Системы доставки для контролируемого высвобождения лекарственного средства
Изобретение относится к соединению Формулы (I)
или его фармацевтически приемлемой соли, диастереомеру или стереоизомеру, где Cредство выбирают из группы, состоящей из цитостатического средства, цитотоксического средства и производного любого из вышеприведенных, Спейсер отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из и
, n равен 0, X представляет собой незамещенный 6-членный арил, Y отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из незамещенного C1-C6 алкилена, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, C(O)-O- и -O-C(O)-, R1 отсутствует или представляет собой незамещенный C1-C18 алкилен или R1 имеет следующую формулу:
R2 выбирают из группы, состоящей из -H и незамещенного C1-C12 алкила, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо представляет собой -H, галоген или -NO2, PBG представляет собой незамещенную малеимидную группу, при этом, когда Спейсер отсутствует, Средство связано с азотом, примыкающим к Спейсеру посредством двойной связи, и где по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является Н. Также предложены фармацевтическая композиция, способ лечения злокачественного новообразования и применение соединения или композиции при изготовлении лекарственного средства. Предложенные соединения могут быть использованы для эффективной и контролируемой доставки и высвобождения лекарственного средства. 8 н. и 38 з.п. ф-лы, 8 ил., 1 табл., 13 пр.
РОДСТВЕННАЯ ЗАЯВКА
[0001] По настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительными заявками на патенты США 62/182,219, поданной 19 июня 2015 г., 62/261,213, поданной 30 ноября 2015 г., и 62/261,563, поданной 1 декабря 2015 г. Каждая из вышеприведенных заявок полностью включена в настоящее описание посредством ссылки.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002] Многие лекарственные средства, в особенности терапевтические средства против злокачественных новообразований, имеют узкий диапазон терапевтического действия, при котором их побочные эффекты ограничивают их благоприятные эффекты. Системное введение таких лекарственных средств часто приводит к ограниченному терапевтическому эффекту, поскольку доза, требуемая для оказания более устойчивого эффекта, приводит к неприемлемым побочным эффектам у пациента. Это является особенно важным в случае тех лекарственных средств, которые обладают высоким цитотоксическим потенциалом, таких как цитостатические средства, вирусостатические средства или иммуносупрессорные средства. При многочисленных попытках исследований изучали возможность доставки конкретного лекарственного средства к конкретному участку действия. Часто, этот подход приводит к более высокой концентрации лекарственного средства на участке действия, чем можно было быть достичь при системном введении, в то же время ограничивая побочные эффекты.
[0003] Доставка лекарственных средств в онкологии представляет собой особенный интерес, вследствие узкого терапевтического диапазона средств, применяемых при таком показании. Многочисленные программы исследований были сконцентрированы на конъюгации противоопухолевых лекарственных средств с широким спектром низко- и высокомолекулярных носителей, включающих сахара, факторы роста, витамины, пептиды, антитела, полисахариды, лектины, белки сыворотки и синтетические полимеры. В большинстве таких систем доставки лекарственного средства, лекарственное средство связано с носителем через спейсер, который включает в себя заранее заданное место разрыва, которое обеспечивает высвобождение связанного лекарственного средства на целевом участке клетки. (Kratz et al., ChemMedChem, 3:20-53 (2008)).
Известны конъюгаты, в которых цитостатические средства связывают с белками сыворотки, в основном, с конкретными молекулами-носителями, такими как человеческий сывороточный альбумин и человеческий сывороточный трансферин, а затем вводят. В некоторых случаях, конъюгаты содержат терапевтически эффективное вещество, и, при введении, это приводит к перемещению терапевтически эффективного вещества к целевому участку, где оно высвобождается (US 7,387,771). В других случаях, конъюгаты, содержащие терапевтически эффективное вещество, молекулу спейсера и белок-связывающую молекулу, ковалентно связываются с циркулирующим сывороточным альбумином при введении, что приводит к транспорту терапевтически эффективного вещества к целевому участку, где оно высвобождается (US 7,387,771). Еще в других случаях, конъюгаты лекарственного средства с антителом (ADC) могут перемещать лекарственное средство к целевому участку для местного высвобождения (Kratz et al., ChemMedChem, 3:20-53 (2008); Panowski et al., mAbs, 6, 34-45 (2014); Chari et al., Angewandte Chem. Int. Ed., 53, 3796-3827 (2014)).
[0004] Однако, при разработке систем доставки лекарственного средства, должен быть найден соответствующий баланс между сохранением целевых свойств носителя лекарственного средства и, в то же время, обеспечением контролируемого высвобождения лекарственного средства. Конструкция доставки лекарственного средства должна иметь достаточную устойчивость в кровотоке, еще обеспечивать эффективное высвобождение лекарственного средства в месте расположения опухоли под действием ферментативного расщепления, восстановления или pH-зависимым способом (Kratz et al., ChemMedChem, 3:20-53 (2008)). Например, Гемцитабин (Gemzar®) является противоопухолевым нуклеозидным химиотерапевтическим средством, которое широко применяется для лечения солидных опухолей. К сожалению, при его рекомендуемой дозе ~1000 мг/м2 приблизительно 90% дезактивируется цитидиндезаминазой до неактивного уридинового метаболита и выделяется в мочу. Дополнительным недостатком, приводящим к химиорезистентности, является низкий уровень экспрессии человеческого равновесного нуклеозидного транспортера 1 подтипа (hENT1) на поверхности раковых клеток, что, таким образом, предотвращает значительный захват гемцитабина.
Следовательно, еще существует потребность в эффективных системах доставки и высвобождения лекарственных средств, чтобы достичь более эффективных и контролируемых доставки и высвобождения лекарственного средства.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0005] Настоящее изобретение предоставляет системы доставки для эффективных и контролируемых доставки и высвобождения лекарственных средств.
[0006] Настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит гидразоновый фрагмент, который расщепляется в кислой среде управляемым способом, для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственных средств. Настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит амидную связь, карбаматную связь и/или сложноэфирную связь, которая расщепляется ферментативно, например, под действием эстераз или амидаз и/или гидролитически для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственных средств. В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит амидную связь, которая расщепляется ферментативно, например, под действием эстераз или амидаз и/или гидролитически, для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственных средств. В других вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит карбаматную связь, которая расщепляется ферментативно и/или гидролитически. В еще других вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит сложноэфирную связь, которая расщепляется ферментативно и/или гидролитически.
[0007] Настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит (i) гидразоновый фрагмент, который расщепляется в кислой среде управляемым способом, и необязательно (ii) амидную связь, карбаматную связь, и/или сложноэфирную связь, которая расщепляется ферментативно, например, под действием эстераз или амидаз и/или гидролитически, для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственных средств. В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит (i) гидразоновый фрагмент, который расщепляется в кислой среде управляемым способом, и необязательно (ii) амидную связь, которая расщепляется ферментативно, например, под действием эстераз или амидаз и/или гидролитически, для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственных средств. В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит (i) гидразоновый фрагмент, который расщепляется в кислой среде управляемым способом, и необязательно (ii) карбаматную связь, которая расщепляется ферментативно и/или гидролитически, для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственных средств. В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит (i) гидразоновый фрагмент, который расщепляется в кислой среде управляемым способом, и необязательно (ii) сложноэфирную связь, которая расщепляется ферментативно и/или гидролитически, для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственных средств. В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит (i) гидразоновый фрагмент, который расщепляется в кислой среде управляемым способом, и необязательно (ii) амидную связь, которая селективно расщепляется под действием карбоксилэстеразы 1 и/или 2, для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственных средств.
В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к системе доставки лекарственного средства, которая содержит (i) гидразоновый фрагмент, который расщепляется в кислой среде управляемым способом, и (ii) амидную связь, которая селективно расщепляется под действием карбоксилэстеразы 2, для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственных средств.
[0008] Настоящее изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (I):
Формула (I)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где:
Средство выбирают из группы, состоящей из цитостатического средства, цитотоксического средства, цитокина, иммуносупрессорного средства, противоревматического средства, противовоспалительного средства, антибиотика, анальгетика, вирусостатического средства, противовоспалительного агента, противогрибкового средства, ингибитора фактора транскрипции, модулятора клеточного цикла, модулятора множественной лекарственной устойчивости, протеасомы или ингибитора протеазы, модулятора апоптоза, ингибитора фермента, ингибитора передачи сигнала, ингибитора протеазы, ингибитора ангиогенеза, гормона или производного гормона, антитела или его фрагмента, терапевтически или диагностически активного пептида, радиоактивного вещества, светоизлучающего вещества, светопоглощающего вещества и производного любого из вышеприведенных выше;
Спейсер отсутствует или представляет собой или
;
n равно 0 или 1;
X выбирают из группы, состоящей из: необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного арила; необязательно замещенного гетероарила; и необязательно замещенного циклоалкила;
R5 выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероарила и необязательно замещенного циклоалкила;
Y отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C6 алкила, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, C(O)-O- и -O-C(O)-;
R1 отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; и необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-,
или R1 является природной или неприродной аминокислотой,
или R1 имеет следующую формулу:
;
R2 выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного C1-C12 алкила, необязательно замещенного арила и необязательно замещенного гетероарила;
каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, электроноакцепторной группы и водорастворимой группы;
PBG является белок-связывающей группой, выбранной из группы, состоящей из необязательно замещенной малеимидной группы, необязательно замещенной галогенацетамидной группы, необязательно замещенной галогенацетатной группы, необязательно замещенной пиридилтиогруппы, необязательно замещенной изотиоцианатной группы, необязательно замещенной винилкарбонильной группы, необязательно замещенной азиридиновой группы, необязательно замещенной дисульфидной группы, необязательно замещенной ацетиленовой группы, необязательно замещенной группы сложного эфира N-гидроксисукцинимида, антитела или его фрагмента и дериватизированного антитела или его дериватизированного фрагмента;
где, когда Спейсер отсутствует, Средство связано с азотом, примыкающим к Спейсеру посредством двойной связи; и
где по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 является электроноакцепторной группой.
[0009] В некоторых вариантах осуществления, PBG является белок-связывающей группой, выбранной из группы, состоящей из необязательно замещенной малеимидной группы, необязательно замещенной галогенацетамидной группы, необязательно замещенной галогенацетатной группы, необязательно замещенной пиридилтиогруппы, необязательно замещенной изотиоцианатной группы, необязательно замещенной винилкарбонильной группы, необязательно замещенной азиридиновой группы, необязательно замещенной дисульфидной группы, необязательно замещенной ацетиленовой группы и необязательно замещенной группы сложного эфира N-гидроксисукцинимида.
[0010] В некоторых вариантах осуществления, PBG ассоциирована с антителом или его фрагментом. В некоторых вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с антителом или его фрагментом. В некоторых вариантах осуществления, PBG ассоциирована с альбумином. В других вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с эндогенным или экзогенным альбумином. В других вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с цистеином-34 эндогенного или экзогенного альбумина.
[0011] Настоящее изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (I):
Формула (I)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где
Средство выбирают из группы, состоящей из цитостатического средства, цитотоксического средства, цитокина, иммуносупрессорного средства, противоревматического средства, противовоспалительного средства, антибиотика, анальгетика, вирусостатического средства, противовоспалительного агента, противогрибкового средства, ингибитора фактора транскрипции, модулятора клеточного цикла, модулятора множественной лекарственной устойчивости, протеасомы или ингибитора протеазы, модулятора апоптоза, ингибитора фермента, ингибитора передачи сигнала, ингибитора протеазы, ингибитора ангиогенеза, гормона или производного гормона, антитела или его фрагмента, терапевтически или диагностически активного пептида, радиоактивного вещества, светоизлучающего вещества, светопоглощающего вещества, и производного любого из вышеприведенных;
Спейсер отсутствует, является или
;
n равно 0 или 1;
X выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного арила; необязательно замещенного гетероарила; и необязательно замещенного циклоалкила;
R5 выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероарила и необязательно замещенного циклоалкила;
Y отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C6 алкила, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -C(O)-O-, и -O-C(O)-;
R1 отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; и необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-;
R2 выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного C1-C12 алкила, необязательно замещенного арила, и необязательно замещенного гетероарила;
каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H или электроноакцепторной группы;
PBG является белок-связывающей группой, выбранной из группы, состоящей из необязательно замещенной малеимидной группы, необязательно замещенной галогенацетамидной группы, необязательно замещенной галогенацетатной группы, необязательно замещенной пиридилтиогруппы, необязательно замещенной изотиоцианатной группы, необязательно замещенной винилкарбонильной группы, необязательно замещенной азиридиновой группы, необязательно замещенной дисульфидной группы, необязательно замещенной ацетиленовой группы, необязательно замещенной группы сложного эфира N-гидроксисукцинимида и антитела или его фрагмента;
где, когда Спейсер отсутствует, Средство связано с азотом, примыкающим к Спейсеру посредством двойной связи; и
где по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 является электроноакцепторной группой.
[0012] В некоторых вариантах осуществления, PBG является белок-связывающей группой, выбранной из группы, состоящей из необязательно замещенной малеимидной группы, необязательно замещенной галогенацетамидной группы, необязательно замещенной галогенацетатной группы, необязательно замещенной пиридилтиогруппы, необязательно замещенной изотиоцианатной группы, необязательно замещенной винилкарбонильной группы, необязательно замещенной азиридиновой группы, необязательно замещенной дисульфидной группы, необязательно замещенной ацетиленовой группы и необязательно замещенной группы сложного эфира N-гидроксисукцинимида.
[0013] В некоторых вариантах осуществления, PBG ассоциирована с антителом или его фрагментом. В некоторых вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с антителом или его фрагментом. В некоторых вариантах осуществления, PBG ассоциирована с альбумином. В других вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с эндогенным или экзогенным альбумином. В других вариантах осуществления, PGB ковалентно связана с цистеином-34 эндогенного или экзогенного альбумина.
[0014] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, представленное Формулой (II):
Формула (II)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где Средство, PBG, Y, R1, Z1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (I).
[0015] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (III):
Формула (III)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где Средство, Спейсер, PBG, Y, R1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (I); и
где Z1 является электроноакцепторной группой.
[0016] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (IV):
Формула (IV)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где Средство, PBG, Y, R1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (I); и
где Z1 является электроноакцепторной группой.
[0017] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (V):
Формула (V)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где Средство, PBG, n, Y, R1, R2, Z1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (I).
[0018] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VI):
Формула (VI)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где:
M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу и необязательно содержит один или более заместителей, выбранных из галогена.
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3.
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3.
R' представляет собой -R3 или -CH2R3;
где каждый раз, когда присутствует R3, его независимо выбирают из группы, состоящей из -OH, -CH3, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы, и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Z1, Z2, Z3, Z4, Y, R1,R2 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (V).
[0019] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VI):
Формула (VI)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где
M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу.
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3.
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3.
R3 выбирают из -OH, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы, и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Z1, Z2, Z3, Z4, Y, R1,R2 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (V).
[0020] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VII):
Формула (VII)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где R' представляет собой -R3 или -CH2R3; а X, X1, X2, X3, X4, n, Y, R1, R2, R3, Z1, Z2, Z3, Z4 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (VI).
[0021] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VII):
Формула (VII)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где X, X1, X2, X3, X4, n, Y, R1, R2, R3, Z1, Z2, Z3, Z4 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (V).
[0022] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VIII):
Формула (VIII)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где
Z1 является электроноакцепторной группой; и,
где Средство, X, n, R2, PBG, Y, R1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (V).
[0023] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (IX):
Формула (IX)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где:
M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу, и необязательно содержит один или более заместителей, выбранных из галогена;
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
R' представляет собой -R3 или -CH2R3;
где каждый раз, когда присутствует R3, его независимо выбирают из группы, состоящей из -OH, -CH3, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1, R2 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (VIII).
[0024] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (IX):
Формула (IX)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где
M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу;
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
R3 выбирают из -OH, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1, R2 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (VIII).
[0025] В некоторых вариантах осуществления, каждый из X1, X2, X3, и X4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, -CH3, -F, -Cl, -Br, -I, и -N3.
[0026] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (X):
Формула (X)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где R' представляет собой -R3 или -CH2R3; и X1, X2, X3, X4, R3, X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1 и R2 являются такими, как определено для соединения Формулы (IX).
[0027] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (X):
Формула (X)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где X1, X2, X3, X4, R3, X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1 и R2 являются такими, как определено для соединения Формулы (IX).
[0028] В некоторых вариантах осуществления, Средство выбирают из группы, состоящей из N-нитрозомочевин; доксорубицина, 2-пирролпирролиноантрациклина, морфолиноантрациклина, диацетатоксиалкилантрациклина, даунорубицина, эпирубицина, идарубицина, неморубицина, PNU-159682, митоксантрона; аметантрона; хлорамбуцила, бендамустина, мелфалана, оксазофосфоринов; 5-фторурацила, 5´-дезокси-5-фторцитидина, 2'-дезокси-5-фторуридина, цитарабина, кладрибина, флударабина, пентостатина, гемцитабин, 4-амино-1-(((2S,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил)-5-фторпиримидин-2(1H)-она, тиогуанина; метотрексата, ралтитрекседа, пеметрекседа, плевитрекседа; паклитаксела, доцетаксела; топотекана, иринотекана, SN-38, 10-гидроксикамптотецина, GG211, луртотекана, 9-аминокамптотецина, камптотецина, 7-формилкамптотецина, 7-ацетилкамптотецина, 9-формилкамптотецина, 9-ацетилкамптотецина, 9-формил-10-гидроксикамптотецина, 10-формилкамптотецина, 10-ацетилкамптотецина, 7-бутил-10-аминокамптотецина, 7-бутил-9-амино-10,11,-метилендиоксокамптотецина; винбластина, винкрестина, виндезина, винорелбина; калихеамицинов; майтансина, майтансинола; ауристатинов (включающих, но не ограниченных перечисленными ауристатин D, ауристатин E, ауристатин F, монометилауристатин D, монометилауристатин E, монометилауристатин F, метиловый эфир монометилауристатина F, ауристатин PYE, ауристатин PHE, родственный природный продукт доластатина 10, и его производные); аматоксинов (включающих, но не ограниченных перечисленными α-аманитин, β-аманитин, γ-аманитин, ε-аманитин, аманин, аманинамид, амануллин и амануллиновую кислоту и ее производные); дуокармицина A, дуокармицина B1, дуокармицина B2, дуокармицина C, дуокармицина SA, CC1065, адозелезина, бизелезина, карзелезина; эрибулина; трабектедина; пирролобензодиазепина, антрамицина, томаймицина, сибиромицина, DC-81, DSB-120; эпотилонов; блеомицина; дактиномицина; пликамицина, миромицина C и цис-конфигурированных комплексов платины (II); или производного любого из вышеприведенных.
[0029] В некоторых вариантах осуществления, Средство выбирают из группы, состоящей из N-нитрозомочевин; доксорубицина, 2-пирролпирролиноантрациклина, морфолиноантрациклина, диацетатоксиалкилантрациклина, даунорубицина, эпирубицина, идарубицина, неморубицина, PNU-159682, митоксантрона; аметантрона; хлорамбуцила, бендамустина, мелфалана, оксазофосфоринов; 5-фторурацила, 2'-дезокси-5-фторуридина, цитарабина, кладрибина, флударабина, пентостатина, гемцитабин, 4-амино-1-(((2S,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил)-5-фторпиримидин-2(1H)-она, тиогуанина; метотрексата, ралтитрекседа, пеметрекседа, плевитрекседа; паклитаксела, доцетаксела; топотекана, иринотекана, SN-38, 10-гидроксикамптотецина, GG211, луртотекана, 9-аминокамптотецина, камптотецина, 7-формилкамптотецина, 9-формилкамптотецина, 9-формил-10-гидроксикамптотецина, 7-бутил-10-аминокамптотецина, 7-бутил-9-амино-10,11,-метилендиоксокамптотецина; винбластина, винкрестина, виндезина, винорелбина; калихеамицинов; майтанзиноидов; ауристатинов; эпотилонов; блеомицина, дактиномицина, пликамицина, миромицина C, и цис-конфигурированных комплексов платины (II); или производного любого из вышеприведенных.
[0030] В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3 и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -F, -NO2, и -CF3. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), -P(O)(OH)2, -SO3H и их фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является -H.
[0031] В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила, и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3 и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -F, -NO2, и -CF3. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является -H.
[0032] В некоторых вариантах осуществления, Z1 выбирают из группы, состоящей из галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN; и каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, Z1 выбирают из группы, состоящей из -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3, и -CN; и каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3, и -CN. В некоторых вариантах осуществления, Z1 выбирают из группы, состоящей из -Cl, -F, и -NO2; и каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -F, -NO2 и -CF3.
[0033] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент соединения согласно изобретению выбирают из группы, состоящей из:
[0034] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент соединения согласно изобретению выбирают из группы, состоящей из:
[0035] В некоторых вариантах осуществления, Y представляет собой -C(O)-NH-. В некоторых вариантах осуществления, Y представляет собой -C(O)-O-. В некоторых вариантах осуществления, Y отсутствует.
[0036] В некоторых вариантах осуществления, R1 выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; и необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-.
[0037] В некоторых вариантах осуществления, R1 выбирают из группы, состоящей из и
[0038] В некоторых вариантах осуществления, R1 отсутствует.
[0039] В некоторых вариантах осуществления, PBG является необязательно замещенной малеимидной группой. В некоторых вариантах осуществления, PBG является
[0040] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент соединения согласно изобретению выбирают из группы, состоящей из:
и
[0041] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой n равно 0 или 1; и X выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного арила; необязательно замещенного гетероарила; и необязательно замещенного циклоалкила; и R2 является таким, как определено для Формулы I.
[0042] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой, где R2 выбирают из группы, состоящей из: -H, необязательно замещенного C1-C12 алкила, необязательно замещенного арила и необязательно замещенного гетероарила; каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3 и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -F, -NO2 и -CF3. В некоторых вариантах осуществления, каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: фенокси-группы, первичной, вторичной или третичной аминогруппы, группы простого эфира, фенольной группы, амидной группы, сложноэфирной группы, алкильной группы, замещенной алкильной группы, фенильной группы и винильной группы. В некоторых вариантах осуществления, каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), -P(O)(OH)2, -SO3H и их фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере один из W1, W2, W3 и W4 не является -H.
[0043] В некоторых вариантах осуществления, W1 выбирают из группы, состоящей из: галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN; и каждый из W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, W1 выбирают из группы, состоящей из: -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3, и -CN; и каждый из W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3 и -CN. В некоторых вариантах осуществления, W1 выбирают из группы, состоящей из: -Cl, -F, и -NO2; и каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -F, -NO2 и -CF3.
[0044] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой, где R2 выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного C1-C12 алкила, необязательно замещенного арила, и необязательно замещенного гетероарила.
[0045] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой
[0046] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой ; и m равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
[0047] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой
[0048] В некоторых вариантах осуществления, соединение согласно изобретению выбирают из группы, состоящей из:
и
;
или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, сольвата, или изомера,
где:
[0049] В некоторых вариантах осуществления, соединение согласно изобретению выбирают из группы, состоящей из:
и
или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, сольвата или изомера.
[0050] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой α-аманитин, и соединение согласно настоящему изобретению выбирают из группы, состоящей из:
и
или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, сольвата, или изомера.
[0051] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой ауристатин или его производное, а соединение согласно настоящему изобретению выбирают из группы, состоящей из:
и
или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, сольвата или изомера.
[0052] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет фармацевтическую композицию, содержащую соединение, раскрытое в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0053] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет способ лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из злокачественного новообразования, вирусного заболевания, аутоиммунного заболевания, острого или хронического воспалительного заболевания и заболевания, вызываемого бактериями, грибками, или другими микроорганизмами, включающий в себя введение нуждающемуся в лечении пациенту терапевтически эффективного количества соединения, описанного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе.
[0054] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединения и композиции для применения в качестве лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединения и композиции для применения при лечении заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из злокачественного новообразования, вирусного заболевания, аутоиммунного заболевания, острого или хронического воспалительного заболевания, и заболевания, вызываемого бактериями, грибками, или другими микроорганизмами.
[0055] В некоторых вариантах осуществления, соединение, раскрытое в настоящем описании, может применяться при производстве или получении лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из злокачественного новообразования, вирусного заболевания, аутоиммунного заболевания, острого или хронического воспалительного заболевания, и заболевания, вызываемого бактериями, грибками, или другими микроорганизмами.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0056] ФИГ. 1 показывает эффект соединения 15 и гемцитабина на рост опухоли у NSLC модели ксенотрансплантата LXFE 397.
[0057] ФИГ. 2 показывает эффект соединения 15 и гемцитабина на рост опухоли у NSLC модели ксенотрансплантата LXFE 397.
[0058] ФИГ. 3 показывает эффект соединения 15 и гемцитабина на изменение массы тела у модели ксенотрансплантата человеческой немелкоклеточной карциномы LXFE 937.
[0059] ФИГ. 4 показывает эффект соединения 15 и гемцитабина на рост опухоли у модели ксенотрансплантата рака яичника OVXF 899.
[0060] ФИГ. 5 показывает эффект соединения 15 и гемцитабина на изменение массы тела у модели ксенотрансплантата человеческого рака яичника OVXF 899.
[0061] ФИГ. 6(A) и 6(B) показывают диаграммы разброса данных для объемов индивидуальных опухолей после лечения соединением 15 или гемцитабином у модели ксенотрансплантата рака яичника OVXF 899. ФИГ. 6(A) показывает абсолютный объем опухоли на день 0; ФИГ. 6(B) показывает абсолютный объем опухоли на день 67.
[0062] ФИГ. 7 показывает эффект соединения 15 и гемцитабина на рост опухоли у модели ксенотрансплантата рака поджелудочной железы Panc11159.
[0063] ФИГ. 8 показывает эффект соединения 15 и гемцитабина на изменение массы тела у модели ксенотрансплантата рака поджелудочной железы Panc11159.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0064] Если в данном описании не определено иным образом, научные и технические термины, используемые в данной заявке, будут иметь значения, которые имеют общепринятое значение для рядовых специалистов в данной области техники. Как правило, номенклатура, используемая в связи с методами, и сами методы в области химии, молекулярной биологии, клеточной биологии и биологии рака, иммунологии, микробиологии, фармакологии и химии белков и нуклеиновых кислот, описанные в данном документе, являются общеизвестными и обычно используемыми в данной области.
[0065] Все публикации, патенты и опубликованные патентные заявки, на которые ссылаются в этой заявке, конкретно включены в данное описание посредством ссылки. В случае конфликта, настоящее описание, включающее его конкретные определения, будет приоритетным. Если не установлено иначе, следует понимать, что каждый вариант осуществления изобретения может применяться по отдельности или в комбинации с любым одним или более другими вариантами осуществления изобретения.
[0066] На протяжении всего описания, слова ʺсодержатʺ или вариации, такие как ʺсодержитʺ или ʺсодержащийʺ следует понимать, как подразумевающие включение установленного целого числа (или компонентов) или группы целых чисел (или компонентов), но не исключение любого другого целого числа (или компонентов) или группы целых чисел (или компонентов).
[0067] На протяжении заявки, там, где соединение или композиция описаны, как имеющие, включающие или содержащие конкретные компоненты, следует иметь в виду, что такие соединение или композиция также могут состоять по существу из или состоять из перечисленных компонентов. Аналогично, там, где методы или способы описаны, как имеющие, включающие или включающие в себя конкретные стадии способов, способы также могут состоять по существу из, или состоять из перечисленных стадий обработки. Дополнительно, следует понимать, что порядок стадий или порядок выполнения некоторых действий не имеет существенного значения до тех пор, пока соединения, композиции и способы, описанные в данном документе, остаются пригодными для использования. Кроме того, две или более стадий или действий могут проводиться одновременно.
[0068] Формы единственного числа ʺaʺ, ʺanʺ и ʺtheʺ включают формы множественного числа, если контекст явным образом не предписывает иначе.
[0069] Термин ʺвключающиеʺ применяют в значении ʺвключающие, но не ограниченные перечисленнымиʺ. ʺВключающиеʺ и ʺвключающие, но не ограниченные перечисленнымиʺ используют взаимозаменяемо.
[0070] Термин ʺилиʺ, как применяют в настоящем описании, следует понимать в значении ʺи/илиʺ, если контекст явным образом не предписывает иначе.
[0071] Термины ʺлекарственное средствоʺ, ʺсредствоʺ, ʺтерапевтическое средствоʺ или ʺтерапевтически эффективное веществоʺ используют для обозначения любого соединения, которое приводит к фармакологическому эффекту либо само по себе или после его преобразования в рассматриваемом организме, и таким образом, также включает производные от этих преобразований. Фармакологический эффект лекарственных средств композиции согласно настоящему изобретению может представлять собой лишь единственный эффект, например, цитостатический эффект, или широкий фармакологический спектр действий, такой как иммуносупрессивный и противовоспалительный эффект средства в одно и то же время.
[0072] Термин ʺантрациклинʺ относится к классу противоопухолевых антибиотиков, имеющих структурную единицу антрацендиона (также называемого антрахиноном или диоксоантраценом). Например, термин ʺантрациклинʺ конкретно предназначен, чтобы индивидуально включать доксорубицин, даунорубицин, эпирубицин, идарубицин, неморубицин, валрубицин, пирарубицин, зорубицин, акларубицин, 2-пирролпирролиноантрациклин, морфолиноантрациклин, диацетатоксиалкилантрациклин, PNU-159682, каминомицин, митоксантрон и аметантрон.
[0073] Термины ʺпациентʺ, ʺсубъектʺ или ʺиндивидуумʺ используются взаимозаменяемо и относятся либо к человеку или животному, не являющемуся человеком. Эти термины включают млекопитающих, таких как люди, приматы, домашний скот (например, коров, свиней), домашних животных (например, собак, кошек) и грызунов (например, мышей и крыс). В некоторых вариантах осуществления, пациент или субъект является человеческим пациентом или субъектом, таким как человеческий пациент, имеющий состояние, нуждающееся в лечении.
[0074] Термин "фармацевтическая композиция" относится к композиции, пригодной для фармацевтического применения у животного-субъекта, включающего людей и млекопитающих, например, в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами или растворители. Такие композиции могут также содержать разбавители, наполнители, соли, буферы, стабилизаторы, солюбилизаторы и другие вещества, хорошо известные в данной области. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция охватывает композицию, содержащую активные ингредиент (ингредиенты) и инертные ингредиент (ингредиенты), которые составляют эксципиент, носитель или разбавитель, а также любой продукт, который является результатом, напрямую или опосредованно, комбинации, комплексообразования или агрегации любых двух или более ингредиентов, или диссоциации одного или более ингредиентов или других типов реакций или взаимодействий одного или более ингредиентов. Соответственно, фармацевтические композиции настоящего раскрытия охватывают любую композицию, полученную при смешивании соединения раскрытия и одного или более фармацевтически приемлемых эксципиента (эксципиентов), носителя (носителей) и/или разбавителя (разбавителей).
[0075] Термин ʺфармацевтически приемлемый носительʺ относится к нетоксичному носителю, который может вводиться пациенту, вместе с терапевтически эффективным веществом согласно данному изобретению, и который не разрушает фармакологической активности Средства. Термин ʺэксципиентʺ относится к добавке в лекарственной форме или композиции, которая не является фармацевтически активным ингредиентом. В некоторых вариантах осуществления, ʺфармацевтически приемлемоеʺ вещество является подходящим для применения в контакте с клетками, тканями или органами животных или людей без избыточной токсичности, раздражения, аллергической реакции, иммуногенности или других неблагоприятных реакций, в количестве, применяемом в дозированной форме в соответствии с режимом дозирования, и соответствует целесообразному отношению благоприятный эффект/риск. В некоторых вариантах осуществления, ʺфармацевтически приемлемоеʺ вещество, которое является компонентом фармацевтической композиции, является, дополнительно, совместимым с другими ингредиентом (ингредиентами) композиции. В некоторых вариантах осуществления, термины ʺфармацевтически приемлемый эксципиентʺ, ʺфармацевтически приемлемый носительʺ и ʺфармацевтически приемлемый разбавительʺ охватывают, без ограничения, фармацевтически приемлемые неактивные ингредиенты, материалы, композиции и несущие среды, такие как жидкие наполнители, твердые наполнители, разбавители, эксципиенты, носители, растворители и инкапсулирующие материалы. Носители, разбавители и эксципиенты также включают все фармацевтически приемлемые дисперсионные среды, покрытия, буферы, изотонические агенты, стабилизаторы, средства, задерживающие всасывание, антимикробные средства, антибактериальные средства, противогрибковые средства, адъюванты и т.д. За исключением случаев, когда какой-либо общепринятый эксципиент, носитель или разбавитель является несовместимым с активным ингредиентом, настоящее раскрытие охватывает применение общепринятых эксципиентов, носителей и разбавителей в фармацевтических композициях. См., например, Remington: Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott Williams & Wilkins (Philadelphia, Pennsylvania, 2005); Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5th Ed., Rowe et al., Eds., Pharmaceutical Press and American Pharmaceutical Association (2005); Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd Ed., Ash и Ash, Eds., Gower Publishing Co. (2007); и Pharmaceutical Preformulation и Formulation, Gibson, Ed., CRC Press LLC (Boca Raton, Florida, 2004).
[0076] Термины ʺфармацевтически эффективное количествоʺ, ʺтерапевтически эффективное количествоʺ или ʺтерапевтически эффективная дозаʺ относятся к количеству, эффективному для лечения заболевания у пациента, например, вызывая благоприятное и/или желательное изменение общего состояния здоровья пациента, страдающего от заболевания (например, рака), лечение, исцеление, ингибирование или облегчение физиологической реакции или состояния и т.д. Полный терапевтический эффект не обязательно происходит при введении одной дозы, и может наступать только после ведения ряда доз. Таким образом, терапевтически эффективное количество может вводиться в одном или более введений. Точное эффективное количество, необходимое для субъекта, будет зависеть, например, от размера субъекта, здоровья и возраста, природы и степени заболевания, терапевтических средств или комбинации терапевтических средств, выбранных для введения, и способа введения. Квалифицированный работник сможет легко определить эффективное количество для данной ситуации посредством рутинного проведения экспериментов. Квалифицированный сотрудник поймет, что лечение злокачественного новообразования включает, но не ограничивается приведенным, уничтожение опухолевых клеток, предотвращение роста новых опухолевых клеток, вызывая регрессию опухоли (уменьшение размера опухоли), вызывая снижение метастазов, улучшая жизненно важные функции пациента, улучшая самочувствие пациента, уменьшая боль, улучшая аппетит, улучшая массу тела пациента, и и любую их комбинацию. Термины ʺфармацевтически эффективное количествоʺ, ʺтерапевтически эффективное количествоʺ, или (терапевтически эффективная дозаʺ также относятся к количеству, требуемому для улучшения клинических симптомов пациента. Терапевтические способы или способы лечения злокачественных новообразований, описанные в данном документе, не следует интерпретировать или иным образом ограничивать ʺизлечениемʺ злокачественного новообразования.
[0077] Как применяют в настоящем описании, термин ʺпрохождение леченияʺ или ʺлечениеʺ включает обращение, снижение или прерывание симптомов, клинических признаков и основополагающей патологии состояния, вызывая улучшение или стабилизацию состояния субъекта. Как применяют в настоящем описании, и хорошо известно в данной области, ʺлечениеʺ представляет собой подход для получения благоприятных или желательных результатов, включающих клинические результаты. Благоприятные или желательные клинические результаты могут включать, но не ограничиваются перечисленными, частичное снятие, улучшение состояния или замедление прогрессирования одного или более симптомов или состояний, ассоциированных с состоянием, например, злокачественным новообразованием, уменьшение степени заболевания, стабилизацию (т.е. не ухудшение) состояния заболевания, задержку или замедление прогрессирования заболевания, частичное снятие или временное облегчение болезненного состояния, и ремиссию (либо частичную или полную), либо обнаруживаемую или не обнаруживаемую. ʺЛечениеʺ может также означать пролонгирование выживаемости в сравнении с ожидаемой выживаемостью, если лечение отсутствует. Иллюстративные благоприятные клинические результаты описаны в данном документе.
[0078] ʺВведениеʺ или введение вещества, соединения или средства субъекту может выполняться с использованием одного из различных способов, известных специалисту в данной области. Например, соединение или средство могут вводиться, внутривенно, внутриартериально, внутрикожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, подкожно, через глаза, подъязычно, перорально (посредством глотания), интраназально (посредством ингаляции), интраспинально, интрацеребрально и трансдермально (посредством всасывания, например, через кожный проток). Соединение или средство могут также соответствующим образом вводиться посредством перезаряжаемых или биоразрушаемых полимерных устройств или других устройств, например, пластырей и насосов, или лекарственных форм, которые обеспечивают пролонгируемое, медленное или контролируемое высвобождение соединения или средства. Введение может также выполняться, например, однократно, множество раз и/или в течение одного или более продолжительных периодов. В некоторых аспектах, введение включает как прямое введение, включающее самостоятельное введение, так и опосредованное введение, включающее действие назначения лекарственного средства. Например, как применяют в настоящем описании, терапевт, который инструктирует пациента по самостоятельному введению лекарственного средства, или по введению лекарственного средства другим лицом и/или который предоставляет пациенту назначение лекарственного средства, также проводит введение лекарственного средства пациенту. Когда способ является частью терапевтического режима, включающего в себя более одного средства или более одной модальности лечения, раскрытие предусматривает, что средства могут вводиться при одних и те же или различных временных отметках и через одинаковые или различающиеся пути введения. Соответствующие способы введения вещества, соединения или средства субъекту будут также зависеть, например, от возраста субъекта, является ли субъект активным или неактивным во время введения, имеет ли субъект когнитивные расстройства во время введения, степени расстройства, и химических и биологических свойств соединения или средства (например, растворимости, усвояемости, биодоступности, стабильности и токсичности).
[0079] Термин ʺзамещенныйʺ относится к фрагментам, имеющим заместители, замещающие водород на одном или более углеродах скелета химического соединения. Будет понятно, что ʺзамещениеʺ или ʺзамещенныеʺ включают подразумеваемое условие, что такое замещение находится в соответствии с разрешенной валентностью замещенного атома и заместителя, и такое замещение приводит к стабильному соединению, например, которое не претерпевает самопроизвольного превращения, такого как посредством перегруппировки, циклизации, элиминирования и т.д. Как применяют в настоящем описании, термин ʺзамещенныйʺ предусматривает включение всех разрешенных заместителей органических соединений. В широком аспекте, разрешенные заместители включают ациклические и циклические, разветвленные и неразветвленные, карбоциклические и гетероциклические, ароматические и неароматические заместители органических соединений. Разрешенные заместители могут представлять собой один или более и одинаковые или различные заместители для соответствующих органических соединений. Применительно к целям изобретения, гетероатомы, такие как азот могут иметь водородные заместители и/или любые разрешенные заместители органических соединений, описанных в данном документе, которые соответствуют валентностям гетероатомов. Заместители могут включать любые заместители, описанные в данном документе, например, галоген, гидроксил, карбонил (такой как карбоксил, алкоксикарбонил, формил или ацил), тиокарбонил (такой как сложный тиоэфир, тиоацетат или тиоформат), алкоксил, алкилтио, ацилокси, фосфорил, фосфат, фосфонат, амино, амидо, амидин, имин, циано, нитро, азидо, сульфгидрил, алкилтио, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидо, сульфонил, гетероциклил, аралкил, или ароматический или гетероароматический фрагмент.
[0080] ʺНеобязательныйʺ или ʺнеобязательноʺ означает, что последовательно описанное обстоятельство может или не может иметь место, таким образом, заявка включает случаи, когда обстоятельство имеет место, и случаи, когда оно отсутствует. Например, фраза ʺнеобязательно замещенныйʺ означает, что неводородный заместитель может присутствовать или не присутствовать на данном атоме, и, таким образом, заявка включает структуры, где неводородный заместитель присутствует, и структуры, где неводородный заместитель не присутствует.
[0081] Если конкретно не установлены как ʺнезамещенныеʺ, ссылки на химические фрагменты в данном описании понимают как включающие замещенные варианты. Например, ссылка на ʺалкильнуюʺ группу или алкильный фрагмент подразумевает включение как замещенных и незамещенных вариантов. Примеры заместителей на химических фрагментах включают, но не ограничиваются приведенными, галоген, гидроксил, карбонил, такой как карбоксил, алкоксикарбонил, формил или ацил), тиокарбонил (такой как сложный тиоэфир, тиоацетат или тиоформат) алкоксил, алкилтио, ацилокси, фосфорил, фосфат, фосфонат, амино, амидо, амидин, имин, циано, нитро, азидо, сульфгидрил, алкилтио, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидо, сульфонил, гетероциклил, аралкил или арильный или гетероарильный фрагмент.
[0082] Термин ʺацилʺ является принятым в данной области и относится к группе, представленной общей формулой гидрокарбил-C(O)-, предпочтительно алкил-C(O)-.
[0083] Термин ʺалкилʺ относится к радикалу насыщенных алифатических групп, включающих алкильные группы с прямой цепью, и алкильные группы с разветвленной цепью. В предпочтительных вариантах осуществления, алкил с прямой цепью или разветвленной цепью имеет 30 или менее углеродных атомов в своем скелете (например, C1-C30 для прямых цепей, C3-C30 для разветвленных цепей), и более предпочтительно, 20 или менее. В некоторых вариантах осуществления, алкильные группы представляют собой низшие алкильные группы, например, метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил и н-пентил. Кроме того, термин ʺалкилʺ, как используют на протяжении описания, в примерах и формуле изобретения, подразумевает включение как ʺнезамещенных алкиловʺ, так и ʺзамещенных алкиловʺ, последние из которых относятся к алкильным фрагментам, имеющим заместители, заменяющие водород на одном или более углеродах углеводородного скелета. В некоторых вариантах осуществления, алкил с прямой цепью или разветвленной цепью имеет 30 или менее атомов углерода в своем скелете (например, C1-C30 для прямых цепей, C3-C30 для разветвленных цепей). В предпочтительных вариантах осуществления, цепь имеет десять или менее углеродных (C1-C10) атомов в своем скелете. В других вариантах осуществления, цепь имеет шесть или менее углеродных (C1-C6) атомов в своем скелете.
[0084] Такие заместители могут включать, например, галоген, гидроксил, карбонил (такой как карбоксил, алкоксикарбонил, формил или ацил), тиокарбонил (такой как сложный тиоэфир, тиоацетат, или тиоформат), алкоксил, алкилтио, ацилокси, фосфорил, фосфат, фосфонат, амино, амидо, амидин, имин, циано, нитро, азидо, сульфгидрил, алкилтио, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидо, сульфонил, гетероциклил, аралкил, или арильный или гетероарильный фрагмент.
[0085] Термин ʺамидʺ, как применяют в настоящем описании, относится к группе, представленной
или
где каждый из RX и RY независимо представляет водород или углеводородную группу, или RX и RY, взятые вместе с атомом N, к которому они присоединены, образуют гетероцикл, имеющий от 4 до 8 атомов в кольцевой структуре.
[0086] В некоторых вариантах осуществления, амид представляет собой -NH-C(O)- или -C(O)-NH-.
[0087] Термины ʺаминʺ и ʺаминоʺ являются принятыми в данной области и относятся как к незамещенным, так и замещенным аминам и их солям, например, фрагменту, который может быть представлен
или
где каждый из RX, RY и RZ независимо представляет водород или углеводородную группу, или RX и RY, взятые вместе с атомом N, к которому они присоединены, образуют гетероцикл, имеющий от 4 до 8 атомов в кольцевой структуре.
[0088] Термин ʺарилʺ, как применяют в настоящем описании, включает замещенные или незамещенные однокольцевые ароматические группы, в которых каждый атом кольца является углеродом. Предпочтительно кольцо является 5-7-членным кольцом, более предпочтительно, 6-членным кольцом. Арильные группы включают фенил, фенол, анилин, и т.п. Термин ʺарилʺ также включает ʺполициклилʺ, ʺполициклʺ и ʺполициклическиеʺ кольцевые системы, имеющие два или более колец, в которых два или более атомов являются общими для двух примыкающих колец, например, кольца представляют собой ʺконденсированные кольцаʺ, где по меньшей мере одно из колец является ароматическим, например, другие циклические кольца могут являться циклоалкилами, циклоалкенилами, циклоалкинилами, арилами. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, полициклы имеют 2-3 кольца. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, полициклические кольцевые системы имеют два циклических кольца, в которых оба кольца являются ароматическими. Каждое из колец полицикла может быть замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах осуществления, каждое кольцо полицикла содержит от 3 до 10 атомов в кольце, предпочтительно от 5 до 7. Например, арильные группы включают, но не ограничены приведенными, фенил, толил, антраценил, флуоренил, инденил, азуленил и нафтил, а также бензоконденсированные карбоциклические фрагменты, такие как 5,6,7,8-тетрагидронафтил и т.п.
[0089] В некоторых вариантах осуществления, арил является однокольцевой ароматической группой. В некоторых вариантах осуществления, арил является двухкольцевой ароматической группой. В некоторых вариантах осуществления, арил является трехкольцевой ароматической группой.
[0090] Термин ʺциклоалкилʺ, как применяют в настоящем описании, относится к радикалу насыщенного алифатического кольца. В предпочтительных вариантах осуществления, циклоалкилы имеют 3-10 углеродных атомов в их кольцевой структуре, и более предпочтительно 5-7 углеродных атомов в кольцевой структуре. В некоторых вариантах осуществления, два циклических кольца могут иметь два или более общих атомов, например, кольца являются ʺконденсированными кольцамиʺ. Подходящие циклоалкилы включают циклогептил, циклогексил, циклопентил, циклобутил и циклопропил.
[0091] В некоторых вариантах осуществления, циклоалкил является моноциклической группой. В некоторых вариантах осуществления, циклоалкил является бициклической группой. В некоторых вариантах осуществления, циклоалкил является трициклической группой.
[0092] Термин ʺгалогеналкилʺ, как применяют в настоящем описании, означает алкильную группу, замещенную одним или более галогенами. Когда присутствует более одного галогена, галогены могут быть одинаковыми или различными. Например, галогеналкильные группы включают, но не ограничиваются приведенными, фторметил, дифторметил, трифторметил, хлордифторметил, 2,2,2-трифторэтил, пентафторэтил и т.п.
[0093] Термины ʺгалоʺ и ʺгалогенʺ, как применяют в настоящем описании, означают галоген и включают хлор, фтор, бром и йод.
[0094] Термин ʺгетероарилʺ включает замещенные или незамещенные ароматические однокольцевые структуры, предпочтительно 5-7-членные кольца, более предпочтительно 5-6-членные кольца, чьи кольцевые структуры включают по меньшей мере один гетероатом (например, O, N, или S), предпочтительно от одного до четырех или от одного до 3 гетероатомов, более предпочтительно один или два гетероатома. Когда два или более гетероатомов присутствуют в гетероарильном кольце, они могут быть одинаковыми или различными. Термин ʺгетероарилʺ также включает ʺполициклилʺ, ʺполициклʺ и ʺполициклическиеʺ кольцевые системы, имеющие два или более циклических колец, в которых два или более углеродов являются общими для двух примыкающих колец, например, кольца являются ʺконденсированными кольцамиʺ, где по меньшей мере одно из колец является гетероароматическим, например, другие циклические кольца могут являться циклоалкилами, циклоалкенилами, циклоалкинилами, арилами, гетероарилами и/или гетероциклилами. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, предпочтительные полициклы имеют 2-3 кольца. В некоторых вариантах осуществления, предпочтительные полициклические кольцевые системы имеют два циклических кольца, в которых оба кольца являются ароматическими. В некоторых вариантах осуществления, каждое кольцо полицикла содержит от 3 до 10 атомов в кольце, предпочтительно от 5 до 7. Например, гетероарильные группы включают, но не ограничены приведенными, пиррол, фуран, тиофен, имидазол, оксазол, тиазол, пиразол, пиридин, пиразин, пиридазин, хинолин, пиримидин, индолизин, индол, индазол, бензимидазол, бензотиазол, бензофуран, бензотиофен, циннолин, фталазин, хиназолин, карбазол, феноксазин, хинолин, пурин и т.п.
[0095] В некоторых вариантах осуществления, гетероарил является однокольцевой ароматической группой. В некоторых вариантах осуществления, гетероарил является двухкольцевой ароматической группой. В некоторых вариантах осуществления, гетероарил является трехкольцевой ароматической группой.
[0096] Термины ʺгетероциклилʺ, ʺгетероциклʺ и ʺгетероциклическийʺ относятся к замещенным или незамещенным неароматическим кольцевым структурам, предпочтительно 3-10-членным кольцам, более предпочтительно 3-7-членным кольцам, чьи кольцевые структуры включают по меньшей мере один гетероатом, предпочтительно от одного до четырех гетероатомов, более предпочтительно один или два гетероатома. В некоторых вариантах осуществления, кольцевая структура может иметь два циклических кольца. В некоторых вариантах осуществления, два циклических кольца могут иметь два или более общих атомов, например, кольца являются ʺконденсированными кольцамиʺ. Гетероциклильные группы включают, например, пиперидин, пиперазин, пирролидин, морфолин, лактоны, лактамы и т.п.
[0097] Термин ʺгидрокарбилʺ, как применяют в настоящем описании, относится к группе, которая связана через углеродный атом, который не имеет заместителя =O или =S, и обычно имеет по меньшей мере одну связь углерод-водород и первичный углеродный скелет, но может необязательно включать гетероатомы. Таким образом, такие группы как метил, этоксиэтил, 2-пиридил и трифторметил считают гидрокарбилами в контексте этой заявки, но заместители, такие как ацетил (который имеет заместитель =O на связывающем углероде) и этокси (который связан через кислород, не углерод) не считают гидрокарбилами. Углеводородные группы включают, но не ограничиваются перечисленными арил, гетероарил, карбоцикл, гетероцикл, алкил, алкенил, алкинил и их комбинации.
[0098] Термины ʺгидразоновый фрагментʺ или ʺгидразонʺ относятся к или
. Стереохимия гидразонового фрагмента может быть E или Z. Термин гидразон, как применяют в настоящем описании, включает как E, так и Z изомеры.
[0099] В различных местах настоящего описания заместители соединений раскрытия раскрыты в группах или в интервалах. Конкретно подразумевают, что раскрытие включает все до одной индивидуальных субкомбинаций элементов таких групп и интервалов. Например, термин ʺC1-C6 алкилʺ конкретно предназначен для индивидуального раскрытия метила, этила, пропила, изопропила, н-бутила, втор-бутила, изобутила и т.д.
[0100] "Фармацевтически приемлемая соль" представляет собой соль соединения, которая является подходящей для фармацевтического применения, включающая, но не ограниченная перечисленными, соли металлов (например, натрия, калия, магния, кальция и т.д.), кислотно-аддитивные соли (например, минеральных кислот, карбоновых кислот и т.д.), и соли присоединения основания (например, аммиака, органических аминов и т.д.). Кислотно-аддитивная солевая форма соединения, которое существует в своей свободной форме в виде основания, может быть получена посредством обработки указанной формы свободного основания соответствующей кислотой, такой как неорганическая кислота, например, галогеноводородная кислота, такая как хлористоводородная или бромистоводородная, серная, азотная, фосфорная кислота и т.п.; или органическая кислота, такая как, например, уксусная, гидроксиуксусная, пропановая, молочная, виноградная, малоновая, янтарная, малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, циклическая, салициловая, п-аминосалициловая, памоевая кислота и т.п. См., например, WO 01/062726. Некоторые фармацевтически приемлемые соли, приведенные Berge et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977), полностью включены в данное описание посредством ссылки. Соединения, содержащие кислотные протоны, могут быть преобразованы в их терапевтически активную, нетоксичную основно-аддитивную солевую форму, например, соли металлов или аминов, посредством обработки соответствующими органическими и неорганическими основаниями. Соответствующие основно-солевые формы включают, например, соли аммония, соли или ионы щелочного и щелочноземельного металла, например, соли лития, натрия, калия, магния, кальция и т.п., соли с органическими основаниями, например, N-метил-D-глюкамином, гидрабаминовые соли, и соли с аминокислотами такими как, например, аргинин, лизин и т.п. Наоборот, указанные солевые формы могут быть преобразованы в свободные формы обработкой соответствующими основанием или кислотой. Соединения и их соли могут находиться в форме сольвата, которая включена в объем настоящего раскрытия. Такие сольваты включают, например, гидраты, алкоголяты и т.п. См., например, WO 01/062726.
[0101] Раскрытие дополнительно предоставляет фармацевтические композиции, содержащие одно или более соединений раскрытия вместе с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. Соединения или фармацевтические композиции раскрытия могут применяться in vitro или in vivo.
[0102] Термин ʺизомерʺ, как применяют в настоящем описании, включает, но не ограничен перечисленными, таутомеры, цис- и транс-изомеры (E (entgegen), Z (zusammen)), R- и S-энантиомеры (указанное обозначение R и S применяют в соответствии с правилами, описанными в Pure Appl. Chem. (1976), 45, 11-30), диастереомеры, (D)-изомеры, (L)-изомеры, стереоизомеры, их рацемические смеси и другие их смеси. Все такие изомеры, также как и их смеси, подразумеваются включенными в это изобретение. Таутомеры, не будучи явным образом указанными в формулах, описанных в данном документе, подразумеваются включенными в объем настоящего изобретения.
Соединения изобретения
[0103] Настоящее изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (I):
Формула (I)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где:
Средство выбирают из группы, состоящей из: цитостатического средства, цитотоксического средства, цитокина, иммуносупрессорного средства, противоревматического средства, противовоспалительного средства, антибиотика, анальгетика, вирусостатического средства, противовоспалительного агента, противогрибкового средства, ингибитора фактора транскрипции, модулятора клеточного цикла, модулятора множественной лекарственной устойчивости, протеасомы или ингибитора протеазы, модулятора апоптоза, ингибитора фермента, ингибитора передачи сигнала, ингибитора протеазы, ингибитора ангиогенеза, гормона или производного гормона, антитела или его фрагмента, терапевтически или диагностически активного пептида, радиоактивного вещества, светоизлучающего вещества, светопоглощающего вещества, и производного любого из вышеприведенных;
Спейсер отсутствует, или его выбирают из группы, состоящей из и
;
n равно 0 или 1;
X выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5- где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного арила; необязательно замещенного гетероарила; и необязательно замещенного циклоалкила;
R5 выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероарила, и необязательно замещенного циклоалкила;
Y отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C6 алкила, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, C(O)-O-, и -O-C(O)-;
R1 отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; и необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-,
или R1 является природной или неприродной аминокислотой,
или R1 имеет следующую формулу:
R2 выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного C1-C12 алкила, необязательно замещенного арила и необязательно замещенного гетероарила;
каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из -H, электроноакцепторной группы и/или водорастворимой группы;
PBG является белок-связывающей группой, выбранной из группы, состоящей из необязательно замещенной малеимидной группы, необязательно замещенной галогенацетамидной группы, необязательно замещенной галогенацетатной группы, необязательно замещенной пиридилтиогруппы, необязательно замещенной изотиоцианатной группы, необязательно замещенной винилкарбонильной группы, необязательно замещенной азиридиновой группы, необязательно замещенной дисульфидной группы, необязательно замещенной ацетиленовой группы, необязательно замещенной группы сложного эфира N-гидроксисукцинимида, антитела или его фрагмента и дериватизированного антитела или его дериватизированного фрагмента;
где когда Спейсер отсутствует, Средство связано с азотом, примыкающим к Спейсеру посредством двойной связи; и
где по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 является электроноакцепторной группой.
[0104] В некоторых вариантах осуществления соединений, описанных в настоящем документе, PBG является белок-связывающей группой, выбранной из группы, состоящей из необязательно замещенной малеимидной группы, необязательно замещенной галогенацетамидной группы, необязательно замещенной галогенацетатной группы, необязательно замещенной пиридилтиогруппы, необязательно замещенной изотиоцианатной группы, необязательно замещенной винилкарбонильной группы, необязательно замещенной азиридиновой группы, необязательно замещенной дисульфидной группы, необязательно замещенной ацетиленовой группы, и необязательно замещенной группы сложного эфира N-гидроксисукцинимида.
[0105] В некоторых вариантах осуществления, PBG ассоциирована с антителом или его фрагментом. В некоторых вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с антителом или его фрагментом. В некоторых вариантах осуществления, PBG ассоциирована с альбумином. В других вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с эндогенным или экзогенным альбумином. В других вариантах осуществления, PGB ковалентно связана с цистеином-34 эндогенного или экзогенного альбумина.
[0106] В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (I):
Формула (I)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где
Средство выбирают из группы, состоящей из цитостатического средства, цитотоксического средства, цитокина, иммуносупрессорного средства, противоревматического средства, противовоспалительного средства, антибиотика, анальгетика, вирусостатического средства, противовоспалительного агента, противогрибкового средства, ингибитора фактора транскрипции, модулятора клеточного цикла, модулятора множественной лекарственной устойчивости, протеасомы или ингибитора протеазы, модулятора апоптоза, ингибитора фермента, ингибитора передачи сигнала, ингибитора протеазы, ингибитора ангиогенеза, гормона или производного гормона, антитела или его фрагмента, терапевтически или диагностически активного пептида, радиоактивного вещества, светоизлучающего вещества, светопоглощающего вещества, и производного любого из вышеприведенных;
Спейсер отсутствует, представляет собой или
;
n равно 0 или 1;
X выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного арила; необязательно замещенного гетероарила; и необязательно замещенного циклоалкила;
R5 выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероарила, и необязательно замещенного циклоалкила;
Y отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C6 алкила, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -C(O)-O-, и -O-C(O)-;
R1 отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкила, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; и необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-;
R2 выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного C1-C12 алкила, необязательно замещенного арила и необязательно замещенного гетероарила;
каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H и электроноакцепторной группы;
PBG является белок-связывающей группой, выбранной из группы, состоящей из необязательно замещенной малеимидной группы, необязательно замещенной галогенацетамидной группы, необязательно замещенной галогенацетатной группы, необязательно замещенной пиридилтиогруппы, необязательно замещенной изотиоцианатной группы, необязательно замещенной винилкарбонильной группы, необязательно замещенной азиридиновой группы, необязательно замещенной дисульфидной группы, необязательно замещенной ацетиленовой группы, необязательно замещенной группы сложного эфира N-гидроксисукцинимида и антитела или его фрагмента;
где, когда Спейсер отсутствует, Средство связано с азотом, примыкающим к Спейсеру посредством двойной связи; и
по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 является электроноакцепторной группой.
[0107] В некоторых вариантах осуществления соединений, описанных в настоящем документе, PBG является белок-связывающей группой, выбранной из группы, состоящей из необязательно замещенной малеимидной группы, необязательно замещенной галогенацетамидной группы, необязательно замещенной галогенацетатной группы, необязательно замещенной пиридилтиогруппы, необязательно замещенной изотиоцианатной группы, необязательно замещенной винилкарбонильной группы, необязательно замещенной азиридиновой группы, необязательно замещенной дисульфидной группы, необязательно замещенной ацетиленовой группы, и необязательно замещенной группы сложного эфира N-гидроксисукцинимида.
[0108] В некоторых вариантах осуществления, PBG ассоциирована с антителом или его фрагментом. В некоторых вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с антителом или его фрагментом. В некоторых вариантах осуществления, PBG ассоциирована с альбумином. В других вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с эндогенным или экзогенным альбумином. В других вариантах осуществления, PGB ковалентно связана с цистеином-34 эндогенного или экзогенного альбумина.
[0109] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (II):
Формула (II)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где Средство, PBG, Y, R1, Z1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (I).
[0110] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (III):
Формула (III)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где Средство, Спейсер, PBG, Y, R1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (I); и
где Z1 является электроноакцепторной группой.
[0111] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (IV):
Формула (IV)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где Средство, PBG, Y, R1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (I); и где Z1 является электроноакцепторной группой.
[0112] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (V):
Формула (V)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где Средство, PBG, n, Y, R1, R2, Z1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (I).
[0113] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VI):
Формула (VI)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где:
M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу и необязательно содержит один или более заместителей, выбранных из галогена;
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкил, галогена и -N3;
R' представляет собой -R3 или -CH2R3;
где каждый раз, когда присутствует R3, его независимо выбирают из группы, состоящей из -OH, -CH3, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы, и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Z1, Z2, Z3, Z4, Y, R1,R2 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (V).
[0114] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VI):
Формула (VI)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где
M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу.
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3.
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкил, галогена и -N3.
R3 выбирают из группы, состоящей из -OH, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Z1, Z2, Z3, Z4, Y, R1,R2 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (V).
[0115] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VII):
Формула (VII)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где R' представляет собой -R3 или -CH2R3; и X, X1, X2, X3, X4, n, Y, R1, R2, R3, Z1, Z2, Z3, Z4 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (VI).
[0116] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VII):
Формула (VII)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где X, X1, X2, X3, X4, n, Y, R1, R2, R3, Z1, Z2, Z3, Z4 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (V).
[0117] В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (VIII):
Формула (VIII)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где
Z1 является электроноакцепторной группой; и где Средство, X, n, R2, PBG, Y, R1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено для соединения Формулы (V).
[0118] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (IX):
Формула (IX)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где:
M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу и необязательно содержит один или более заместителей, выбранных из галогена;
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
R' представляет собой -R3 или -CH2R3;
где каждый раз, когда присутствует R3, его независимо выбирают из группы, состоящей из -OH, -CH3, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1, R2 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (VIII).
[0119] В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (IX):
Формула (IX)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер, где
M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу;
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
R3 выбирают из -OH, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1, R2 и PBG являются такими, как определено для соединения Формулы (VIII).
[0120] В некоторых вариантах осуществления, каждый из X1, X2, X3 и X4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, -CH3, -F, -Cl, -Br, -I и -N3.
[0121] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (X):
Формула (X)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер;
где R' представляет собой -R3 или -CH2R3; и X1, X2, X3, X4, R3, X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1 и R2 являются такими, как определено для соединения Формулы (IX).
[0122] В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение предоставляет соединение, имеющее структуру, представленную Формулой (X):
Формула (X)
или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват, или изомер; где X1, X2, X3, X4, R3, X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1 и R2 являются такими, как определено для соединения Формулы (IX).
[0123] В некоторых вариантах осуществления, Средство выбирают из группы, состоящей из N-нитрозомочевин; доксорубицина, 2-пирролпирролиноантрациклина, морфолиноантрациклина, диацетатоксиалкилантрациклина, даунорубицина, эпирубицина, идарубицина, неморубицина, PNU-159682, митоксантрона; аметантрона; хлорамбуцила, бендамустина, мелфалана, оксазофосфоринов; 5-фторурацила, 5´-дезокси-5-фторцитидина, 2'-дезокси-5-фторуридина, цитарабина, кладрибина, флударабина, пентостатина, гемцитабина, 4-амино-1-(((2S,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил)-5-фторпиримидин-2(1H)-она, тиогуанина; метотрексата, ралтитрекседа, пеметрекседа, плевитрекседа; паклитаксела, доцетаксела; топотекана, иринотекана, SN-38, 10-гидроксикамптотецина, GG211, луртотекана, 9-аминокамптотецина, камптотецина, 7-формилкамптотецина, 7-ацетилкамптотецина, 9-формилкамптотецина, 9-ацетилкамптотецина, 9-формил-10-гидроксикамптотецина, 10-формилкамптотецина, 10-ацетилкамптотецина, 7-бутил-10-аминокамптотецина, 7-бутил-9-амино-10,11,-метилендиоксокамптотецина; винбластина, винкрестина, виндезина, винорелбина; калихеамицинов; майтансина, майтансинола; ауристатинов (включающих, но не ограниченных перечисленными, ауристатин D, ауристатин E, ауристатин F, монометилауристатин D, монометилауристатин E, монометилауристатин F, метиловый эфир монометилауристатина F, ауристатин PYE, ауристатин PHE, родственный природный продукт доластатин 10 и его производные); аматоксинов (включающих, но не ограниченных перечисленными α-аманитин, β-аманитин, γ-аманитин, ε-аманитин, аманин, аманинамид, амануллин и амануллиновую кислоту и ее производные); дуокармицина A, дуокармицина B1, дуокармицина B2, дуокармицина C, дуокармицина SA, CC1065, адозелезина, бизелезина, карзелезина; эрибулина; трабектедина; пирролобензодиазепина, антрамицина, томаймицина, сибиромицина, DC-81, DSB-120; эпотилонов; блеомицина; дактиномицина; пликамицина, миромицина C и цис-конфигурированных комплексов платины (II); или производного любого из вышеприведенных.
[0124] В некоторых вариантах осуществления, Средство выбирают из группы, состоящей из N-нитрозомочевин; доксорубицина, 2-пирролиноантрациклина, морфолиноантрациклина, диацетатоксиалкилантрациклина, даунорубицина, эпирубицина, идарубицина, неморубицина, митоксантрона; аметантрона; хлорамбуцила, бендамустина, мелфалана, оксазофосфоринов; 5-фторурацила, 2'-дезокси-5-фторуридина, цитарабина, кладрибина, флударабина, пентостатина, гемцитабина, тиогуанина; метотрексата, ралтитрекседа, пеметрекседа, плевитрекседа; паклитаксела, доцетаксела; топотекана, иринотекана, SN-38, 10-гидроксикамптотецина, GG211, луртотекана, 9-аминокамптотецина, камптотецина; винбластина, винкрестина, виндезина, винорелбина; калихеамицинов; майтанзиноидов; ауристатинов; эпотилонов; блеомицина, дактиномицина, пликамицина, миромицина C и цис-конфигурированных комплексов платины (II); или производного любого из вышеприведенных.
[0125] В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3 и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -F, -NO2 и -CF3. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), -P(O)(OH)2, -SO3H, и их фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является -H.
[0126] В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -Br, -I, -F, C(O)OH, -NO2, -CF3 и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -F, -NO2, и -CF3. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является -H.
[0127] В некоторых вариантах осуществления, Z1 выбирают из галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN; и Z2, Z3 и Z4 каждый из независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, Z1 выбирают из группы, состоящей из -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3 и -CN; и каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3, и -CN. В некоторых вариантах осуществления, Z1 выбирают из группы, состоящей из -Cl, -F, и -NO2; и каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -F, -NO2, и -CF3.
[0128] В некоторых вариантах осуществления, R2 представляет собой метил.
[0129] В некоторых вариантах осуществления, X1 является -H, X2 является -F, X3 является -F и X4 является -OH.
Гидразоновый фрагмент
[0130] Система доставки лекарственного средства содержит кислотолабильный, расщепляемый гидразоновый фрагмент. Расщепление гидразонового фрагмента и период полувыведения при высвобождении лекарственного средства варьируют в соответствии с электроноакцепторными заместителями и их положением в фенильном кольце, по которому присоединен гидразон. Фенильное кольцо может быть замещено следующим образом, где PBG, R1, Y, Z1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено в настоящем описании.
[0131] В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит по меньшей мере одну электроноакцепторную группу. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит одну электроноакцепторную группу, присоединенную по положению 1. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит одну электроноакцепторную группу, присоединенную по положению 2. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит одну электроноакцепторную группу, присоединенную по положению 3. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит две электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 1 и 2. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит две электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 1 и 3. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит две электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 1 и 4. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит две электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 1 и 5. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит две электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 2 и 3. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит две электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 2 и 4. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит две электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 2 и 5. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит две электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 3 и 4. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит две электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 3 и 5. В некоторых вариантах осуществления, фенильное кольцо содержит три электроноакцепторные группы, присоединенные по положениям 1, 3 и 5.
[0132] В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3 и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -F, -NO2, и -CF3. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), -P(O)(OH)2, -SO3H и их фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является -H.
[0133] В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3, и -CN, где по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является -H. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -F, -NO2, и -CF3, где по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является -H. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -F, -NO2, и -CF3, где по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является -H.
[0134] В некоторых вариантах осуществления, период полувыведения при высвобождении лекарственного средства составляет около 1,5 часов, около 2,0 часов, около 2,5 часов, около 3,0 часов, около 3,5 часов, около 4,0 часов, около 4,5 часов, около 5,0 часов, около 5,5 часов, около 6,0 часов, около 6,5 часов, около 7,0 часов, около 7,5 часов, около 8,0 часов, около 8,5 часов, около 9,0 часов, около 9,5 часов, около 10,0 часов, около 10,5 часов, около 11,0 часов, около 11,5 часов, около 12,0 часов, около 12,5 часов, около 13,0 часов, около 13,5 часов, около 14,0 часов, около 14,5 часов, около 15,0 часов, около 15,5 часов, около 16,0 часов, около 16,5 часов, около 17,0 часов, около 17,5 часов, около 18,0 часов, около 18,5 часов, около 19,0 часов, около 19,5 часов, или около 20,0 часов.
[0135] Без связи с теорией, фенильное кольцо, содержащее одну электроноакцепторную группу, присоединенную к положению 1, стабилизирует гидразоновый фрагмент, приводя к медленному и пролонгированному высвобождению Средства в кислых средах. В некоторых вариантах осуществления, положение электроноакцепторных групп в фенильном кольце по отношению к положению гидразонового фрагмента в фенильном кольце предоставляет способ управления высвобождением лекарственного средства.
[0136] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет способ получения соединения для управления высвобождением лекарственного средства посредством модификации лекарственного средства с добавлением фрагмента или
, как описано в настоящем документе для Формул I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX и X.
[0137] Некоторые варианты осуществления изобретения включают конъюгаты со схемами замещения и соответствующими периодами полувыведения при высвобождении лекарственного средства, показанными в Таблице A (ЧСА обозначает человеческий сывороточный альбумин). Структура неморубицина представляет собой
.
Конъюгаты неморубицина, представленные в Таблице A, имеют следующую структуру:
Таблица A
Соединение | R6 | Период полувыведения при pH 5,0 (ч) |
1 |
![]() |
1,35 |
2 |
![]() |
3,05 |
3 |
![]() |
1,45 |
4 |
![]() |
3,45 |
5 |
![]() |
1,45 |
6 |
![]() |
4,40 |
7 |
![]() |
3,00 |
8 |
![]() |
1,35 |
9 |
![]() |
3,20 |
10 |
![]() |
2,00 |
11 |
![]() |
2,20 |
12 |
![]() |
2,05 |
13 |
![]() |
2,30 |
14 |
![]() |
10,40 |
[0138] В некоторых вариантах осуществления, соединение согласно изобретению выбирают из:
,
,
,
и
;
или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, сольвата или изомера,
где:
[0139] В некоторых вариантах осуществления, соединение выбирают из группы, состоящей из:
,
и
или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, сольвата или изомера.
[0140] В некоторых вариантах осуществления, соединение согласно настоящему изобретению выбирают из группы, состоящей из:
,
и
или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, сольвата или изомера.
[0141] В некоторых вариантах осуществления, соединение согласно настоящему изобретению выбирают из группы, состоящей из:
и
или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, сольвата, или изомера.
[0142] В некоторых вариантах осуществления, соединение представляет собой соединение 15, имеющее структуру:
.
[0143] В некоторых вариантах осуществления, соединение 15 предотвращает дезактивацию гемцитабина, что приводит к продолжительному воздействию на опухоль.
Средство
[0144] В некоторых вариантах осуществления, Средство выбирают из группы, состоящей из цитостатического средства, цитотоксического средства, цитокина, иммуносупрессора, противоревматического средства, противовоспалительного средства, антибиотика, анальгетика, противовоспалительного агента, вирусостатического средства, противогрибкового средства, ингибитора фактора транскрипции, модулятора клеточного цикла, модулятора множественной лекарственной устойчивости, протеасомы или ингибитора протеазы, модулятора апоптоза, ингибитора фермента, ингибитора ангиогенеза, гормона или производного гормона, антитела или его фрагмента, терапевтически или диагностически активного пептида, радиоактивного вещества, светоизлучающего вещества, светопоглощающего вещества, производного любого из вышеприведенных, фармацевтически приемлемой соли, гидрата, сольвата или изомера любого из приведенных выше.
[0145] В некоторых вариантах осуществления, Средство выбирают из группы, состоящей из N-нитрозомочевины; доксорубицина, 2-пирролпирролиноантрациклина, морфолиноантрациклина, диацетатоксиалкилантрациклина, даунорубицина, эпирубицина, идарубицина, неморубицина, PNU-159682, митоксантрона; аметантрона; хлорамбуцила, бендамустина, мелфалана, оксазофосфоринов; 5-фторурацила, 5'-дезокси-5-фторцитидина, 2'-дезокси-5-фторуридина, цитарабина, кладрибина, флударабина, пентостатина, гемцитабина, 4-амино-1-(((2S,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил)-5-фторпиримидин-2(1H)-она, тиогуанина; метотрексата, ралтитрекседа, пеметрекседа, плевитрекседа; паклитаксела, доцетаксела; топотекана, иринотекана, SN-38, 10-гидроксикамптотецина, GG211, луртотекана, 9-аминокамптотецина, камптотецина, 7-формилкамптотецина, 7-ацетилкамптотецина, 9-формилкамптотецина, 9-ацетилкамптотецина, 9-формил-10-гидроксикамптотецина, 10-формилкамптотецина, 10-ацетилкамптотецина, 7-бутил-10-аминокамптотецина, 7-бутил-9-амино-10,11,-метилендиоксокамптотецина; винбластина, винкрестина, виндезина, винорелбина; калихеамицинов; майтансина, майтансинола; ауристатинов (включающих, но не ограниченных перечисленными ауристатин D, ауристатин E, ауристатин F, монометилауристатина D, монометилауристатина E, монометилауристатина F, метилового эфира монометилауристатина F, ауристатина PYE, ауристатина PHE, родственного природного продукта доластатина 10, и его производных); аматоксинов (включающих, но не ограниченных перечисленными α-аманитин, β-аманитин, γ-аманитин, ε-аманитин, аманин, аманинамид, амануллин и амануллиновую кислоту и ее производные); дуокармицина A, дуокармицина B1, дуокармицина B2, дуокармицина C, дуокармицина SA, CC1065, адозелезина, бизелезина, карзелезина; эрибулина; трабектедина; пирролобензодиазепина, антрамицина, томаймицина, сибиромицина, DC-81, DSB-120; эпотилонов; блеомицина; дактиномицина; пликамицина, миромицина C и цис-конфигурированных комплексов платины (II); или производного любого из вышеприведенных.
[0146] В некоторых вариантах осуществления, Средство выбирают из группы, состоящей из N-нитрозомочевины; доксорубицина, 2-пирролпирролиноантрациклина, морфолиноантрациклина, диацетатоксиалкилантрациклина, даунорубицина, эпирубицина, идарубицина, неморубицина, PNU-159682, митоксантрон; аметантрон; хлорамбуцила, бендамустина, мелфалана, оксазофосфоринов; 5-фторурацила, 2'-дезокси-5-фторуридина, цитарабина, кладрибина, флударабина, пентостатина, гемцитабин, 4-амино-1-(((2S,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил)-5-фторпиримидин-2(1H)-она, тиогуанина; метотрексата, ралтитрекседа, пеметрекседа, плевитрекседа; паклитаксела, доцетаксела; топотекана, иринотекана, SN-38, 10-гидроксикамптотецина, GG211, луртотекана, 9-аминокамптотецина, камптотецина, 7-формилкамптотецина, 9-формилкамптотецина, 9-формил-10-гидроксикамптотецина, 7-бутил-10-аминокамптотецина, 7-бутил-9-амино-10,11,-метилендиоксокамптотецина; винбластина, винкрестина, виндезина, винорелбина; калихеамицинов; майтанзиноидов; ауристатинов; эпотилонов; блеомицина, дактиномицина, пликамицина, миромицина C и цис-конфигурированных комплексов платины (II); или производного любого из вышеприведенных.
[0147] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой a N-нитрозомочевину.
[0148] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой антрациклин, такой как, но не ограниченный перечисленными, доксорубицин, 2-пирролпирролиноантрациклин, морфолиноантрациклин, диацетатоксиалкилантрациклин, даунорубицин, эпирубицин, идарубицин, неморубицин, PNU-159682, митоксантрон или аметантрон.
[0149] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой алкилирующий агент, такой как, но не ограниченный перечисленными, хлорамбуцил, бендамустин, мелфалан или оксазофосфорины.
[0150] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой антиметаболит, такой как, но не ограниченный перечисленными, 5-фторурацил, 2'-дезокси-5-фторуридин, цитарабин, кладрибин, флударабин, пентостатин, гемцитабин, 4-амино-1-(((2S,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил)-5-фторпиримидин-2(1H)-он или тиогуанин. В некоторых вариантах осуществления, антиметаболит представляет собой аналог пиримидина или пурина, содержащий по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу.
[0151] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой антагонист фолиевой кислоты, такой как, но не ограниченный перечисленными, метотрексат, ралтитрексед, пеметрексед или плевитрексед.
[0152] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой таксан, такой как, но не ограниченный перечисленными, паклитаксел или доцетаксел.
[0153] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой камптотецин, такой как, но не ограниченный перечисленными, топотекан, иринотекан, SN-38, 10-гидроксикамптотецин, GG211, луртотекан, 9-аминокамптотецин, камптотецин, -формилкамптотецин, 9-формилкамптотецин, 9-формил-10-гидроксикамптотецин, 7-бутил-10-аминокамптотецин или 7-бутил-9-амино-10,11-метилендиоксокамптотецин.
[0154] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой алкалоид из Vinca, такой как, но не ограниченный перечисленными, винбластин, винкрестин, виндезин, винорелбин или калихеамицин.
[0155] В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой майтансиноид, ауристатин, эпотилон, блеомицин, дактиномицин, пликамицин, миромицин C, цис-конфигурированный комплекс платины (II) или производное любого из вышеприведенных.
Спейсер
Амидная связь
[0156] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой , где n, X и R2 являются такими, как определено в настоящем описании.
[0157] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой , где n, X и R2 являются такими, как определено в настоящем описании.
[0158] В некоторых вариантах осуществления, n равно 0 или 1.
[0159] В некоторых вариантах осуществления, X выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C1-C18 алкил, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-NH-C(O)-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где необязательно каждый из до шести атомов углерода в указанном C1-C18 алкиле независимо заменен на -OCH2CH2-; необязательно замещенного арила; необязательно замещенного гетероарила; и необязательно замещенного циклоалкила.
[0160] В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где один углеродный атом в указанном C1-C18 алкиле заменен на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где два углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где три углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где четыре углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где пять углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где шесть углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-.
[0161] В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где один углеродный атом в указанном C1-C18 алкиле заменен на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где два углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где три углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где четыре углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где пять углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где шесть углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-.
[0162] В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где один углеродный атом в указанном C1-C18 алкиле заменен на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где два углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где три углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где четыре углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где пять углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где шесть углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-.
[0163] В некоторых вариантах осуществления, X является необязательно замещенным арилом. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой , где каждый из Z5, Z6, Z7 и Z8 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -OH, -NO2, -CN, -OC1-C6 алкила, необязательно замещенного C1-C6 алкила, необязательно замещенного C1-C6 галогеналкила и необязательно замещенного C1-C6 галогеналкокси.
В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой , где каждый из Z5, Z6, Z7 и Z8 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -OH, -NO2, -CN, необязательно замещенного -OC1-C6 алкила, необязательно замещенного C1-C6 алкила, необязательно замещенного C1-C6 галогеналкила и необязательно замещенного C1-C6 галогеналкокси. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z5, Z6, Z7 и Z8 является -H.
[0164] В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный гетероарил.
[0165] В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой необязательно замещенный циклоалкил.
[0166] В некоторых вариантах осуществления, R5 выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероарила и необязательно замещенного циклоалкила. В некоторых вариантах осуществления, R5 представляет собой необязательно замещенный арил.
[0167] В некоторых вариантах осуществления, R2 выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного C1-C12 алкила, необязательно замещенного арила, и необязательно замещенного гетероарила.
[0168] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер отсутствует.
[0169] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер содержит фрагмент или связь, которые являются расщепляемыми ферментом. В некоторых вариантах осуществления, расщепляемая связь является пептидной связью, имидной связью или амидной связью. В некоторых вариантах осуществления, амидная связь может быть сконструирована, чтобы расщепляться конкретно эстеразой и/или амидазами. В некоторых вариантах осуществления, Спейсер содержит амидную связь, которая селективно расщепляется под действием карбоксилэстераз. В предпочтительных вариантах осуществления, Спейсер содержит амидную связь, которая селективно расщепляется под действием карбоксилэстеразы 2. В предпочтительных вариантах осуществления, Спейсер содержит амидную связь, которая присоединена к арильному кольцу следующим образом: . В некоторых вариантах осуществления, Спейсер содержит амидную связь, которая присоединена к арильному кольцу следующим образом:
где каждый из Z5, Z6, Z7 и Z8 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -OH, -NO2, -CN, -OC1-C6 алкила, необязательно замещенного C1-C6 алкила, необязательно замещенного C1-C6 галогеналкила и необязательно замещенного C1-C6 галогеналкокси. В некоторых вариантах осуществления, Спейсер содержит амидную связь, которая присоединена к арильному кольцу следующим образом:
где каждый из Z5, Z6, Z7 и Z8 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -OH, -NO2, -CN, -OC1-C6 алкила, необязательно замещенного C1-C6 алкила, необязательно замещенного C1-C6 галогеналкила и необязательно замещенного C1-C6 галогеналкокси. В некоторых вариантах осуществления, каждый из Z5, Z6, Z7 и Z8 является -H.
[0170] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой , где R2 выбирают из группы, состоящей из: -H, необязательно замещенного C1-C12 алкила, необязательно замещенного арила, и необязательно замещенного гетероарила; и каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3 и -CN. В некоторых вариантах осуществления, каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -F, -NO2, и -CF3. В некоторых вариантах осуществления, каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: фенокси-группы, первичной, вторичной или третичной аминогруппы, группы простого эфира, фенольной группы, амидной группы, сложноэфирной группы, алкильной группы, замещенной алкильной группы, фенильной группы и винильной группы. В некоторых вариантах осуществления, каждый из W1, W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), -P(O)(OH)2, -SO3H, и их фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере один из W1, W2, W3 и W4 не является -H.
[0171] В некоторых приведенных выше вариантах осуществления, W1 выбирают из группы, состоящей из: галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN; и каждый из W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, галогена, -C(O)OH, -C(O)O-C1-C6 алкила, -NO2, галогеналкила, -S(O)2-C1-C6 алкила и -CN. В некоторых вариантах осуществления, W1 выбирают из группы, состоящей из: -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3, и -CN; и каждый из W2, W3 и W4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -Br, -I, -F, -C(O)OH, -NO2, -CF3, и -CN. В некоторых вариантах осуществления, W1 выбирают из группы, состоящей из: -Cl, -F, и -NO2; и каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из: -H, -Cl, -F, -NO2 и -CF3.
[0172] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой , где R2 является таким, как определено в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой
[0173] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой ; и m равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
[0174] В некоторых вариантах осуществления, Спейсер представляет собой
[0175] В некоторых вариантах осуществления, R2 выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного C1-C12 алкила, необязательно замещенного арила и необязательно замещенного гетероарила.
[0176] В одном аспекте, спейсер может функционировать в качестве защитной группы, предотвращая метаболическое разрушение Средства, обеспечивая посредством этого целенаправленной применение более высоких доз Средства. В некоторых вариантах осуществления, Средство представляет собой гемцитабин.
Линкер
[0177] В некоторых вариантах осуществления, линкер содержит Y и R1. В некоторых вариантах осуществления, Y отсутствует. В некоторых вариантах осуществления, R1 отсутствует. В некоторых вариантах осуществления, отсутствуют оба Y и R1.
[0178] В некоторых вариантах осуществления, Y выбирают из группы, состоящей из метила, этила, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -C(O)-O-, и -O-C(O)-.
[0179] В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где один углеродный атом в указанном C1-C18 алкиле заменен на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где два углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где три углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где четыре углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где пять углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил, где шесть углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-.
[0180] В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где один углеродный атом в указанном C1-C18 алкиле заменен на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где два углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где три углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где четыре углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где пять углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-NH-C(O)R5-, где шесть углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-.
[0181] В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где один углеродный атом в указанном C1-C18 алкиле заменен на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где два углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где три углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где четыре углеродных атома в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где пять углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-. В некоторых вариантах осуществления, R1 представляет собой необязательно замещенный C1-C18 алкил-C(O)-NH-R5-, где шесть углеродных атомов в указанном C1-C18 алкиле заменены на -OCH2CH2-.
[0182] В некоторых вариантах осуществления, R5 выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероарила и необязательно замещенного циклоалкила.
[0183] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент соединения согласно изобретению выбирают из группы, состоящей из:
,
,
,
,
,
Белок-связывающая группа
[0184] Белок-связывающие группы (ʺPBGʺ) включают, но не ограничиваются перечисленными, замещенную или незамещенную малеимидную группу, замещенную или незамещенную галогенацетамидную группу, замещенную или незамещенную галогенацетатную группу, замещенную или незамещенную пиридилтиогруппу, замещенную или незамещенную изотиоцианатную группу, замещенную или незамещенную винилкарбонильную группу, замещенную или незамещенную азиридиновую группу, замещенную или незамещенную дисульфидную группу, замещенную или незамещенную ацетиленовую группу, замещенную или незамещенную группу сложного эфира N-гидроксисукцинимида, антитело или его фрагмент. В некоторых вариантах осуществления, белок-связывающие группы (ʺPBGʺ) включают, но не ограничиваются перечисленными, замещенную или незамещенную малеимидную группу, замещенную или незамещенную галогенацетамидную группу, замещенную или незамещенную галогенацетатную группу, замещенную или незамещенную пиридилтиогруппу, замещенную или незамещенную изотиоцианатную группу, замещенную или незамещенную винилкарбонильную группу, замещенную или незамещенную азиридиновую группу, замещенную или незамещенную дисульфидную группу, замещенную или незамещенную ацетиленовую группу или замещенную или незамещенную Группу сложного эфира N-гидроксисукцинимида. В некоторых вариантах осуществления, белок-связывающая группа является замещенной или незамещенной малеимидной группой. В некоторых вариантах осуществления, белок-связывающая группа представляет собой
В некоторых вариантах осуществления, PBG является замещенной C1-C6 алкилом или галогеном. В некоторых вариантах осуществления, PBG является замещенной метилом, -Cl или -Br. В некоторых вариантах осуществления, PBG включает антитело или его фрагмент. В некоторых вариантах осуществления, PBG включает лиганд, имеющий специфичность к рецептору, например, низко- или высокомолекулярное соединение, такое как фолиевая кислота, витамины, пептиды, сахара, нативные или модифицированные белки.
[0185] Дисульфидная группа может быть активирована тионитробензойной кислотой (например, 5'-тио-2-нитробензойной кислотой) в виде обмениваемой группы. Малеимид, пиридилдитио, или группа сложного эфира N-гидроксисукцинимида могут, при необходимости, быть замещены алкильной группой или приведенными выше водорастворимыми группами. Как правило, белок-связывающая группа обладает белок-связывающими свойствами, т.е. она связывается ковалентно (ʺковалентная белок-связывающая группаʺ) или нековалентно (ʺнековалентная белок-связывающая группаʺ), в физиологической среде, с конкретными аминокислотами на поверхности белка. Малеимидная группа, галогенацетамидная группа, галогенацетатная группа, пиридилдитио-группа, дисульфидная группа, винилкарбонильная группа, азиридиновая группа и/или ацетиленовая группа предпочтительно взаимодействуют с тиольными (-SH) группами цистеинов, в то время как группа сложного эфира N-гидроксисукцинимида и/или изотиоцианатная группа предпочтительно взаимодействуют с аминогруппой (-NH) лизинов на поверхности белка. Например, белок-связывающая группа, такая как малеимидная группа, может связываться с цистеином-34 альбумина. В некоторых вариантах осуществления, альбумин не является модифицированным (например, он не модифицирован, чтобы быть заряженным либо положительно или отрицательно). В некоторых вариантах осуществления, PBG, описанная в данном документе, может связываться с антителом или его фрагментом, такими, как описаны в данном документе.
[0186] Соединение, применяемое в изобретении, включает любые и все комбинации одного или более Средств, спейсеров, линкеров, белок-связывающих групп, расщепляемых фрагментов, т.е. гидразон, амидную связь. Соединения могут содержать антрациклин и расщепляемый кислотой фрагмент, который может расщепляться таким образом, чтобы управлять высвобождением антрациклина. В некоторых вариантах осуществления, терапевтически эффективное вещество содержит антрациклин, гидразон в качестве расщепляемого кислотой фрагмента, расщепление и период полувыведения при высвобождении лекарственного средства которого, варьируют в соответствии с электроноакцепторными заместителями и их положением в фенильном кольце, к которому присоединен гидразон, и малеимидную группу в качестве ковалентной белок-связывающей группы. В некоторых других вариантах осуществления, соединения могут содержать гемцитабин и расщепляемый кислотой фрагмент, который может расщепляться таким образом, чтобы управлять высвобождением гемцитабина. В некоторых других вариантах осуществления, соединения могут содержать алкалоид Vinca и расщепляемый кислотой фрагмент, который может расщепляться таким образом, чтобы управлять высвобождением алкалоида Vinca.
Антитела в качестве носителей
[0187] Злокачественные клетки обладают специфичными маркерами, известными как антигены, которые имеют значение для роста и прогрессирования опухоли. Антигены представляют собой белки, часто расположенные на поверхности опухоли. Важным характеристическим признаком антител является их способность связываться с целевыми антигенами с высокой специфичностью. Однако, несмотря на специфичное связывание с антигенами, у антител часто отсутствует терапевтическая активность (Panowski et al., mAbs, 6, 34-45 (2014); Chari et al., Angewandte Chem. Int. Ed., 53, 3796-3827 (2014)). Вследствие их высокой специфичности к антигенам, антитела могут применяться в качестве носителей для доставки лекарственного средства. Они могут быть конъюгированы с терапевтически эффективным веществом, образуя конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC), чтобы доставлять терапевтически эффективное вещество к целевому участку, такому как опухоль. При связывании ADC с антигеном, комплекс антиген-ADC интернализуется через эндоцитоз. Попадая внутрь опухоли, ADC высвобождает терапевтически эффективное вещество. Чтобы ADC был успешным, важным является выбор терапевтически эффективного вещества, линкера и антитела. Выбор антигена, и, следовательно, соответствующего антитела является важным, так как эффективность интернализации комплекса антиген-антитело влияет на то, как много терапевтически эффективного вещества доставляется. Кроме того, для эффективности ADC, число молекул лекарственного средства, требуемое для уничтожения клетки, должно быть ниже количества лекарственного средства, которое можно доставить. Таким образом, активное лекарственное средство, с активностью в пикомолярном диапазоне, является предпочтительным. Окончательно, как только ADC интернализуется, линкер должен расщепляться для высвобождения терапевтически эффективного вещества. Предпочтительные линкеры обеспечивают эффективное и контролируемое высвобождение терапевтически эффективного вещества в кислой среде опухоли, в то же время предотвращая высвобождение терапевтически эффективного вещества в плазме, которое могло бы приводить к нецелевой токсичности и более узкому диапазону терапевтического действия для применения терапевтически эффективного вещества. Линкеры, раскрытые в настоящем описании, могут быть конъюгированы с антителами, которые направлены в сторону любых антигенов или рецепторов, экспрессируемых на злокачественной клетке. Антитело может быть химерным, гуманизированным, человеческим или генетически сконструированным или химически модифицированным антителом, таким как тио-антитело (ТИОMAB), и обеспечивать присоединение линкера без значительного снижения целевой связывающей способности антитела.
[0188] В некоторых вариантах осуществления белок-связывающие группы (PBG) соединений, описанных в настоящем документе, ассоциированы с антителом или его фрагментом, описанными в настоящем документе, образуя, таким образом, ADC. В некоторых вариантах осуществления, PBG ковалентно связана с антителом или его фрагментом. В других вариантах осуществления, PBG нековалентно связана с антителом или его фрагментом.
[0189] В некоторых аспектах, PBG согласно настоящей заявке может связываться с носителем. В некоторых вариантах осуществления, носитель представляет собой полипептид-связывающее средство. Раскрытие охватывает полипептид-связывающие средства, такие как антитела, антиген-связывающие части антител, и отчасти неиммуноглобулиновые антиген-связывающие структуры, которые могут эффективно нацеливаться на антигены.
[0190] Моноклональные антитела, связывающиеся с антигенами, присутствующими на поверхности опухоли, могут применяться в раскрытых способах и композициях.
[0191] В некоторых вариантах осуществления, антитела могут представлять собой модифицированные антитела или их антиген-связывающие фрагменты, которые связываются с внеклеточным доменом антигена.
[0192] В некоторых вариантах осуществления, деиммунизированное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который связывается с внеклеточным доменом антигена, включают вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где каждая вариабельная область имеет от 2 до 20 аминокислотных замен в каркасной области в сравнении с нечеловеческим или исходным антителом, которое связывается с внеклеточным доменом антигена.
[0193] В некоторых вариантах осуществления, деиммунизированное антитело или его антиген-связывающий фрагмент имеет одну иди более областей, определяющих комплементарность, (CDR) из нечеловеческого или исходного антитела, которое связывается с внеклеточным доменом антигена. В одном варианте осуществления, в областях, определяющих комплементарность (CDR), присутствует от 1 до 5 замен.
[0194] В некоторых вариантах осуществления, одноцепочечные антитела, и химерные, гуманизированные или приматизированные (CDR-привитые) антитела, а также химерные или CDR-привитые одноцепочечные антитела, содержащие части, полученные из различных видов, могут применяться в качестве антиген-связывающих частей антитела. Различные части этих антител могут быть соединены вместе химически общепринятыми методами, или могут быть получены в виде совмещенного белка с использованием методов генетической инженерии. Например, нуклеиновые кислоты, кодирующие химерную или гуманизированную цепь, могут экспрессироваться для получения совмещенного белка. См., например, Cabilly et al., Патент США № 4,816,567; Cabilly et al., Европейский патент № 0,125,023 B1; Boss et al., Патент США № 4,816,397; Boss et al., Европейский патент № 0,120,694 B1; Neuberger, M. S. et al., WO 86/01533; Neuberger, M. S. et al., Европейский патент № 0,194,276 B1; Winter, Патент США № 5,225,539; и Winter, Европейский патент № 0,239,400 B1. См. также, Newman, R. et al., BioTechnology, 10: 1455-1460 (1992), касающуюся приматизированного антитела. См., например, Ladner et al., Патент США № 4,946,778; и Bird, R. E. et al., Science, 242: 423-426 (1988)), касающуюся одноцепочечных антител.
[0195] Дополнительно, могут также применяться функциональные фрагменты антител, включающие фрагменты химерных, гуманизированных, приматизированных или одноцепочечных антител. Функциональные фрагменты субъектных антител сохраняют по меньшей мере одну функцию связывания и/или функцию модуляции непроцессированного антитела, производными которого они являются. В некоторых вариантах осуществления, функциональные фрагменты сохраняют антиген-связывающую функцию соответствующего непроцессированного антитела (например, специфичность к опухоли).
[0196] Например, фрагменты антитела, способные к связыванию с рецептором антигена или его частью, включающие, но не ограниченные перечисленными, фрагменты Fv, Fab, Fab' и F(ab')2, охватываются изобретением. Такие фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением или рекомбинантными технологиями. Например, расщепление папаином или пепсином может генерировать фрагменты Fab или F(ab')2, соответственно. Антитела, продуцируемые в разнообразных усеченных формах с использованием генов антител, в которых один или более стоп-кодонов были введены против хода транскрипции от природного стоп-сайта, охватываются изобретением. Например, химерный ген, кодирующий часть тяжелой цепи F(ab')2, может быть сконструирован для включения последовательностей ДНК, кодирующих домен CH1 и шарнирную область тяжелой цепи.
[0197] Термин ʺгуманизированный иммуноглобулинʺ как применяют в настоящем описании, относится к иммуноглобулину, содержащему части иммуноглобулинов различного происхождения, где по меньшей мере, одна часть имеет человеческое происхождение. Соответственно, настоящее изобретение охватывает гуманизированный иммуноглобулин, имеющий специфичность связывания для антигена (например, человеческого антигена), указанный иммуноглобулин содержит антиген-связывающую область нечеловеческого происхождения (например, от грызуна) и по меньшей мере часть иммуноглобулина человеческого происхождения (например, человеческую каркасную область, человеческую константную область или ее часть). Например, гуманизированное антитело может содержать части, производные от иммуноглобулина нечеловеческого происхождения с необходимой специфичностью, такого как мышиный, и из последовательностей иммуноглобулина человеческого происхождения (например, химерного иммуноглобулина), соединенные вместе химически общепринятыми методами (например, синтетическими) или полученные в виде совмещенного белка с использованием методов генетической инженерии (например, ДНК, кодирующая белковые части химерного антитела, может экспрессироваться для продуцирования совмещенной полипептидной цепи).
[0198] Одним другим примером гуманизированного иммуноглобулина является иммуноглобулин, содержащий одну или более цепей иммуноглобулина, содержащих CDR нечеловеческого происхождения (например, одну или более CDR, производных от антитела нечеловеческого происхождения), и каркасную область, производную от легкой и/или тяжелой цепи человеческого происхождения (например, CDR-привитые антитела с изменениями в каркасе или без них).
[0199] В некоторых вариантах осуществления, антитело представляет собой антитело-антагонист. Как описано в данном документе, термин ʺантитело-антагонистʺ относится к антителу, которое может ингибировать одну или более функций мишени, таких как активность связывания (например, связывания лиганда) и активность передачи сигналов (например, транспорта аминокислот). Например, антитело-антагонист может ингибировать (снижать или предотвращать) транспорт глутамина антигеном.
[0200] В некоторых вариантах осуществления, также применимыми являются антиидиотипические антитела. Антиидиотипические антитела распознают антигенные детерминанты, ассоциированные с антиген-связывающим участком другого одного антитела. Антиидиотипические антитела могут быть получены против вторичного антитела при иммунизации животных одинакового вида, и могут принадлежать к такому же штамму, как и животное, используемое для продуцирования вторичного антитела. См. например, Патент США № 4,699,880. В одном варианте осуществления, антитела выделяются против рецептора или его части, и эти антитела в свою очередь применяют для продуцирования антиидиотипического антитела. Такое антиидиотипическое антитело может также быть ингибитором транспортерной функции антигена, хотя оно само не связывает антиген. Такое антиидиотипическое антитело может также называться антителом-антагонистом.
[0201] В некоторых вариантах осуществления, подходящие антитела могут быть фрагментированы с использованием общепринятых методов и фрагменты могут быть подвергнуты скринингу на применимость таким же образом, как описано выше для цельных антител. Например, фрагменты F(ab)2 могут быть генерированы посредством обработки антитела пепсином. Полученный в результате фрагмент F(ab)2 может быть обработан для снижения дисульфидных мостиков, чтобы продуцировать фрагменты Fab.
[0202] В некоторых вариантах осуществления, подходящие антитела дополнительно предназначены для включения биспецифичных, одноцепочечных, химерных и гуманизированных молекул, имеющих аффинность к полипептиду антигена, придаваемую по меньшей мере одной областью CDR антитела. Методы получения одноцепочечных антител (Патент США № 4,946,778) могут также быть адаптированы для продуцирования одноцепочечных антител. Также, трансгенные мыши или другие организмы, включающие других млекопитающих, могут применяться для экспрессии гуманизированных антител. Способы генерации этих антител известны в данной области. См., например, Cabilly et al., Патент США № 4,816,567; Cabilly et al., Европейский патент № 0,125,023 B1; Queen et al., Европейский патент № 0,451,216 B1; Boss et al., Патент США № 4,816,397; Boss et al., Европейский патент № 0,120,694 E1; Neuberger, M. S. et al., WO 86/01533; Neuberger, M. S. et al., Европейский патент № 0,194,276 B1; Winter, Патент США № 5,225,539; Winter, Европейский патент № 0,239,400 B1; Padlan, E. A. et al., Европейская патентная заявка № 0,519,596 A1. См. также, Ladner et al., Патент США № 4,946,778; Huston, Патент США № 5,476,786; и Bird, R. E. et al., Science, 242: 423-426 (1988)).
[0203] Такие гуманизированные иммуноглобулины могут продуцироваться с использованием синтетических и/или рекомбинантных нуклеиновых кислот для получения генов (например, кДНК), кодирующих желательную гуманизированную цепь. Например, последовательности нуклеиновой кислоты (например, ДНК), кодирующие гуманизированные вариабельные области, могут быть построены с использованием ПЦР-способов мутагенеза, чтобы изменить последовательности ДНК, кодирующие человеческую или гуманизированную цепь, такие как ДНК-матрица из прежде гуманизированной вариабельной области (см., например, Kamman, M., et al., Nucl. Acids Res., 17: 5404 (1989)); Sato, K., et al., Cancer Research, 53: 851-856 (1993); Daugherty, B. L. et al., Nucleic Acids Res., 19(9): 2471-2476 (1991); и Lewis, A. P. и J. S. Crowe, Gene, 101: 297-302 (1991)). Применяя эти или другие подходящие способы, могут быть также легко получены варианты. В одном варианте осуществления, клонированные вариабельные области могут быть подвергнуты мутагенезу, и могут быть отобраны последовательности, кодирующие варианты с желательной специфичностью (например, из библиотеки фагов; см. например, Krebber et al., Патент США № 5,514,548; Hoogenboom et al., WO 93/06213, опубликован 1 апреля 1993)).
[0204] В некоторых вариантах осуществления, антитело представляет собой моноклональное антитело. Например, способ генерации моноклонального антитела, которое специфически связывается с полипептидом антигена, может включать в себя введение в мышь количества иммуногенной композиции, содержащей полипептид антигена, эффективное для стимуляции обнаруживаемого иммунного ответа, получение продуцирующих антитела клеток (например, клеток из селезенки) из мыши и гибридизацию продуцирующих антитела клеток с клетками миеломы, чтобы получить продуцирующие антитела гибридомы, и тестирование продуцирующих антитела гибридом, чтобы идентифицировать гибридому, которая продуцирует моноклональные антитела, которые специфически связываются с полипептидом антигена. Сразу после получения, гибридому можно размножать в культуре клеток, необязательно в условиях культивирования, где производные от гибридомы клетки продуцируют моноклональные антитела, которые специфически связываются с полипептидом антигена. Моноклональные антитела могут быть очищены из культуры клеток.
[0205] Дополнительно, методы, применяемые для скрининга антител, чтобы идентифицировать желательное антитело, могут влиять на свойства полученного антитела. Например, антитело для применения в некоторых терапевтических целях, могут быть способными для нацеливания на конкретный тип клеток. Соответственно, для получения антител этого типа, может быть желательным проводить скрининг антител, которые связываются с клетками, которые экспрессируют антиген, представляющий интерес (например, посредством сортировки флуоресцентно-активированных клеток). Аналогично, если антитело будет применяться для связывания антигена в растворе, может быть желательным тестировать связывание в растворе. Для тестирования антител доступно разнообразие различных методов: взаимодействие с антигеном для идентификации особенно желательных антител. Такие методы включают ELISA, аналитические тесты с использованием поверхностного плазмонного резонанса (например, тест на связывание Biacore, Biacore AB, Uppsala, Sweden), сэндвич-анализы (например, система парамагнитных шариков от IGEN International, Inc., Gaithersburg, Maryland), Вестерн-блоттинги, аналитические тесты на иммунопреципитацию и иммуногистохимия.
Фармацевтические композиции
[0206] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет фармацевтическую композицию, содержащее соединение, описанное в данном документе.
[0207] Общее количество соединения в композиции для введения пациенту, является количеством, которое подходит для этого пациента. Специалист в данной области сможет понять, что для различных индивидуумов могут требоваться различные общие количества терапевтически эффективного вещества. В некоторых вариантах осуществления, количество соединения представляет собой фармацевтически эффективное количество. Квалифицированный работник сможет определить количество соединения в композиции, необходимое для лечения пациента, на основе таких факторов, как, например, возраст, масса тела и физическое состояние пациента. Концентрация соединения зависит от его растворимости в растворе для внутривенного введения и объема жидкой среды, который может вводиться. Например, концентрация соединения может составлять от около 0,1 мг/мл до около 50 мг/мл в инъекционной композиции. В некоторых вариантах осуществления, концентрация соединения может составлять от около 0,1 мг/мл до около 25 мг/мл, от около 7 мг/мл до около 17 мг/мл, от около 0,1 мг/мл до около 5 мг/мл или от около 0,25 мг/мл до около 4,5 мг/мл. В конкретных вариантах осуществления, концентрация соединения может составлять около 0,1 мг/мл, около 0,2 мг/мл, около 0,3 мг/мл, около 0,4 мг/мл, около 0,5 мг/мл, около 0,6 мг/мл, около 0,7 мг/мл, около 0,8 мг/мл, около 0,9 мг/мл, около 1,0 мг/мл, около 1,1 мг/мл, около 1,2 мг/мл, около 1,3 мг/мл, около 1,4 мг/мл, около 1,5 мг/мл, около 1,6 мг/мл, около 1,7 мг/мл, около 1,8 мг/мл, около 1,9 мг/мл, около 2,0 мг/мл, около 2,1 мг/мл, около 2,2 мг/мл, около 2,3 мг/мл, около 2,4 мг/мл, около 2,5 мг/мл, около 2,6 мг/мл, около 2,7 мг/мл, около 2,8 мг/мл, около 2,9 мг/мл, около 3,0 мг/мл, около 3,1 мг/мл, около 3,2 мг/мл, около 3,3 мг/мл, около 3,4 мг/мл, около 3,5 мг/мл, около 3,6 мг/мл, около 3,7 мг/мл, около 3,8 мг/мл, около 3,9 мг/мл, около 4,0 мг/мл, около 4,1 мг/мл, около 4,2 мг/мл, около 4,3 мг/мл, около 4,4 мг/мл, около 4,5 мг/мл, около 4,6 мг/мл, около 4,7 мг/мл, около 4,8 мг/мл, около 4,9 мг/мл, около 5,0 мг/мл, около 5,1 мг/мл, около 5,2 мг/мл, около 5,3 мг/мл, около 5,4 мг/мл, около 5,5 мг/мл, около 5,6 мг/мл, около 5,7 мг/мл, около 5,8 мг/мл, около 5,9 мг/мл, или около 6,0 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления, концентрация соединения может составлять около 7 мг/мл, около 8 мг/мл, около 9 мг/мл, около 10 мг/мл, около 11 мг/мл, около 12 мг/мл, около 13 мг/мл, около 14 мг/мл, около 15 мг/мл, около 16 мг/мл, около 17 мг/мл, около 18 мг/мл, около 19 мг/мл, около 20 мг/мл, около 21 мг/мл, около 22 мг/мл, около 23 мг/мл, около 24 мг/мл, около 25 мг/мл, около 26 мг/мл, около 27 мг/мл, около 28 мг/мл, около 29 мг/мл или около 30 мг/мл.
[0208] Фармацевтические композиции и наборы согласно настоящему изобретению могут также содержать разбавители, наполнители, соли, буферы, стабилизаторы, солюбилизаторы и другие вещества, хорошо известные в данной области. Термин ʺфармацевтически приемлемоеʺ означает нетоксичное вещество, которое не препятствует эффективности биологической активности активных ингредиента (ингредиентов). Характеристики носителя будут зависеть от пути введения.
[0209] Композиции могут вводиться различными общепринятыми способами. Иллюстративные пути введения, которые могут применяться, включают пероральный, парентеральный, внутривенный, внутриартериальный, кожный, подкожный, внутримышечный, местный, внутричерепной, интраорбитальный, внутриглазной, интравитреальный, интравентрикулярный, интракапсулярный, интраспинальный, интрацистернальный, внутрибрюшинный, интраназальный, аэрозольный, введение в центральную нервную систему (ЦНС), или введение посредством суппозитория. В некоторых вариантах осуществления, композиции подходят для парентерального введения. Эти композиции могут вводиться, например, внутрибрюшинно, внутривенно, или интратекально. В некоторых вариантах осуществления, композиции вводят посредством внутривенной инъекции. В некоторых вариантах осуществления, восстановленная лекарственная форма может быть получена ресуспендированием лиофилизированной композиции соединения антрациклина в жидкости для ресуспендирования, содержащей этанол и воду. Такое восстановление может включать в себя добавление жидкости для ресуспендирования и смешивание, например, посредством кругового перемешивания или встряхивания смеси. Ресуспендированная лекарственная форма затем может быть сделана пригодной для инъекции посредством смешивания, например, раствора Рингера с лактатом с лекарственной формой для создания инъекционной композиции. Специалист в данной области сможет понять, что способ введения лекарственной формы или композиции терапевтически эффективного вещества, будет зависеть от таких факторов, как возраст, масса тела и физическое состояние пациента, проходящего лечение, и заболевания или состояния, подвергаемого лечению. Квалифицированный работник, сможет, таким образом, выбрать способ введения, оптимальный для пациента в зависимости от конкретного случая.
[0210] В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединения и композиции для применения в качестве лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет соединения и композиции для применения при лечении злокачественного новообразования, вирусного заболевания, аутоиммунного заболевания, острого или хронического воспалительного заболевания и заболевания, вызываемого бактериями, грибками или другими микроорганизмами.
[0211] В некоторых вариантах осуществления, соединение, раскрытое в настоящем описании, может применяться в производстве или получении лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из злокачественного новообразования, вирусного заболевания, аутоиммунного заболевания, острого или хронического воспалительного заболевания, и заболевания, вызываемого бактериями, грибками и другими микроорганизмами.
[0212] В некоторых вариантах осуществления, злокачественное новообразование представляет собой гемобластоз или солидную опухоль. В некоторых вариантах осуществления, злокачественное новообразование выбирают из карциномы, саркомы, лейкемии, лимфомы, множественной миеломы или меланомы.
[0213] В некоторых вариантах осуществления, злокачественное новообразование представляет собой аденокарциному, увеальную меланому, острый лейкоз, акустическую невриному, ампулярную карциному, карциному аноректальной области, астроцитомы, базалиому, рак поджелудочной железы, опухоль соединительной ткани, рак мочевого пузыря, бронхиальную карциному, немелкоклеточную бронхиальную карциному, рак молочной железы, лимфому Беркита, карциному тела матки, CUP-синдром, рак толстой кишки, рак тонкого кишечника, рак яичника, карциному эндометрия, рак желчного пузыря, карциномы желчного пузыря, рак матки, рак шейки матки, опухоли шеи, носа и уха, гематологические неоплазии, волосатоклеточный лейкоз, рак уретры, рак кожи, глиомы, рак яичка, саркому Капоши, рак гортани, рак костей, колоректальную карциному, опухоли шеи/головы, карциному толстой кишки, краниофарингиому, рак печени, лейкемию, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, рак желудка, рак толстой кишки, медуллобластому, меланому, менингиому, рак почки, почечно-клеточные карциномы, олигодендроглиому, карциному пищевода, остеолитические карциномы и остеопластические карциномы, остеосаркому, карциному яичника, карциному поджелудочной железы, рак полового члена, рак простаты, рак языка, карциному яичника или рак лимфатической железы.
[0214] В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение предоставляет набор, содержащий соединение, описанное в данном документе, и фармацевтически приемлемый эксципиент, носитель и/или разбавитель.
[0215] В некоторых вариантах осуществления, в композицию могут быть включены один или более эксципиентов. Специалист в данной области сможет понять, что выбор любого одного эксципиента может повлиять на выбор любого другого эксципиента. Например, выбор конкретного эксципиента может препятствовать применению одного или более дополнительных эксципиентов, поскольку комбинация эксципиентов сможет производить нежелательные воздействия. Специалист в данной области сможет эмпирически определить, какие эксципиенты, если они вообще используются, включать в композиции. Эксципиенты могут включать, но не ограничиваются перечисленными, сорастворители, солюбилизирующие средства, буферы, регуляторы рН, объемообразующие агенты, поверхностно-активные вещества, инкапсулирующие средства, регуляторы тоничности, стабилизирующие средства, защитные средства и модификаторы вязкости. В некоторых вариантах осуществления, может быть благоприятным включать фармацевтически приемлемый носитель в композиции.
[0216] В некоторых вариантах осуществления, в композиции может быть включено солюбилизирующее средство. Солюбилизирующие средства могут быть применимыми для увеличения растворимости любых компонентов композиции, включающих соединение или эксципиент. Солюбилизирующие средства, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных солюбилизирующих средств, которые могут применяться в композициях. В некоторых вариантах осуществления, солюбилизирующие средства включают, но не ограничиваются перечисленными, этиловый спирт, трет-бутиловый спирт, полиэтиленгликоль, глицерин, метилпарабен, пропилпарабен, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон и любые фармацевтически приемлемые соли и/или их комбинации.
[0217] pH композиции может быть равен любому pH, который обеспечивает желательные свойства для лекарственной формы или композиции. Желательные свойства могут включать, например, стабильность соединения, увеличенное сохранение соединения в сравнении с композициями при других pH и улучшенную эффективность фильтрации. В некоторых вариантах осуществления, pH композиций могут составлять от около 3,0 до около 9,0, например, от около 5,0 до около 7,0. В конкретных вариантах осуществления, pH композиций могут составлять 5,5±0,1, 5,6±0,1, 5,7±0,1, 5,8±0,1, 5,9±0,1, 6,0±0,1, 6,1±0,1, 6,2±0,1, 6,3±0,1, 6,4±0,1 или 6,5±0,1.
[0218] В некоторых вариантах осуществления, может быть благоприятным забуферивать pH посредством включения одного или более буферов в композиции. В некоторых вариантах осуществления, буфер может иметь pKa, равный, например, около 5,5, около 6,0, или около 6,5. Специалист в данной области сможет понять, что соответствующий буфер может быть выбран для включения в композиции, исходя из его pKa и других свойств. Буферы являются хорошо известными в данной области. Соответственно, буферы, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных буферов, которые могут применяться в лекарственных формах или композициях согласно изобретению. В некоторых вариантах осуществления, буфер включает, но не ограничивается перечисленным Трис, Трис HCl, фосфат калия, фосфат натрия, цитрат натрия, аскорбат натрия, комбинации фосфата натрия и калия, Трис/Трис HCl, бикарбонат натрия, фосфат аргинина, гидрохлорид аргинина, гидрохлорид гистидина, какодилат, сукцинат, 2-(N-морфолино)этансульфоновую кислоту (MES), малеат, бис-трис, фосфат, карбонат, и любые их фармацевтически приемлемые соли и/или их комбинации.
[0219] В некоторых вариантах осуществления, в композиции может быть включен регулятор рН. Модифицирование pH композиции может иметь благоприятные воздействия на, например, стабильность или растворимость соединения, или может быть применимым при получении композиции, подходящей для парентерального введения. Регуляторы рН хорошо известны в данной области. Соответственно, регуляторы рН, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных регуляторов рН, которые могут применяться в композициях. Регуляторы рН могут включать, например, кислоты и основания. В некоторых вариантах осуществления, регулятор рН включает, но не ограничивается перечисленными, уксусную кислоту, хлористоводородную кислоту, фосфорную кислоту, гидроксид натрия, карбонат натрия и их комбинации.
[0220] В некоторых вариантах осуществления, в композиции может быть включен объемообразующий агент. Объемообразующие агенты обычно используют в лиофилизированных композициях для обеспечения композиции добавленного объема и, чтобы способствовать визуализации композиции, особенно в случаях, где лиофилизированную гранулу было бы трудно увидеть иным образом. Объемообразующие агенты также могут помочь препятствовать выбросу активных компонента (компонентов) из фармацевтической композиции и/или способствовать криопротекции композиции. Объемообразующие агенты хорошо известны в данной области. Соответственно, объемообразующие агенты, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных объемообразующих агентов, которые могут применяться в композициях.
[0221] Иллюстративные объемообразующие агенты могут включать углеводы, моносахариды, дисахариды, полисахариды, сахароспирты, аминокислоты и сахарные кислоты и их комбинации. Углеводные объемообразующие агенты включают, но не ограничиваются перечисленными, моно-, ди- или полиуглеводы, крахмалы, альдозы, кетозы, аминосахара, глицеральдегид, арабинозу, ликсозу, пентозу, рибозу, ксилозу, галактозу, глюкозу, гексозу, идозу, маннозу, талозу, гептозу, глюкозу, фруктозу, метил-α-D-глюкопиранозид, мальтозу, лактон, сорбозу, эритрозу, треозу, арабинозу, аллозу, альтрозу, гулозу, идозу, талозу, эритрулозу, рибулозу, ксилулозу, псикозу, тагатозу, глюкозамин, галактозамин, арабинаны, фруктаны, фуканы, галактаны, галактуронаны, глюканы, маннаны, ксиланы, инулин, леван, фукоидан, каррагинан, галактокаролозу, пектины, амилозу, пуллулан, гликоген, амилопектин, целлюлозу, пустулан, хитин, агарозу, кератин, хондроитин, дерматан, гиалуроновую кислоту, ксантиновую камедь, сахарозу, трегалозу, декстран и лактозу. Сахароспиртовые объемообразующие агенты включают, но не ограничиваются перечисленными, альдиты, инозиты, сорбит и маннит. Аминокислотные объемообразующие агенты включают, но не ограничиваются перечисленными, глицин, гистидин и пролин. Объемообразующие агенты на основе сахарных кислот включают, но не ограничиваются перечисленными, альдоновые кислоты, уроновые кислоты, альдаровые кислоты, глюконовую кислоту, изоаскорбиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, глукаровую кислоту, глюкуроновую кислоту, глюконовую кислоту, глукаровую кислоту, галактуроновую кислоту, маннуроновую кислоту, нейраминовую кислоту, пектиновые кислоты и альгиновую кислоту.
[0222] В некоторых вариантах осуществления, в композиции может быть включено поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активные вещества, как правило, снижают поверхностное натяжение жидкой композиции. Это может обеспечивать благоприятные свойства, такие как улучшенная легкость фильтрации. Поверхностно-активные вещества также могут действовать как эмульгаторы и/или солюбилизирующие средства. Поверхностно-активные вещества хорошо известны в данной области. Соответственно, поверхностно-активные вещества, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных поверхностно-активных веществ, которые могут применяться в лекарственных формах или композициях согласно изобретению. Поверхностно-активные вещества, которые могут быть включены, включают, но не ограничиваются перечисленными, сложные эфиры сорбитана, такие как полисорбаты (например, полисорбат 20 и полисорбат 80), липополисахариды, полиэтиленгликоли (например, ПЭГ 400 и ПЭГ 3000), полоксамеры (т.е. плюроники), этиленоксиды и полиэтиленоксиды (например, Тритон X-100), сапонины, фосфолипиды (например, лецитин) и их комбинации.
[0223] В некоторых вариантах осуществления, в композиции может быть включено инкапсулирующие средство. Инкапсулирующие средства могут изолировать молекулы и способствовать их стабилизации или солюбилизации. Инкапсулирующие средства хорошо известны в данной области. Соответственно, инкапсулирующие средства, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных инкапсулирующих средств, которые могут применяться в композициях. Инкапсулирующие средства, которые могут быть включены в композиции, включают, но не ограничиваются перечисленными, диметил-β-циклодекстрин, гидроксиэтил-β-циклодекстрин, гидроксипропил-β-циклодекстрин и триметил-β-циклодекстрин и их комбинации.
[0224] В некоторых вариантах осуществления, в композиции может быть включен регулятор тоничности. Тоничность жидкой композиции является важным фактором, который нужно учитывать при введении композиции пациенту, например, посредством парентерального введения. Регуляторы тоничности, таким образом, могут применяться, чтобы помочь получить композицию, пригодную для введения. Регуляторы тоничности хорошо известны в данной области. Соответственно, регуляторы тоничности, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных регуляторов тоничности, которые могут применяться в композициях. Регуляторы тоничности могут быть ионными или неионными и включают, но не ограничиваются перечисленными, неорганические соли, аминокислоты, углеводы, сахара, сахароспирты и углеводы. Иллюстративные неорганические соли могут включать хлорид натрия, хлорид калия, сульфат натрия и сульфат калия. Иллюстративной аминокислотой является глицин. Иллюстративные сахара могут включать сахароспирты, такие как глицерин, пропиленгликоль, глюкозу, сахарозу, лактозу и маннит.
[0225] В некоторых вариантах осуществления, в композиции может быть включено стабилизирующее средство. Стабилизирующие средства помогают увеличить стабильность соединения в композициях. Это может происходить посредством, например, уменьшения разрушения или предотвращения агрегации соединения. Не желая быть связанными теорией, авторы отмечают, что механизмы увеличения стабильности могут включать секвестрацию соединения из растворителя или ингибирование свободно-радикального окисления терапевтически эффективного вещества. Стабилизирующие средства хорошо известны в данной области. Соответственно, стабилизирующие средства, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных стабилизирующих средств, которые могут применяться в композициях. Стабилизирующие средства могут включать, но не ограничиваются перечисленными, эмульгаторы и поверхностно-активные вещества.
[0226] В некоторых вариантах осуществления, в композиции может быть включено защитное средство. Защитные средства являются агентами, которые защищают фармацевтически активный ингредиент (например, терапевтически эффективное вещество или соединение) от нежелательного состояния (например, нестабильности, вызванной замораживанием или лиофилизацией или окислением). Защитные средства могут включать, например, криопротекторы, лиопротекторы и антиоксиданты. Криопротекторы являются применимыми для предотвращения потери активности активного фармацевтического ингредиента (например, соединения антрациклина), когда композицию подвергают воздействию температуры, находящейся ниже ее температуры замерзания. Например, криопротектор может быть включен в ресуспендированную лиофилизированную лекарственную форму таким образом, что лекарственная форма может быть заморожена перед разбавлением для внутривенного (ВВ) введения. Криопротекторы хорошо известны в данной области. Соответственно, криопротекторы, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных криопротекторов, которые могут применяться в композициях. Криопротекторы включают, но не ограничиваются перечисленными, растворители, поверхностно-активные вещества, инкапсулирующие средства, стабилизирующие средства, модификаторы вязкости и их комбинации. Криопротекторы могут включать, например, дисахариды (например, сахарозу, лактозу, мальтозу и трегалозу), полиолы (например, глицерин, маннит, сорбит и дульцит), гликоли (например, этиленгликоль, полиэтиленгликоль и пропиленгликоль).
[0227] Лиопротекторы являются применимыми при стабилизации компонентов композиции. Например, терапевтически эффективное вещество может быть лиофилизировано с использованием лиопротектора перед ресуспендированием. Лиопротекторы хорошо известны в данной области. Соответственно, лиопротекторы, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных лиопротекторов, которые могут применяться в композициях. Лиопротекторы включают, но не ограничиваются перечисленными, растворители, поверхностно-активные вещества, инкапсулирующие средства, стабилизирующие средства, модификаторы вязкости и их комбинации. Иллюстративные лиопротекторы могут представлять собой, например, сахара и полиолы. Трегалоза, сахароза, декстран и гидроксипропил-бета-циклодекстрин являются неограничивающими примерами лиопротекторов.
[0228] Антиоксиданты являются применимыми при предотвращении окисления компонентов композиции. Окисление может приводить к агрегации лекарственного продукта или другим воздействиям, ухудшающим чистоту лекарственного продукта или его активность. Антиоксиданты хорошо известны в данной области. Соответственно, антиоксиданты, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных антиоксидантов, которые могут применяться в композициях. Антиоксиданты могут представлять собой, например, аскорбат натрия, цитрат, тиолы, метабисульфит и их комбинации.
[0229] В некоторых вариантах осуществления, в композицию может быть включен модификатор вязкости. Модификаторы вязкости изменяют вязкость жидких композиций. Это может быть благоприятным, поскольку вязкость играет важную роль в легкости, с которой жидкая композиция фильтруется. Композиция может подвергаться фильтрации до лиофилизации и ресуспендирования или после ресуспендирования. Модификаторы вязкости хорошо известны в данной области. Соответственно, модификаторы вязкости, описанные в данном документе, не предназначены для составления исчерпывающего списка, но предоставлены лишь в качестве иллюстративных модификаторов вязкости, которые могут применяться в композициях. Модификаторы вязкости включают растворители, солюбилизирующие средства, поверхностно-активные вещества и инкапсулирующие средства. Иллюстративные модификаторы вязкости, которые могут быть включены в композиции, включают, но не ограничиваются перечисленными, N-ацетил-DL-триптофан и N-ацетил-цистеин.
Способы лечения
[0230] Соединения и композиции, описанные в настоящем документе, являются применимыми для различных клинических применений.
[0231] Соединения и композиции данного изобретения обладают способностью индуцировать пролонгированное или долговременное ингибирование роста опухоли. В некоторых вариантах осуществления, пролонгированное или долговременное ингибирование роста опухоли происходит без какой-либо потери массы тела или миелотоксичности.
[0232] Раскрытие также предоставляет способ лечения состояния или заболевания у пациента, причем указанное состояние или заболевание выбирают из злокачественного новообразования, вирусного заболевания, аутоиммунного заболевания, острого или хронического воспалительного заболевания, и заболевания, вызываемого бактериями, грибками, или другими микроорганизмами, включающий в себя введение пациенту соединения или фармацевтической композиции, описанных в данном документе.
[0233] В некоторых вариантах осуществления, злокачественное новообразование представляет собой гемобластоз или солидную опухоль. В некоторых вариантах осуществления, злокачественное новообразование выбирают из карциномы, саркомы, лейкемии, лимфомы, множественной миеломы или меланомы.
[0234] В некоторых вариантах осуществления, злокачественное новообразование представляет собой аденокарциному, увеальную меланому, острый лейкоз, акустическую невриному, ампулярную карциному, карциному аноректальной области, астроцитомы, базалиому, рак поджелудочной железы, опухоль соединительной ткани, рак мочевого пузыря, бронхиальную карциному, немелкоклеточную бронхиальную карциному, рак молочной железы, лимфому Беркита, карциному тела матки, CUP-синдром, рак толстой кишки, рак тонкого кишечника, рак яичника, карциному эндометрия, рак желчного пузыря, карциномы желчного пузыря, рак матки, рак шейки матки, опухоли шеи, носа и уха, гематологические неоплазии, волосатоклеточный лейкоз, рак уретры, рак кожи, глиомы, рак яичка, саркому Капоши, рак гортани, рак костей, колоректальную карциному, опухоли шеи/головы, карциному толстой кишки, краниофарингиому, рак печени, лейкемию, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, рак желудка, рак толстой кишки, медуллобластому, меланому, менингиому, рак почки, почечно-клеточные карциномы, олигодендроглиому, карциному пищевода, остеолитические карциномы и остеопластические карциномы, остеосаркому, карциному яичника, карциному поджелудочной железы, рак полового члена, рак простаты, рак языка, карциному яичника или рак лимфатической железы.
ВАРИАЦИИ И МОДИФИКАЦИИ
[0235] Вариации, модификации и другие осуществления описанного в настоящем документе будут проводиться рядовыми специалистами в данной области без отступления от идеи и объема изобретения. Соответственно, изобретение не ограничивается предшествующим описанием или следующими примерами.
Иллюстративные примеры
[0236] При том, что аспекты изобретения теперь в целом описаны, их будет легче понять при ссылке на следующие примеры, которые включены лишь с целью иллюстрации некоторых признаков и вариантов осуществления изобретения и не подразумеваются как ограничивающие.
Эквиваленты
[0237] Специалисты в данной области, смогут осознать или будут способны установить, не используя ничего превышающего рутинного проведения экспериментов, многочисленные эквиваленты соединений, композиций и способов их применения, описанных в настоящем документе. Такие эквиваленты считаются включенными в пределы объема изобретения.
Примеры
Пример 1
[0238] Оценка гемцитабина и альбумин-связывающего гемцитабина фосфата соединения 15 у модели ксенотрансплантата человеческого немелкоклеточного рака легкого LXFE 397.
Самкам голых мышей NMRI под анестезией изофлураном подкожно в левый бок вводили односторонние опухолевые имплантаты человеческих LXFE 397 (плоскоклеточная карцинома, дифференциация: слабая) до тех пор, пока опухоли не становились пальпируемыми и достигали объема 50-150 мм3. Животных содержали в клетках, температуру внутри клеток поддерживали при 25+1°C с относительной влажностью, равной 45‐65%, и кратности воздухообмена в клетке, равной 60-раз за час. Животных кормили автоклавированной 19% белковой экструдированной диетой Teklad Global (T.2019S.12) от Harlan Laboratories и обеспечивали доступ к стерильной и подкисленной (pH 2,5) водопроводной воде, которую меняли дважды в неделю. Пищу и воду обеспечивали по потребности. Перед терапией животных рандомизировали (8 мышей на группу) с учетом медианного и среднего объема опухоли в группе. Животных подвергали рутинному мониторингу дважды в неделю по рабочим дням и ежедневно по субботам и воскресеньям. Начиная со дня 0, животных взвешивали дважды в неделю. Относительные массы тела (RBW) индивидуальных животных рассчитывали посредством деления индивидуальной абсолютной массы тела в день X (BWx) на индивидуальную массу тела в день рандомизации. Объем опухоли определяли посредством двухмерного измерения циркулем в день рандомизации (день 0) и затем дважды в неделю. Объемы опухолей рассчитывали в соответствии со следующим уравнением:
Объем опухоли [мм3]=a [мм] x b2 [мм2] x 0,5, где "a" представляет собой самый крупный диаметр, а "b" является перпендикулярным диаметром опухоли, представляющей идеализированный эллипсоид. Относительный объем индивидуальной опухоли в день X (RTVx) рассчитывают посредством деления абсолютного объема [мм3] соответствующей опухоли в день X (Tx) на абсолютный объем той же самой опухоли в день рандомизации. Режимы применяли в той степени, насколько позволяют существующие требования к содержанию животных. Прекращение содержания индивидуальных мышей производили при объеме опухоли > 2000 мм3. Исходные растворы соединения 15 получали следующим образом для двух групп обработки:
1) 8 мышей, средняя масса 40 г: 24 мг/кг эквивалентов гемцитабина ≡ 78,48 мг/кг ≡ 3,14 мг/мышь. Приготовление образца: 154 мг взвешивали в 20-мл пузырьке, растворяли в 14,7 мл 20 мМ натрийфосфатного буфера с pH 7; 4 аликвоты по 3,6 мл каждая в 10-мл пузырьках. Замораживали в жидком азоте, лиофилизировали (> 48 ч) и закупоривали.
2) 8 мышей, средняя масса 40 г: 36 мг/кг эквивалентов гемцитабина ≡ 117,7 мг/кг ≡ 4,71 мг/мышь. Приготовление образца: 231 мг взвешивали в 20-мл пузырьке, растворяли в 14,7 мл 20 мМ натрийфосфатного буфера с pH 7; 4 аликвоты по 3,6 мл каждая в 10-мл пузырьках. Замораживали в жидком азоте, лиофилизировали (> 48 ч) и закупоривали.
В день обработки лиофилизированные образцы растворяли в 20 мМ натрийфосфатном буфере с pH 7, содержащем 5% глюкозу и вводили посредством внутривенной инъекции. Внутривенное введение несущей среды (20 мМ натрийфосфатного буфера, 5% D-глюкозы - pH 7,0), гемцитабина (растворенного в 5% D-глюкозе; доза 240 мг/кг) и соединения 15 (растворенного в 20 мМ натрийфосфатном буфере, 5% D-глюкозы - pH 7,0; 24 мг/кг эквивалентов гемцитабина) проводили в дни 1, 8, 15 и 22.
В день 23, 3 мыши из контрольной группы и 2 мыши из группы обработки гемцитабином должны были быть умерщвлены вследствие объема опухоли, превышающего 2000 мм3. Изменение массы тела (BWC) в сравнении с контролем: Гемцитабин (день 23) приблизительно -6%; соединение 15 (день 27) ~ 0,5%. Развитие роста опухоли у NSLC модели ксенотрансплантата LXFE 397 показывает превосходящую противоопухолевую эффективность действия соединения 15 в сравнении с гемцитабином при одной десятой дозы гемцитабина (p < 0,05) при равнозначной токсичности, на что указывает сравнимая и низкая потеря массы тела. См. ФИГ. 1.
[0239] ФИГ. 1 показывает эффект соединения 15 и гемцитабина на рост опухоли у NSLC модели ксенотрансплантата LXFE 397.
Пример 2
[0240] Оценка гемцитабина и альбумин-связывающего гемцитабина фосфата соединения 15 у модели ксенотрансплантата человеческой немелкоклеточной карциномы LXFE 937.
Самкам голых мышей NMRI под анестезией изофлураном подкожно в левый бок вводили односторонние опухолевые имплантаты фрагментов человеческой опухоли LXFE 937 до тех пор, пока опухоли не становились пальпируемыми и достигали объема ~100 мм3. Животных содержали в клетках, температуру внутри клеток поддерживали при 25+1°C с относительной влажностью, равной 45‐65% и кратности воздухообмена в клетке, равной 60-раз за час. Животных кормили автоклавированной 19% белковой экструдированной диетой Teklad Global (T.2019S.12) от Harlan Laboratories и обеспечивали им доступ к стерильной и подкисленной (pH 2,5) водопроводной воде, которую меняли дважды в неделю. Пищу и воду обеспечивали по потребности. Перед терапией, животных рандомизировали (8 мышей на группу) с учетом медианного и среднего объема опухоли в группе. Животных подвергали типовому мониторингу дважды в неделю по рабочим дням и ежедневно по субботам и воскресеньям. Начиная со дня 0, животных взвешивали дважды в неделю. Относительные массы тела (RBW) индивидуальных животных рассчитывают посредством деления индивидуальной абсолютной массы тела в день X (BWx) на индивидуальную массу тела в день рандомизации. Объем опухоли определяли посредством двухмерного измерения циркулем в день рандомизации (день 0) и затем дважды в неделю. Объемы опухолей рассчитывали в соответствии со следующим уравнением:
Объем опухоли [мм3]=a [мм] × b2 [мм2] × 0,5, где "a" представляет собой самый крупный диаметр, а "b" является перпендикулярным диаметром опухоли, представляющей идеализированный эллипсоид. Относительный объем индивидуальной опухоли в день X (RTVx) рассчитывали посредством деления абсолютного объема [мм3] соответствующей опухоли в день X (Tx) на абсолютный объем той же самой опухоли в день рандомизации. Режимы применяли в той степени, насколько позволяют существующие требования к содержанию животных. Прекращение содержания индивидуальных мышей проводили при объеме опухоли > 2000 мм3. Исходные растворы соединения 15 получали следующим образом для двух групп обработки:
1) 8 мышей, средняя масса 40 г: 2×18 мг/кг эквивалентов гемцитабина (дозирование два раза в неделю; д 0, 3, 7, 10 и т.д. в течение 4 недель) ≡ 58,4 мг/кг ≡ 2,35 мг/мышь. Приготовление образца: 115,5 мг взвешивали в 10-мл пузырьке, растворяли в 7,35 мл 20 мМ натрийфосфатном буфере pH 7; 4 каждая из аликвот по 1,86 мл в 10-мл пузырьках. Замораживали в жидком азоте, лиофилизировали (> 48 ч) и закупоривали.
В день обработки лиофилизированные образцы растворяли в 20 мМ натрийфосфатном буфере pH 7, содержащем 5% глюкозы, и вводили посредством внутривенной инъекции. Внутривенное введение несущей среды (20 мМ натрийфосфатного буфера, 5% D-глюкозы - pH 7,0), гемцитабина (растворенного в 5% D-глюкозе; доза 240 мг/кг) и проводили в дни 1, 8, 15 и 22, а введение соединения 15 (растворенного в 20 мМ натрийфосфатном буфере, 5% D-глюкозы - pH 7,0; 18 мг/кг эквивалентов гемцитабина) проводили в дни 0, 3, 7, 10, 14, 17, 21 и 24.
Изменение массы тела (BWC) в сравнении с контролем было сравнимым, приблизительно+10% для группы, обработанной гемцитабином, и приблизительно+2% в группе, обработанной соединением 15.
Опухоли в группах, обработанных гемцитабином, начинали повторно расти через ~20 дней после терапии, достигая среднего объема опухоли ~700 мм3 через ~50 дней после терапии, причем 2 мыши из группы, обработанной гемцитабином, пришлось умерщвлять между 78 и 85 днями вследствие превышения объемом опухоли 2000 мм3. Напротив, полные ремиссии опухолей наблюдали через ~60 дней после окончания терапии, в группе, обработанной 15. Таким образом, развитие роста опухоли у модели ксенотрансплантата человеческой немелкоклеточной карциномы LXFE 937 показывает превосходящую противоопухолевую эффективность действия соединения 15 в сравнении с гемцитабином при приблизительно одной седьмой дозы гемцитабина (p < 0,05) при равнозначной токсичности, на что указывает сравнимый прирост массы тела. См. ФИГ. 2 и 3.
[0241] ФИГ. 2 показывает кривые роста опухоли в контрольной группе, группе, обработанной гемцитабином, и группе, обработанной соединением 15, у модели ксенотрансплантата человеческой немелкоклеточной карциномы LXFE 937.
[0242] ФИГ. 3 показывает кривые изменения массы тела в контрольной группе, группе, обработанной гемцитабином, и группе, обработанной соединением 15, у модели ксенотрансплантата человеческой немелкоклеточной карциномы LXFE 937.
Пример 3
[0243] Оценка гемцитабина и альбумин-связывающего гемцитабина фосфата соединения 15 на человеческой модели ксенотрансплантата карциномы яичника OVXF 899.
Самкам голых мышей NMRI под анестезией изофлураном подкожно в левый бок вводили односторонние опухолевые имплантаты фрагментов человеческой опухоли OVXF 899, до тех пор, пока опухоли не становились пальпируемыми и достигали объема ~200 мм3. Животных содержали в клетках, температуру внутри клеток поддерживали при 25+1°C, с относительной влажностью, равной 45 ‐ 65%, и кратностью воздухообмена в клетке, равной 60-раз за час. Животных кормили автоклавированной 19% белковой экструдированной диетой Teklad Global (T.2019S.12) от Harlan Laboratories и обеспечивали доступ к стерильной и подкисленной (pH 2,5) водопроводной воде, которую меняли дважды в неделю. Пищу и воду обеспечивали по потребности. Перед терапией, животных рандомизировали (8 мышей на группу) с учетом медианного и среднего объема опухоли в группе. Животных подвергали типовому мониторингу дважды в неделю по рабочим дням и ежедневно по субботам и воскресеньям. Начиная со дня 0, животных взвешивали дважды в неделю. Относительные массы тела (RBW) индивидуальных животных рассчитывали посредством деления индивидуальной абсолютной массы тела в день X (BWx) на индивидуальную массу тела в день рандомизации. Объем опухоли определяли посредством двухмерного измерения циркулем в день рандомизации (день 0) и затем дважды в неделю. Объемы опухолей рассчитывали в соответствии со следующим уравнением:
Объем опухоли [мм3]=a [мм] x b2 [мм2] x 0,5, где "a" представляет собой самый крупный диаметр, а "b" является перпендикулярным диаметром опухоли, представляющей идеализированный эллипсоид. Относительный объем индивидуальной опухоли в день X (RTVx) рассчитывали посредством деления абсолютного объема [мм3] соответствующей опухоли в день X (Tx) на абсолютный объем той же самой опухоли в день рандомизации. Режимы применяли в той степени, насколько позволяют существующие требования к содержанию животных. Прекращение содержания индивидуальных мышей проводили при объеме опухоли > 2000 мм3. Исходные растворы соединения 15 получали следующим образом для двух групп обработки:
8 мышей, средняя масса 40 г: 2×18 мг/кг эквивалентов гемцитабина (дозирование два раза в неделю; дни 1, 4, 8, и т.д. в течение 4 недель) ≡ 58,4 мг/кг ≡ 2,35 мг/мышь. Приготовление образца: 115,5 мг взвешивали в 10 мл-пузырьке, растворяли в 7,35 мл 20 мМ натрийфосфатном буфере pH 7; каждая из 4 аликвот по 1,86 мл в 10-мл пузырьках. Замораживали в жидком азоте, лиофилизировали (> 48 ч) и закупоривали.
В день обработки лиофилизированные образцы растворяли в 20 мМ натрийфосфатном буфере с pH 7, содержащем 5% глюкозы, и вводили посредством внутривенной инъекции. Внутривенное введение несущей среды (20 мМ натрийфосфатного буфера, 5% D-глюкозы - pH 7,0), гемцитабина (растворенного в 5% D-глюкозе; доза 240 мг/кг) проводили в дни 1, 8, 15, и 22, и соединения 15 (растворенного в 20 мМ натрийфосфатном буфере, 5% D-глюкозы - pH 7,0; 18 мг/кг эквивалентов гемцитабина) проводили в дни 1, 4, 8, 11, 15, 18, 22 и 25.
Изменение массы тела (BWC) в сравнении с контролем было сравнимым, приблизительно+5% для группы, обработанной гемцитабином, и приблизительно+10% в группе, обработанной соединением 15.
Опухоли в группах, обработанных гемцитабином, начинали повторно расти через ~10 дней после терапии, достигая среднего объема опухоли ~2000 мм3 через 50 дней после терапии, причем 3 мышей из группы, обработанной гемцитабином, приходилось умерщвлять в день 74, вследствие превышения объемом опухоли 2000 мм3. Напротив, полные ремиссии опухолей наблюдали через 50 дней после окончания терапии в группе, обработанной 15. Таким образом, развитие роста опухоли у модели ксенотрансплантата карциномы яичника OVXF 899 показывает превосходящую противоопухолевую эффективность действия соединения 15 в сравнении с гемцитабином при приблизительно одной седьмой дозы гемцитабина (p < 0,05) при равнозначной токсичности, на что указывает сравнимый прирост массы тела. См. ФИГ. 4, 5 и 6.
[0244] ФИГ. 4 показывает кривые роста опухоли контрольной группы, группы, обработанной гемцитабином, и группы, обработанной соединением 15 у модели ксенотрансплантата человеческой карциномы яичника OVXF.
[0245] ФИГ. 5 показывает кривые изменения массы тела в контрольной группе, группе обработки гемцитабином, и группе, обработанной соединением 15, у модели ксенотрансплантата человеческой карциномы яичника OVXF.
[0246] ФИГ. 6 показывает графики рассеяния для индивидуальных объемов опухоли после лечения соединением 15 или гемцитабина у модели ксенотрансплантата рака яичника OVXF 899.
Пример 4
[0247] Оценка гемцитабина и альбумин-связывающего гемцитабина фосфата соединения 15 у модели ксенотрансплантата человеческой карциномы поджелудочной железы Panc11159
Самкам голых мышей NMRI (nu/nu) подкожно пересаживали односторонние опухолевые имплантаты фрагментов опухоли Panc11159, до тех пор, пока опухоли не становились пальпируемыми и достигали объема ~200 мм3. Животных содержали в клетках (Macrolon Type-II проволочная сетка), температуру внутри клеток поддерживали при 22+1°C при относительной влажности, равной 50+10%. Период освещения: искусственное; 12-часовый темновой/12-часовой световой ритм (свет от 06.00 до 18.00 часов). Состояние здоровья мышей обследовали в начале эксперимента и дважды в день во время эксперимента; идентификация: ушная метка и метки на клетке. Животных кормили Ssniff NM, Soest, Germany и обеспечивали доступ к автоклавированному и подкисленному (pH 4,0) питью. Пищу и воду обеспечивали по потребности. Перед терапией животных рандомизировали (10 мышей на группу) с учетом медианного и среднего объема опухоли в группе.
Изменение массы тела измеряли два или три раза в неделю. Диаметры опухолей (медианный и средний) измеряли два или раза в неделю с помощью циркуля. Объемы опухолей рассчитывали в соответствии с: V=(длина × (ширина)2)/2. Для расчета относительного объема опухоли (RTV) объемы опухолей для каждого дня измерения относили к дню первой обработки.
Исходные растворы соединения 15 получали следующим образом для двух групп обработки:
10 мышей, 30-средняя масса 40 г: 2×18 мг/кг эквивалентов гемцитабина (дозирование два раза в неделю в течение 4 недель) ≡ 58,4 мг/кг ≡ 2,35 мг/мышь. Приготовление образца: 115,5 мг взвешивали в 10 мл-пузырьке, растворяли в 7,35 мл 20 мМ натрийфосфатном буфере pH 7; каждая из 4 аликвот по 1,86 мл в 10-мл пузырьках. Замораживали в жидком азоте, лиофилизировали (> 48 ч) и закупоривали.
В день обработки лиофилизированные образцы растворяли в 20 мМ натрийфосфатном буфере с pH 7, содержащем 5% глюкозы, и вводили посредством внутривенной инъекции. Внутривенное введение несущей среды (20 мМ натрийфосфатного буфера, 5% D-глюкозы - pH 7,0) гемцитабина (растворенного в 5% D-глюкозе; доза 240 мг/кг) проводили в дни 36, 43, 50, 57, соединения 15 (растворенного в 20 мМ натрийфосфатном буфере, 5% D-глюкозы - pH 7,0; 18 мг/кг эквивалентов гемцитабина) проводили в дни 36, 40, 43, 47, 50, 54, 57 и 60.
Изменение массы тела (BWC) в сравнении с контролем было сравнимым, приблизительно+3% для обеих групп, группы, обработанной гемцитабином и группы, обработанной соединением 15.
Объемы опухолей в группе, обработанной гемцитабином, удваивались на день 85, в то время как объемы опухолей в группе, обработанной 15, демонстрировали небольшую регрессию или стабильное заболевание. Таким образом, развитие роста опухоли у модели ксенотрансплантата Panc11159 человеческой карциномы поджелудочной железы показало превосходящую противоопухолевую эффективность действия соединения 15 в сравнении с гемцитабином при приблизительно одной седьмой дозы гемцитабина (p < 0,05) при равнозначной токсичности, на что указывает сравнимый прирост массы тела. См. ФИГ. 7 и 8.
[0248] ФИГ. 7 показывает кривые роста опухолей контрольной группы, группы, обработанной гемцитабином, и группы, обработанной соединением 15, у модели ксенотрансплантата рака поджелудочной железы Panc11159.
[0249] ФИГ. 8 показывает кривые изменения массы тела в контрольной группе, группе, обработанной гемцитабином, и группе, обработанной соединением 15, у модели ксенотрансплантата рака поджелудочной железы Panc11159.
Пример 5
[0250] Общая методика синтеза замещенных малеимидобензоилгидразоновых производных неморубицина
Типовым образом, к смеси неморубицина (1 эквивалент), и трифторацетата гидразида замещенной малеимидобензойной кислоты (2 эквивалента) добавляли безводный метанол при комнатной температуре (КТ), и реакционную смесь перемешивали при КТ. После завершения реакции, как показала ТСХ, замещенные малеимидобензоилгидразоновые производные неморубицина выделяли в виде твердого вещества красного цвета осаждением или кристаллизацией с использованием смеси изопропанола и диизопропилового эфира, и полученный продукт сушили в высоком вакууме.
[0251] Общая методика исследований высвобождения альбумин-связанных замещенных малеимидобензоилгидразоновых производных неморубицина
Типовым образом, замещенные малеимидобензоилгидразоновые производные неморубицина растворяли в смеси 20:80 EtOH/5%-Глюкоза и добавляли к человеческому сывороточному альбумину (ЧСА) - полностью восстановленному в положении цистеин-34 - в 4 мМ фосфатном буфере pH 7,4 и инкубировали при 37°C в течение 2 часов. Конъюгат альбумина с лекарственным средством выделяли, используя Sephadex G-25, и элюировали 4 мМ фосфатным буфером с pH 7,4 содержащим 150 мМ NaCl. Чистоту конъюгата неморубицина с альбумином измеряли по данным анализа посредством ОФ-ВЭЖХ, и содержание антрациклина в образце определяли спектрофотометрически. Для исследований высвобождения лекарственного средства при рН 5,0, 200 мкМ раствор соответствующего конъюгата неморубицина с человеческим сывороточным альбумином (ЧСА) доводили до pH 5,0 с помощью 50 мМ натрийацетатного буфера, подвергали мониторингу с использованием ОФ-ВЭЖХ, и высвобождение неморубицина определяли при 495 нм. Результаты представлены в Таблице A.
Пример 6
[0252] Способ A: Получение Соединения 15
Соединение 15 может быть получено, как описано ниже, и показано на Схеме 1.
СХЕМА 1
[0253] Синтез 4-ацетил-N-(1-((2R,4R,5R)-3,3-дифтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)-тетрагидрофуран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-ил)бензамида (B)
К перемешиваемому раствору 4-ацетилбензойной кислоты (8,25 г, 50,30 ммоль) в CH2Cl2 (165 мл) добавляли оксалилхлорид (8,31 мл, 95,57 ммоль) и ДМФА (каталитическое количество) при 0°C. Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха в высоком вакууме с получением 4-ацетилбензоилхлорида в виде твердого вещества бледно-желтого цвета. Неочищенное вещество использовали как таковое на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 9,15 г, 99,67%. К перемешиваемому раствору гемцитабина гидрохлорида (15 г, 50 ммоль) в пиридине (150 мл), по каплям добавляли хлортриметилсилан (31,6 мл, 250 ммоль) [~1,0 мл/мин] в течение 30 мин при 0°C. Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. 4-ацетилбензоилхлорид (9,12 г, 50 ммоль) добавляли к реакционной смеси по частям (3 части, ~3,04 г/5,0 мин) в течение 15 мин. Полученную в результате смесь перемешивали при 45°C в течение 16 ч. Затем к указанной выше реакционной смеси добавляли этанол (150 мл) и перемешивали в течение 30 мин. Последовательно добавляли обессоленную воду (75 мл) и перемешивали в течение дополнительных 5 ч. Затем реакционную смесь концентрировали досуха и остаток гасили водой со льдом (300 мл). Полученное в результате твердое вещество фильтровали через фильтровальную бумагу Whatman (11 мкм) и сушили в высоком вакууме в течение 5 ч. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле. Неочищенную массу растворяли в CH2Cl2 и адсорбировали на силикагеле (60-120 меш, 60 г) и очищали на флэш-колонке 60 × 12,5 см, используя 240 г силикагеля 60-120 меш и ~20 л 60% этилацетата в петролейном эфире в качестве элюента. Полученное в результате твердое вещество промывали метанолом (100 мл), отфильтровывали и сушили в высоком вакууме в течение 5 ч с получением 4-ацетил-N-(1-((2R,4R,5R)-3,3-дифтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)-тетрагидрофуран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-ил)бензамида (B) в виде твердого вещества белого цвета. Выход: 5,2 г, 12,71 ммоль, 25,42%.
[0254] Синтез промежуточного соединения (C)
В колбе объемом 50 мл, 1,816 мл (19,54 ммоль) фосфорилхлорида добавляли к 12,2 мл триметилфосфата. Прозрачный, бесцветный раствор охлаждали в бане со льдом, с последующим добавлением 2 г (4,89 ммоль) (B). Суспензия осветлялась через ~15 мин и полученный раствор светло-желтого цвета перемешивали в бане со льдом. Через 2 ч, 5 мкл реакционной смеси добавляли с осторожностью к 1 мл 1:1 смеси диэтилового эфира и насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Млечную суспензию в органической фазе рассеивали при тщательном смешивании. 50 мкл водной фазы удаляли, разбавляли 150 мкл воды Millipore и анализировали посредством ЖХ-МС. Через ~2,5 ч, реакционную смесь добавляли по каплям при периодическом встряхивании к смеси из 140 мл воды Millipore, 140 мл насыщенного раствора NaHCO3 и 600 мл диэтилового эфира в колбе Эрленмейера объемом 1000 мл, охлаждаемой в бане со льдом. Смесь переносили в разделительную воронку объемом 1000 мл и хорошо встряхивали. Водную фазу промывали другими 400 мл диэтилового эфира. Водную фазу (pH 7-8) отделяли, отфильтровывали через воронку с пористым стеклянным фильтром (размер пор 3) в колбу объемом 500 мл и подкисляли до pH 4 с использованием конц. HCl. Смесь переносили в восемь пробирок Falcon объемом 50 мл (~40 мл в каждую), затем сохраняли при 4°C в холодильнике в течение ночи. Суспензию центрифугировали (3220 об/мин/30 мин), супернатант удаляли пипеткой и остаток лиофилизировали. Выход: (4,195 г/175%, теоретический: 2,393 г). Твердое вещество растворяли в 275 мл метанола, затем добавляли 75 мл тетрагидрофурана и смесь хранили при 5°C в течение 3 дней. Растворитель удаляли в вакууме до ~150 мл, затем добавляли 60 мл тетрагидрофурана, образуя осадок белого цвета, который отфильтровывали и промывали 20 мл тетрагидрофуран/метанол (1:1). (C) выделяли в виде твердого вещества белого цвета из фильтрата. Выход: 3 г.
[0255] Синтез линкера (A)
4-амино-2-нитробензойную кислоту (4,62 г, 25,36 ммоль) перемешивали с трет-бутилкарбазатом (5,04 г, 38,14 ммоль), HOBt гидратом (5,297 г, 34,6 ммоль) и EDC (4,84 г, 25,25 ммоль) в 120 мл 1:2-смеси диметилформамид/дихлорметан в бане со льдом в течение 15 мин, затем при комнатной температуре в течение ночи. ТСХ (CHCl3/метанол, 9:1) показывает завершение реакции через 26 ч. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на оксиде кремния с получением чистого соединения в виде пены желтого цвета (6,2 г, 82%). В колбе объемом 250 мл, 4-амино-2-нитрокарбазат (2,827 г, 9,54 ммоль) растворяли в 80 мл тетрагидрофурана. К перемешиваемому раствору добавляли хлорангидрид 6-малеимидокапроновой кислоты (2,41 г, 10,5 ммоль), растворенный в 30 мл тетрагидрофурана. Триэтиламин (1,455 мл, 10,5 ммоль), смешанный с 40 мл ТГФ, добавляли по каплям к смеси в течение 1 ч, используя капельную воронку. Полученную в результате суспензию светло-коричневого цвета перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. ТСХ (CHCl3/метанол, 9:1) показала завершение реакции. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (CHCl3/метанол, 9:1), получая на выходе чистый продукт в виде твердого вещества желтого цвета (3 г, 64%). Продукт (3 г, 6,13 ммоль) суспендировали в 10 мл дихлорметана и охлаждали в бане со льдом. 10 мл трифторуксусной кислоты добавляли по каплям в течение 30 мин, используя капельную воронку к охлажденной, перемешиваемой смеси. ТСХ (CHCl3/метанол, 9:1) раствора желтого цвета через 3 ч показывает полное отщепление BOC-группы. Все растворители удаляли при пониженном давлении, и остаток сушили в высоком вакууме в течение ночи. Остаток растворяли в минимальном количестве тетрагидрофурана и осаждали в смеси 1:1 диизопропилового эфира и н-гексана, затем хранили при 5°C в течение ночи. Осадок кремовой окраски выделяли центрифугированием, промывали диэтиловым эфиром и сушили в высоком вакууме с получением 2,5 г (81%) линкера A в виде твердого вещества бежевого цвета.
[0256] Синтез соединения 15
(C) растворяли (2 × 375 мг (1,226 ммоль) в 30 мл безводного метанола, каждый в двух 50-мл пробирках Falcon), центрифугировали (3220 об/мин, 10 мин), супернатанты добавляли к линкеру (A) (1,235 г, 2,452 ммоль), суспендировали в 20 мл безводного метанола в колбе объемом 250 мл. Добавляли другие 40 мл метанола и 2 мл ацетонитрила, и мутный раствор светло-желтого цвета перемешивали при комнатной температуре. ТСХ (RP-18, ацетонитрил/NaH2PO4, 30:70) реакционной смеси через 15 ч показывает полное потребление (C). Смесь упаривали до ~30 мл, переносили в 50-мл пробирку Falcon и хранили при 5°C (1 ч). Осадок собирали центрифугированием (3220 об/мин, 10 мин), супернатант (3×10 мл) добавляли к холодной смеси 3:1 диизопропиловый эфир/изопропанол (3×30 мл) в три 50-мл пробирки Falcon и хранили при 5°C в течение ночи. Осадок собирали центрифугированием (3220 об/мин, 15 мин), промывали 5 мл диэтилового эфира, сушили на воздухе и в высоком вакууме с получением на выходе 903 мг (85,6% от теоретического, 1,055 г) соединения 15 в виде твердого вещества желтого цвета. Неочищенный продукт объединяли в одну 50-мл пробирку Falcon, промывали тетрагидрофураном (6×10-15 мл) и центрифугировали после каждой стадии промывки (3220 об/мин, 10 мин). Окончательно, продукт промывали 3 раза 5-10 мл диэтилового эфира и сушили на воздухе и в высоком вакууме с получением на выходе 694,4 мг (66%) соединения 15 в виде твердого вещества желтоватого цвета.
[0257] pH-зависимая стабильность HSА-соединения 15 при pH 7,0 и 5,0
Стабильность при pH 7,0 (фосфатный буфер 4 мМ, NaCl 150 мМ): соединение 15 добавляли к раствору полностью восстановленного ЧСА (человеческого сывороточного альбумина) и полное связывание с цистеином в положении 34 подтверждали посредством ВЭЖХ. 200 мкМ раствора полученного конъюгата соединения 15 с ЧСА инкубировали при 37°C и анализировали посредством ВЭЖХ каждый час. Приблизительно 0,18% (C) высвобождалось за час. Стабильность при pH 5,0 (фосфатный буфер 4 мМ, NaCl 150 мМ, доведенного с использованием 1 M HCl): Конъюгат ЧСА с соединением 15 получали при pH 7,0 (см. выше) и доводили до pH 5,0 добавлением 1 M HCl. 200 мкМ раствора полученного конъюгата ЧСА с соединением 15 инкубировали при 37°C и анализировали посредством ВЭЖХ каждый час. Период полувыведения (t1/2) для высвобождения (C) составляет приблизительно 13 ч.
[0258] Способ B: Получение Соединения 15. Соединение 15 может быть получено следующим альтернативным способом.
[0259] Синтез 4-ацетил-N-(1-((2R,4R,5R)-3,3-дифтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)-тетрагидрофуран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-ил)бензамида (B)
Синтез 2,5-диоксопирролидин-1-ил-4-ацетилбензоата: В атмосфере азота в 4-литровую трехгорлую круглодонную колбу загружали 4-ацетилбензойную кислоту (1,0 эквив., 487,8 ммоль, 80,00 г), N-гидроксисукцинимид (NHS) (1,1 эквив., 536,6 ммоль, 61,75 г), и безводный ТГФ (1,80 л). Цифровую мешалку IKA Eurostar с верхним приводом (регулирование мощности при 190 об/мин) применяли для перемешивания содержимого реакционного раствора при постоянной скорости. Раствор охлаждали, используя баню со льдом (60 мин). Раствор N,N'-дициклогексилкарбодиимида (DCC) (1,1 эквив., 536,6 ммоль, 110,71 г) в безводном ТГФ (720 мл) затем добавляли по каплям (в течение 90 мин), в атмосфере азота при перемешивании (капельную воронку промывали безводным ТГФ, 2×5 мл). Через около 30 минут добавления DCC реакционная смесь становилась мутной вследствие образования N,N'-дициклогексилмочевины (DCU) в виде осадка белого цвета. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение дополнительных 2 часов, в то время как лед непрерывно добавляли к бане со льдом. Реакционная смесь затем медленно нагревалась до комнатной температуры без удаления бани со льдом, чтобы реакция продолжалась до того, как анализ методом ВЭЖХ показал полное потребление карбоновой кислоты через 25 ч 30 мин. Твердое вещество удаляли посредством вакуум-фильтрации. Твердое вещество промывали безводным ТГФ (4 × 100 мл), и объединенные фракции упаривали досуха в вакууме при 40°C. Остаток растворяли в безводном дихлорметане (400 мл), и раствор хранили при 4°C в течение 15 ч и затем снова отфильтровывали. Твердое вещество промывали предварительно охлажденным безводным дихлорметаном (2×20 мл). Растворитель удаляли в вакууме при 30°C, остаток перерастворяли в безводном ДХМ (750 мл), и органический слой промывали холодным 5% водным раствором NaOH (2×400 мл). Органический слой промывали дистиллированной H2O (400 мл), затем сушили над сульфатом натрия (~20 г), фильтровали под вакуумом и концентрировали в вакууме при 30°C с получением соединения, указанного в заголовке. Соединение сушили в высоком вакууме в течение 24 ч с получением на выходе (100,2 г, 79%) в виде твердого вещества грязно-белого цвета (ВЭЖХ250нм > 95,9%).
[0260] Синтез (B) : Гемцитабин (1,0 эквив., 76,02 ммоль, 20,00 г) добавляли к ТГФ (532 мл) и дистиллированной воде (45,6 мл) одной порцией с образованием мелкодисперсной суспензии, которая становилась прозрачным раствором после кипячения с обратным холодильником (67°C) в течение 5 мин. Затем, раствор 2,5-диоксопирролидин-1-ил-4-ацетилбензоата (1,05 эквив., 79,82 ммоль, 20,84 г) в ТГФ (229 мл) добавляли по каплям через канюлю в течение периода, равного 6 мин. После окончания добавления, реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником (67°C) в течение 16 ч. Через 16 ч, анализ методами ВЭЖХ (PDA 266 нм) и ЖХ-МС показал присутствие приблизительно 20% непрореагировавшего исходного вещества гемцитабина. В соответствии с ВЭЖХ анализом (PDA 266 нм), реакционный раствор содержал 53,8% продукта, 33,6% общих полярных примесей и 12,6% общих неполярных примесей. При очистке продукта этой загрузки использовали последовательные и селективные стадии промывки неочищенного продукта, чтобы удалить любые нежелательные полярные и неполярные примеси. Способ включал стадии промывки взвеси различными растворителями, которые селективно растворяли полярные и неполярные примеси, при которых продукт является идеально нерастворимым или лишь слегка растворимым. Следовательно, через 16 ч реакционный раствор бледно-желтого цвета достигал комнатной температуры, и растворители упаривали под вакуумом при 40°C с получением на выходе липкого остатка.
Первую стадию очистки применяли для удаления полярных примесей посредством промывки водой с последующей фильтрацией и дополнительной промывкой водой. Таким образом, воду (300 мл) добавляли к указанному выше неочищенному продукту, и содержимое колбы растирали при комнатной температуре (30 мин) до получения мелкодисперсной суспензии белого цвета. Полученную в результате суспензию затем перемешивали при 50°C в течение 15 мин, отфильтровывали через фильтр-воронку (Пор. 4) и промывали водой (2×25 мл) с получением аморфного твердого вещества (твердого вещества 1), которое сушили под вакуумом в течение 15 ч с получением 26,34 г. Анализ методом ВЭЖХ (266 нм) этого твердого вещества (твердого вещества 1) показал чистоту, равную 91,9%, с содержанием всего 3,7% полярных примесей и 4,4% неполярных примесей.
Вторую стадию очистки применяли для удаления неполярных и оставшихся полярных примесей из твердого вещества 1 посредством промывки взвеси смесью воды и хлороформа (2:1, об/об). Таким образом, воду (200 мл) наливали в колбу, содержащую твердое вещество 1, и полученную суспензию перемешивали при 50°C в течение 5 мин, давали ей охладиться до комнатной температуры (0,5 ч), суспендировали с хлороформом (100 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 10 минут до гомогенности. Смеси затем давали осадиться (приблизительно 5 минут) и гетерогенную смесь отфильтровывали через фильтр-воронку (Пор. 4), и промывали холодной водой (2 × 15 мл) с получением аморфного твердого вещества (твердого вещества 2), которое затем сушили в высоком вакууме в течение 24 ч с получением соединения, указанного в заголовке (23,60 г, 76%) в виде твердого вещества белого цвета (ВЭЖХ (266 нм) > 94,21%). Анализ методом ВЭЖХ (266 нм) отфильтрованного твердого вещества 2 показал чистоту, равную 94,2%, с содержанием всего 1,7% полярных примесей и 4,1% неполярных примесей.
Химическая Формула: C18H17 F2N3O6, Рассчитано [M+H]+ 410,12, установлено [M+H]+ 410,15
[0261] Синтез промежуточного соединения (C)
Оксихлорид фосфора (4,2 эквив., 102,6 ммоль, 9,59 мл) добавляли к холодному (0°C, баня вода со льдом) триметилфосфату (60 мл), и прозрачный раствор выдерживали при 0°C в течение 20 мин. Затем, твердое вещество (B) (1,0 эквив., 24,42 ммоль, 10,00 г) добавляли тремя частями (3 г, 3 г и 4 г). Через приблизительно 20 минут, реакционная смесь становилась гомогенной и обретала светло-желтую окраску, и ее выдерживали при 0°C в течение 3,5 ч. Анализ методами ВЭЖХ и ЖХ-МС через 3 ч показал прибл. 99% конверсию. Как только фосфорилирование завершалось (3,5 ч), смесь фильтровали через воронку с пористым стеклянным фильтром, и затем выливали по каплям в течение 30 мин в холодную (0°C), энергично встряхиваемую свежеприготовленную смесь насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия (NaHCO3) и диэтилового эфира (450 мл, 300 мл). Перемешивание продолжали в течение 10 мин при 0°C и в течение 60 мин при комнатной температуре до получения прозрачной водной фазы (с внутренней температурой 15°C).
Органический слой удаляли, и водный слой промывали диэтиловым эфиром (1×300 мл). Водная фаза оставалась частично эмульгированной, и к ней затем добавляли более насыщенный раствор NaHCO3, чтобы достичь деэмульгирующих условий. Добавление 330 мл насыщенного раствора NaHCO3 помогало разрушить эмульгированные капли и фазы разделялись. Объединенные водные экстракты (780 мл) перемешивали при комнатной температуре и доводили до pH 4,0 концентрированной HCl (приблизительно 19 мл), и раствор равномерно распределяли в пробирки Falcon объемом 50 мл (всего 16) и хранили при 4°C в течение 2,5 дней. После этого периода образовывался твердый осадок белого цвета, и перед его анализом выполняли следующие стадии:
- Образцы центрифугировали в течение 20 минут при 10°C и 4000 об/мин.
- Супернатанты (водную фазу) удаляли декантацией, объединяли и сушили в вакууме при 50°C, и полученное твердое вещество сушили в высоком вакууме в течение 17 ч.
- Аморфные осадки перерастворяли в метаноле (400 мл). Раствор переносили в круглодонную колбу объемом 1 литр, и растворители упаривали под вакуумом при 40°C с получением на выходе твердого вещества белого цвета (твердого вещества 1, 10,96 г), которое далее сушили в высоком вакууме в течение 20 ч.
Анализ твердого вещества методом ВЭЖХ 95,4% (220 нм).
Химическая Формула: C18H18F2N3O9P, Рассчитано [M-H]+ 488,07, установлено [M-H]+ 488,55
[0262] Синтез линкера (A)
Синтез трет- Бутил-2-(4-амино-2-нитробензоил)гидразин-1-карбоксилата: 4-Амино-2-нитробензойную кислоту (1,0 экв., 164,7 ммоль, 30,00 г) растворяли в смеси ацетонитрила и тетрагидрофурана (1:1; 720 мл) и охлаждали до 6°C на бане с льдосоляным охлаждением, затем добавляли трет-бутилкарбазат (1,5 экв., 247,1 ммоль, 32,65 г), HOBt (1,1 экв., 181,2 ммоль, 27,93 г) и EDC-HCl (1,0 экв., 164,7 ммоль, 31,64 г), и реакционную смесь перемешивали в течение 90 мин на льду, после чего баню со льдом удаляли, и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Первоначально остающееся твердое вещество в реакционной смеси растворялось при перемешивании в пределах первых двух часов. После перемешивания реакционного раствора в течение 16 ч, растворители удаляли при пониженном давлении (водяная баня: 40°C). Неочищенное вещество (густое масло темно-коричневого цвета) растворяли в 2% н-бутаноле в дихлорметане (600 мл), промывали насыщенным раствором NH4Cl (2×600 мл), насыщенным раствором NaHCO3 (1×600 мл), и дистиллированной водой (1×600 мл). Органический слой затем сушили над сульфатом натрия, Na2SO4, (200 г). Растворители удаляли при пониженном давлении (водяная баня: 40°C), получая на выходе соединение, указанное в заголовке в виде пены коричневого цвета (чистота: 98,4%, согласно ВЭЖХ (220 нм); выход: 30,42 г (62%). Химическая Формула: C12H16N4O5, рассчитано [M+Na]+: 319,10, установлено [M+Na]+: 319,08.
Синтез хлорида 6‐малеимидокапроновой кислоты: Безводный дихлорметан (250 мл) добавляли при комнатной температуре при перемешивании одной частью в одногорлую круглодонную колбу объемом один литр, содержащую 6‐малеимидокапроновую кислоту (1,0 эквив., 236,6 ммоль, 49,97 г), что приводило в результате к раствору желтого цвета. Небольшое количество нерастворимых примесей удаляли фильтрацией через фильтровальную бумагу (MN 617¼, ø185 мм) с последующей промывкой безводным ДХМ (25 мл). К раствору при комнатной температуре по каплям добавляли хлорангидрид щавелевой кислоты (1,1 эквив., 259,6 ммоль, 22,50 мл) через капельную воронку (в течение 2 ч) при перемешивании реакционного раствора. Осторожно: Во время процесса добавления наблюдали выделение газа. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре и обеспечивали взаимодействие до тех пор, пока анализ методом ВЭЖХ не показал полное потребление 6‐малеимидокапроновой кислоты через 7 ч 30 мин. Во время реакции цвет реакционного раствора изменялся на темно-желтый. Через 5 ч 30 мин после полного добавления хлорангидрида щавелевой кислоты растворитель удаляли в вакууме при 30°C. Полученное в результате масло темно-желтого цвета затем сушили в высоком вакууме в течение 20 часов. Полученное твердое вещество светло-коричневатого цвета дробили шпателем и сушили в течение дополнительных 20 ч в высоком вакууме с получением (53,35 г, 98%) твердого вещества светло-коричневатого цвета (ВЭЖХ (220 нм) > 97,6% в виде метилового эфира).
Синтез Boc-защищенного линкера A: Раствор хлорида 6‐малеимидокапроновой кислоты (1,1 экв., 216,6 ммоль, 49,70 г) в безводном ТГФ, (382 мл) добавляли одной частью при комнатной температуре к раствору трет-бутил-2-(4-амино-2-нитробензоил)гидразин-1-карбоксилата (1,0 экв., 196,9 ммоль, 58,34 г) в безводном ТГФ (580 мл). Прозрачную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Раствор DIPEA (1,1 экв., 216,6 ммоль, 37,7 мл) в безводном ТГФ (120 мл) затем добавляли по каплям через капельную воронку (в течение одного часа) при умеренном перемешивании при комнатной температуре. После завершения реакции по данным ВЭЖХ реакционную смесь хранили при 4°C в течение 14 ч. Растворитель затем удаляли при пониженном давлении с получением густого масла темно-коричневого цвета, которое затем растворяли в ДХМ (450 мл) при встряхивании, используя шейкер KL 2 (прибл. 150 об/мин; Edmund Bühler GmbH, Hechingen, Germany) в течение 10 мин при комнатной температуре. Этот раствор переносили в делительную воронку объемом 2 л, и круглодонную колбу споласкивали дополнительным ДХМ (450 мл), который затем добавляли в делительную воронку. Органическую фазу затем промывали 5% HCl (900 мл), водн. нас. NaHCO3 (900 мл) и 1M NaH2PO4 (900 мл). После водной обработки, органическую фазу сушили над Na2SO4. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и остаток сушили в течение 16 ч в высоком вакууме с получением на выходе соединения, указанного в заголовке (79,25 г) в виде пены светло-коричневого цвета. Неочищенный продукт дополнительно очищали флэш-хроматографией с получением 31,21 г с чистотой 99,6% по ВЭЖХ (220 нм). Химическая Формула: C22H27N5O8, рассчитано [M+Na]+: 512,18, установлено [M+Na]+: 512,04.
Синтез линкера A: Защищенный линкер (1,0 эквив., 30,60 ммоль, 15,06 г) помещали в одногорлую круглодонную колбу объемом 250 мл и предварительно охлаждали в бане со льдом в течение 10 минут. Предварительно охлажденную ТФУ (26 эквив., 784 ммоль, 60 мл) добавляли одной частью при перемешивании с использованием магнитной мешалки (250 об/мин). Смесь дополнительно перемешивали при охлаждении в бане со льдом в течение 45 минут, пока анализ методом ВЭЖХ не показал полное потребление защищенного линкера. Поскольку было установлено, что удаление ТФУ при комнатной температуре или более высоких температурах приводит к димеризации линкера A, ТФУ удаляли при низкой температуре (баня со льдом) в высоком вакууме. Чтобы облегчить удаление ТФУ, в качестве носителя был выбран толуол. Толуол (30 мл) добавляли к реакционному раствору при 0°C, и смесь ТФУ-толуол затем удаляли при 0°C (предосторожность: 1) тщательный контроль высокого вакуума, 2) без перемешивания раствора, чтобы избежать его быстрого переноса в ловушку) в высоком вакууме. Пустую двухгорлую круглодонную колбу (500 мл), охлаждаемую жидким азотом применяли в качестве дополнительной охлаждающей ловушки для конденсированного ТФУ и толуола. Во время удаления ТФУ, смесь время от времени пузырилась, и часть раствора перетекала внутрь соединительной трубки. Через 30 минут большую часть смеси ТФУ-толуол удаляли, и получали маслянистый остаток. Для дополнительного удаления ТФУ в колбу добавляли другие 30 мл толуола, и ТФУ удаляли, как описано выше. Через 80 минут этот процесс повторяли после добавления дополнительных 20 мл толуола. Через 110 минут дополнительную охлаждающую ловушку удаляли, и воскоподобное вещество напрямую соединяли с системой высокого вакуума. Через 3 ч 30 минут баню со льдом удаляли, и маслянистый остаток сушили в течение других 30 минут при комнатной температуре с получением пены. Пеноподобный остаток растворяли в N,N-диметилформамиде, ДМФА (30 мл), и продукт осаждали покапельным добавлением раствора ДМФА при комнатной температуре в смесь диизопропиловый эфир/метанол (45:5, 1,5 л) при энергичном перемешивании. Другие 2 мл ДМФА использовали для споласкивания реакционной колбы. Осадок фильтровали через пористый стеклянный фильтр (Пор. 4) посредством вакуум-отсоса, и продукт (фильтровальную лепешку) промывали диизопропиловым эфиром (3×200 мл) не давая лепешке высыхать. После конечной стадии промывки 200 мл н-пентана лепешку сушили вакуум-отсосом. Твердое вещество желтоватого цвета собирали в колбу и сушили в высоком вакууме в течение 18 ч. Продукт хранили при -20°C. Выход: 10,94 г (91,8%). Чистота (среднее значение для трех измерений): 99,0% (220 нм), 98,7% (247 нм). Рассчитано [M+H]+ 390,14, установлено [M+H]+ 390,12.
[0263] Синтез соединения 15
Производное гемцитабина (C) (1,0 эквив., 9,29 ммоль, 4,55 г) суспендировали в безводном метаноле (68,9 мл) с последующим добавлением безводного ДМСО (45,9 мл), и осветленный прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут. После этого периода, линкер (A) (1,0 эквив., 9,29 ммоль, 3,62 г) добавляли тремя частями с последующим добавлением 1,0 эквив. ТФУ. Реакционная смесь приобретала светло-желтую окраску, и ее перемешивали при комнатной температуре. Как только реакция завершалась (4 ч), что подтверждали анализом методами ВЭЖХ (220 нм) и ЖХ-МС, смесь добавляли по каплям в течение 2-3 минут в холодную (0°C) свежеприготовленную смесь 1:3 трет-бутилметилового эфира и изопропанола (600 мл) при энергичном перемешивании. Перемешивание продолжали в течение 10 мин при 0°C (внутренняя температура: 5°C). Осадок фильтровали, промывали четыре раза холодным ТГФ, переносили в новую воронку с пористым стеклянным фильтром и суспендировали в холодном трет-бутилметиловом эфире (1×100 мл, 4°C). Этот конечный аморфный осадок переносили в круглодонную колбу объемом 250 мл и сушили в высоком вакууме в течение 20 ч с получением на выходе соединения 15, указанного в заголовке, в виде твердого вещества бледного цвета (4,52 г). Анализ методом ВЭЖХ 96,2% (220 нм), Химическая Формула: C35H35F2N8O14P, рассчитано [M-H]+859,19, установлено [M-H]+859,40.
Пример 7
[0264] Получение Соединения 16
80 мг Доксорубицина·HCl (138 мкмоль) и 139 мг Линкера A (276 мкмоль; 2 экв.) растворяли в 20 мл безводного метанола при энергичном перемешивании при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч. Осаждение выполняли, используя 105 мл смеси 2:1 изопропанола и диизопропилового эфира, и реакционную смесь хранили при -20°C в течение ночи. Осадок красного цвета центрифугировали (3200×г, 10 мин) и отбрасывали, и супернатант переносили в новую емкость. Супернатант снова осаждали 150 мл диизопропилового эфира и хранили в течение ночи при -20°C. Осадок красного цвета центрифугировали и промывали дважды 8 мл ацетонитрила и однократно 40 мл смеси 1:3 изопропанол/диизопропиловый эфир. Полученный продукт затем сушили в высоком вакууме с получением на выходе Соединения 16 в виде твердого вещества красного цвета. Выход: 53,9 мг (40%).
[0265] Стабильность Конъюгата ЧСА с соединением 16 при pH 7,0 и 5,0
Стабильность при pH 7 (Фосфатный буфер 4 мМ NaCl 150 мМ):
Соединение 16 добавляли к раствору полностью восстановленного ЧСА (человеческого сывороточного альбумина) и полное связывание с положением цистеина-34 подтверждали посредством ВЭЖХ. 200 мкМ раствора полученного конъюгата ЧСА с соединением 16 инкубировали при 37°C и анализировали методом ВЭЖХ каждый час.
Всего лишь 0,36% свободного доксорубицина высвобождалось за час.
Стабильность при pH 5 (Фосфатный буфер 4 мМ, хлорид натрия 150 мМ и натрий-ацетатный буфер 50 мМ): конъюгат ЧСА с соединением 16 получали при pH 7 (см. выше) и натрий-ацетатный буфер (50 мМ) добавляли для доведения значения pH до 5,0. Раствор 200 мкМ полученного конъюгата ЧСА с соединением 16 при pH 5,0 инкубировали при 37°C и анализировали методом ВЭЖХ каждый час. Период полувыведения для высвобождения доксорубицина составлял приблизительно 9 ч.
Пример 8
[0266] Синтез пролекарства винбластина на основе линкера A
12'-Формилвинбластин получали из винбластина и гексаметилентетрамина согласно методике, опубликованной в WO 2005/055939 A2,12'-Формилвинбластин (320 мг, 336 мкмоль) и линкер A (172,3 мг, 442,5 мкмоль; 1,31 экв.) растворяли в безводном MeOH (32 мл) при энергичном перемешивании в реакционной пробирке объемом 50 мл. Через 2 ч, реакцию доводили до конца добавлением диизопропилового эфира (34 мл), и раствор хранили при -20°C в течение 2 ч. Небольшое количество примесей осаждали, их центрифугировали и отбрасывали. К супернатанту добавляли смесь н-гексан/диизопропиловый эфир (20 мл, 50:50) и хранили при -20°C в течение 16 ч. Осадок центрифугировали, растворяли в 1 мл смеси CHCl3/MeOH (90:10) и переосаждали из 20 мл смеси н-гексан/диизопропиловый эфир (50:50), центрифугировали и промывали 8 мл смеси AcN/диэтиловый эфир (1:3) и дополнительно центрифугировали. Продукт растворяли в 5 мл смеси CHCl3/MeOH (99:1), переосаждали из 20 мл смеси н-гексан/диизопропиловый эфир (50:50) и центрифугировали. Эту стадию промывки повторяли дважды. Затем продукт сушили в высоком вакууме с получением твердого вещества белого цвета.
Выход: 253 мг (57%), Чистота ВЭЖХ: 90,1% (220 нм) 93,0% (310 нм)
Химическая Формула: C64H75N9O15, рассчитано [M+H]+.: 1210,55, Установлено [M+H]+: 1210,42
Пример 9
[0267] Синтез пролекарства винбластина на основе линкера B
12'-Формилвинбластин получали из винбластина и гексаметилентетрамина согласно методике, опубликованной в WO 2005/055939 A2.
12'-Формилвинбластин (300 мг, 315 мкмоль) и линкер B (153 мг, 321 мкмоль; 1,02 экв.) растворяли в безводном MeOH (25 мл) и перемешивали при КТ. Через 1 ч, реакцию доводили до конца добавлением смеси н-гексан/диизопропиловый эфир (23 мл, 50:50), и раствор хранили при -20°C в течение 4 ч. Небольшое количество примесей осаждали, центрифугировали и отбрасывали. К супернатанту затем добавляли диизопропиловый эфир (20 мл) и хранили при -20°C в течение 2 ч.
Осадок центрифугировали, растворяли в 1 мл смеси CHCl3/MeOH (99:1) и переосаждали из 20 мл смеси н-гексан/диизопропиловый эфир (50:50), центрифугировали и промывали 10 мл смеси AcN/диэтиловый эфир (1:3) и дополнительно центрифугировали.
Продукт растворяли в 5 мл смеси CHCl3/MeOH (90:1), переосаждали из 20 мл диизопропилового эфира, центрифугировали и сушили в высоком вакууме с получением порошка белого цвета.
Выход: 251 мг (63%), Чистота ВЭЖХ: 90,1% (220 нм) 94,0% (310 нм).
Химическая Формула: C64H75FN8O12, рассчитано [M+H]+: 1183,55, Установлено [M+H]+: 1183,45
[0268] Получение линкера B
К раствору 4-амино-2-фторбензойной кислоты (8,1 г, 52,22 ммоль), трет-бутилкарбазат (8,28 г, 62,66 ммоль) и N-метилморфолин (14,35 мл, 130,54 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл) и EtOAc 7(5 мл), 1,67 M T3P (50% в этилацетате, 40,65 мл) добавляли по каплям через воронку. Смесь перемешивали при КТ в течение 16 ч. Добавляли воду, и органический слой промывали насыщенным раствором KHCO3 и водой, сушили над MgSO4, отфильтровывали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растирали в MTBE, отфильтровывали и сушили в вакууме с получением 9,7 г (69%) трет-бутил-2-(4-амино-2-фторбензоил)гидразинкарбоксилата в виде твердого вещества белого цвета. Химическая Формула: C12H16FN3O3, рассчитано [M-H]+: 268,11, установлено [M-H]+: 268,00.
К раствору трет-бутил-2-(4-амино-2-фторбензоил)гидразинкарбоксилата (9,68 г, 35,94 ммоль), добавляли 6-малеимидогексановую кислоту (6,6 г, 31,25 ммоль) и N-метилморфолин (8,59 мл, 0,08 моль) в тетрагидрофуране (40 мл) и EtOAc (120 мл), 1,67M T3P (50% в этилацетате, 24,32 мл)? и смесь перемешивали при 60°C в течение 48 ч. Добавляли воду и EtOAc, и органический слой промывали насыщенным раствором KHCO3, водой и насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO4, отфильтровывали и концентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очищали на хроматографической колонке, используя н-гексан:EtOAc от 1:1 до 1:2 в качестве элюента. Полученное твердое вещество растирали в MTBE с получением 7,5 г (51,9%, чистота > 98%) N-Boc-O-фторлинкера в виде твердого вещества белого цвета. Химическая Формула: C22H27FN4O6, рассчитано [M-H]+: 461,18, установлено [M-H]+: 461,00.
К суспензии N-Boc-O-фторлинкера (7 г, 15,14 ммоль) в дихлорметане (40 мл) при 0°C добавляли ТФУ (40,54 мл, 0,53 моль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 15 мин и при КТ в течение 15 мин. Растворитель удаляли в вакууме при 0°C. Неочищенный продукт растирали в MTBE/ДХМ 7:1. Твердое вещество фильтровали и сушили в вакууме с получением 6,5 г (90,1%) O-фтормалеимидного линкера в виде твердого вещества белого цвета. Чистота ВЭЖХ 96,8% (220 нм). Химическая Формула: C17H18FN4O4, рассчитано [M-H]+: 361,13, установлено [M-H]+: 361,10.
Пример 10
[0269] Получение линкера C.
Линкеры согласно данному изобретению могут быть получены способами, отображенными на схеме реакции, показанной ниже.
Синтез хлорангидрида fmoc-L-пролина: Fmoc-L-пролин (250 мг, 0,74 ммоль) растворяли в CH2Cl2 (4 мл). Добавляли тионилхлорид (800 мкл, 10,36 ммоль), и раствор перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 3 ч с использованием мониторинга посредством ТСХ при гашении метанолом в качестве разбавителя и последующим образованием метанольного аддукта (CH2Cl2:MeOH; 9:1). Затем реакционную смесь сушили в вакууме с получением 250 мг неочищенного вещества, которое затем применяли в последующей реакции без какой-либо дополнительной очистки.
Синтез трет- бутил-2-(2-нитро-4-(пирролидин-2-карбоксамидо)бензоил)гидразин-1-карбоксилата: К раствору трет-бутил-2-(4-амино-2-нитробензоил)гидразин-1-карбоксилата (104 мг, 0,35 ммоль) в ТГФ (2 мл) добавляли (9H-флуорен-9-ил)метил-(S)-2-(хлоркарбонил)пирролидин-1-карбоксилат (250 мг, 0,70 ммоль) в виде раствора в ТГФ (2 мл) с последующим покапельным добавлением триэтиламина (49 мкл, 0,35 ммоль) в виде раствора в ТГФ (200 мкл). После перемешивания в течение 12 ч, ТСХ (CHCl3/ацетон, 7:3) показала полную конверсию исходного вещества. Реакционную смесь фильтровали и сушили в вакууме посредством упаривания на роторном испарителе. Полученное в результате масло затем очищали на Biotage FCC с использованием градиента метанола и хлороформа с получением 279 мг твердого вещества бледного цвета.
К раствору предшествующего твердого вещества в безводном CH2Cl2 (2 мл) добавляли DBU (10%, 200 мкл), и смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. Мониторинг реакционной смеси проводили посредством ЖХ/МС до израсходования исходного вещества. Реакционную смесь сушили в вакууме упариванием на роторном испарителе. Полученное в результате масло затем очищали на Biotage FCC с использованием градиента метанола и хлороформа с получением соединения, указанного в заголовке, в виде твердого вещества коричневого цвета (63 мг, 46% выход, 2 стадии). Химическая Формула: C17H23N5O6, рассчитано [M+H]+: 394,17, установлено [M+NH]+: 394,14.
Синтез (((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)(сульфо)-D-аланина: L-Цистеиновую кислоту (500 мг, 2,95 ммоль) суспендировали в смеси 10% водного раствора Na2CO3 (17,5 мл) и 1,4-диоксана (7,5 мл) и охлаждали в бане со льдом. N-флуоренилметоксикарбонилсукцинимид (1,19 г, 3,54 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (12,5 мл) посредством осторожного нагрева и раствор добавляли в течение 30 мин через капельную воронку при эффективном перемешивании. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи, и органический растворитель удаляли в вакууме. Суспензию разбавляли H2O (10 мл), промывали трет-бутилметиловым эфиром (2×10 мл), и водную фазу подкисляли с использованием конц. HCl до pH 3,0. Раствор лиофилизировали с получением 1,02 г fmoc-цистеиновой-кислоты в виде гигроскопичного твердого вещества. Это твердое вещество использовали без дополнительной очистки. Химическая Формула: C18H17NO7S, рассчитано [M-H]+: 390,06, установлено [M-H]+=390,07.
Синтез (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-((S)-2-((4-(2-(трет-бутоксикарбонил)гидразин-1-карбонил)-3-нитрофенил)карбамоил)пирролидин-1-ил)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты: В высушенной открытым пламенем колбе, fmoc-L-цистеиновую кислоту (96 мг, 0,30 ммоль) растворяли в смеси безводной смеси ДМСО:CH2Cl2:ДМФА (1:1:1, 3 мл). Добавляли HATU (114 мг, 0,30 ммоль), с последующим добавлением HOAt (41 мг, 0,30 ммоль). Через 5 мин добавляли раствор трет-бутил-(S)-2-(2-нитро-4-(пирролидин-2-карбоксамидо)бензоил)гидразин-1-карбоксилата (100 мг, 0,25 ммоль) в безводном ДМФА (2 мл) с последующим покапельным добавлением NMM (55 мкл, 0,50 ммоль), и полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 17 ч. Флэш-хроматографией на нормальной фазе (градиент CHCl3:метанол) получали соединение, указанное в заголовке (152 мг, 78%). Химическая Формула: C35H38N6O12S, рассчитано [M-CO2tBu+H]+: 667,18 установлено [M-CO2tBu+H]+, 667,11.
Синтез (R)-2-амино-3-((S)-2-((4-(2-(трет-бутоксикарбонил)гидразин-1-карбонил)-3-нитрофенил)карбамоил)пирролидин-1-ил)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты: К раствору (S)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-((S)-2-((4-(2-(трет-бутоксикарбонил)гидразин-1-карбонил)-3-нитрофенил)карбамоил)пирролидин-1-ил)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (152 мг, 0,198 ммоль) в безводном CH2Cl2 (2 мл) добавляли DBU (10%, 200 мкл) при 0°C, и смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. Хроматограмма ЖХ-МС (образец в MeCN) показала полную конверсию исходного вещества. Органический растворитель упаривали под вакуумом, получая на выходе маслянистый остаток. После очистки этого остатка флэш-хроматографией (градиент CHCl3/метанол; от 2 до 95%) получали соединение, указанное в заголовке в виде твердого вещества коричневого цвета (80,4 мг, 75% выход). Химическая Формула: C20H28N6O10S, рассчитано [M+Na]+ 567,15, установлено [M+Na]+ 567,19.
Синтез (R)-3-((S)-2-((4-(2-(трет-бутоксикарбонил)гидразин-1-карбонил)-3-нитрофенил)карбамоил)пирролидин-1-ил)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты: К раствору (R)-2-амино-3-((S)-2-((4-(2-(трет-бутоксикарбонил)гидразин-1-карбонил)-3-нитрофенил)карбамоил)пирролидин-1-ил)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (80,4 мг, 0,14 ммоль) в ТГФ (2 мл) добавляли хлорангидрид 6-малеимидокапроновой кислоты (41,0 мг, 0,14 ммоль) одной частью в виде раствора в ТГФ (1 мл). После перемешивания в течение 5 мин при КТ, раствор триэтиламина (24 мкл, 0,14 ммоль) в ТГФ (200 мкл) добавляли по каплям в течение 10 мин. Раствор коричневого цвета перемешивали при КТ в течение дополнительных 3 ч. Реакционную смесь фильтровали и сушили под вакуумом, получая на выходе маслянистый остаток коричневого цвета. После очистки этого остатка флэш-хроматографией (градиент CHCl3/MeOH, от 100:0 до 2:98) получали соединение, указанное в заголовке (71 мг, 65%). Химическая Формула: C30H39N7O13S, рассчитано [M-CO2tBu+H]+: 638,18, установлено [M-CO2tBu+H]+: 638,02.
(R)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-((S)-2-((4-(гидразинкарбонил)-3-нитрофенил)карбамоил)пирролидин-1-ил)-3-оксопропан-1-сульфоновая кислота: К охлаждаемому льдом перемешиваемому раствору (R)-3-((S)-2-((4-(2-(трет-бутоксикарбонил)гидразин-1-карбонил)-3-нитрофенил)карбамоил)пирролидин-1-ил)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (71 мг, 0,09 ммоль) в CH2Cl2 (1 мл) добавляли ТФУ (293 мкл, 3,83 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, пока ЖХ-МС не показала израсходование исходного вещества. Желательный продукт получали из реакционной смеси упариванием растворителя и применяли без дополнительной очистки. Твердое вещество коричневого цвета (91 мг, следы ТФУ). НРМС (ЭРИ) для C25H31N7O11S, рассчитано [M+H]+: 637,18, установлено [M+H]+: 638,07 (M+H). Чистота: 96% (ВЭЖХ, 220 нм).
Пример 11
[0270] Синтез гемцитабина гидразина: (R)-3-((R)-2-((4-(2-((Z)-1-(4-((1-((2R,4R,5R)-3,3-дифтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-ил)карбамоил)фенил)этилиден)гидразин-1-карбонил)-3-нитрофенил)карбамоил)пирролидин-1-ил)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты.
К перемешиваемой суспензии 4-ацетил-N-(1-((2R,4R,5R)-3,3-дифтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиримидин-4-ил)бензамида (3 мг, 0,071 ммоль) и (R)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-((S)-2-((4-(гидразинкарбонил)-3-нитрофенил)карбамоил)пирролидин-1-ил)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (5 мг, 0,078 ммоль) в метаноле (250 мкл) добавляли ТФУ (9 мкл, 0,117 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 дней, проводя мониторинг методом ЖХ-МС. По прошествии этого времени, раствор бледного цвета концентрировали в вакууме. Флэш-хроматографией на нормальной фазе (градиент CHCl3:метанол) получали соединение, указанное в заголовке (5,6 мг, 74%). Химическая Формула: C43H46F2N10O16S, рассчитано [M+H]+: 1028,27, установлено [M+H]+:1029,05.
Пример 12
[0271] Синтез гидразона неморубицина
Неморубицин (3 мг, 4,7 мкмоль, 1 экв.) растворяли в безводном MeOH (750 мкл) и добавляли к Линкеру C (10,5 мг, 14,0 мкмоль, 3 экв.) в пробирке для реакции объемом 2 мл. Добавляли ТФУ (1,1 мкл, 2 экв.), и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Во время реакции можно было наблюдать выпадение осадка.
Через 16 ч, добавляли MeOH (800 мкл), и реакционную смесь центрифугировали (20000×g, 2 мин).
Супернатант разделяли в 2 новых пробирки для реакции объемом 2 мл и в каждой из них дополнительно проводили осаждение 1 мл диизопропилового эфира. Вторичный осадок центрифугировали, сушили и анализировали.
Чистота: 89% (220 нм) 80% (495 нм)
Химическая Формула: C57H66N8O23S, рассчитано [M-H]+: 1261,39, Установлено [M-H]+: 1261,60
Пример 13
[0272] Синтез N-(4-Ацетилбензоил)-MMAE (соединение 17)
54,9 мг 4-ацетилбензойной кислоты (334 мкмоль, 2 экв.), 127 мг HATU (334 мкмоль, 2 экв.) и 45,6 мг HOAt (334 мкмоль, 2 экв.) растворяли в 5 мл безводного ДМФА и добавляли 36,7 мкл NMM (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут при комнатной температуре. Далее добавляли раствор 120 мг MMAE (167 мкмоль, 1 экв.) и 36,7 мкл NMM (334 мкмоль, 2 экв.) в 5 мл безводном ДМФА и перемешивание продолжали в течение 72 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли 40 мл хлороформа и промывали дважды 10 мл 5% раствора HCl и трижды 10 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Органический слой сушили над сульфатом натрия, отфильтровывали и растворитель удаляли под вакуумом. Остаток растворяли в 2 мл CHCl3 и очищали, используя флэш-хроматографию (растворитель A: CHCl3, растворитель B: MeOH, 36 мл/мин, объем колонки (CV)=19 мл, градиент: 2 CV (0% B), 4 CV (от 0 до 3% B), 2,4 CV (3% B), 2 CV (от 3 до 5% B), 3 CV (5% B), 1,5 CV (от 5 до 9% B), ZIP® Sphere 10 г, Biotage® Isolera™ One). После сушки в вакууме соединение 17 (115 мг, 80%) получали в виде бесцветной пены. ВЭЖХ Чистота: 97,5% (220 нм).
[0273] Синтез гидразона N-(4-Ацетилбензоил)-MMAE с малеимидным Линкером A (соединение 18)
К раствору 20,6 мг соединения 17 (23,3 мкмоль, 1 экв.) в 3 мл метанола добавляли 23,5 мг малеимидного линкера A (46,6 мкмоль, 2 экв.) в пробирке для реакции объемом 50 мл. Далее, 3,7 мкл ТФУ (46,6 мкмоль, 2 экв.) добавляли к слегка мутной реакционной смеси, после чего раствор немедленно осветлялся. Через 4 ч перемешивания при комнатной температуре, добавляли 4 мл смеси н-гексан/диизопропиловый эфир (1:1) с последующим добавлением 16 мл н-гексана. Образовавшийся осадок центрифугировали (3,220×g, 10 мин) растворяли в 1 мл смеси хлороформ/метанол (1:1) и очищали, используя повторяющуюся флэш-хроматографию (1. хроматография: растворитель A: CHCl3, растворитель B: MeOH, 32 мл/мин, объем колонки (CV)=19 мл, градиент: 1 CV (от 1 до 5% B), 2 CV (5% B), 3 CV (от 5 до 8% B), 4 CV (8% B), 1 CV (от 8 до 9% B), 6 CV (9% B), ZIP® Sphere 10 г, Biotage® Isolera™ One. 2. хроматография: растворитель A: вода, растворитель B: ацетонитрил, 12 мл/мин, объем колонки (CV)=21 мл градиент: 1 CV (10% B), 4 CV (от 10 до 50% B), 3 CV (50% B), 6 CV (от 50 до 80% B) SNAP® Ultra C18 12 г, Biotage® Isolera™ One). После сушки в вакууме соединение 18 (17,0 мг, 58%) получали в виде бесцветного порошка. ВЭЖХ Чистота: 99,1% (220 нм).
[0274] Синтез конъюгата соединения 18 с трастузумаб (соединение 19)
Промышленный трастузумаб (Герцептин®, Roche) восстанавливали с использованием WFI, и pH доводили буфером 0,5 M Трис, 25 мМ EDTA (4% объема загрузки) до pH 8. Раствор mAb разбавляли до 10 мг/мл, используя 10 мМ PBS pH 7,4. Затем, добавляли 2,25 экв. TCEP (трис-(2-карбоксиэтил)фосфина), и смесь инкубировали в течение 90 мин при 20°C. Далее, содержание NMA (N,N-диметилацетамида) в смеси доводили до 5%, и добавляли 5,5 эквивалентов соединения 18. Смесь инкубировали в течение 60 мин при 20°C. Затем реакционную смесь гасили добавлением 11 эквивалентов NAC (N-ацетилцистеина). Удаления несвязанного лекарственного средства и замены буфера на 10 мМ PBS pH 7,4 достигали посредством тангенциальной поточной фильтрации (10 диаобъемов). Раствор концентрировали и определяли концентрацию белка. Затем раствор разбавляли до 7,2 мг/мл, используя 10 мМ PBS pH 7,4. Полученный конъюгат трастузумаб (соединение 19) имел DAR, равный 4,0, как было определено посредством HIC (TOSOH Bioscience, Бутил-NPR 4,6 мм ID×3,5 см, 2,5 мкм; подвижная фаза A: 3 M сульфата аммония, 25 мМ моногидрата моноосновного фосфата натрия в очищенной воде, pH 6,95; подвижная фаза B: 25% изопропанола и 75% 25 мМ моногидрата моноосновного фосфата натрия в очищенной воде, pH 6,95; поток: 0,8 мл мин-1 при 25°C в течение 18 мин, используя систематичный градиент), и 0,41% несвязанного соединения 18, как было определено посредством ВЭЖХ (Waters Xterra MS, C18, 3,5 мкм, 2,1×100 мм, градиент: подвижная фаза A: 20 мМ ацетата аммония, pH 7,0 ± 0,1, подвижная фаза B: ацетонитрил, градиент: 0 мин: 70% A, 20 мин: 30% A, 25 мин: 10% A, 25,1 мин: 70% A, 35 мин: 70% A).
[0275] Стабильность и кинетика высвобождения соединения 19 в буферных растворах при рН 4,0 и pH 7,4
Для исследования стабильности и кинетики высвобождения конъюгат соединения 19 инкубировали в буферных растворах при 37°C. Таким образом, 3-мл аликвоту раствора соединения 19 в фосфатном буфере (7,2 мг/мл в 10 мМ PBS) подкисляли до pH 4,0, используя 0,5 M уксусную кислоту, и помещали вместе с необработанной 3-мл аликвотой (pH 7,4) в термостат при 37°C. Через соответствующие интервалы, образцы (аликвоты по 50 мкл) при обеих значениях pH отбирали и хранили при -20°C до анализа. Перед анализом, образцы удаляли из морозильной камеры и добавляли 7 мкл 5 M NaCl, а также 93 мкл охлажденного метанола. Затем образцы хранили в течение 30 мин при -20°C, центрифугировали при 4°C и 200 об/мин в течение 60 мин. Затем 75 мкл супернатанта разбавляли 75 мкл очищенной воды, и смесь энергично встряхивали и анализировали, используя ВЭЖХ (Waters Xterra MS, C18, 3,5 мкм, 2,1×100 мМ, градиент: подвижная фаза A: 20 мМ ацетата аммония, pH 7,0 ± 0,1, подвижная фаза B: ацетонитрил, градиент: 0 мин: 70% A, 20 мин: 30% A, 25 мин: 10% A, 25,1 мин: 70% A, 35 мин: 70% A). Стандартную кривую для соединения 17 получали при 2,00, 1,00, 0,50, 0,30, 0,20, 0,10, 0,05 и 0,01 мкМ. Интервал от 2,00 до 0,05 мкМ применяли для количественной УФ-оценки при 214 нм. Было установлено, что Соединение 17 являлось единственным продуктом высвобождения. Через 24 ч, 2,7% соединения 17 высвобождалось из ADC при рН 7,4, в то время как при рН 4,0 наблюдали 39,6% свободного соединения 17.
1. Соединение, имеющее структуру Формулы (I)
Формула (I),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где Cредство выбирают из группы, состоящей из цитостатического средства, цитотоксического средства и производного любого из вышеприведенных;
Спейсер отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из и
;
n равен 0;
X представляет собой незамещенный 6-членный арил;
Y отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из незамещенного C1-C6 алкилена, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, C(O)-O- и -O-C(O)-;
R1 отсутствует или представляет собой незамещенный C1-C18 алкилен;
или R1 имеет следующую формулу:
R2 выбирают из группы, состоящей из –H и незамещенного C1-C12 алкила;
каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо представляет собой -H, галоген или -NO2;
PBG представляет собой незамещенную малеимидную группу;
где, когда Спейсер отсутствует, Средство связано с азотом, примыкающим к Спейсеру посредством двойной связи; и
где по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является Н.
2. Соединение, имеющее структуру Формулы (I)
Формула (I),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где Средство выбирают из группы, состоящей из цитостатического средства, цитотоксического средства и производного любого из вышеприведенных;
Спейсер отсутствует, или
;
n равен 0;
X представляет собой незамещенный 6-членный арил;
Y отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из незамещенного C1-C6 алкилена, -NH-C(O)-, -C(O)-NH-, -C(O)-O- и -O-C(O)-;
R1 отсутствует или представляет собой незамещенный C1-C18 алкилен;
R2 выбирают из группы, состоящей из –H и незамещенного C1-C12 алкила;
каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из –H, галогена и -NO2;
PBG представляет собой незамещенную малеимидную группу;
где, когда Спейсер отсутствует, Средство связано с азотом, примыкающим к Спейсеру посредством двойной связи; и
где по меньшей мере один из Z1, Z2, Z3 и Z4 не является Н.
3. Соединение по п. 1 или 2, где указанное соединение имеет структуру Формулы (II)
Формула (II),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где Средство, PBG, Y, R1, Z1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено в п. 1 или 2.
4. Соединение по п. 1 или 2, указанное соединение имеет структуру Формулы (III)
Формула (III),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где Средство, Спейсер, Z2, Z3, Z4, Y, R1 и PBG являются такими, как определено в п. 1 или 2; и
где Z1 не является Н.
5. Соединение по п. 1 или 2, где указанное соединение имеет структуру Формулы (IV)
Формула (IV),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где Средство, PBG, Y, R1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено в п. 1 или 2; и
где Z1 не является Н.
6. Соединение по п. 1, где указанное соединение имеет структуру Формулы (V)
Формула (V),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где Средство, n, X, R1, R2, Z1, Z2, Z3, Z4, Y и PBG являются такими, как определено в п. 1.
7. Соединение по п. 6, где указанное соединение имеет структуру Формулы (VI)
Формула (VI),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу и необязательно содержит один или несколько заместителей, выбранных из галогена;
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
R' представляет собой -R3 или -CH2R3;
где каждый раз, когда присутствует R3, его независимо выбирают из группы, состоящей из -OH, -CH3, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Z1, Z2, Z3, Z4, Y, R1, R2 и PBG являются такими, как определено в п. 6.
8. Соединение по п. 6, где указанное соединение имеет структуру Формулы (VI)
Формула (VI),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу;
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкил, галогена и -N3;
R3 выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, -OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Z1, Z2, Z3, Z4, Y, R1, R2 и PBG являются такими, как определено в п. 6.
9. Соединение по п. 7 или 8, где указанное соединение имеет структуру Формулы (VII)
Формула (VII),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где R' представляет собой -R3 или -CH2R3; и X, X1, X2, X3, X4, n, Y, R1, R2, R3, Z1, Z2, Z3, Z4 и PBG являются такими, как определено в п. 7 или 8.
10. Соединение по п. 7 или 8, где указанное соединение имеет структуру Формулы (VII)
Формула (VII),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где X, X1, X2, X3, X4, n, Y, R1, R2, R3, Z1, Z2, Z3, Z4 и PBG являются такими, как определено в п. 7 или 8.
11. Соединение по п. 6, где указанное соединение имеет структуру Формулы (VIII)
Формула (VIII),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где Средство, X, n, R2, PBG, Y, R1, Z2, Z3 и Z4 являются такими, как определено в п. 6; и
где Z1 не является Н.
12. Соединение по п. 11, где указанное соединение имеет структуру Формулы (IX)
Формула (IX),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу и необязательно содержит один или несколько заместителей, выбранных из галогена;
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
R' представляет собой -R3 или -CH2R3;
где каждый раз, когда присутствует R3, его независимо выбирают из группы, состоящей из -OH, -CH3, -OP(O)(OH)2, -P(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты, ацильной группы и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1, R2 и PBG являются такими, как определено в п. 11.
13. Соединение по п. 11, где указанное соединение имеет структуру Формулы (IX)
Формула (IX),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где M является пиримидиновой или пуриновой группой, которая содержит по меньшей мере одну первичную или вторичную аминогруппу;
каждый из X1 и X2 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
каждый из X3 и X4 независимо, как позволяет валентность, отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, C1-C6 алкила, галогена и -N3;
R3 выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, -OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)OP(O)(OH)OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)(NH2), аминокислоты или ацильной группы и их фармацевтически приемлемой соли, где соль содержит ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла, ион аммония или замещенного алкилом аммония; и
где X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1, R2 и PBG являются такими, как определено в п. 11.
14. Соединение по п. 12 или 13, где указанное соединение имеет структуру Формулы (X)
Формула (X),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где R' представляет собой -R3 или -CH2R3; и X1, X2, X3, X4, R3, X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1 и R2 являются такими, как определено в п. 12 или 13.
15. Соединение по п. 12 или 13, где указанное соединение имеет структуру Формулы (X)
Формула (X),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер; и
где X1, X2, X3, X4, R3, X, n, Y, Z1, Z2, Z3, Z4, R1 и R2 являются такими, как определено в п. 12 или 13.
16. Соединение по любому одному из пп. 1-15, где Средство выбирают из группы, состоящей из N-нитрозомочевин; доксорубицина, 2-пирролпирролиноантрациклина, морфолиноантрациклина, диацетатоксиалкилантрациклина, даунорубицина, эпирубицина, идарубицина, неморубицина, PNU-159682, митоксантрона; аметантрона; хлорамбуцила, бендамустина, мелфалана, оксазофосфоринов; 5-фторурацила, 5'-дезокси-5-фторцитидина, 2'-дезокси-5-фторуридина, цитарабина, кладрибина, флударабина, пентостатина, гемцитабина, 4-амино-1-(((2S,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил)-5-фторпиримидин-2(1H)-она, тиогуанина; метотрексата, ралтитрекседа, пеметрекседа, плевитрекседа; паклитаксела, доцетаксела; топотекана, иринотекана, SN-38, 10-гидроксикамптотецина, GG211, луртотекана, 9-аминокамптотецина, камптотецина, 7-формилкамптотецина, 7-ацетилкамптотецина, 9-формилкамптотецина, 9-ацетилкамптотецина, 9-формил-10-гидроксикамптотецина, 10-формилкамптотецина, 10-ацетилкамптотецина, 7-бутил-10-аминокамптотецина, 7-бутил-9-амино-10,11,-метилендиоксокамптотецина; винбластина, винкрестина, виндезина, винорелбина; калихеамицинов; майтансина, майтансинола; ауристатина, выбранного из группы, состоящей из ауристатина D, ауристатина E, ауристатина F, монометилауристатина D, монометилауристатина E, монометилауристатина F, метилового эфира монометилауристатина F, ауристатина PYE, ауристатина PHE, родственного природного продукта доластатина 10 и его производных; аматоксина, выбранного из группы, состоящей из α-аманитина, β-аманитина, γ-аманитина, ε-аманитина, аманина, аманинамида, амануллина и амануллиновой кислоты и ее производных; дуокармицина A, дуокармицина B1, дуокармицина B2, дуокармицина C, дуокармицина SA, CC1065, адозелезина, бизелезина, карзелезина; эрибулина; трабектедина; пирролобензодиазепина, антрамицина, томаймицина, сибиромицина, DC-81, DSB-120; эпотилонов; блеомицина; дактиномицина; пликамицина, миромицина C и цис-конфигурированных комплексов платины (II); или производного любого из вышеприведенных.
17. Соединение по любому одному из пп. 1-15, где Средство выбирают из группы, состоящей из N-нитрозомочевин; доксорубицина, 2-пирролпирролиноантрациклина, морфолиноантрациклина, диацетатоксиалкилантрациклина, даунорубицина, эпирубицина, идарубицина, неморубицина, PNU-159682, митоксантрона; аметантрона; хлорамбуцила, бендамустина, мелфалана, оксазофосфоринов; 5-фторурацила, 2'-дезокси-5-фторуридина, цитарабина, кладрибина, флударабина, пентостатина, гемцитабина, 4-амино-1-(((2S,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-метилтетрагидрофуран-2-ил)метил)-5-фторпиримидин-2(1H)-она, тиогуанина; метотрексата, ралтитрекседа, пеметрекседа, плевитрекседа; паклитаксела, доцетаксела; топотекана, иринотекана, SN-38, 10-гидроксикамптотецина, GG211, луртотекана, 9-аминокамптотецина, камптотецина, 7-формилкамптотецина, 9-формилкамптотецина, 9-формил-10-гидроксикамптотецина, 7-бутил-10-аминокамптотецина, 7-бутил-9-амино-10,11,-метилендиоксокамптотецина; винбластина, винкрестина, виндезина, винорелбина; калихеамицинов; майтанзиноидов; ауристатинов; эпотилонов; блеомицина, дактиномицина, пликамицина, миромицина C и цис-конфигурированных комплексов платины (II); или производного любого из вышеприведенных.
18. Соединение по любому из пп. 1-17, где каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -Br, -I, -F и -NO2.
19. Соединение по п. 18, где каждый из Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -F и -NO2.
20. Соединение по любому одному из пп. 1-17, где
Z1 выбирают из группы, состоящей из галогена и -NO2; и
каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из -H, галогена и -NO2.
21. Соединение по п. 20, где
Z1 выбирают из группы, состоящей из -Cl, -Br, -I, -F и -NO2; и
каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -Br, -I, -F и -NO2.
22. Соединение по п. 21, где
Z1 выбирают из группы, состоящей из -Cl, -F, и -NO2; и
каждый из Z2, Z3 и Z4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -Cl, -F и -NO2.
23. Соединение по любому одному из пп. 1-17, где выбирают из группы, состоящей из:
24. Соединение по любому одному из пп. 1-17, где выбирают из группы, состоящей из:
25. Соединение по любому одному из пп. 1-24, где Y представляет собой -C(O)-NH-.
26. Соединение по любому одному из пп. 1-24, где Y представляет собой -C(O)-O-.
27. Соединение по любому одному из пп. 1-24, где Y отсутствует.
28. Соединение по любому одному из пп. 1-27, где R1 представляет собой незамещенный C1-C18 алкилен.
29. Соединение по любому одному из пп. 1-27, где R1 отсутствует.
30. Соединение по любому одному из пп. 1 и 3-27, где R1 является:
31. Соединение по п.1 или 2, где PBG ассоциирована с антителом или его фрагментом.
32. Соединение по п. 31, где PBG ковалентно связана с антителом или его фрагментом.
33. Соединение по п. 31, где PBG ассоциирована с альбумином.
34. Соединение по п. 31, где PBG ковалентно связана с эндогенным или экзогенным альбумином.
35. Соединение по п. 31, где PGB ковалентно связана с цистеином-34 эндогенного или экзогенного альбумина.
36. Соединение по любому одному из пп. 1-32, 34 и 35, где PBG является
37. Соединение, имеющее структуру Формулы (I)
Формула (I),
или его фармацевтически приемлемая соль, диастереомер или стереоизомер;
где Cредство выбирают из группы, состоящей из цитостатического средства, цитотоксического средства и производного любого из вышеприведенных;
Спейсер отсутствует или его выбирают из группы, состоящей из и
;
n равен 0;
X представляет собой незамещенный 6-членный арил;
и
выбирают из группы, состоящей из:
и
38. Соединение по любому одному из пп. 1, 4 или 16-37, где Спейсер представляет собой
n равно 0 или 1;
X представляет собой незамещенный 6-членный арил; и
R2 является таким, как определено в п. 1.
39. Соединение по любому одному из пп. 7-10 и 12-38, где каждый из X1, X2, X3 и X4 независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OH, -CH3, -F, -Cl, -Br, -I и -N3.
40. Соединение, выбранное из группы, состоящей из
и его фармацевтически приемлемой соли, диастереомера или стереоизомера,
где
41. Соединение, выбранное из группы, состоящей из:
и
или его фармацевтически приемлемой соли, диастереомера или стереоизомера.
42. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественного новообразования у пациента, который нуждается в таком лечении, содержащая эффективное количество соединения по любому одному из пп. 1-41 и фармацевтически приемлемый носитель.
43. Способ лечения злокачественного новообразования, включающий введение нуждающемуся в лечении пациенту терапевтически эффективного количества соединения по любому одному из пп. 1-41 или фармацевтической композиции по п. 42.
44. Соединение по любому одному из пп. 1-41 для применения в качестве лекарственного средства.
45. Соединение по любому одному из пп. 1-41 для применения при лечении злокачественного новообразования.
46. Применение соединения по любому одному из пп. 1-41 или композиции по п. 42 при изготовлении лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования.