Ссср i •-''•'я-.'1сид,ч• ^'

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

237343

Союв Советскик 1оциалистическик

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 24.И.1965 (№ 1015344/31-16) с присоединением заявки ¹

Приоритет

Опуолпковано 07.Х.1969. Бюллетень ¹ 31

Дата опубликования описания З.III.1970

Кл. 30h, 6

МПК А 61k

УДК 615.371/372:576. .851.71 (088.8) Комитет по делам изобретений н открытий при Совете Министров

СССР

Авторы изобретения

Е. П. Лукин, Н. Н. Васильев, В. М. Шевелев, В. Н. П

В. П. Малина, И. С. Корнев, A. А. Мордуева, А. А. Вор бьев

Н. H. Ураков, В. А. Размочаев, А. А. Карякин -"".М31.ьй1 и Д. В. Виноградов-Волжинский

Научно-исследовательский институт санитарии Министерст атвборонй" ""

СССР

Заявитель

° ТЕКА

СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ХИМИЧЕСКИХ РИККЕТСИОЗНЫХ

ВАКЦИН

Известны способы производства х??мическпх риккстсиозных вакцин путем выделения растворенного риккетсиозного антигена.

По предлагаемому способу культуру риккстсий суспсндиру?от в растворителе, например в физиологическом растворе, цснтрифугируют н в дальнейшем используют надосадочную жидкость или корпускулы обрабатывают эфиром, экстрагируя нз них затем антигсн трихлоруксусной кислотой. Очистку производят, например, путем осаждения органическими растворителями или кислотами, фракционирования нсйтральнымн солями или на ионообменных колонках.

Это позволяет уменьшить реактогенность и аллсргенность вакцин, обеспечить стандартность антигсна, повысить его чистоту и конце??тр аци ю, i также дает Воз. т! ож ность Вкл?очать вакцину в ассоциированные препараты.

Пример 1. Приготовление нативных препаратов растворимого антигена риккетсий

Провачека.

Накопление риккетсий осуществляется либо на куриных эмбрионах, либо путем инфицирования вшей. Подготовленный материал гомогенизируют и суспендируют в 0,05%-ном растворе хлористого натрия, содержащего

0,2в/о формалина так, чтобы получить 10%ную суспензию. Суспензию вь?держ??ва?от

20 — 24 час при 4 — 6 С, центрифугнруют

60 уяиин при 5000 об/ .вин и декантируют надосадочную жидкость. Полученные препараты контролируют путем высева на питательные среды. Стандартизацию препаратов осуществляют разведением стерильным 0,85tt/q-ным раствором поваренной соли, контролируя содержание антнгена по РСК.

П р ?t м е р 2. Приготовление препаратов растворимого антигена риккетсий Барнета.

Для накопления возбудителя в жслточные мешки куриных эморионов вводят инфицирукиций материал риккетский Барнета, находя«t?nc?t в 1 фазовом состоянии, по 0,25 — 0,3.?тлг и иш убируют 8 — 9 дней при 37 — 38 С. Эмбрионы, павшие до истечения 5 суток, уничтожают, а оставшиеся в живых и павшие более, чсit через 5 суток сохраняют прн 4 С, вскрывают, извлекают жслточныс мешки и гомогенизнруют. Из гомогсната готовят 20%-ную суспензию в 0,85п/и-ном растворе поваренной соли с добавлением 5 /,-ного фосфатного буферногоо р а створ а и 0,5п/< форм алин а. Суспензию после выдерживания в течение 10 суток прн 4 C встряхивают с 0,2 объема наркозного эфира и отделяют нижний слой. Обработку эфиром повторяют несколько раз, пока эфирный слой не будет оставаться бесцветным после отста??вяш?я в течение ночи. К среднему

c,тою добавляют 0.5 объема физиологического

30 раствора нлн воды и вновь обрабатывают

3 эфиром, сливая нижний слой. Водные фракции после дополнительной обр аботки соединяют и дополнительно обрабатывают эфиром.

Полученные обогащенные риккетсиями фракции центрифугируют 5 — б час при 5000 об/Вин, растирают осадок в ступке с небольшим количеством физиологического р аствор а или воды и добавляют равный объем 12>/в-ного р аствор а трихлоруксусной кислоты. Смесь выдерживают G «ac при 0 — 1 С при частом перемсшивании, центрифугируют 30 — 40 яин при 3 — 4 тыс. об/.яин, суспендируют осадок в небольшом количестве воды или физиологического раствора и вновь обрабатывают трихлоруксусной кислотой.

Надосадочная жидкость после цснтрифугирования содержит растворимый антигерои риккетсий Барнета. Полученные препараты подвергают диализу сначала против водопроводной |воды (34 ч), а затем против дистиллирован ной (24 ч) при 4 — б С. Диализаты после стандартизации и контроля используют в качестве прививочных препаратов. Для получения более. концентрированных препаратов с высокой степенью очистки полученные диа 4

J >

; мб".

237343 лизаты смешивают с 3 объемами этилового спирта, оставляют на 24 — 48 ч при 4 — б С, отделяют выпавший осадок центрифугированием и суспендируют в необходимом количестве физиологического р аствор а.

Предмет изобретения

Способ производства химических риккетсиозных вакцин путем выделения растворимого риккетсиозного антигена, отличающийся тем, что, с целью уменьшения реактогенности и аллергенности вакцин, стандартизации антигена, повышения его чистоты и концентрации, а также возможности включения в ассо15 циированные препараты, культуру риккетсий суспендируют в растворителе, например в физиологическом растворе, центрифугируют, в дальнейшем используют надосадочную жидкость или корпускулы обрабатывают эфиром, 20 экстрагируя из них затем антиген трихлоруксусной кислотой, и очищают, например, путем осаждения органическими р астворителями или кислотами, фракционирования нейтральными солями или на ионоооменных ко25 лонках.

Составитель В. Таратута

Редактор Т. Рыбалова Техред Л. Я. Левина Корректор Г. 11, Шильмаи

Заказ 376у7 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2