Средство для лечения дисбактериоза

 

Изобретение относится к медицине и касается средства для лечения дисбактериоза. Задача изобретения заключается в создании высокоэффективного средства для лечения дисбактериоза, позволяющего сократить сроки лечения, получить более стойкий и выраженный лечебный эффект. Сущность изобретения заключается в создании средства, включающего лиофилизированную смесь биомассы бифидобактерий, лизоцим и нуклеинат натрия при следующем соотношении компонентов на одну дозу: биомасса бифидобактерий 10⁵ - 10⁸ КОЕ, лизоцим 5 - 20 мг, нуклеинат натрия 50 - 250 мг. Технический результат заключается в создании препарата, обладающего комплексным биологическим действием. 3 табл.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в гастроэнтерологии, педиатрии, геронтологии, а также в акушерстве и гинекологии, онкологии, хирургии и других областях клинической медицины.

Известно применение бактерийных и некоторых иммуномодулирующих биопрепаратов для лечения и профилактики дисбактериозов и дисфункций кишечника. Наиболее широко используют эубиотики из представителей кишечной нормофлоры, например бифидумбактерин, примадофилус, лактобактерин, колибактерин, бификол, аципол и др. [Дорофейчук В.Г., Бейер Л.В., Сазонова Н.Е. и др. Лечение и профилактика дисбактериоза у детей. Методические рекомендации, М., 1986; Дисбактериозы и эубиотики. Тез. докл. Всерос. научно-практ. конф., М., 1996] , принцип действия которых основан на феномене микробного антагонизма. Регуляция микробиоценоза слизистых оболочек осуществляется благодаря прямому действию на микрофлору производственных штаммов эубиотиков путем восполнения дефицита соответствующих ее представителей, вытеснения патогенных и избытка условно-патогенных микроорганизмов, а также опосредованной мобилизации местного иммунитета и обменных процессов продуктами распада бактериальных клеток, например мурамилдипептидом (МДП) [Бондаренко В.М., Учайкин В.Ф., Мурашова А.О., Абрамов Н.А. Дисбиоз. Современные возможности профилактики и лечения. М. , 1995; Щербаков И.Т. Патоморфология слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта при острых бактериальных, вирусной кишечных инфекциях и хронических колитах: Дис. докт. мед. наук, М., 1996]. Бактерийные препараты в большинстве случаев обеспечивают клиническое улучшение. Однако их недостатком является необходимость длительного применения для достижения стойкого бактериологического эффекта и медленная коррекция местного иммунитета, особенно у ослабленных больных. Кроме того, при значительных нарушениях иммунной системы некоторые эубиотики сами могут вызывать инфекционные осложнения [Тюрин М.В. Молочнокислые бактерии как потенциальные возбудители инфекционных заболеваний человека// Антибиотики и микроэкология человека и животных. М. , 1988, с. 175 - 178], способствовать распространению антибиотикорезистентности, угнетать др. представителей нормобиоценоза [Лесняк С.В., Евтухова Л. Н., Шимчук Л.Ф. О свойствах препаратов из нормальной микрофлоры человека // Антибиотики и микроэкология человека и животных. М., 1988, с. 136 - 140].

В лечении дисбактериоза и дисфункций кишечника применяют также иммунные препараты, например иммуноглобулины направленного действия (лактоглобулин противоколипротейный, комплексный иммунный препарат КИП и др.) [Соболева С. В. Лактоглобулины направленного действия (микробиологические аспекты разработки и клинического применения препаратов): Дис. докт. мед. наук, Ростов-на-Дону, 1991; Озерная А.С., Коршунов В.М., Учайкин В.Ф. Применение бактерийных и иммуноглобулиновых препаратов для лечения острых кишечных инфекций у детей раннего возраста // Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций: Тез. докл. Всесоюзн. конф., 1991, т. 3, с. 471]. Их эффект основан на специфической активности содержащихся в них антител (иммуноглобулинов классов G и M) в отношении соответствующих микроорганизмов и стимуляции неспецифической резистентности организма. К их недостаткам можно отнести высокую стоимость, сложности получения экологически чистого сырья, а также сравнительно высокую реактогенность у сенсибилизированных больных, связанную с опасностью неблагоприятного воздействия на слизистые оболочки избытка экзогенных иммуноглобулинов класса IgG и продуктов быстрой гибели микроорганизмов. Кроме того, применение иммуноглобулиновых препаратов требует дополнительного введения эубиотиков [Ладодо К.С., Щербакова Э.Г. и др. Применение биологически активных добавок к детскому питанию. Метод. рекомендации. М., 1988].

Для коррекции местного иммунитета желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), стимуляции неспецифической резистентности, улучшения адгезивных свойств бифидо- и лактобактерий при дисбактериозе и дисфункциях кишечника, особенно у детей первого года жизни, находящихся на искусственном вскармливании, применяют лизоцим, который можно считать "идеальным", физиологичным иммуномодулятором. Лизоцим относится к факторам естественной защиты живых организмов и обладает не только мягким иммуномодулирующим действием, но и широчайшим спектром других ценных общебиологических свойств. Он повышает протифоинфекционную и антитоксическую резистентность, участвует в пищеварении и регуляции многих важнейших систем организма, оказывает антимикробный, противовоспалительный, гипосенсибилизирующий, антианемический и многие др. эффекты [Бухарин О.В., Васильев Н. В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине. Томск, 1974.; Щербакова Э.Г., Растунова Г.А. Новое в механизмах действия лизоцима // Новое в трансфузиологии, 1995, вып. 10, с. 51 - 60]. Применяемый в медицинской практике лизоцим из белка куриного яйца (инъекционный препарат и лизоцим гидрохлорид) близок по антигенной структуре эндогенному лизоциму и имеет общие с последним механизмы выведения и регуляции уровня в крови и тканях, что минимизирует его побочное действие. Лизоцим применяют при дисбактериозе и дисфункциях кишечника для обогащения детского питания как дополнительное средство, повышающее эффект бифидо- и лактобактерий, а также иммунных лактоглобулинов [Ладодо К.С., Щербакова Э.Г. и др. Применение биологически активных добавок к детскому питанию. Методические рекомендации. М., 1988.; Щербакова Э. Г. Системный подход к лечению и профилактике нарушений микроэкологии кишечника. // Успехи теоретической и клинической медицины. Матер. I науч. сессии РМАПО, М., 1995, с. 76].

В качестве прототипа принято средство для лечения и профилактики дисбактериоза и дисфункций кишечника - бифилиз (ВИГЭЛ), представляющее собой лиофилизированную смесь биомассы живых бифидобактерий (B. bifidum штамм 1) и лизоцима при следующем соотношении компонентов на одну дозу: биомасса бифидобактерий - 10⁶-10⁸ колониеобразующих единиц (КОЕ), лизоцим - 5 - 20 мг [патент RU 2071339 C1, кл. 6 A 61 K 35/74, 38/43; опубл. 10.01.97, Бюл. N 1] .

Бифилиз обеспечивает быстрое улучшение клинико-бактериологических показателей у больных с дисбактериозом и дисфункциями кишечника, улучшение морфофункционального состояния ЖКТ и общего состояния больных; при профилактическом применении значительно снижает частоту дисбактериозов различного генеза и повышает противоинфекционную резистентность организма, особенно у новорожденных и детей раннего возраста, лишенных материнского молока, у ослабленных больных [Щербакова Э.Г., Коровина Н.А., Большакова А.М. и др. Комплексный пробиотик бифилиз в лечении и профилактике дисбактериоза у детей // Научные и практические аспекты совершенствования качества продуктов детского и геродиетического питания.: Труды 1-й Междунар. конф., М., Пищепромиздат, 1997, с. 78 - 84].

Препарат недостаточно эффективен у ряда категорий больных: - недостаточно быстро обеспечивает восстановление сниженного содержания функционально полноценной кишечной палочки и элиминацию эшерихий с гемолизирующей активностью или слабо выраженными ферментативными свойствами (СВК); - не всегда обеспечивает коррекцию иммунологических показателей у больных со значительными нарушениями иммунной системы, характеризующимися лейко-, нейтро- и лимфопенией, дефицитом и дисбалансом отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов, нарушениями B-клеточного звена гуморального иммунитета и т.п.

- при применении в терапевтических дозах значительно улучшает, но не полностью нивелирует повреждающее действие на ткань печени пероральных антибиотиков, обладающих гепатотоксичностью; - при одновременном применении с пероральными антибиотиками уменьшает, но не предотвращает полностью нарушения показателей гомеостаза и иммунобиологической реактивности, например повышенной функциональной активности белков острой фазы и гранулоцитарной эластазы, угнетения метаболизма фагоцитирующих клеток.

Задачей изобретения является создание высокоэффективного средства для лечения дисбактериоза, позволяющего сократить сроки лечения, получить более стойкий и выраженный лечебный эффект.

Сущность изобретения состоит в том, что средство для лечения дисбактериоза, включающее лиофилизированную смесь биомассы бифидобактерий и лизоцима, дополнительно содержит нуклеинат натрия при следующем соотношении компонентов на одну дозу: биомасса бифидобактерий 10⁵ - 10⁸ КОЕ, лизоцим 5 - 20 мг, нуклеинат натрия 50 - 250 мг.

Использование изобретения позволяет получить следующий технический результат: - сократить в 1,5 - 2 раза сроки лечения дисбактериоза по сравнению с применением бифилиза у больных с выраженными нарушениями иммунной системы, значительным дефицитом кишечной палочки и/или высоким содержанием эшерихий с гемолизирующими и слабо выраженными ферментативными свойствами (СВК); - ускорить нормализацию состояния слизистой оболочки кишечника, его пищеварительной, иммунной и барьерной функции; - уменьшить риск развития поражений печени и обеспечить значительное улучшение ее состояния при различных токсических воздействиях, особенно при остром медикаментозном гепатите; - снизить в 2-3 раза частоту и выраженность проявлений эксудативного диатеза и пищевой аллергии, особенно у детей; - уменьшить частоту и тяжесть течения инфекционных и деструктивных осложнений (в том числе эндогенной инфекции) у больных с дисбактеризом на фоне иммунных нарушений; - улучшить переносимость и повысить эффективность антибактериальной терапии, снизить курсовые дозы антибиотиков и потребность в их назначении, например, при селективной деконтаминации;
- повысить эффективность антианемической терапии.

Полученный технический результат достигается за счет быстрой и стойкой нормализации анаэробного и аэробного компонентов кишечного микробиоценоза, защиты ткани печени и слизистой оболочки кишечника, нормализации клеточных факторов местного иммунитета ЖКТ, стимуляции иммунобиологической реактивности организма (стимуляция фагоцитов, повышение сниженной лизоцимной активности и антитоксической резистентности), коррекции механизмов регуляции протеолиза - снижения исходно высокой функциональной активности важнейшей плазменной протеиназы - гранулоцитарной эластазы и коррекции активности ее основного ингибитора, белка острой фазы воспаления - а₁-протеиназного ингибитора (а₁-ПИ), принимающего участие в контроле механизмов адаптации и реализации воспалительного процесса.

Авторами впервые установлены новые механизмы действия сочетания лизоцима гидрохлорида с бифидобактериями и нуклеинатом натрия в составе единого препарата, обусловливающие появление нового сверхсуммарного эффекта, превышающего эффект раздельного применения отдельных компонентов: коррекция функциональной активности гранулоцитарной эластазы, а₁-ПИ и их соотношений; стимуляция кислородного метаболизма фагоцитирующих клеток и уровня лизоцима в сыворотке крови; предотвращение развития острого токсического медикаментозного гепатита. Кроме того, сочетание нуклеината натрия с бифилизом или лизоцимом обладает более выраженным антианемическим действием, очевидно, за счет усиления указанного эффекта каждого из препаратов, а также благодаря нормализации содержания и функциональной активности кишечной палочки, являющейся продуцентом витамина K, дефицит которого, особенно при нарушении функций печени, приводит к геморрагическим осложнениям и развитию железодефицитной анемии.

Известно, что бифилиз как физиологичная сбалансированная система естественных взаимодополняющих факторов защиты ЖКТ обеспечивает коррекцию микробиоценоза кишечника, повышая содержание бифидобактерий, способствуя размножению лактобактерий и элиминации ряда энтеропатогенных и условно-патогенных микроорганизмов; улучшение иммунобиологической реактивности организма благодаря стимуляции клеточных факторов местного иммунитета, снижению уровня сенсибилизации, повышению уровня эндогенного лизоцима в содержимом ЖКТ, секретах пищеварительных желез и сыворотке крови, улучшению антипротеиназной активности плазмы крови [патент RU N 2071339 C1, Бюл. N 1, 10.01.97]. Применение бифилиза и входящего в его состав лизоцима создает условия для купирования воспалительных процессов, уменьшения повреждающего действия антибиотиков и других агрессивных и токсических факторов на клетки слизистых оболочек, в том числе на клеточные факторы местного иммунитета кишечника, а также на ткань печени, оказывает антианемическое действие при кровопотере, стимулирует процессы регенерации.

Нуклеинат натрия представляет собой натриевую соль низкомолекулярной дрожжевой РНК. В потенции препарата входит его способность восстанавливать измененные функции иммунокомпетентных и других клеток макроорганизма, усиливать регенерацию тканей и заживление ран, повышать способность организма к нейтрализации токсинов (тахифилаксия), нормализовать нарушенные метаболические процессы в организме. В связи с этим препарат с большим успехом применяется в качестве иммуномодулятора при широком круге заболеваний, например пневмониях, колитах различной этиологии, язвенных процессах желудка, двенадцатиперстной и толстой кишки, трофических язвах и т.д. Наряду с этим нуклеинат натрия вызывает существенные изменения в микробных популяциях, характеризующиеся ускорением размножения в первую очередь сапрофитных бактерий, представителей нормальной кишечной микрофлоры, повышает экспрессию молекул адгезии - ключевых структур в процессе приживления нормофлоры в кишечнике человека [Земсков В.М., Караулов А.В., Земсков А.М., Назаретян В.Г. Иммуномодуляторы в терапии легочной патологии. М., 1995, 320 с.].

Нуклеинат натрия ранее для лечения дисбактериоза не применяли.

При совместном применении нуклеината натрия с бифилизом или с лизоцимом образуется принципиально новая сбалансированная защитная система, которая обеспечивает:
- более быстрое и стойкое улучшение и нормализацию как анаэробного, так и аэробного компонента кишечного микробиоценоза, в первую очередь кишечных палочек с полноценными ферментными свойствами, улучшая их адгезию в кишечнике, что ведет к вытеснению и элиминации кишечных палочек с гемолизирующими и сниженными ферментативными свойствами, а также других микроорагнизмов с патогенными потенциями;
- предотвращение лекарственных повреждений ультраструктур и сохранение физиологического асинхронного режима функционирования клеток Панета - специализированных структурных элементов слизистой оболочки тонкого кишечника, продуцирующих эндогенный лизоцим и иммуноглобулины IgA;
- значительное уменьшение или нивелирование морфофункционльных проявлений острого токсического медикаментозного гепатита (нормализация морфофункционального состояния ткани печени и клеточного состава печеночных долек);
- выраженную стимуляцию функциональной активности фагоцитирующих клеток по показателям их кислородного метаболизма (спонтанный НСТ-тест, спонтанная и индуцированная хемилюминесценция);
- коррекцию функциональной активности гранулоцитарной эластазы, белков острой фазы воспаления (а₁-ПИ, а₂-макроглобулина) и лизоцима в сыворотке крови;
- снижение степени сенсибилизации;
- повышение противоинфекционной, противовирусной, антитоксической резистентности организма;
- выраженное антианемическое действие.

Средство для лечения дисбактериоза представляет собой сухую микробную массу живых бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum штамм 1), лиофилизированную в среде культивирования с добавлением лизоцима, например лизоцима гидрохлорида, нуклеината натрия и сахарозо-желатино-молочной среды. Препарат предполагается к выпуску в виде пористой или пористо-кристаллической массы разных оттенков бежевого или серого цвета, содержащих по 5 доз препарата в стеклянных флаконах вместимостью 10 - 12 мл. Возможен выпуск средства в виде порошка an gro для применения в качестве лекарственного сырья.

Одна доза препарата содержит от 10⁵ до 10⁸ КОЕ живых бифидобактерий, 5 - 20 мг лизоцима, например лизоцима гидрохлорида, и 50 - 250 мг нуклеината натрия. Препарат хорошо растворяется в воде и водных растворах; при растворении в воде из расчета 1 мл на одну дозу препарата после 3-4-кратного взбалтывания образуется гомогенная желтоватая мутная взвесь с характерным вкусом и запахом.

Средство для лечения дисбактериоза изготавливают следующим образом. Вначале выращивают маточную культуру бифидобактерий (Bifidobactetium bifidum штамм 1) в среде Блаурока или аминопептидной среде и затем используют эту культуру для выращивания основной микробной биомассы. Для этого маточную культуру бифидобактерий засевают в стерильную реакторную емкость, содержащую среду культивирования (модифицированную среду Блаурока или аминопептидную среду) из расчета 6 - 10% от объема питательной среды. Культивирование проводят глубинным способом при 37,5 5^oC в течение 16 - 24 ч, что позволяет получить биомассу с содержанием бифидобактерий 10⁵-10⁸ КОЕ/мл. Затем биомассу переносят в стерильные емкости, добавляют при постоянном перемешивании последовательно лизоцим, например, лизоцим гидрохлорид, нуклеинат натрия и среду высушивания (сахарозо-желатино-молочную среду) из расчета содержания в конечной суспензии лизоцима 0,05 - 2,0% (0,5 - 20 мг/мл), нуклеината натрия 0,5 - 25,0% (5 - 250 мг/мл), сахарозы 5 - 10% (50 - 100 мг/мл), желатина 1 - 1,5% (10 - 15 мг/мл) и обезжиренного молока 20 - 25% (200 - 250 мг/мл). Суспензию разливают в стеклянные флаконы вместимостью 12 мл, замораживают при температуре 40 - 45^oC на срок не менее 48 ч, после чего лиофилизируют в вакуум-сушильных аппаратах. Флаконы с высушенным препаратом закрывают герметично стерильными резиновыми пробками и обкатывают металлическими колпачками. Весь технологический процесс осуществляется в асептических условиях с поэтапным контролем содержания живых бифидобактерий и отсутствия посторонней микрофлоры.

Пример 1. Для приготовления препарата ампулу с лиофилизированной культурой производственного штамма бифидобактерий растворяли в 5 мл стерильной дистиллированной воды и вносили во флакон вместимостью 1 л, содержащий 100 мл модифицированной полужидкой среды Блаурока. Взвесь инкубировали в анаэростате при 38^oC в течение 24 ч, после чего взбалтывали, отбирали пробы для определения микробной чистоты и содержания живых бифидобактерий. Полученную маточную культуру разводили модифицированной средой Блаурока до концентрации бифидобактерий 10⁶ КОЕ/мл, засевали 100 мл бактериальной взвеси в лабораторный реактор, куда предварительно была внесена модифицированная аминопептидная среда в объеме 1000 мл и культивировали в течение 20 ч при 38^oC, после чего отбирали пробы для подсчета живых бифидобактерий. Биомассу переносили в отдельную стерильную бутыль и вносили лизоцим гидрохлорид, нуклеинат натрия и среду высушивания из расчета конечных концентраций ингредиентов: 0,05% (5 мг/мл) лизоцима гидрохлорида, 0,5% (50 мг/мл) нуклеината натрия, 5% (50 мг/мл) сахарозы, 1% (10 мг/мл) желатина, 20% (200 мг/мл) обезжиренного молока. После тщательного перемешивания взвесь разливали автоматическим дозатором в стерильные стеклянные флаконы Ф-10, помещенные в кассеты, которые загружали в низкотемпературный ларь с температурой около 45^oC на 48 ч. Затем кассеты с препаратом переносили в вакуум-сушильный аппарат ПГ-5 и лиофилизировали. Флаконы закрывали стерильными резиновыми пробками и обкатывали металлическими колпачками.

В данной лабораторной серии препарата содержание лизоцима, нуклеината натрия и бифидобактерий отвечало расчетному и составило соответственно 5 мг, 50 мг и 10⁵ КОЕ на одну дозу.

Пример 2. Получение маточной культуры бифидобактерий проводили, как было указано в примере 1. Посевная доза маточной культуры бифидобактерий составляла 10⁹ КОЕ/мл при засеве в лабораторный реактор с предварительно внесенной в него аминопептидной средой в объеме 1000 мл. После 18 ч культивирования при 38^oC биомассу переносили в отдельную стерильную бутыль, предварительно отобрав пробу на определение микробной обсемененности и содержания бифидобактерий. Затем в биомассу при постоянном помешивании вносили лизоцим гидрохлорид, нуклеинат натрия и среду высушивания из расчета конечных концентраций ингредиентов: 20 мг/мл лизоцима гидрохлорида, 250 мг/мл нуклеината натрия, 50 мг/мл сахарозы, 10 мг/мл желатина, 200 мг/мл обезжиренного молока. После тщательного перемешивания взвесь разливали автоматическим дозатором в стерильные флаконы по 5 мл, и проводили дальнейшую обработку, как изложено в примере 1.

В данной лабораторной серии предлагаемый препарат имел в одной дозе содержание бифидобактерий 10⁸ КОЕ/мл, лизоцима гидрохлорида 20 мг, нуклеината натрия 250 мг.

Новый препарат предназначен к применению у взрослых и детей всех возрастных групп для лечения дисбактериозов кишечника разного генеза и дисфункций кишечника, характеризующихся преимущественно дефицитом бифидобактерий и полноценной кишечной палочки, постантибиотическими и токсическими поражениями печени, железодефицитной анемией, нарушениями иммунной системы. Препарат можно применять на фоне антибактериальной терапии.

Способ применения. Во флакон с препаратом перед употреблением добавить доверху свежепрокипяченую и охлажденную до комнатной температуры воду, оставить на 2-3 минуты, затем перемешать встряхиванием. Полученную взвесь, содержащую 5 доз препарата, принимать за 20 - 30 минут до приема пищи. В случае необходимости применения меньшей дозы препарата (по 2,5 дозы на прием 2 раза в день) сухую биомассу во флаконе следует предварительно аккуратно разделить пополам очень чистым острым режущим предметом, перенести одну половину препарата в отдельную чистую посуду и развести в 2-3 чайных ложках воды для разового приема. Оставшуюся часть плотно закрыть сухой резиновой пробкой от того же флакона и оставить в холодильнике до следующего приема.

При местном применении препарат следует растворять аналогичным образом, полученной суспензией смочить стерильный тампон из расчета 2 - 2,5 дозы на одну манипуляцию и тщательно обработать этим тампоном раневую поверхность или область соска и ареолы за 20 - 30 мин до прикладывания ребенка к груди.

Эффективность разработанного средства подтверждена на экспериментальной модели дисбактериоза и острого лекарственного гепатита, индуцированного у крыс высокими дозами антибиотика тетрациклина.

Пример 3. В экспериментах на 30 крысах линии Вистар с исходной массой тела 180 - 200 г вводили ежедневно перорально тетрациклин в дозе 750 мг/кг натощак в течение 7 дней. Одновременно с антибиотиком (сразу после него) животным также перорально вводили испытуемый препарат (препарат I) или бифилиз (препарат II) по 2,5 дозы на крысу.

Тетрациклин оказывал значительное повреждающее действие на слизистую оболочку всех отделов кишечника. Через сутки после его отмены у животных наблюдали наличие дистрофических и микроциркуляторных изменений слизистой оболочки (СО) двенадцатиперстной, тонкой и толстой кишки, что проявлялось в нарушении конструкции ворсинчатого аппарата энтероцитов, локальных повреждениях целостности эпителиального пласта, отечности подслизистого слоя собственной пластинки СО толстой кишки, в которой морфометрически отмечали подавление лимфопоэза, изменения количества и соотношений иммунокомпетентных клеток, возрастание числа эозинофилов. Методами электронной микроскопии выявлена перестройка цитофизиологии экзокриноцитов кишечных желез - клеток Панета, ответственных за выработку эндогенного лизоцима и иммуноглобулинов IgA.

В содержимом толстого кишечника крыс после применения тетрациклина значительно снижалось содержание кишечных палочек, хотя и сохранялось на уровне контроля число бифидобактерий, не являющихся, как известно, преобладающими представителями нормофлоры этих животных.

Под влиянием высокой дозы тетрациклина развивались выраженные проявления его гепатотоксического эффекта, которые хараткеризовались морфологической картиной острого токсического гепатита: нарушениями микроциркуляции печеночных долек, дистрофическими изменениями гепатоцитов с опустошением ядер (феномен "штампованного ядра") и вакуолизацией цитоплазмы по типу жирового гепатоза, возрастанием клеточной плотности преимущественно в перипортальных отделах печеночных долек за счет увеличения числа лимфоцитов и появления значительного количества отсутствующих в норме фибробластов, фиброцитов, эозинофильных гранулоцитов, что свидетельствует об интенсивном фиброзном процессе с явлениями сенсибилизации.

Впервые показано, что эти изменения сопровождаются нарушениями регуляции плазменного протеолиза и функциональной активности нейтрофилов. Так, в сыворотке крови в 1,6 раза по сравнению с нормой возросла активность гранулоцитарной эластазы, что свидетельствует о высокой степени дегрануляции нейтрофилов, и в 2,42 раза повышалась активность образующегося в печени а₁-ПИ. При этом наблюдалось угнетение кислородного метаболизма перитонеальных макрофагов (двукратное снижение показателей спонтанного НСТ-теста, спонтанной и индуцированной зимозаном хемилюминесценции), снижение в 1,74 раза уровня сывороточного лизоцима.

Применение препарата I одновременно с тетрациклином оказывало выраженное защитное действие, предотвращая развитие дистрофических и некробиотических изменений СО тонкой и толстой кишки, при этом нормализовался ворсинчатый аппарат энтероцитов, улучшался клеточный состав лимфоплазмоцитарного инфильтрата собственной пластинки СО кишечника. Отмечена полная сохранность ультраструктур и физиологического асинхронного режима функционирования клеток Панета. Под влиянием предлагаемого препарата нормализовалась функциональная активность гранулоцитарной эластазы, достоверно снижаясь в 1,63 раза по сравнению с таковой при применении одного тетрациклина; при этом в 1,34 раза снижалась активность а₁-ПИ. Положительная динамика указанных показателей сопровождалась стимуляцией неспецифической резистентности организма животных: уровень сывороточного лизоцима повышался в среднем в 2,95 раза по сравнению с таковым при применении тетрациклина и в 1,69 раза по сравнению с нормой.

Следует отметить, что при применении препарата I показатели неспецифической резистентности мало отличались от таковых при применении в адекватных дозах лизоцима гидрохлорида в сочетании с нуклеинатом натрия: активность а₁-ПИ составляла соответственно 9,45 1,75 и 9,4 1,48 ИЕ/мл, гранулоцитарной эластазы - 2,54 0,31 и 2,88 0,88 ИЕ/мл и лизоцима - 1,27 0,21 и 1,2 0,25 мкг/мл.

Препарат I практически полностью предупреждал развитие острого медикаментозного токсического гепатита. Он обеспечил нормализацию ключевых показателей клеточного состава интралобулярных и парацентральных зон печеночных долек (клеточная плотность, количество эндотелиоцитов, лимфоцитов и эозинофилов); при его применении оставались неповрежденными гепатоциты, которые имели четко контурированные гиперхромные ядра и нормальное содержание гликогена.

Бактериологически в содержимом толстого кишечника крыс выявлено повышение в 2,5 раза титров кишечной палочки без существенных изменений содержания бифидо- и лактобактерий.

Препарат II обеспечивал несколько меньший защитный эффект в отношении ткани печени. Под его влиянием к концу срока наблюдения (24 ч после последнего введения препаратов) еще не наступало полной нормализации морфометрических показателей клеточного состава лимфоплазмоцитарного инфильтрата собственной пластинки слизистой оболочки тонкой и толстой кишки, хотя и было значительное улучшение по сравнению с применением одного антибиотика. В отдельных участках тонкого кишечника оставались микроциркуляторные нарушения, при этом на фоне значительного улучшения ультраструктуры ядра и эндоплазматического ретикулума клеток Панета (по сравнению с применением одного антибиотика) приближалось к норме, но не полностью нормализовалось соотношение клеток с различной электронной плотностью. При этом бактериологически не удалось отметить существенного повышения содержания кишечной палочки, которое осталось в тех же пределах, как при применении только тетрациклина.

Под влиянием бифилиза (препарат II) отмечено значительное улучшение состояния ткани печени, близкое к таковому при применении препарата I, однако последний обеспечивал более выраженное снижение выраженности фиброзных процессов в ткани печени. Так, в перипортальных зонах печеночных долек у животных, получавших бифилиз или препарат I, число фибробластов снижалось соответственно в 2,6 и 4,2 раза, фиброцитов - в 3,3 и 5,4 раза по сравнению с таковым при применении одного тетрациклина (табл. 1).

У животных, получавших препарат II, активность а₁-ПИ и гранулоцитарной эластазы снизилась соответственно в 1,28 раза и в 1,33 раза (p > 0,05) по сравнению с применением одного тетрациклина, оставаясь выше физиологической нормы.

Препарат I значительно стимулировал кислородный метаболизм перитонеальных макрофагов крыс на фоне высокой дозы тетрациклина, тогда как бифилиз (препарат II) обеспечивал только нормализацию этого интегрального показателя функциональной активности фагоцитов. Так, препарат I при применении оказывал значительное стимулирующее действие на макрофаги: показатели спонтанного НСТ-теста были в среднем вдвое выше, чем при применении одного антибиотика, и достоверно превышали уровень нормы; показатель стимулированной хемилюминесценции был выше, чем после курса одного тетрациклина в 4,3 раза и превышал физиологический уровень в 2,5 раза, хотя спонтанная хемилюминесценция достигала лишь физиологических величин. После применения препарата II величины спонтанного НСТ-теста, спонтанной и индуцированной хемилюминесценции возрастали соответственно в 1,56, 1,89 и 1,98 раза по сравнению с применением одного тетрациклина. Стимуляция бифилизом выявлена лишь по данным спонтанного НСТ-теста, которые в среднем превышали норму в 1,76 раза (p < 0,05), а показатель индуцированной хемилюминесценции хотя и нормализовался, но был в 2,19 раза ниже, чем при применении препарата I (табл. 2).

Таким образом, экспериментальное изучение показало, что применение предлагаемого препарата одновременно с антибиотиком широкого спектра тетрациклином, позволяет снизить токсическое действие антибиотика не только на слизистую оболочку пищеварительного тракта и клетки-продуценты эндогенного лизоцима и других факторов местной защиты пищеварительного тракта, но также предотвратить развитие острого токсического медикаментозного гепатита и фиброзных изменений ткани печени, обеспечить коррекцию механизмов регуляции плазменного протеолиза, стимулировать факторы неспецифической противоинфекционной резистентности - кислородный метаболизм фагоцитирующих клеток, уровень эндогенного лизоцима, предотвратить индуцированное антибиотиком резкое снижение содержания кишечной палочки в содержимом кишечника.

Клинико-лабораторные наблюдения показали, что предлагаемое средство обеспечивает эффективную коррекцию как анаэробного, так и аэробного компонентов микробиоценоза кишечника у больных с дисбактериозом, характеризующимся количественными и качественными нарушениями коликомпонента кишечной микрофлоры в сочетании с дефицитом бифидо- и лактобактерий.

Пример 4. Больная К., 7 лет. Диагноз: дисбактериоз III стадии. Девочка страдает дисфункциями кишечника (запоры, метеоризм, боли в животе, плохой аппетит, плохая прибавка массы тела) и пищевой аллергией в течение 4 лет. Настоящее обострение возникло после перенесенной пневмонии и лечения антибиотиками в стационаре. Биотерапию проводили сочетанием бифилиза (по 5 доз) с нуклеинатом натрия (по 500 мг) 2 раза в день в течение 7 дней. Клиническое улучшение наступило на 3-й день биотерапии и характеризовалось нормализацией частоты и характера стула, уменьшением метеоризма и болей в животе, улучшением аппетита, возрастанием сниженного числа эритроцитов и их цветного показателя в периферической крови. Клинические проявления дисфункции кишечника купированы полностью на 5-й день. Бактериологически после курса лечения в кишечной микрофлоре нормализовалось содержание бифидобактерий, возросло с 15 до 100 млн/г общее число кишечной палочки, с 95% до 65% снизилось количество кишечной палочки СВК, причем снижение последнего показателя продолжалось после окончания лечения: через 1 мес. содержание E. coli СВК составило 30% (табл. 3). Достигнуто стойкое выздоровление при наблюдении в течение 3 мес.

Таким образом, применение предлагаемого средства оказывало хороший бактериологический эффект, обеспечивая быструю и стойкую коррекцию микробиоценоза кишечника за счет восстановления количества кишечной палочки с полноценными ферментными свойствами, элиминации эшерихий с гемолизирующими и сниженными ферментативными свойствами, нормализации количества бифидобактерий и лактобактерий.

Предлагаемый препарат обладает комплексным биологическим действием, направленным на ускорение нормализации аэробного и анаэробного компонентов микробиоценоза, слизистой оболочки и клеточных факторов местного иммунитета пищеварительного тракта, улучшение морфофункционального состояния ткани печени и повышение ее резистентности к лекарственным и другим токсическим воздействиям, коррекцию механизмов регуляции протеолиза, стимуляцию иммунобиологической реактивности и повышение адаптационного потенциала организма.

Формула изобретения

Средство для лечения дисбактериоза, включающее лиофилизированную смесь биомассы бифидобактерий и лизоцима, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит нуклеинат натрия при следующем соотношении компонентов на одну дозу:
Биомасса бифидобактерий, КОЕ - 10⁵ - 10⁸
Лизоцим, мг - 5 - 20
Нуклеинат натрия, мг - 50 - 250Ш

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2