Способ выделения ацетилхолинэстеразы из тканимозга
267815
ОП ИСАН И Е
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Соеетских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Кл. 30h, 2/04
Заявлено 20.XI1.1968 (№ 1290831/31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 02.IV.1970. Бюллетень № 13
Дата опубликования описания 24ХП.1970
МПК А 61k
Комитет по делам изобретений и открытий при Сосете йлииистрсе
СССР
УДК 612.397 3:577 153;
;612.015.21 (088.8) о со лм qz юзн@„е
"гноАвторы изобретения
А, П. Бресткин, Д. Л. Певзнер, Л. М. Эпштейн, В. Г. Афанасьев-Озеров, Ю. Г. Жуковский и Г. И. Максимова
Заявитель Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ ИЗ ТКАНИ
МОЗГА
Изобретение относится к области биохимии.
Известен способ выделения ацетилхолинэстеразы из лиофильно высушенного порошка ткани мозга с помощью детергента, например, путем обработки бутанолом с последующей экстракцией фосфатным буфером. Одна т получаемые при этом препараты обладают сравнительно невысокой стабильностью и аквностью.
Целью настоящего изобретения является повышение эффективности извлечения фермента и получение активных стабильных препаратов.
Для достижения этой цели при выделении ацетилхолинэстеразы из лиофильно высушечного порошка ткани мозга с помощью детергента лиофильно высушенный порошок обрабатывают смесью детергента с растворителем жиров, например октанола с гексаном, в отношении 1: 1.
Согласно предложенному способу сырую ткань мозга теплокровных животных (хвостатые ядра бычьего мозга и мозга кошки) или хладнокровных животных (рыб, моллюсков отделяют от остатков других тканей, измельчают, гомогенизируют в небольшом объеме воды, доводят рН до 8 аммиаком и лиофильно сушат. Сухой порошок обрабатывают
20-кратным количеством смеси детергента и растворителя жиров, например октанола с гексаном, в течение 15 мин, дают отстояться и сливают верхний слой. Затем обрабатывают повторно 10-кратным количеством смеси растворителей, вновь отстаивают и сливают верхний слой, а осадок трижды промывают гексаном. Остаток сушат в вакууме, экстрагиру.ют водой или 0,01-M фосфатным буфером (рН 7,8) и центрифугируют. Ацетилхолинэlo стераза переходит в раствор в количестве 60—
700, Растворы препарата, полученные из ткани мозга теплокровных животных, неустойчивы в кислой среде, и поэтому из них необходимо
15 удалить балластные белки путем фракционирования сульфатом аммония при рН 6,5 — 6,8.
При концентрации сульфата аммония 25",(, выпадают балластные белки, а при 500/О в осадок переходит ацетилхолинэстераза.
2р Этот осадок отделяют центрифугированием и растворяют в дистиллированной воде. При использовании растворов, полученных из мозговой ткани хладнокровных животных, балластные белки отделяют сначала добав25 ленпем соляной кислоты до рН 4,5, а затем сульфата аммония до концентрации 60%.
Ацетилхолинэстераза выпадает в осадок при концентрации сульфата аммония 80%.
Полученные водные растворы ферментов, 30 освобожденных от балластных белков, обра267815
Составитель В. А. Таратута
Редактор Л. А, Утехина Техред Л. В. Куклина Корректор С. А. Кузовенкова
Заказ 1787/5 Тираж 480 Подписное
ЦНИИПИ Комитета ло делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 батывают аммиаком до рН 7,8, центрифугируют, и прозрачные растворы обессоливают на молекулярных ситах или диализом. После стериального фильтрования растворы разливают в ампулы или лиофильцо высушивают.
Предмет изобретения
Способ выделения ацетилхолинэстеразы из ткани мозга с помощью детергента, отлича ои ийся тем, что, с целью повышения эффективности извлечения фермента и получения активных стабильных препаратов, лиофильно
5 высушенный порошок ткани мозга обрабатывают смесью детергента с растворителем жиров, например октанола с гексаном, в отношении 1: 1.
