Ингибиторы фермента, конвертирующего интерлейкин-1-
Изобретение относится к новым классам соединений общей формулы
где R1 представляет собой:
или
значения радикалов указаны в формуле изобретения, которые являются ингибиторами фермента, конвертирующего интерлейкин-1β. Ингибиторы ICE настоящего изобретения характеризуются специфическими структурными и физикохимическими свойствами. Данное изобретение относится также к фармацевтическим композициям, включающим эти соединения. Соединения и фармацевтические композиции настоящего изобретения особенно хорошо подходят для ингибирования активности ICE и, следовательно, могут успешно использоваться в качестве препаратов против IL-1, апоптоз-, IGIF- и IFN-γ-опосредованных заболеваний, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, костно-деструктивных нарушений, пролиферативных заболеваний, инфекционных заболеваний, дегенеративных заболеваний и некротических заболеваний. Настоящее изобретение также относится к способам ингибирования ICE активности для лечения интерлейкин-1-, апоптоз-, IGIF- и IFN-γ-опосредованных заболеваний и уменьшение продукции IGIF- и IFN-γ с помощью соединений и композиций настоящего изобретения. Настоящее изобретение также относится к способам получения N-ациламино соединений. 8 н. и 56 з.п. ф-лы, 30 табл., 14 ил.
Настоящее изобретение относится к новым классам соединений, которые являются ингибиторами фермента, конвертирующего интерлейкин-1β ("ICE"). Данное изобретение относится также к фармацевтическим композициям, включающим эти соединения. Соединения и фармацевтические композиции данного изобретения особенно хорошо подходят для ингибирования активности ICE и, следовательно, могут успешно использоваться в качестве лекарственных средств против заболеваний, опосредованных интерлейкином-1 ("IL-1"), апоптозом, фактором, индуцирующим интерферон гамма, ("IGIF") и интерфероном-γ ("IFN-γ "), включающих воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, деструкцию костей, пролиферативные нарушения, инфекционные заболевания и дегенеративные заболевания. Данное Настоящее изобретение относится к новым классам соединений, которые являются ингибиторами фермента, конвертирующего интерлейкин-1β ("ICE"). Данное изобретение относится также к фармацевтическим композициям, включающим эти соединения. Соединения и фармацевтические композиции данного изобретения особенно хорошо подходят для ингибирования активности ICE и, следовательно, могут успешно использоваться в качестве лекарственных средств против заболеваний, опосредованных интерлейкином-1 ("IL-1"), апоптозом, фактором, индуцирующим интерферон гамма, ("IGIF") и интерфероном-γ ("IFN-γ "), включающих воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, деструкцию костей, пролиферативные нарушения, инфекционные заболевания и дегенеративные заболевания. Данное изобретение относится также к способам ингибирования ICE активности и уменьшения продукции IGIF и IFN-γ и к способам лечения заболеваний, опосредованных интерлейкином-1, апоптозом, фактором, индуцирующим интерферон гамма, и интерфероном-γ с использованием соединений и композиций данного изобретения. Настоящее изобретение относится также к способам получения N-ациламино соединений.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Интерлейкин-1-("IL-1") является основным проинфламматорным и иммунорегуляторным белком, который стимулирует дифференциацию и пролиферацию фибробластов, продукцию простагландинов, коллагеназы и фосфолипазы синовиальными клетками и хондроцитами, дегрануляцию базофилов и эозинофилов и активацию нейтрофилов. Oppenheim, J. H. et al, Immunology Today, 7, рр 45-56 (1986). В таком качестве он включен в патогенез хронических и острых воспалительных и аутоиммунных заболеваний. Например, при ревматоидном артрите IL-1 является медиатором как воспалительных симптомов, так и деструкции хрящевого протеогликана в пораженных суставах. Wood, D.D. et al., Arthritis Rheum. 26, 975, (1983); Pettipher, E. J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. UNITED STATES OF AMERICA 71, 295 (1986); Arend, W. P. and Dayer, J.M., Artritis Rheum. 38, 151 (1995). IL-1 является высокоактивным агентом, вызывающим костную ресорбцию. Jandiski, J. J., J. Oral Path. 17, 145 (1988); Dewhirst, F.E. et al., J. Immunol. 8, 2562 (1985). Альтернативно он упоминается как "фактор, активирующий остеокласты" при костнодеструктивных заболеваниях, таких, как остеоартрит и множественная миелома. Bataille, R. et al., Int. J. Clin. Lab. Res. 21 (4), 283 (1992). В некоторых пролиферативных заболеваниях, таких, как острая миелогенная лейкемия и множественная миелома, IL-1 может способствовать росту и адгезии опухолевых клеток. Bani, M. R., J. Natl. Cancer Inst. 83, 123 (1991); Vidal-Vanaclocha, F., Cancer Res. 54, 2667 (1994). При этих заболеваниях IL-1 также стимулирует продукцию других цитокинов, таких, как IL-6, который модулирует развитие опухоли (Tartour et al., Cancer Res. 54, 6243 (1994). IL-1 преимущественно продуцируется моноцитами периферической крови, как часть воспалительного ответа, и существует в двух различных агонистических формах, IL-1α и IL-1β . Mosely, В. S. et аl., Proc. Natl. Acad. Sci., 84, pp.4572-4576 (1987); Lonneman, G. et al., Eur. J. Immunol., 19, pp.1531-1536 (1989).
IL-1β синтезируется как биологически неактивный предшественник, pIL-1β . В pIL-1β не хватает обычной ведущей последовательности, и он не подвергается воздействию сигнальной пептидазы. March, С. J., Nature, 315, pp.641-647 (1985). Вместо этого pIL-1β расщепляется под действием интерлейкин-1β конвертирующего фермента ("ICE") между Asp-116 и Ala-117 с получением биологически активного С-концевого фрагмента, обнаруженного в человеческой сыворотке и синовиальной жидкости. Sleath, Р. R., et al., J. Biol. Chem., 265, pp.14526-14528 (1992); A.D.Howard et al., J. Immunol., 147, pp.2964-2969 (1991). ICE является цистеин-протеазой, локализованной преимущественно в моноцитах. Она превращает предшественник IL-1β в зрелую форму. Black, R. A. et al., FEBS Lett., 247, рр.386-390 (1989); Kostura, M. J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. UNITED STATES OF AMERICA 86. pp.5227-5231 (1989). Воздействие ICE необходимо также для транспорта зрелого IL-1β через клеточную мембрану.
Кроме того, очевидно, что ICE, или его гомологи, включены в регуляцию запрограммированной смерти клетки, или апоптоза. Yuan, J. et al., Cell. 75, pp.641-652 (1993); Miura, M. et al., Cell. 75, pp.653-660 (1993); Nett-Fiordalisi, M. A. et al., J. Cell Biochem., 17B, р.117 (1993). В частности, считается, что ICE, или его гомологи, связаны с регуляцией апоптоза при нейродегенеративных заболеваниях, таких, как болезни Альцгеймера и Паркинсона. Marx, J. and M. Baringa, Science, 259, pp.760-762 (1993); Gagliardini, V. et al., Science, 263, pp.826-828 (1994). Терапевтическое применение ингибирования апоптоза может включать лечение болезней Альцгеймера, Паркинсона, удара, инфаркта миокарда, спинной атрофии и старения.
Продемонстрировано, что ICE опосредует апоптоз (программируемую смерть клетки) в некоторых типах тканей. Steller, Н., Science, 267, р.1445 (1995); Whyte, M. and Evan, G, Nature, 376, p.17 (1995); Martin, S. J. and Green, D. R., Cell. 82, p.349,(1995); Alnemri, E. S., et al., J. Biol. Chem., 270, p.4312 (1995); Yuan, J. Curr. Opin. Cell Biol., 7, p.211 (1995). Трансгенные мыши, лишенные гена ICE, являются дефицитными в отношении Fas-опосредованного апоптоза (Kuida, К. et al., Science. 267, р.2000 (1995)). Эта активность ICE отличается от его роли как фермента, процессирующего pro-IL1β . Предполагают, что в некоторых типах тканей ингибирование ICE может не оказывать влияния на секрецию зрелого IL-1β , но может ингибировать апоптоз.
Обладающий ферментативной активностью ICE был ранее описан как гетеродимер, состоящий из двух субъединиц, р20 и р10 (с молекулярным весом соответственно 20 кДа и 10 кДа). Эти субъединицы получаются из профермента с молекулярным весом 45 кДа (р45) через форму р30, посредством автокаталитического механизма активации. Thomberry, N. A. et al., Nature, 356, pp.768-774 (1992). Профермент ICE делится на несколько функциональных доменов: продомен (р14), р22/20 субъединица, связующий полипептид и р10 субъединица. Thomberry et al., supra: Casano et al., Genomics. 20, pp.474-481 (1994).
Профермент р45 с полной длиной цепи был охарактеризован по его кДНК и аминокислотной последовательности. РСТ патентные заявки WO 91/15577 и WO 94/00154. Также известны кДНК и аминокислотные последовательности для р20 и р10. Thornberry et al., supra. Также были клонированы и секвенированы мышиный и крысиный ICE. Их аминокислотные и нуклеотидные последовательности имеют высокую степень гомологии с человеческим ICE. Miller, D. К. et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, pp.133-148 (1993); Molineaux, S. M. et. al., Proc. Nat. Acad. Sci., 90, pp.1809-1813 (1993). Трехмерная структура ICE определена на атомном уровне с помощью рентгеновской кристаллографии. Wilson, К.Р., et al., Nature, 370, pp.270-275 (1994). Активный фермент существует в виде тетрамера, состоящего из двух р20 и двух р10 субъединиц.
Кроме того, у человека обнаружены гомологи ICE, имеющие сходства в аминокислотных последовательностях регионов активных участков ферментов. Такие гомологи включают ТХ (или ICEreI-II или ICH-2) (Faucheu, et al., EMBO J., 14, р.1914 (1995); Kamens J., et al., J. Biol. Chem., 270, p.15250 (1995); Nicolson et al., J. Biol. Chem., 270, p.15870 (1995)), TY (или ICEreI-III) (Nicolson et al., J. Biol. Chem., 270, p.15870 (1995)); ICH-1 (или Nedd-2) (Wang, L. et al., Cell. 78, p.739 (1994)), MCH-2 (Femandes-Alnemri, Т. et al., Cancer Res., 55, p.2737 (1995)), CPP 32 (или YAMA, или апопейн) (Femandes-Alnemri, Т. et al., J. Biol. Chem. 269, p.30761 (1994); Nicolson D. W. et al., Nature. 376, p.37 (1995)), и СМН-1 (или МСН-3) (Lippke, et al., J. Biol. Chem., (1996); Femandes-Alnemri, Т. et al., Cancer Res., (1995)). Каждый из этих гомологов ICE, так же, как и сам ICE, способен индуцировать апоптоз при повышенной экспрессии в трансфицированных клеточных линиях. Ингибирование одного или нескольких таких гомологов пептидильным ингибитором ICE Tyr-Val-Ala-Asp-хлорметилкетоном приводит к ингибированию апоптоза в первичных клетках клеточных линий. Lazebnik et al., Nature, 371, р.346 (1994). Описанные здесь соединения также способны ингибировать один или несколько гомологов ICE (см. Пример 5). Следовательно, эти соединения могут использоваться для ингибирования апоптоза в тканях, содержащих гомологи ICE, но которые не содержат активный ICE и не продуцируют зрелый IL-1β .
Интерферон-гамма индуцирующий фактор (IGIF) является полипептидом с молекулярной массой приблизительно 18 кДа, стимулирующим продукцию интерферона-гамма (IFN-γ ) Т-клетками. IGIF продуцируется in vivo активированными клетками Купфера и макрофагами и экспортируется из этих клеток при стимуляции эндотоксином. Таким образом, соединение, уменьшающее продукцию IGIF, может использоваться, как ингибитор стимуляции таких Т-клеток, что, в свою очередь, приводит к уменьшению уровня продукции IFN-γ этими клетками.
IFN-γ является цитокином, обладающим иммунорегуляторным действием на ряд иммунных клеток. В частности, IFN-γ участвует в активации макрофагов и селекции Thl клеток (F. Belardelli, APMIS, 103, р.161 (1995)). IFN-γ оказывает свое действие частично путем модуляции экспрессии генов через STAT и IRF механизмы (С.Schindler and J.E.Damell, Ann. Rev. Biochem., 64, p.621 (1995); Т.Taniguchi, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 121, p.516 (1995)).
Мыши, утратившие IFN-γ или его рецептор, обладают множественными дефектами в функциях иммунных клеток и являются устойчивыми к эндотоксическому шоку (S.Huang et al., Science. 259, р.1742 (1993); D.Dalton et al., Science, 259, p.1739 (1993); В.D.Car et al., J. Exp. Med., 179, p.1437 (1994)). Очевидно, что вместе с IL-1β , IGIF является мощным стимулятором продукции IFN-γ Т-клетками (Н.Okamura et al., Infection and Immunity. 63, р.3966 (1995); H.Okamura et al., Nature, 378, p.88 (1995); S.Ushio et al., J.Immunol., 156, p.4274 (1996)).
Продемонстрировано, что IFN-γ вносит вклад в патологические состояния, ассоциированные с рядом воспалительных, инфекционных и аутоиммунных нарушений и заболеваний. Таким образом, соединения, способные уменьшать продукцию IFN-γ , могут применяться для улучшения патологических состояний, опосредованных IFN-γ .
Механизмы биологической регуляции IGIF и, таким образом, IFN-γ , не выяснены. Известно, что IGIF синтезируется в виде белкового предшественника, называемого "про-IGIF". Однако, остается неясным, каким образом про-IGIF расщепляется и имеет ли его процессинг биологическое значение.
Соответственно, композиции и способы, регулирующие превращение про-IGIF в IGIF, могут применяться для уменьшения продукции IGIF и IFN-γ in vivo и, таким образом, для уменьшения вредного воздействия этих белков, которые вносят вклад в нарушения и заболевания человека.
Однако ICE и другие члены ICE/CED-3 семейства ранее не связывали с превращением про-IGIF в IGIF или с продукцией IFN-γ in vivo.
Ингибиторы ICE представляют собой класс соединений, применяемых для подавления воспаления или апоптоза или обоих. Описаны пептидные и пептидильдые ингибиторы ICE. PCT патентные заявки WO 91/15577; WO 93/05071; WO 93/09135; WO 93/14777 и WO 93/16710; и европейская патентная заявка 0547699. На мышиных моделях воспалительных процессов (vide infra) обнаружено, что такие пептидильные ингибиторы ICE блокируют продукцию зрелого IL-1β и подавляют рост лейкемических клеток in vitro (Estrov et al., Blood 84, 380a (1994)). Однако, из-за своей пептидной природы такие ингибиторы обычно характеризуются нежелательными фармакологическими свойствами, такими, как низкая клеточная проницаемость и клеточная активность, низкая оральная абсорбция, низкая стабильность и быстрый метаболизм. Planner, J.J. and D.W.Norbeck, in Drug Discovery Technologies, C.R.Clark and W.H.Moos, Eds. (Ellis Horwood, Chichester, England, 1990), pp.92-126. Это затрудняет разработку на их основе эффективных лекарственных препаратов.
Сообщалось также о непептидильных соединениях, ингибирующих ICE in vitro. РСТ патентная заявка WO 95/26958; патенты US 5552400; Dolle et al., J. Med. Chem., 39, pp.2438-2440 (1996). Однако, не ясно, имеют ли эти соединения соответствующий фармакологический профиль для терапевтического применения.
Кроме того, применяющиеся способы получения таких соединений не выгодны. В этих способах используется гидрид трибутилолова, токсичный, чувствительный к влаге реагент. Следовательно, эти способы не удобны для проведения, представляют риск для здоровья и создают проблемы с утилизацией токсичных отходов. Кроме того, соединения, полученные с помощью этих способов, трудно очищать.
Соответственно, существует потребность в соединениях, которые могут эффективно ингибировать действие ICE in vivo, для применения их в качестве агентов, использующихся для профилактики и лечения хронических и острых форм IL-1-опосредованных заболеваний, апоптоз-, IGIF- или IFN-γ -опосредованных заболеваний, так же, как для воспалительных, аутоиммунных, костно-деструкционных, пролиферативных, инфекционных или дегенеративных заболеваний. Существует также необходимость в разработке способов получения таких соединений.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение предоставляет новые классы соединений и их фармацевтически приемлемые производные, которые используются как ингибиторы ICE. Эти соединения могут использоваться одни, или в сочетании с другими терапевтическими или профилактическими агентами, такими, как антибиотики, иммуномодуляторы, или другие анти-воспалительные агенты, для лечения или профилактики заболеваний, опосредованных IL-1, апоптозом, IGIF или IFN-γ . Соответственно предпочтительному воплощению, соединения данного изобретения способны связываться с активным участком ICE и ингибировать активность этого фермента. Кроме того, они имеют повышенную клеточную активность, улучшенную фармакокинетику и/или улучшенную оральную биодоступность по сравнению с пептидильными ингибиторами ICE.
Главным объектом данного изобретения является предоставление новых классов соединений, которые являются ингибиторами ICE, представленных формулами;
α
различные заместители которых описаны в этом разделе.
Следующим предметом данного изобретения является предоставление способа получения N-ациламино соединений в результате сочетания карбоксильной кислоты с alloc-защищенным амином.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг.1А. ICE расщепляет пpo-IGIF in vivo. Клеточные лизаты Cos клеток, трансфицированных различными плазмидами, экспрессирующими упомянутые выше ферменты, или контрольных клеток, анализировали на наличие IGIF путем разделения белков методами SDS-PAGE и иммуноблотинга с анти-IGIF антисывороткой (линия 1, имитация трансфицированных клеток; линия 2, npo-IGIF один; линии 3-12, npo-IGIF в сочетании с ICE, ICE-C285S, СРР32, CPP32-C163S, СМН-1, CMH-1-C186S, Тх, Tx-C258S, соответственно). Подвижности npo-IGIF и зрелого IGIF с молекулярной массой 18 кДа указаны справа. Маркеры молекулярного веса, который указан в кДа, показаны слева (Пример 23).
Фиг.1В. ICE расщенляет пpo-IGIF по аутентичному процессирующему участку in vitro, что продемонстрировано окрашиванием с помощью Кумасси синего продуктов протеолитической реакции, разделенных методом SDS-PAGE (Пример 23). Использовали следующие протеазы и ингибиторы: линия 1, буферный контроль; линия 2, 0,1 нМ ICE; линия 3, 1 нМ ICE; линии 4 и 5, 1 нМ ICE с 10 нМ Cbz-Val-Ala-Asp-[(2,6-дихлорбензоил)окси]метилкетоном и 100 нМ Ас-Туr-Val-Ala-Asp-альдегидом, соответственно; линии 6 и 7, 15 нМ СРР32 с 400 нМ Ac-Asp-Glu-Val-Аsр-альдегидом (D.W.Nicholson et al., Nature, 376, р.37 (1995)) соответственно; линия 8, 100 нМ СМН-1; линия 9, 10 ед./мл гранзима В; и М, маркеры молекулярной массы, указанной в кДа.
Фиг.1С. В результате расщепления под действием ICE неактивный npo-IGIF превращается в активный IGIF, который индуцирует продукцию IFN-γ в Тhl хелперных клетках. Нерасщепленный (пpo-IGIF), расщепленный под действием ICE (пpo-IGIF/ICE), расщепленный под действием СРР32 (npo-IGIF/CPP32), и рекомбинантный зрелый IGIF (rIGIF) инкубировали с А.Е7 Thl клетками в концентрации 12 нг/мл (незаштрихованная колонка) и 120 нг/мл (заштрихованная колонка) в течение восемнадцати часов и уровни высвобождающегося в культуральную среду IFN-γ анализировали с помощью ELISA-теста (Пример 23). Клетки А.Е7, инкубировавшиеся с буфером, ICE (ICE) или СРР32 (СРР32) анализировали подобным образом как негативные контроли. Полученные значения представляют собой средние величины из трех определений.
Фиг.2А. Зрелый IGIF (18 кДа) продуцируется Cos клетками, со-трансфицированными плазмидами, экспессирующими про-IGIF и ICE. Клеточные лизаты (слева) и инкубационная среда (справа) Cos клеток, трансфицированных про-IGIF экспрессирующей плазмидой, в отсутствие (-) или присутствии экспрессирующей плазмиды, кодирующей дикий тип (ICE) или неактивный мутант (ICE-C285S) ICE. Трансфицированные клетки метаболически метили 35S-метионином, белки из клеточных лизатов и инкубационной среды подвергали иммунопреципитации с помощью анти-IGIF антисыворотки и разделяли методом SDS-PAGE (Пример 24). Подвижности про-IGIF и зрелого IGIF с молекулярным весом 18 кДа показаны справа. Маркеры молекулярной массы, указанной в кДа, показаны слева.
Фиг.2В. Определяли IFN-γ индуцирующую активность в Cos клетках, со-трансфицированных плазмидами, экспрессирующими про-IGIF и ICE. Клеточные лизаты (заштрихованные колонки) и инкубационную среду (незаштрихованные колонки) Cos клеток, трансфекцированных плазмидами, экспрессирующими про-IGIF, в отсутствие (про-IGIF) или присутствии (про-IGIF/ICE) экспрессирующей плазмиды, кодирующей дикий тип (ICE), анализировали на уровни IFN-γ (нг/мл) с помощью ELISA-теста. Cos клетки, трансфицированные буфером (имитация), или только ICE-экспрессирующей плазмидой (ICE), служили негативными контролями (Пример 24).
Фиг.ЗА. Клетки Купфера от мышей, утративших ICE, являются дефективными в отношении экспорта IGIF. Клетки Купфера от дикого типа мышей (ICE+/+), или ICE-дефицитных мышей, гомозиготных в отношении ICE мутации, (ICE-/-), изолировали и обрабатывали LPS в течение 3 часов. Уровни иммуноактивных полипептдов IGIF в инкубационной среде (нг/мл) клеток дикого типа определяли с помощью ELISA-теста (Пример 25). N.D. (not detectable) означает, что концентрация IGIF меньше 0,1 нг/мл.
Фиг.3В. Клетки Купфера от мышей, утративших ICE, являются дефективными в отношении экспорта зрелого IGIF. Клетки Купфера от дикого типа мышей (ICE+/+), или ICE-дефицитных мышей, гомозиготных в отношении ICE мутации, (ICE-/-), изолировали и обрабатывали LPS в течение 3 часов. Обработанные клетки метаболически метили 35S-метионином, белки из клеточных лизатов и инкубационной среды подвергали иммунопреципитации с помощью анти-IGIF антисыворотки и разделяли методом SDS-PAGE (Пример 25). Подвижности про-IGIF и зрелого IGIF с молекулярным весом 18 кДа показаны справа. Маркеры молекулярной массы, указанной в кДа, показаны слева.
Фиг.3С. Сыворотка ICE-дефицитных мышей содержит пониженные уровни IGIF. Образцы сыворотки мышей дикого типа (ICE+/+), или ICE-дефицитных мышей, гомозиготных в отношении ICE мутации, (ICE-/-), анализировали на уровни IGIF (нг/мл) с помощью ELISA-теста (Пример 25).
Фиг.3D. Сыворотка ICE-дефицитных мышей содержит пониженные уровни IFN-γ . Образцы сыворотки мышей дикого типа (ICE+/+), или ICE-дефицитных мышей, гомозиготных в отношении ICE мутации, (ICE-/-), анализировали на уровни IFN-γ (нг/мл) с помощью ELISA-теста (Пример 25).
Фиг.4. Уровень IFN-γ в сыворотке после массированного введения LPS был значительно понижен у ICE-дефицитных мышей (Пример 26). Образцы сыворотки мышей дикого типа (затемненные квадраты), или ICE-дефицитных мышей (затемненные круги), анализировали на уровни IFN-γ (нг/мл) с помощью ELISA-теста как функцию от времени (в часах) после введения LPS. Температура животных на протяжении всего периода времени показана в градусах Цельсия для дикого типа мышей (незатемненные квадраты) или ICE-дефицитных мышей (незатемненные круги).
Фиг.5. Ингибитор ICE, AcYVAD-альдегид (AcYVAD-CHO), ингибирует синтез IL-1β и IFN-γ человеческими мононуклеарными клетками периферической крови (РВМС), стимулированный LPS. Процент (%) ингибирования приведен для синтеза IL-1β (незакрашенное квадраты) и IFN-γ (незакрашенные ромбы) как функция от концентрации ингибитора (мкМ).
Фиг.6. Соединение 214е ингибирует продукцию IL-1β в мышах в ответ на введение LPS. Образцы сыворотки мышей CD1 после введения LPS анализировали на уровни IL-1β (пг/мл) с помощью ELISA-теста. Соединение 214е вводили путем интраперитонеальной инъекции (IP) через один час после введения LPS. Кровь собирали через семь часов после введения LPS (Пример 7).
Фиг.7. Соединение 217е ингибирует продукцию IL-1β в мышах в ответ на введение LPS. Образцы сыворотки мышей CD1 после введения LPS анализировали на уровни IL-1β (пг/мл) с помощью ELISA-теста. Соединение 217е вводили путем интраперитонеальной инъекции (IP) через один час после введения LPS. Кровь собирали через семь часов после введения LPS (Пример 7).
Фиг.8. Соединение 214е, но не соединение 217е, при принудительном введении в ротовую полость, ингибирует продукцию IL-1β в мышах в ответ на введение LPS. В этом исследовании определяли оральную абсорбцию при условиях, описаных для фиг.6 и 7. Эти результаты показывают, что соединение 214е является потенциально активным ингибитором ICE при оральном применении (см. Пример 7).
Фиг.9. Соединение 214е и его аналоги также ингибируют продукцию IL-1β при IP введении. Эти результаты получены в условиях, описанных для фиг.6 и 7 и в Примере 7.
Фиг.10. Соединение 214е и его аналоги также ингибируют продукцию IL-1β при пероральном (РО) введении. Эти результаты получены в экспериментальных условиях, описаных для фиг.6 и 7 и в Примере 7.
Фиг.11А/В. Соединения 302 и 304а демонстрируют детектируемые клеточные уровни в крови при пероральном введении (50 мг/кг, в 0,5% карбоксиметилцеллюлозе) мышам.
Образцы крови собирали через 1 и 7 часов после приема дозы. Соединения 302 и 304а являются предшественниками 214е и метаболизируются в 214е in vivo. Определяемый в крови уровень соединения 214е не превышает 0,10 мкг/мл при пероральном введении (Пример 8).
Фиг.12. Соединение 412f блокирует прогрессию коллаген-индуцированного артрита II типа у самцов мышей DBA/1J (Wooley, Р.H., Methods in Enzymology, 162, pp.361-373 (1988) and Geiger, Т., Clinical and Experimental Reumatology, 11, pp.515-522 (1993)). Соединение 412f вводили перорально через зонд дважды в день (10, 25 и 50 мг/кг), с интервалом приблизительно в 7 часов. Воспаление определяли по Шкале Тяжести Артрита от 1 до 4 баллов (увеличение числа баллов соответствует увеличению тяжести заболевания). Добавляли число баллов по двум передним лапкам, получая конечное число баллов (см. Пример 21).
Фиг.13. Соединение 412d блокирует прогрессию коллаген-индуцированного артрита II типа у самцов мышей DBA/1J. Эти результаты получены в условиях, описаных для фиг.12 и в Примере 21.
Фиг.14. Соединение 696а блокирует прогрессию коллаген-индуцированного артрита II типа у самцов мышей DBA/1J. Эти результаты получены в условиях, описаных для фиг.12 и в Примере 21.
СОКРАЩЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Сокращения
Обозначения Реагент или фрагмент
Ala аланин
Arg аргинин
Asn аспарагин
Asp аспарагиновая кислота
Cys цистеин
Gln глутамин
Glu глутаминовая кислота
Gly глицин
His гистидин
Ile изолейцин
Leu лейцин
Lys лизин
Met метионин
Phe фенилаланин
Pro пролин
Ser серин
Thr треонин
Trp триптофан
Tyr тирозин
Val валин
Ac2O уксусный ангидрид
n-Bu нормальный бутил
DMF диметилформамид
DIEA N,N-диизопропилэтиламин
EDC гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-
этилкарбодиимида
Et2O диэтиловый эфир
EtOAc этилацетат
Fmoc 9-флуоренилметоксикарбонил
HBTU гексафторфосфат O-бензотриазол-1-ил-
N,N,N’,N’-тетраметилурония
HOBT гидрат 1-гидроксибензотриазола
MeOH метанол
TFA трифторуксусная кислота
Alloc аллилоксикарбонил
Определения
В данном описании применяются следующие термины:
Термин "фактор, индуцирующий интерферон гамма", или "IGIF", относится к фактору, способному стимулировать эндогенную продукцию IFN-γ .
Термин "ингибитор ICE" относится к соединению, способному ингибировать этот фермент. Ингибирование ICE можно определять с помощью методов, описанных здесь, или включенных в качестве ссылки. Опытным специалистам известно, что ингибитор ICE in vivo не обязательно является ингибитором ICE in vitro. Например, в тестах in vitro соединение в форме пролекарства обычно демонстрирует отсутствие активности, или низкую активность. Такие пролекарственные формы могут изменяться под действием метаболических или других биохимических процессов в организме пациента, с образованием in vivo ингибитора ICE.
Термин "цитокин" относится к молекулам, которые опосредуют взаимодействия между клетками.
Термин "состояние" относится к любому заболеванию, нарушению, или воздействию, имеющему вредные биологические последствия для субъекта.
Термин "субъект" относится к животному, или к одной или нескольким клеткам, полученным из животного. В предпочтительном варианте животное является млекопитающим, наиболее предпочтительно, человеком. Клетки могут быть в любой форме, включая, не ограничиваясь ими, клетки, сохраняющиеся в тканях, клеточные кластеры, не погибшие клетки, трансфицированные или трансформированные клетки и клетки, полученные от животного, измененного физически или фенотипически.
Термин "активный участок" обозначает любой или все следующие участки ICE: участок, связывающий субстрат, участок, с которым связывается ингибитор, и участок, на котором происходит расщепление субстрата.
Термин "гетероцикл" или "гетероциклический" относится к стабильным моно- или полициклическим соединениям, которые могут необязательно содержать одну или две двойные связи, или одно или несколько ароматических колец. Каждый гетероцикл состоит из атомов углерода и от одного до четырех гетероатомов, независимо выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу. Используемые здесь термины "гетероатомы азота" и "гетероатомы серы" включают любую окисленную форму азота или серы и четвертичную форму любого основного азота. Определенные выше гетероциклы включают, например, пиримидинил, тетрагидрохинолил, тетрагидроизохинонлинил, пуринил, пиримидил, индолинил, бензимидазолил, имидазолил, имидазолиноил, имидазолидинил, хинолил, изохинолил, индолил, пиридил, пирролил, пирролинил, пиразолил, пиразинил, хиноксолил, пиперидинил, морфолинил, тиаморфолинил, фурил, тиенил, триазолил, тиазолил, β -карболинил, тетразолил, тиазолидинил, бензофураноил, тиаморфолинил сульфон, бензоксазолил, оксопиперидинил, оксопирролидинил, оксоазепинил, азепинил, изоксазолил, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, тиадиазолил, бензодиоксолил, бензотиенил, тетрагидротиофенил и сульфоланил. Другие гетероциклы описаны в A.R. Katritzky and С.W. Rees, eds. Comprehensive Heterocyclic Chemistry: The Structure, Reactions, Synthesis and Use of Heterocyclic Compounds. Vol.1-8, Pergamon Press, NY (1984).
Термин "циклоалкил" относится к моно- или полициклическим группам, содержащим от 3 до 15 атомов углерода, и могут необязательно содержать одну или две двойные связи. Примеры включают циклогексил, адамантил и норборнил. Термин "арил" относится к моно- или полициклическим группам, содержащим 6, 10, 12 или 14 атомов углерода, в которых как минимум одно кольцо является ароматическим. Примеры включают фенил, нафтил и тетрагидронафталин.
Термин "гетероароматический" относится к моно- или полициклическим группам, содержащим от 1 до 15 атомов углерода и от одного до четырех гетероатомов, каждый из которых независимо выбран из группы, включающей серу, азот и кислород и которые дополнительно содержат от 1 до 3 пяти- или шестичленных колец, как минимум одно из которых является ароматическим.
Термин "альфа-аминокислота" (α -аминокислота) относится как к встречающимся в природе аминокислотам, так и к другим, "небелковым", α -аминокислотам, обычно использующимся в пептидной химии для получения синтетических аналогов природных пептидов, включающим D и L формы. Природными аминокислотами являются глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, серин, метионин, треонин, фенилаланин, тирозин, триптофан, цистеин, пролин, гистидин, аспарагиновая кислота, аспарагин, глутаминовая кислота, глутамин, γ -карбоксиглютаминовая кислота, аргинин, орнитин и лизин. Примеры "небелковых" α -аминокислот включают гидроксилизин, гомосерин, гомотирозин, гомо-фенилаланин, цитруллин, кинуренин, 4-амино-фенилаланин, 3-(2-нафтил)-аланин, 3-(1-нафтил)-аланин, метионин сульфон, т-бутил-аланин, т-бутилглицин, 4-гидроксифенилглицин, аминоаланин, фенилглицин, винилаланин, пропаргил-глицин, 1,2,4-триазол-3-аланин, 4,4,4-трифтор-треонин, тиронин, 6-гидрокситриптофан, 5-гидрокситриптофан, 3-гидроксикинуренин, 3-аминотирозин, трифторметилаланин, 2-тиенилаланин, (2-(4-пиридил)этил)-цистеин, 3,4-диметоксифенилаланин, 3-(2-тиазолил)-аланин, иботеновую кислоту, 1-амино-1-циклопентанкарбоновую кислоту, 1-амино-1-циклогексанкарбоновую кислоту, хискваловую кислоту, 3-трифторметилфенилаланин, 4-трифторметилфенилаланин, циклогексилаланин, цикло-гексилглицин, тиогистидин, 3-метокситирозин, эластатинал, норлейцин, норвалин, аллоизолейцин, гомоаргинин, тиопролин, дегидропролин, гидроксипролин, изонипектотовую кислоту, гомопролин, циклогексилглицин, α -амино-н-масляную кислоту, циклогексилаланин, аминофенилмасляную кислоту, фенилаланин, замещенный в орто, мета или пара положении фенильного фрагмента одним или двумя из следующих заместителей: (C1-C4) алкил, (C1-C4) алкокси, галоген или нитро группами или замещен метилендиокси группой; β -2- и 3-тиенилаланин, β -2- и 3-фуранилаланин, β -2, 3- и 4-пиридилаланин, β -(бензотиенил-2- и 3-ил)аланин, β -(1- и 2-нафтил)аланин, O-алкилированные производные серина, треонина или тирозина, S-алкилированный цистеин, S-алкилированный гомоцистеин, О-сульфатный, O-фосфатный и O-карбоксильный эфиры тирозина, 3-сульфотирозин, 3-карбокситирозин, 3-фосфотирозин, эфир тирозина с 4-метансульфоновой кислотой, 4-метанфосфониевый эфир тирозина, 3,5-дииодтирозин, 3-нитротирозин, ε -алкиллизин, и дельта-алкилорнитин. Любая из этих α -аминокислот может быть замещена метильной группой в альфа-положении, атомом галогена в любом ароматическом остатке α -амино боковой цепи, или соответствующей защитной фуппой при О, N или S атомах боковой цепи аминокислотных остатков. Соответствующие защитные группы раскрыты в "Protective Groups In Organic Synthesis," T.W.Greene and P.G.M. Wuts, J. Wiley & Sons, NY, NY, 1991.
Термин "замещать" подразумевает замещение атома водорода в соединении замещающей группой. В настоящем изобретении атомы водорода, которые составляют часть фрагмента, участвующего в образовании водородной связи, способного образовать водородную связь с карбонильным кислородом Arg-341 ICE или карбонильным кислородом Ser-339 ICE, исключены из замещения. К таким исключенным атомам водорода относятся атомы, входящие в состав -NH-групп, находящихся в альфа-положении по отношению к -СО- группе, и описываются скорее как -NH-, чем как Х группа, или некоторые другие обозначения в следующих диаграммах: (а) через (t), (v) через (z).
Термин "прямая цепь" относится к прилегающей неразветвленной цепочке ковалентно связанных атомов. Прямая цепь может быть замещена, но ее заместители не являются частью прямой цепи.
Термин "Кi" относится к численному значению эффективности соединения при ингибировании активности фермента-мишени, такого, как ICE. Уменьшение значения Кi соответствует увеличению эффективности. Значение Ki получают в результате приведения экспериментально полученных значений скорости к стандартным уравнениям ферментативной кинетики (see I.H.Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).
Термин "пациент", используемый в данной заявке, относится к любому млекопитающему, особенно к человеку.
Термин "фармацевтически эффективное количество" относится к количеству, проявляющему эффективное действие при лечении или облегчении IL-I-, апоптоз-, IGIF- или IFN-γ -опосредованных заболеваний у пациента. Термин "профилактически эффективное количество" относится к количеству, обладающему эффективностью в предотвращении или существенном уменьшении риска IL-I-, апоптоз-, IGIF-или IFN-γ - опосредованных заболеваний у пациента.
Термин "фармацевтически приемлемый носитель, или адъювант" относится к нетоксичному носителю или адъюванту, который может быть введен пациенту вместе с соединением данного изобретения и который не нарушает его фармакологическую активность.
Термин "фармацевтически приемлемое производное" обозначает любую фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир, или соль такого эфира соединения данного изобретения, или любое другое соединение, которое при введении реципиенту способно производить (прямым или непрямым образом) соединение данного изобретения или анти-ICE активный метаболит или их остаток.
Фармацевтически приемлемые соли соединений данного изобретения включают, например, соли, полученные из фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. Примеры подходящих кислот включают хлористоводородную, бромистоводородную, серную, азотную, перхлорную, фумаровую, малеиновую, фосфорную, гликолевую, молочную, салициловую, янтарную, толуол-п-сульфоновую, винную, уксусную, лимонную, метансульфоновую, муравьиную, бензойную, малоновую, нафталин-2-сульфоновую и бензолсульфоновую кислоты. Другие кислоты, такие, как щавелевая, несмотря на то, что сами по себе не являются фармацевтически приемлемыми, могут применяться при получении солей, использующихся в качестве промежуточных веществ при получении соединений данного изобретения и их фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот. Соли, получаемые из соответствующих оснований, включают соли щелочных металлов (напр., натрия), щелочноземельных металлов (напр., магния), аммония и N-(C1-4 aлкил)
+ |
4 |
Ингибиторы ICE данного изобретения могут содержать один или несколько "асимметрических" атомов углерода и, таким образом, могут находиться в виде рацематов и рацемических смесей, индивидуальных энантиомеров, смесей диастереомеров и индивидуальных диастереомеров. Все эти изомерные формы соединений специально включены в настоящее изобретение. Каждый стереогенный атом углерода может быть R или S конфигурации. Хотя специфические соединения и строительные блоки, представленные в примерах в этой заявке, могут быть описаны в отдельной стереохимической конфигурации, также рассматриваются соединения и строительные блоки, имеющие каждый противоположную стереохимию в любом данном хиральном центре или их смеси.
Ингибиторы ICE данного изобретения могут включать циклические структуры, которые могут быть необязательно замещены при атомах углерода, азота или других атомах различными заместителями. Такие циклические структуры могут быть замещены одним или несколькими заместителями. Предпочтительно циклические структуры содержат от 0 до 3 заместителей. При множественном замещении каждый заместитель может быть выбран независимо от других, при условии того, что комбинация заместителей приводит к образованию стабильного соединения.
В данном изобретении рассматриваются только те комбинации заместителей и вариации, которые приводят к образованию стабильных соединений. Используемый здесь термин "стабильный" относится к соединениям, обладающим достаточной стабильностью для проведения промышленного производства и введения млекопитающим с помощью известных в этой области методов. Обычно такие соединения являются стабильными при температуре 40°С или ниже, в отсутствие влаги или других химически реактивных условий, в течение как минимум одной недели.
Заместители могут быть представлены в различной форме. Эти формы известны опытным специалистам и являются взаимозаменяемыми. Например, метильный заместитель на фенильном кольце может быть представлен в любой из следующих форм:
Здесь взаимозаменяемо используются различные формы таких заместителей, как метил.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Для более полного понимания описываемого изобретения далее приводится его подробное описание.
Ингибиторы ICE в одном воплощении (А) данного изобретения имеют формулу α :
в которой:
Х1 представляет собой -СН;
g равно 0 или 1;
каждый J независимо выбран из группы, состоящей из -Н, -ОН и -F, при условии, что если первый и второй J связаны с С, и упомянутый первый J представляет собой -ОН, то второй J представляет собой -Н;
m равно 0, 1, или 2;
Т представляет собой -ОН, -СО-СО2Н, -CO2H, или любой биоизостерический заместитель для –СО2Н;
R1 выбран из группы, состоящей из следующих формул, в которых любой цикл может быть необязательно замещен одним или несколькими заместителями при любом атоме углерода на Q1, при любом атоме азота на R5, или при любом атоме на =O, -ОН, -СО2Н или галоген; любой насыщенный цикл может необязательно иметь одну или две кратные связи; и где R1 (е) и (у) необязательно конденсирован с бензольным кольцом;
R20 выбран из группы, состоящей из:
в которых каждый цикл С независимо выбран из группы, состоящей из бензо-, пиридо-, тиено-, пирроло-, фурано-, тиазоло-, изотиазоло-, оксазоло-, изоксазоло-, пиримидо-, имидазоло-циклов, циклопентила и циклогексила;
R3 представляет собой:
-CN,
-CH=CH-R9,
-CH=N-O-R9,
-(CH2)1-3-T1-R9,
-CJ2-R9,
-CO-R13, или
каждый R4 независимо выбран из группы, состоящей из:
-Н,
-Аr1,
-R9,
-T1-R9, и
-(CH2)1,2,3-T1-R9;
каждый T1 независимо выбран из группы, состоящей из:
СН=СН-,
-О-,
-S-,
-SO-,
-SO2-,
-NR10-,
-NR10-CO-,
-CO-,
-O-СО-,
-СО-O-,
-CO-NR10-,
-O-CO-NR10-,
-NR10-CO-O-,
-NR10-CO-NR10-,
-SO2-NR10-,
-NR10-SO2, и
-NR10-SO2-NR10-;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из:
-Н,
-Ar1,
-СО-Аr1,
-SO2-Ar1,
-CO-NH2,
-SO2-NH2,
-R9,
-CO-R9,
-CO-O-R9,
-SO2-R9,
R6 и R7 вместе образуют насыщенный 4-8-членный карбоцикл или гетероцикл, содержащий -О-, -S- или -NH-; или R7 представляет собой -Н, a R6 представляет собой
-Н
-Аr1,
-R9,
-(CH2)1,2,3-T1-R9, или
боковую цепь α -аминокислотного остатка;
каждый R9 представляет собой C1-6 алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, необязательно замещенную один или несколько раз -ОН, -F, или =O и необязательно замещенную одной или двумя Ar1 группами;
каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -Н или С1-6 алкилыюй группы с прямой или разветвленной цепью;
каждый R13 независимо выбран из группы, состоящей из: -Аr2, -R4 и
каждый Ar1 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда арильных групп, содержащих 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 циклов, циклоалкильную группу, содержащую от 3 до 15 атомов углерода и от 1 до 3 циклов, причем указанная циклоалкильная группа необязательно конденсирована с бензольным циклом, и гетероциклическую группу, содержащую от 5 до 15 кольцевых атомов и от 1 до 3 циклов, эта гетероциклическая группа содержит как минимум одну группу, содержащую гетероатом, выбранную из -О-, -S-, -SO-, -SO2-, =N- и -NH-, упомянутая гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, упомянутая гетероциклическая группа необязательно включает одно или несколько ароматических колец, причем, эта циклическая группа один или несколько раз необязательно замещена –NH2, -СО2Н, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -CN, =O, -ОН, перфтор С1-3алкилом, или Q1;
каждый Аr2 независимо выбран из следующей группы, в которой любой цикл может быть один или несколько раз необязательно замещен Q1 и О2:
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из:
-Аr1
-O-Аr1
-R9,
-T1-R9, и
-(CH2)1,2,3-T1-R9-;
каждой Q2 независимо выбран из группы, состоящей из: -ОН, -NH2, -СО2Н, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -CN, -СF3, и ;
при условии, что –Ar1 замещен группой Q1, которая включает одну или несколько дополнительных групп –Ar1, упомянутая дополнительная группа –Ar1 не замещена Q1;
каждый Х независимо выбран из группы, состоящей из=N- и=СН-;
каждый Х2 независимо выбран из группы, состоящей из: -О-, -СН2-, -NH-, -S-, -SO- и –SO2;
каждый Х3 независимо выбран из группы, состоящей из: -СН2-, -S-, -SO- и -SO2-;
каждый Х4 независимо выбран из группы, состоящей из: -СН2- и -NH-;
каждый Х5 независимо выбран из группы, состоящей из: и
;
Х6 представляет собой -СН- или -N-;
каждый Y независимо выбран из группы, состоящей из: -O-, -S- и -NH;
каждый Z независимо представляет собой СО или SO2;
каждое а независимо равно 0 или 1;
каждое с независимо равно 1 или 2;
каждое d независимо равно 0, 1 или 2; и
каждое е независимо равно 0, 1, 2 или 3;
при условии, если
R1 представляет собой (f),
R6 представляет собой боковую цепь α -аминокислотного остатка, и
R7 представляет собой -Н,
то (аа1) и (аа2) должны быть замещены Q1;
а также при условии, если
R1 представляет собой (о),
g равно 0,
J представляет собой -Н,
m равно 1,
R6 представляет собой боковую цепь α -аминокислотного остатка,
R7 представляет собой -Н,
Х2 представляет собой -СН2-,
Х5 представляет собой -СН-,
Х6 представляет собой -N-, и
R3 представляет собой или -CO-R13, если
R13 представляет собой:
-СН2-О-СО-Аr1,
-CH2-S-CO-Ar1,
-СН2-О-Аr1,
-CH2-S-Ar1 или
-R4, если –R4 является -Н;
то цикл группы R1 (о) должен быть замещен Q1 или конденсирован с бензолом; и при условии, если
R1 является (w),
g равно 0,
J является -Н,
m равно 1,
Т представляет собой -СО2Н,
Х2 является О,
R5 представляет собой бензилоксикарбонил, и
цикл С является бензоциклом,
то R3 не может быть -CO-R13, если:
R13 является -CH2-O-Ar1 и
Ar1 представляет собой 1-фенил-3-трифторметил-пиразол-5-ил, в котором фенил необязательно замещен атомом хлора;
или, если:
R13 представляет собой -СН2-О-СО-Аr1 где Ar1 представляет собой 2,6-дихлорофенил.
Предпочтительные соединения воплощения А имеют формулу α , в которой R1 представляет собой (w):
в котором другие заместители являются такими, как описаны выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения А имеют формулу α , в которой R1 представляет собой (у):
в котором другие заместители являются такими, как описано выше.
Более предпочтительные соединения воплощения А имеют формулу α , в которой:
X1 представляет собой -СН;
g равно 0;
J представляет собой -Н;
m равно 0 или 1, а Т представляет собой -CO-CO2H, или любой
биоизостерический заместитель –СО2Н, или
m равно 1, а Т представляет собой -СО2Н;
R1 выбран из группы, состоящей из соединений следующих формул, в которых любой цикл может быть один или несколько раз необязательно замещен при любом атоме углерода Q1, при любом атоме азота R5 или при любом атоме =O, -ОН, -СО2Н или галогеном, и где (е) необязательно конденсирован с бензолом:
и
R20 представляет собой:
или
и с равно 1;
цикл С является бензоциклом, необязательно замещенным –С1-3 алкилом, -O-C1-3 алкилом, -Cl, -F или –СF3;
если R1 представляет собой (а) или (b), R5 является предпочтительно -Н, а если R1 представляет собой (с), (е), (f), (о), (r), (w), (x) или (у), R5 является предпочтительно:
-CO-Ar1
-SO2-Ar1,
-CO-NH2,
-CO-NH-Ar1,
-CO-R9,
-CO-O-R9,
-SO2-R9, или
-CO-NH-R9,
R7 представляет собой -Н и R6 представляет собой: -Н,
-R9, или
-Ar1;
R9 представляет собой C1-6 алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, необязательно замещенную =O и необязательно замещенную -Ar1;
R10 представляет собой -Н или –C1-6 алкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
Ar1 представляет собой фенил, нафтил, пиридил, бензотиазолил, тиенил, бензотиенил, бензоксазолил, 2-инданил, или индолил необязательно замещенные -O-C1-3 алкилом, -NH-C1-3 алкилом, -N-(С1-3 алкил)2, -Сl, -F, -СF3, -С1-3 алкилом, или ;
Q1 представляет собой R9 или -(СН2)0,1,2-T1-(CH2)0,1,2-Ar1, где Т1 представляет собой -О- или -S-;
каждый Х независимо выбран из группы, состоящей из: =N- и =СН-;
каждый Х2 независимо выбран из группы, состоящей из: -O-, -CH2-, -NH-, -S-, -SO- и -SО2-;
каждый Х5 независимо выбран из группы, состоящей из: и
;
Х6 представляет собой и
;
при условии, если:
R1 представляет собой (о),
Х2 представляет собой –СН2-,
Х5 представляет собой , и
Х6 представляет собой ,
то цикл группы R1 (о) должен быть замещен Q1 или конденсирован с бензолом; и
Z представляет собой С=O.
Самыми предпочтительными соединениями этого более предпочтительного воплощения являются такие, в которых группа R1 представляет собой:
или
а с равно 2; или
или
которые необязательно конденсированы с бензолом,
а с равно 1 или 2;
при условии, если R1 представляет собой (е4),
g равно 0,
J представляет собой -H,
m равно 1,
Т представляет собой –СО2Н,
R5 представляет собой бензилоксикарбонил, и
с равно 1,
то R3 не может быть -СО-R13, если
R13 представляет собой –CH2-O-Ar1, где
Ar1 представляет собой 1-фенил-3-трифторметил-пиразол-5-ил, где фенил необязательно замещен атомом хлора; или если
R13 представляет собой -CH2-O-CO-Ar1, где
Ar1 представляет собой 2,6-дихлорфенил,
и если скелет цикла во 2 позиции замещен пара-фтор-фенилом; и
также при условии, если
R1 представляет собой (е7),
g равно 0,
J представляет собой -Н,
m равно 1,
Т представляет собой -CO2H или -CO-NH-OH,
R5 является защитной группой при атоме N боковой цепи аминокислотного остатка, и
каждый с равен 1,
то R3 не может быть -CO-R13 если R13 представляет собой:
-СН2-O-CO-Ar1,
-CH2-S-CO-Ar1,
-СН2-О-Аr1, или
-CH2-S-Ar1.
Самыми предпочтительными соединениями этого воплощения являются такие, в которых:
R1 представляет собой:
или
а с равно 2;
mравно 1;
Т представляет собой -СО2Н; и
R3 представляет собой -CO-R13.
Другими самыми предпочтительными соединениями этого воплощения являются такие, в которых:
R1 представляет собой:
где X2 представляет собой:
-О-,
-S-,
-SO2-, или
-NH-;
необязательно замещенный R5 или Q1 при Х2, если X2 представляет собой -NH-; и
цикл С является бензоциклом, замещенным –С1-3 алкилом, -O-С1-3 алкилом, -Сl, -F или –СF3.
Ингибиторы ICE другого воплощения (В) настоящего изобретения имеют формулу (I):
где:
R1 выбран из группы, состоящей из соединений следующих формул:
цикл С выбран из группы, состоящей из бензо-, пиридо-, тиепо-, пирроло-, фурано-, тиазоло-, изотиазоло-, оксазоло-, изоксазоло-, пиримидо-, имидазоло-циклов, циклопентила и циклогексила;
R2 представляет собой:
или
m равно 1 или 2;
R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9,
-S(O)2-R9,
-C(O)-CH2-O-R9,
-C(O)C(O)-R10,
-R9-
-Н, и
-C(O)C(O)-OR10;
Х5 представляет собой и
;
Y2 представляет собой Н2 или О;
Х7 представляет собой -N(R8)- или -О-;
R6 выбран из группы, состоящей из -Н и –СН3;
R8 выбран из группы, состоящей из:
-С(O)-R10,
-C(O)O-R9,
-C(O)-N(H)-R10,
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-CH2-OR10,
-C(O)C(O)-R10;
-C(O)-CH2N(R10)(R10),
-C(O)-CH2C(O)-O-R9,
-C(O)-CH2C(O)-R9,
-Н, и
-C(O)-C(O)-OR10;
каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из –Аr3 и –C1-9 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной Аr3, где –C1-6 алкильная группа необязательно ненасыщена;
каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -Н, -Аr3, С3-6 циклоалкильной группы и –С1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной Аr3, где –C1-6 алкильная группа необязательно ненасыщена;
R13 независимо выбран из группы, состоящей из -Н, -Аr3 и –C1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной Аr3, -CONH2, -OR5, -ОН, -OR9, или –СО2Н;
каждый R51 независимо выбран из группы, состоящей из R9, -C(O)-R9, -C(O)-N(H)-R9, или любые R51, взятые вместе, образуют насыщенный 4-8 карбоцикл, или гетероцикл, содержащий -О-, -S-, или -NH-;
каждый R21 независимо выбран из группы, состоящей из -Н или –C1-6 прямой или разветвленной алкильной группы;
каждый Аr3 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильных групп, содержащих 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 циклов, и ароматических гетероциклических групп, содержащих от 5 до 15 атомов кольца и от 1 до 3 циклов, упомянутая гетероциклическая группа содержит как минимум одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, SO2, =N- и -NH-, такая гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, упомянутая гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, и упомянутая циклическая группа может быть один или несколько раз необязательно замещена –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NН2, -СО2Н, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -CN, =O, -ОН, -перфтор С1-3 алкила, R5, -OR5, -NHR5, OR9, -NHR9, R9, -C(O)-R10 и
при условии, если –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп -Аr3, упомянутые добавочные -Аr3 группы не должны быть замещены другими -Аr3.
Предпочтительно R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10-
-C(O)O-R9 и
-C(O)-NH-R10-
Альтернативно, R5 выбран из группы, состоящей из:
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-C(O)-R10,
-R9 и
-C(O)-C(O)-OR10,
Более предпочтительно:
m равно 1;
R13 представляет собой Н или –С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, -OR9 или –СО2Н, где R9 представляет собой –С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, в которой Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
R21 представляет собой -Н или -СН3;
R51 представляет собой C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную -Аr3, где Аr3 является фенилом, необязательно замещенным Q1;
Аr3 представляет собой фенил, нафтил, тиенил, хинолинил, изохинолинил, пиразолил, тиазолил, изоксазолил, бензотриазолил, бензимидазолил, тиенотиенил, имидазолил, тиадиазолил, бензо[b]тиофенил, пиридил бензофуранил, и индолил;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -NHR9 и , где каждый R9 и R10 независимо представляют собой С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Ar3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Ингибиторы ICE другого воплощения (С) настоящего изобретения имеют формулу (II):
в которой:
m равно 1 или 2;
R1 выбран из группы, состоящей из соединений следующих формул:
и
цикл С выбран из группы, состоящей из бензо-, пиридо-, тиено-, пирроло-, фурано-, тиазоло-, изотиазоло-, оксазоло-, изоксазоло-, пиримидо-, имидазоло-циклов, циклопентила и циклогексила;
R3 выбран из группы, состоящей из:
-CN,
-С(O)-Н,
-С(O)-СН2-T1-R11,
-C(O)-CH2-F,
-C=N-O-R9 и
-СО-Аr2;
R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9,
,
-S(O)2-R9,
-C(O)-CH2-O-R9,
-C(O)C(O)-R10,
-R9,
-Н и
-C(O)C(O)-OR10,
X5 представляет собой и
;
Y2 представляет собой H2 или О;
Х7 представляет собой -N(R8)- или -О-;
каждый T1 независимо выбран из группы, состоящей из -О-, -S-, -S(O)- и -S(O)2-;
R6 выбран из группы, состоящей из -Н и –СН3;
R8 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9,
-C(O)-NH-R10,
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-CH2-OR10,
-C(O)C(O)-R10,
-C(O)-CH2-N(R10)(R10),
-C(O)-CH2C(O)-O-R9,
-С(O)-СН2С(O)-R9,
-Н и
-C(O)-C(O)-OR10;
каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из –Аr3 и С1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной –Аr3, где –С1-6 алкильная группа является необязательно замещенной;
каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -Н, -Аr3, С3-6 циклоалкильной группы и C1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной –Аr3, где –C1-6 алкильная группа является необязательно замещенной;
каждый R11 независимо выбран из группы, состоящей из
-Аr4,
-(СН2)1-3-Аr4,
-Н, и
-С(O)-Аr4;
R13 выбран из группы, состоящей из Н, Аr3 и С1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной Аr3, -CONH2, -OR5, -ОН, -OR9 или –СО2Н; -OR13 необязательно является -N(H)-OH;
каждый R21 независимо выбран из группы, состоящей из -Н или С1-6 прямой или разветвленной алкильной группы;
Аr2 независимо выбран из следующей группы, в которой любой цикл может быть один или несколько раз необязательно замещен –Q1:
и
где каждый Y независимо выбран из группы, состоящей из О и S;
каждый Аr3 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильных групп, содержащих 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 циклов, и ароматических гетероциклических групп, содержащих от 5 до 15 циклических атомов и от 1 до 3 циклов, упомянутые гетероциклические группы содержат как минимум одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, SO2, =N- и -NH-, -N(R5)- и -N(R9)-, эти гетероциклические группы необязательно содержат одну или несколько двойных связей, упомянутые гетероциклические группы необязательно содержат одно или несколько ароматических колец, и упомянутые циклические группы один или несколько раз необязательно замещены –Q1;
каждый Аr4 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильных групп, содержащих 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 циклов, и гетероциклических групп, содержащих от 5 до 15 атомов кольца и от 1 до 3 циклов, упомянутые гетероциклические группы содержат как минимум одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, SO2, =N-, -NH-, -N(R5)- и -N(R9)-, эти гетероциклические группы необязательно содержат одну или несколько двойных связей, упомянутые гетероциклические группы необязательно содержат одно или несколько ароматических колец, и упомянутые циклические группы один или несколько раз необязательно замещены –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -СО2Н, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -CN, =O, -ОН, -перфтор С1-3 алкила, R5, -OR5, -NHR5, OR9, -NHR9, R9, -C(O)-R10 и
при условии, что когда –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, то упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Предпочтительные соединения этого воплощения включают, не ограничиваясь ими, следующие соединения:
Предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е11), а другие заместители являются такими, как определено выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е12), а другие заместители являются такими, как определено выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (у1), а другие заместители являются такими, как определено выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (у2), а другие заместители являются такими, как определено выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (z), а другие заместители являются такими, как определено выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (w2), а другие заместители являются такими, как определено выше.
Более предпочтительно R1 представляет собой (w2) и m равно 1;
цикл С является бензо-, пиридо- или тиено-циклом;
R3 выбран из группы, состоящей из -С(O)-Н, -С(O)-Аr2 и -C(O)CH2-T1-R11;
R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10, где R10 представляет собой –Аr3;
-C(O)O-R9, где R9 представляет собой –СН2-Аr3;
-C(O)C(O)-R10, где R10 представляет собой –СН2Аr3;
-R9, где R9 представляет собой C1-2 алкильную группу, замещенную –Аr3;
и -C(O)C(O)-OR10, где R10 представляет собой –СН2Аr2;
T1 является О или S;
R6 представляет собой Н;
R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)-CH2-OR10 и -C(O)CH2-N(R10)(R10), где R10 является Н, СН3 или –СН3СН3;
R11 выбран из группы, состоящей из –Аr4, -(СН2)1-3-Аr4 и -С(O)-Аr4;
R13 представляет собой Н или С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, -ОН, -OR9 или –СО2Н, где R9 представляет собой С1-4 разветвленную или прямую алкильную группу, где Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
Аr2 представляет собой (hh);
Y представляет собой О;
Аr3 представляет собой фенил, нафтил, тиенил, хинолинил, изохинолинил, тиазолил, бензимидазолил, тиенотиенил, тиадиазолил, бензотриазолил, бензо[b]тиофенил, бензофуранил и индолил;
Аr4 представляет собой фенил, тетразолил, нафтил, пиридинил, оксазолил, пиримидинил или индолил;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из —NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -NHR9 и , где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Предпочтительные соединения данного воплощения включают, не ограничиваясь ими, следующие соединения:
Другие предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СН, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СН, R3 представляет собой СО-Аr2, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СН, R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11, R11 представляет собой -(СН2)1-3-Аr4, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СН и
R9 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11;
Т1 является О; и
R11 представляет собой -С(O)-Аr4,
а другие заместители являются такими, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), X5 представляет собой СH, R3 представляет собой
-С(O)-Н, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), X5 представляет собой СН, R3 представляет собой -С(O)-СН2-Т1-R11, R11 представляет собой – Аr4, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, R3 представляет собой СО-Аr4, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11, R11 представляет собой -(СН2)1-3-Ar4, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N и
R3 представляет собой -С(O)-СН2-Т1-R11;
T1 является О; и
R11 представляет собой -(СО)-Аr4, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, R3 представляет собой
-С(O)-Н, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения С имеют формулу (II), где R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, R3 представляет собой
-С(O)-СН2-Т1-R11, R11 представляет собой –Аr4, а другие заместители являются такими, как определены выше.
Более предпочтительно, если в этих более предпочтительных соединениях
R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9 и
-C(O)-NH-R10.
Альтернативно в этих более предпочтительных соединениях R5 выбран из группы, состоящей из:
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-C(O)-R10,
-R9 и
-C(O)-C(O)-OR10.
Наиболее предпочтительно, если в этих более предпочтительных соединениях
m равно 1;
T1 представляет собой О или S;
R13 представляет собой Н или –C1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, -OR9 или –СО2Н, где R9 представляет собой С1-4 разветвленную или прямую алкильную группу, Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
R21 представляет собой -Н или –СН3;
R51 представляет собой C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, где Аr3 является фенилом, необязательно замещенным Q1;
Аr2 представляет собой (hh);
Y представляет собой О, и
Аr3 представляет собой фенил, нафтил, тиенил, хинолинил, изохинолинил, пиразолил, тиазолил, изоксазолил, бензотриазолил, бензимидазолил, тиенотиенил, имидазолил, тиадиазолил, бензо[b]тиофенил, пиридил,бензофуранил и индолил;
Ar4 представляет собой фенил, тетразолил, пиридинил, оксазолил, нафтил, пиримидинил или тиенил;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -С(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -NHR9 и , где каждый R9 R10 независимо представляют собой –С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Предпочтительные соединения воплощения (В) включают, не ограничиваясь ими, следующие соединения:
Предпочтительные соединения воплощения (С) включают, не ограничиваясь ими, следующие соединения:
Характерные соединения данного изобретения также включают, не лимитируясь ими, соединения, в структуру которых включены строительные блоки 1-22:
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
в которых:
R представляет собой
,
,
где R13 представляет собой –СН3, -CH2СН3, -СН2CH2СН3, -СН(СН3)(СН3), -СН2СН2СН2СН3, -СН2-СН(СН3)СН3, -С(СН3)3, -CH2Ph, или
,
,
где
R13 представляет собой –СH3, -СН2СН3, -СН2СH3СН3, -СН(СН3)(СН3), -СН2CH2СН2СН3, -СН2-СН(СН3)СН3, -С(СН3)3, -CР2Ph, или
,
и каждый R51 представляет собой –СН3, -СН2СН3, -СН2СН2СН3, -СН(СН3)(СН3), -СН2СН2СН2СН3, -СН2-СН(СН3)СН3, -С(СН3)3, -СН2Рh, или, взятые вместе, они образуют этилендиоксиацеталь, или пропилендиоксиацеталь; или
,
где R51 представляет собой –СН3, -СН2СН3, -СН2СН2СН3, -СН(СН3)(СН3), -СН2СН2СН2СН3, -СН2-СН(СН3)СН3, -С(СН3)3, -CH2Ph, -С(O)-СН3 или -C(O)-Ph;
R5 в каждом из вышеперечисленных соединений является таким же, как фрагменты R5, описанные для соединений: 139, 214с, 214е, 404-413, 415-491, 493-501. Характерные соединения данного изобретения также включают, не лимитируясь ими, соединения, в структуру которых включены строительные блоки 1-28, в которых R, R51 и R5 являются такими, как определены выше, и в которых группа -С(O)- фрагмента R5 соединений 214с, 214е, 404-413, 415-418, 422-426, 430-456, 458-466, 468, 470-471, 473-491, 493, 495, 497-501 замещена на –СН2-, -С(O)С(O) или -СН2С(O)С(O)-.
Ингибиторы ICE другого воплощения (D) настоящего изобретения имеют формулу (I):
где:
;
;
и цикл С выбран из группы, состоящей из бензо-, пиридо-, тиено-, пирроло-, фурано-, тиазоло-, изотиазоло-, оксазоло-, изоксазоло-, пиримидо, имидазоло-циклов, циклопентила и циклогексила;
R2 представляет собой:
,
или
;
m равно 1 или 2;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9,
-C(O)-N(R10)(R10)
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-CH2-O-R9,
-C(O)C(O)-R10,
-R9,
-H,
-C(O)C(O)-OR10 и
-C(O)C(O)-N(R9)(R10);
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -СО2Н, -Cl, -F, -Вr, I, -NO2, -CN, =О, -ОН, -перфтор С1-3 алкил, R5, -OR5, -NHR5, OR9, -N(R9)(R10), R9, -С(O)-R10 и ,
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3;
а другие заместители являются такими, как определены в воплощении (В).
Предпочтительно R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9 и
-C(O)-NH-R10.
Альтернативно R5 выбран из группы, состоящей из:
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-C(O)-R10,
-R9 и
-C(O)-C(O)-OR10.
Более предпочтительно:
m равно 1;
R13 представляет собой Н или -С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, -OR9 или –СО2Н, где R9 представляет собой С1-4 разветвленную или прямую алкильную группу, Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
R21 представляет собой Н или –СН3;
R51 представляет собой С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, где Аr3 является фенилом, необязательно замещенным Q1;
каждая циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, пиридила, бензофуранила и индолила, причем упомянутая циклическая группа может иметь один или несколько заместителей Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -ОR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -N(R9)(R10) и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Ингибиторы ICE другого воплощения (Е) настоящего изобретения имеют формулу (II):
где:
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9,
-C(O)-N(R10)(R10)
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-CH2-O-R9,
-C(O)C(O)-R10,
-R9,
-H,
-C(O)C(O)-OR10 и
-C(O)C(O)-N(R9)(R10);
R15 независимо выбран из группы, состоящей из -ОН, -ОАr3, -N(H)-OH и –OC1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной –Аr3, -CONH2, -OR5, -ОН, OR9 или –СО2Н;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -СО2Н, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -CN, =O, -ОН, -перфтор C1-3 алкил, R5, -OR5, -NHR5, OR9, -N(R9)(R10), R9, -C(O)-R10 и ,
при условии, что –Ar3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3;
а другие заместители являются такими, как определены в воплощении (С).
Предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е11), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е12), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (у1), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (у2), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (z), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (w2), а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительно R1 представляет собой (w2) и
m равно 1;
цикл С является бензо-, пиридо- или тиено-циклом;
R3 выбран из группы, состоящей из -С(O)-Н, -С(O)-Аr2 и -C(O)CH2-T1-R11;
R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3;
-C(O)O-R9, где R9 является –СН2-Аr3;
-C(O)C(O)-R10, где R10 является –Аr3;
-R9, где R9 является C1-2 алкильной группой, замещенной –Аr3; и
-C(O)C(O)-OR10, где R10 является –СН2Аr3;
T1 представляет собой О или S;
R6 представляет собой Н;
R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)-CH2-OR10 и -С(O)СН2-N(R10)(R10), где R10 является Н, СН3 или –СН2СН3;
R11 выбран из группы, состоящей из -Ar4, -(CH2)1-3-Ar4 и -С(O)-Аr4;
R15 представляет собой -ОН или –OC1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Ar3, -ОН, OR9 или –СО2Н, где R9 представляет собой –С1-4 разветвленную или прямую алкильную группу, Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
Аr2 представляет собой (hh);
Y представляет собой О;
каждая циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, тиазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, тиадиазолила, бензотриазолила, бензо[b]тиофенила, бензофуранила и индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждая циклическая группа Аr4 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, тетразолила, нафтила, пиридинила, оксазолила, пиримидинила или индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -N(R9)(R10) и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Другие предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СН, а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СН, R3 является СО-Аr2, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СН, R3 является -С(O)-СН2-T1-R11, R11 является -(CH2)1-3-Ar4, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СН, R3 является -С(O)-СН2-T1-R11, T1 представляет собой О, R11 является -(СО)-Аr4, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СH, R3 является -С(O)-Н, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СH, R3 является -CO-CH2-T1-R11, R11 является -Аr4, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, R3 является СО-Аr2, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, R3 является -С(O)-СН2-Т1-R11, R11 является -(СН2)1-3-Аr4, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N и:
R3 является -C(O)-CH2-T1-R11;
T1 представляет собой О; и
R11 является -(СО)-Аr4, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, R3 является -С(O)-Н, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие более предпочтительные соединения воплощения Е имеют формулу (II), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, R3 является -CO-CH2-T1-R11, R11 является -Аr4, а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительно, когда в этих более предпочтительных соединениях R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9 и
-C(O)-NH-R10.
Альтернативно в этих более предпочтительных соединениях R5 выбран из группы, состоящей из:
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-C(O)-R10,
-R9 и
-C(O)C(O)-OR10.
Предпочтительнее всего, когда в этих более предпочтительных соединениях
m равно 1;
T1 представляет собой О или S;
R15 представляет собой -ОН или -ОС1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, OR9 или –СО2Н, где R9 представляет собой –С1-4 разветвленную или прямую алкильную группу, Ar3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
R21 представляет собой -Н или СН3;
Аr2 представляет собой (hh);
Y представляет собой О, и
каждая циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, бензофуранила и индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждая циклическая группа Аr4 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, тетразолила, пиридинила, оксазолила, нафтила, пиримидинила или тиенила, причем упомянутая циклическая группа может иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NН2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -С(O)2-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляетсобой -C(O)-R10, -OR9, -N(R9)(R10) и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Ингибиторы ICE другого воплощения (F) настоящего изобретения имеют формулу (III):
где R1 и R2 такие, как описаны в воплощении (D).
Предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (w2), а другие заместители такие, как определены выше.
Предпочтительно, когда r) представляет собой (w2):
m равно 1;
цикл С является бензо-, пиридоили тиено-циклом;
R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3;
-C(O)O-R9, где R9 является –СН2-Аr3;
-С(O)С(O)-R10, где R10 является –Аr3;
-R9, где R9 является C1-2 алкильной группой, замещенной –Аr3; и -C(O)C(O)-OR10, где R10 является –CH2Ar3;
R6 представляет собой Н;
R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)-CH2-OR10 и -С(O)СН2-N(R10)(R10), где R10 является Н, СН3 или –СН2СН3;
R13 представляет собой Н или -С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, OR9 или –СО2Н, где R9 представляет собой -С1-4 алкильную группу с разветвленной или прямой цепью, Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
Аr3 представляет собой фенил, нафтил, тиенил, хинолинил, изохинолинил, тиазолил, бензимидазолил, тиенотиенил, тиадиазолил, бензотриазолил, бензо[b]тиофенил, бензофуранил и индолил;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -NHR9 и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (е11), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (е12), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (у1), а другие заместители такие, как определены выше;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Более предпочтительно, когда в этих более предпочтительных соединениях циклическая группа Аr3 выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, бензофуранила и индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1.
К соединениям предпочтительной формы воплощения F относятся такие, в которых:
R5 представляет собой -С(O)-R10, где
R10 представляет собой –Аr3, где циклическая группа Аr3 является фенилом, причем упомянутая циклическая группа может быть необязательно замещена один или несколько раз следующими заместителями:
-F,
Сl,
-N(H)-R5, где R5 является -Н или -C(O)-R10, где R10 представляет собой –С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где циклическая группа Аr3 является фенилом, причем упомянутая циклическая группа может быть необязательно замещена один или несколько раз Q1,
-N(R9)(R10), где R9 и R10 независимо представляют собой –C1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, или
-O-R5, где R5 представляет собой Н или -С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу.
Более предпочтительно циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, необязательно замещенный один или несколько раз по 3 или 5 положению -Сl или по 4 положению -N(H)-R5, -N(R9)(R10) или -O-R5.
Другие предпочтительные соединения воплощения F включают такие, в которых R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 является Аr3, а циклическая группа Аr3 выбрана из группы, состоящей из индолила, бензимидазолила, тиенила и бензо[b]таофенила, причем упомянутая циклическая группа может быть необязательно замещена один или несколько раз Q1.
Другие предпочтительные соединения воплощения F включают такие, в которых R5 представляет собой -С(O)-R10, где R10 является Аr3, а циклическая группа Аr3 выбрана из хинолила и изохинолила, причем упомянутая циклическая группа может быть необязательно замещена один или несколько раз Q1.
Другие предпочтительные соединения воплощения F это такие, в которых R5 представляет собой -С(O)-R10, где R10 является Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, замещенный .
В другой форме воплощения F соединения являются такими, как описано выше, при дополнительном условии, что если:
m равно 1;
R1 является (е10);
Х5 является СH;
R15 является -ОН;
R21 является -Н;
Y2 является О и R3 является -С(O)-Н, то R5 не может быть:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, замещенный Q1, 4-(карбометокси)фенилом, 2-фторфенилом, 2-пиридилом, N-(4-метилпиперазин)метилфенилом, или
-C(O)-R9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
-C(O)-R9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
Y2 является О, R3 является -C(O)-CH2-T1-R11, T1 является О, а R11 является Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 5-(1-(4-хлорфенил)-3-трифторметил)пиразолил, то R5 не может быть:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой 4-(диметиламинометил)фенил, фенил, 4-(карбоксиметилтио)фенил, 4-(карбоксиэтилтио)фенил, 4-(карбоксиэтил)фенил, 4-(карбоксипропил)фенил, 2-фторфенил, 2-пиридил, N-(4-метилпиперазин)метилфенил, или
-C(O)-R9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил;
и, если R11 является Аr4, где циклическая группа А4 представляет собой 5-(1-фенил-3-трифторметил)пиразолил, то R5 не может быть:
-C(O)-R9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил;
и, если R11 является Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 5-(1-(2-пиридил)-3-трифторметил)пиразолил, то R5 не может быть:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой 4-(диметиламинометил)фенил, или
-C(O)-R9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
Y2 является O, R3 является -C(O)-CH2-T1-R11, T1 является О, а R11 является -С-(O)-Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 2,5-дихлорфенил, то R5 не может быть:
-C(O)-R10, где R10 является –Ar3, а циклическая группа Аr3 представляет собой 4-(диметиламинометил)фенил, 4-(N-морфолинметил)фенил, 4-(N-(метилпиперазин)метил)фенил, 4-(N-(2-метил)имидазолметил)фенил, 5-бензимидазолил, 5-бензтриазолил, N-карбоэтокси-5-бензтриазолил, N-карбоэтокси-5-бензимидазолил, или
-C(O)-R9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
Y2 является Н2, R3 является -С(O)-СН2-Т1-R11, T1 является О, а R11 является -С-(O)-Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 2,5-дихлорфенил, то R5 не может быть:
-C(O)-R9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил.
В другой форме воплощения F соединения являются такими, в которых R21 представляет собой -Н.
Альтернативно, предпочтительные соединения это такие, в которых R21 представляет собой –СН3.
Предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 является (w2), а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительно, когда R1 представляет собой (w2) и
m равно 1;
цикл С является бензо-, пиридо- или тиено-циклом;
R3 выбран из группы, состоящей из -С(O)-Н, -С-(O)-Аr2 и -C(O)CH2-T1-R11;
R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3;
-C(O)O-R9, где R9 является –СН2-Аr3;
-C(O)C(O)-R10, где R10 является –Аr3;
-R9, где R9 является С1-2 алкильной группой, замещенной –Аr3; и
-C(O)C(O)-OR10, где R10 является -СН2Аr3;
T1 является О или S;
R6 представляет собой Н;
R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)-CH2-OR10 и -С(O)СН2-N(R10)(R10), где R10 является Н, СН3 или -СН2СН3;
R11 выбран из группы, состоящей из -Аr4, -(СН2)1-3-Аr4, и -С(O)-Аr4;
R15 представляет собой Н или –ОС1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, OR9 или –СО2Н, где R9 представляет собой –С1-4 алкильную группу с разветвленной или прямой цепью, Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
Аr2 является(hh);
Y является О;
каждая циклическая группа Аr3 выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, тиазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, тиадиазолила, бензотриазолила, бензо[b]тиофенила, бензофуранила и индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждая циклическая группа Ar4 выбрана из ряда, состоящего из фенила, тетразолила, нафтила, пиридинила, оксазолила, пиримидинила или индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -N(R9)(R10) и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (е11), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (е12), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (у1), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (у2), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (z), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 является СН, а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения F имеют формулу (III), в которой R1 представляет собой (е10), Х5 является N, а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительно, когда в этих более предпочтительных соединениях R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9 и
-C(O)-NH-R10.
Альтернативно в этих более предпочтительных соединениях R5 выбран из группы, состоящей из:
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-C(O)-R10,
-R9,
-C(O)C(O)-OR10 и
-C(O)-C(O)-N(R9)(R10).
Предпочтительнее всего, когда в этих более предпочтительных соединениях
m равно 1;
R13 представляет собой -Н или –С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, OR9 или –СО2Н, где R9 представляет собой –С1-4 разветвленную или прямую алкильную группу, Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
R21 представляет собой -Н или СН3;
R51 представляет собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, где Аr3 является фенилом, необязательно замещенным Q1;
каждая циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, пиридила, бензофуранила и индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -N(R9)(R10) и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Предпочтительные соединения воплощения (F) включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Ингибиторы ICE другого воплощения (G) настоящего изобретения имеют формулу (IV):
где
m равно 1 или 2;
R1 выбран из группы, состоящей из соединений следующих формул:
;
;
;
;
;
;
; и
R15 независимо выбран из группы, состоящей из -ОН, -ОАr3, -N(H)-OH и –OC1-6, где С1-6 является прямой или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенной –Аr3, -СОNН2, -OR5, -ОН, OR9 или –CO2H;
Ar2 независимо выбран из следующей группы, в которой любой цикл может быть один или несколько раз необязательно замещен –Q1 или фенилом, необязательно замещенным Q1:
и
,
где каждый Y независимо выбран из группы, состоящей из О и S;
а другие заместители являются такими, как определены в воплощении (Е).
Предпочтительные соединения воплощения G имеют формулу (IV), в которой R1 представляет собой (w2), а другие заместители являются такими, как определены выше.
Предпочтительно, когда R1 представляет собой (w2):
mравно 1;
цикл С является бензо-, пиридо- или тиено-циклом;
R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3;
-C(O)O-R9, где R9 является –СН2-Аr3;
-C(O)C(O)-R10, где R10 является –Аr3;
-R9, где R9 является C1-2 алкильной группой, замещенной –Аr3; и
-C(O)C(O)-OR10, где R10 является –ОH2Аr3;
R6 представляет собой Н;
R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)-CH2-OR10 и -С(O)СН2- N(R10)(R10), где R10 является Н, СН3 или –СН2СН3;
R13 представляет собой Н или –С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, OR9, -СО2Н, где R9 представляет собой -С1-4 алкильную группу с разветвленной или прямой цепью, Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
Аr3 представляет собой фенил, нафтил, тиенил, хинолинил, изохинолинил, тиазолил, бензимидазолил, тиенотиенил, тиадиазолил, бензотриазолил, бензо[b]тиофенил, бензофуранил и индолил;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -NHR9 и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Другие предпочтительные соединения воплощения G имеют формулу (IV), в которой R1 представляет собой (е10-А), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения G имеют формулу (IV), в которой R1 представляет собой (е11), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения G имеют формулу (IV), в которой R1 представляет собой (е12), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения G имеют формулу (IV), в которой R1 представляет собой (у1), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения G имеют формулу (IV), в которой R1 представляет собой (у2), а другие заместители такие, как определены выше.
Другие предпочтительные соединения воплощения G имеют формулу (IV), в которой R1 представляет собой (z), а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительными соединениями воплощения G являются такие, в которых R3 представляет собой -СО-Аr2.
Наиболее предпочтительно, когда R3 представляет собой -СО-Аr2, Y является О.
Другие более предпочтительные соединения это такие, в которых R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11, а R11 является -(CH2)1-3-Ar4.
Наиболее предпочтительно, когда R3 представляет собой -С(O)-СН2-Т1-R11, a R11 является -(CH2)1-3-Ar4 и T1 является О.
Другие более предпочтительные соединения это такие, в которых:
R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11;
Т1 является О; и
R11 является -С(O)-Аr4.
Другие более предпочтительные соединения это такие, в которых R3 представляет собой -С(O)-Н.
Другие более предпочтительные соединения это такие, в которых R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11, а R11 является -Аr4.
Более предпочтительно, когда R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11, a R11 является -Ar4, T1 является О или S.
Более предпочтительно, когда R1 представляет собой (e11), (e12), (у1), (у2), (z), (е10-А) и (e10-B), R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9 и
-C(O)-NH-R10.
Альтернативно, когда R1 представляет собой (e11), (е12), (у1), (у2), (z), (е10-А) и (e10-B), R5 выбран из группы, состоящей из:
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-C(O)-R10,
R9,
-C(O)-C(O)-OR10 и
-C(O)-C(O)-N(R9)(R10).
Более предпочтительно R5 представляет собой -C(O)-C(O)-R10.
Альтернативно R5 представляет собой -C(O)-C(O)-OR10.
Наиболее предпочтительно, когда R1 представляет собой (e11), (e12), (у1), (у2), (z), (e10-A) и (e10-B):
m равно 1;
R21 представляет собой -Н или СН3;
R51 представляет собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, где циклическая группа Аr3 является фенилом, причем упомянутая циклическая группа один или несколько раз необязательно замещена –Q1;
каждая циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, пиридила, бензофуранила или индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -N(R9)(R10) и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где циклическая группа Аr3 является фенилом, и упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Более предпочтительно, если в этих предпочтительных соединениях циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, бензофуранила и индолила, и упомянутая циклическая группа один или несколько раз необязательно замещена –Q1;
Соединениями в предпочтительной форме воплощения G являются такие, в которых R21 представляет собой Н, а другие заместители такие, как определены выше.
Соединениями в другой предпочтительной форме воплощения G являются такие, в которых R21 представляет собой СН3, а другие заместители такие, как определены выше
Ингибиторы ICE другого воплощения (G) настоящего изобретения имеют формулу (V):
где R1 представляет собой:
;
R21 представляет собой СН3;
а другие заместители такие, как определены выше в воплощении (G).
Соединения другой формы воплощения (I) (форма 1) имеют формулу (V):
где R1 представляет собой:
;
каждый R5 представляет собой -C(O)-C(O)-OR10;
а другие заместители такие, как определены выше в воплощении (G).
Альтернативно, соединения этой формы воплощения I (формы 2) - это такие, в которых R21 представляет собой СН3.
Соединения другой формы воплощения (J) (форма 1) имеют формулу (V):
в которой
R1 представляет собой:
;
а другие заместители такие, как определены выше в воплощении (G).
при условии, если:
m равно 1;
R1 является (е10);
Х5 является СН;
R15 является -ОН;
R21 является -H; и
Y2 является О и R3 является -С(O)-Н, то R5 не может быть:
-С(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный –Q1, 4-(карбоксиметокси)фенилом, 2-фторфенилом, 2-пиридилом, N-(4-метилпиперазин)метилфенилом, или
-C(O)-OR9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
Y2 является О, R3 является -C(O)-CH2-T1-R11, T1 является О, а R11 является Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 2,5-дихлорфенил, то R5 не может быть:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой 4-(диметиламинометил)фенил, фенил, 4-(карбоксиметилтио)фенил, 4-(карбоксиэтилтио)фенил, 4-(карбоксиэтил)фенил, 4-(карбоксипропил)фенил, 2-фторфенил, 2-пиридил, N-(4-мeтилпипepaзин)мeтилфeнил, или
-C(O)-OR9, где R10 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил;
и, если, R11 является -Аr4, а циклическая группа Аr4 представляет собой 5-(1-фенил-3-трифторметил)пиразолил, то R5 не может быть:
-C(O)-R9, где R9 является –СН3-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил;
и, если, R11 является -Аr4, а циклическая группа Аr4 представляет собой 5-(1-(2-пиридил)-3-трифторметил)пиразолил, то R5 не может быть:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой 4-(диметиламинометил)фенил, или
-C(O)-OR9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
Y2 является О, R3 является -C(O)-CH2-T1-R11, T1 является О, а R11 является -С-(O)-Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 2,5-дихлорфенил, то R5 не может быть:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой 4-(диметиламинометил)фенил, 4-(Н-морфолинметил)фенил, 4-(N-метилпиперазин)метилфенил, 4-(N-(2-метил)имидазолилметил)фенил, 5-бензимидазолил, 5-бензтриазолил, N-карбоэтокси-5-бензтриазолил, N-карбоэтокси-5-бензимидазолил, или
-C(O)-OR9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
Y2 является Н2, R3 является -C(O)-CH2-T1-R11, T1 является О, a R11 является -С-(O)-Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 2,5-дихлорфенил, то R5 не может быть:
-C(O)-R9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил;
и другие заместители являются такими, как описано выше в воплощении (G).
Соединениями другой формы воплощения J (форма 2) являются такие, в которых R21 представляет собой –СН3.
Соединениями другой формы воплощения J (форма 3) являются такие, в которых R5 представляет собой -C(O)-C(O)-OR10.
Соединениями другой формы воплощения J (форма 4) являются такие, в которых R5 представляет собой -C(O)-C(O)-OR10, a R21 представляет собой –СН3.
Предпочтительные соединения воплощений Н, I и J имеют формулу (V), в которой R3 представляет собой -СО-Аr2.
Более предпочтительно, когда R3 представляет собой -СО-Аr2, Y является О.
Предпочтительные соединения воплощений Н, I и J имеют формулу (V), в которой R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11 и R11 является -(СН2)1-3-Аr4.
Более предпочтительно, когда R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11 и R11 является -(CH2)1-3-Ar4, T1 является О.
Предпочтительные соединения воплощений Н, I и J имеют формулу (V), в которой R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11, T1 является О и R11 является -С(O)-Аr4.
Предпочтительные соединения воплощений Н, I и J имеют формулу (V), в которой R3 представляет собой -С(O)-Н.
Предпочтительные соединения воплощений Н, I и J имеют формулу (V), в которой R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11 и R11 является -Аr4.
Более предпочтительно, когда R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11 и R11 является -Ar4, T1 является О или S.
Более предпочтительными соединениями воплощений Н и J (формы 1 и 2) являются такие, в которых R5 выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9 и
-C(O)-NH-R10.
Альтернативно, более предпочтительными соединениями воплощений Н и J (формы 1 и 2) являются такие, в которых R5 выбран из группы, состоящей из:
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-C(O)-R10,
R9,
-C(O)-C(O)-OR10 и
-C(O)-C(O)-N(R9)(R10).
Более предпочтительно R5 представляет собой -C(O)-C(O)-R10.
Альтернативно R5 представляет собой -C(O)-C(O)-OR10.
Более предпочтительными соединениями воплощений Н, I (форма 2) и J (формы 2 и 4) являются такие, в которых:
m равно 1;
Y2 является О;
R15 представляет собой ОН или -ОС1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, OR9, -СО2Н, где R9 представляет собой –C1-4 алкильную группу с разветвленной или прямой цепью, Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
Аr2 является (hh);
Y является О; и
каждая циклическая группа Аr3 выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, пиридила, бензофуранила и индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждая циклическая группа Аr4 выбрана из ряда, состоящего из фенила, тетразолила, пиридила, оксазолила, нафтила, пиримидинила и тиенила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -N(R9)(R10) и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где циклическая группа Аr3 является фенилом, и упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Более предпочтительными соединениями воплощений I (форма 1) и J (форма 3) являются такие, в которых:
m равно 1;
R21 представляет собой -H или СН3;
R51 представляет собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, где циклическая группа Аr3 является фенилом, причем упомянутая циклическая группа один или несколько раз необязательно замещена –Q1;
каждая циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, пиридила, бензофуранила или индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -С(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -N(R9)(R10) и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где циклическая группа Аr3 является фенилом, и упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Предпочтительно, если в этих более предпочтительных соединениях циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, бензофуранила и индолила, и упомянутая циклическая группа один или несколько раз необязательно замещена –Q1.
Предпочтительными соединениями воплощений Н и J (формы 1 и 1) являются такие, в которых:
R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11;
T1 является О; и
R11 является -С(O)-Аr4, где циклическая группа Аr4 выбрана из ряда, состоящего из тетразолила, пиридила, оксазолила, пиримидинила и тиенила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1.
Предпочтительные соединения воплощений Н, I и J имеют формулу (V), в которой R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11, R11 является -Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой пиридил, и упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1.
Предпочтительными соединениями воплощения J (форма 1) являются такие, в которых:
R3 представляет собой -С(O)-Н и
R5 представляет собой -C(O)-R10, где
R10 является –Аr3, где циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, который может быть один или несколько раз замещен следующими заместителями:
-F,
-Сl,
-N(H)-R5, где R5 представляет собой -Н или -C(O)-R10, где R10 представляет собой –С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где
Аr3 является фенилом, -N(R9)(R10), где R9 и R10 независимо представляет собой –C1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, или
-О-R5, где R5 является Н или –С1-4 прямой или разветвленной алкильной группой.
Более предпочтительно, если Аr3 является фенилом, один или несколько раз необязательно замещенным по 3 или 5 положению -Сl или по 4 положению -NH-R5, -N(R9)(R10) или –ОR5.
Другими более предпочтительными соединениями воплощения J (форма 1) являются такие, в которых:
R3 представляет собой -С(O)-Н;
R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 выбрана из группы, состоящей из индолила, бензимидазолила, тиенила и бензо[b]тиофенила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1.
Другими более предпочтительными соединениями воплощения J (форма 1) являются такие, в которых:
R3 представляет собой -С(O)-Н;
R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 выбрана из хинолила и изохинолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1.
Другими более предпочтительными соединениями воплощения J (форма 1) являются такие, в которых:
R3 представляет собой -С(O)-Н;
R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 является фенилом, замещенным .
Предпочтительные соединения воплощения (J) включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Ингибиторы ICE другого воплощения (К) настоящего изобретения имеют формулу:
где:
R1 представляет собой:
, или
;
С является циклом, выбранным из ряда, состоящего из бензо-, пиридо-, тиено-, пирроло-, фурано-, тиазоло-, изотиазоло-, оксазоло-, изоксазоло-, пиримидо-, имидазоло-циклов, циклопентила и циклогексила; цикл может быть один или несколько раз замещен –Q1;
R2 представляет собой:
,
или
;
m равно 1 или 2;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из:
-C(O)-R10,
-C(O)O-R9,
-C(O)-N(R10)(R10)
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-CH2-O-R9,
-C(O)C(O)-R10,
-R9,
-H,
-C(O)C(O)-OR10 и
-C(O)C(O)-N(R9)(R10);
X5 представляет собой СН или N;
Y2 представляет собой H3 или О;
R6 выбран из группы, состоящей из -Н и –СН3;
R8 выбран из группы, состоящей из:
-С(O)-R10,
-C(O)O-R9,
-C(O)-N(H)-R10,
-S(O)2-R9,
-S(O)2-NH-R10,
-C(O)-CH2-OR10,
-C(O)C(O)-R10,
-C(O)-CH2-N(R10)(R10),
-C(O)-CH2C(O)-O-R9,
-C(O)-CH2C(O)-R9,
-Н и
-C(O)-C(O)-OR10;
каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из –Аr3 и –C1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной Аr3, где –C1-6 алкильная группа является необязательно замещенной;
каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -Н, -Аr3, -С3-6 циклоалкильной группы и –C1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной Аr3, где –C1-6 алкильная группа может быть ненасыщенной;
R13 выбран из группы, состоящей из Н, Аr3 и C1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной Аr3, -CONH2, -OR5, -ОН, -OR9 или –СО2Н;
каждый R51 независимо выбран из группы, состоящей из R9, -C(O)-R9,-C(O)-N(H)-R9, или любые R51, взятые вместе, образуют насыщенный 4-8-членный карбоцикл, или гетероциклическое кольцо, содержащее -О-, -S- или -NH-;
каждый R21 независимо выбран из группы, состоящей из -Н или –C1-6 прямой или разветвленной алкильной группы;
каждый Аr3 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильных групп, содержащих 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 циклов, и ароматических гетероциклических групп, содержащих от 5 до 15 циклических атомов и от 1 до 3 циклов, упомянутая гетероциклическая группа содержит как минимум одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, SO2, =N- и -NH-, эта гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, упомянутая гетероциклическая группа необязательно включает одно или несколько ароматических колец, и упомянутая циклическая группа один или несколько раз необязательно замещена –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -CO2H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -CN, =O, -ОН, -перфтор C1-3 алкила, R5, -OR5, -NHR5, -OR9, -N(R9)(R10), -R9, -C(O)-R10 и ,
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Предпочтительными соединениями данного воплощения являются такие, в которых:
m равно 1;
цикл С выбран из ряда, состоящего из бензо-, пиридо- или тиено-циклов, этот цикл может быть один или несколько раз замещен галогеном, -NH2, -NH-R5, -NH-R9, -OR10 или –R9, где R9 является –С1-4 прямой или разветвленной алкильной группой, a R10 является Н или –С1-4 прямой или разветвленной алкильной группой;
R6 представляет собой Н;
R13 представляет собой Н или -С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, -ОН, -OR9, -CO2H, где R9 представляет собой –C1-4 алкильную группу с разветвленной или прямой цепью, Аr3 является морфолинилом или фенилом, где фенил необязательно замещен Q1;
R21 представляет собой -Н или СН3;
R51 представляет собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную –Аr3, где Аr3 является фенилом, необязательно замещенным –Q1;
каждая циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, пиридила, бензофуранила или индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NН2, -Сl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет
собой -C(O)-R10, -OR9, -NHR9 и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Предпочтительно, если в данном предпочтительном воплощении R1 представляет собой (w2), а другие заместители такие, как определены выше.
Соединения данного предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
; и
Более предпочтительно, если R8 выбран из группы, состоящей из:
-С(O)-R10,
-C(O)O-R9,
-C(O)-CH2-OR10,
-C(O)-CH2C(O)-R9.
Наиболее предпочтительно, если R8 представляет собой -C(O)-CH2-OR10, а R10 является -Н или –СН3.
Альтернативно, в данном предпочтительном воплощении R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой СН, а другие заместители такие, как определены выше.
Альтернативно, в данном предпочтительном воплощении R1 представляет собой (е10), Х5 представляет собой N, а другие заместители такие, как определены выше.
Предпочтительно, если в любом из вышеперечисленных соединений воплощения (К) R5 представляет собой -C(O)-R10 или -C(O)-C(O)-R10, а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительно, когда R10 представляет собой Аr3, а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительно, если в этих более предпочтительных соединениях:
R5 представляет собой -C(O)-R10 и R10 представляет собой Аr3,
где циклическая группа Аr3 является фенилом, который может быть один или несколько раз замещен следующими группами:
-R9, где R9 представляет собой -С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу,
-F,
-Сl,
-N(H)-R5, где R5 представляет собой -Н или -С(O)-R10, где R10 представляет собой –С1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом,
-N(R9)(R10), где R9 и R10 независимо представляют собой –C1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, или
-O-R5, где R5 является Н или -С1-4 прямой или разветвленной алкильной группой.
Предпочтительные соединения данного более предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
;
;
;
Наиболее предпочтительно, когда Аr3 является фенилом, один или несколько раз замещенным в 3 или 5 положении -Сl или в 4 положении -N(H)-R5, -N(R9)(R10) или -О-R5.
Предпочтительные соединения данного наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
;
;
;
.
Другие предпочтительные соединения данного наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
;
;
;
Альтернативно, Аr3 является фенилом, один или несколько раз замещенным в 3 или 5 положении R9, где R9 представляет собой –C1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, и в 4 положении фенил замещен -О-R5.
Предпочтительные соединения данного наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Другие предпочтительные соединения этого наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
; и
.
Альтернативно, в этом более предпочтительном воплощении R5 представляет собой -С(O)-R10, где R10 является Аr3 и циклическая группа Аr3 выбрана из группы, состоящей из индолила, бензимидазолила, тиенила, хинолила, изохинолила и бензо(b)тиофенила, эта циклическая группа может быть один или несколько раз замещена –Q1.
Наиболее предпочтительно, когда циклическая группа Аr3 является изохинолилом.
Предпочтительные соединения этого наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
;
Другие предпочтительные соединения этого наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
.
Альтернативно, в этом более предпочтительном воплощении R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 представляет собой Аr3, и циклическая группа. Аr3 является фенилом, замещенным .
Предпочтительные соединения этого более предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
;
Другие соединения воплощения (К) включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
Ингибиторами ICE другого воплощения (L) настоящего изобретения являются соединения формулы:
,
в которой:
R1 выбран из группы, состоящей из соединений следующих формул:
;
R5 выбран из группы, состоящей из:
-CN,
-С(O)-Н,
-C(O)-CH2-T1-R11,
-C(O)-CH2-F,
-C=N-O-R9 и
-СО-Аr2;
каждый T1 независимо выбран из группы, состоящей из -О-, -S-, -S(O)- и -S(O)2-;
каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -Н, -Аr3, С3-6 циклоалкильной группы и –C1-6 прямой или разветвленной алкильной группы, необязательно замещенной Аr3, где –C1-6 алкильная группа необязательно ненасыщена;
каждый R11 независимо выбран из группы, состоящей из:
-Аr4,
-(СН2)1-3-Аr4,
-Н и
-С(O)-Аr4;
R15 выбран из группы, состоящей из -ОН, -ОАr3, -N(H)-OH и –OC1-6, где С1-6 является прямой или разветвленной алкильной группой, необязательно замещенной –Аr3, -CONH2, -OR5, -ОН, OR9 или -СO2Н;
Аr2 независимо выбран из следующей группы, в которой любой цикл может быть один или несколько раз замещен –Q1 или фенилом, необязательно замещенным Q1:
и
,
где каждый Y независимо выбран из группы, состоящей из О и S;
каждый Аr3 является циклической группой, независимо выбранной из ряда, состоящего из арильных групп, содержащих 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 циклов, и ароматических гетероциклических групп, содержащих от 5 до 15 циклических атомов и от 1 до 3 циклов, упомянутая гетероциклическая группа содержит как минимум одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, SO2, =N-, -NH-, -N(R5) и -N(R9)-, такая гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, упомянутая гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, и упомянутая гетероциклическая группа может быть один или несколько раз необязательно замещена –Q1;
каждый Аr4 является циклической группой, независимо выбранной из ряда, состоящего из арильных групп, содержащих 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 циклов, и ароматических гетероциклических групп, содержащих от 5 до 15 циклических атомов и от 1 до 3 циклов, упомянутая гетероциклическая группа содержит как минимум одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, SO2, =N-, -NH-, -N(R5) и -N(R9)-, такая гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, упомянутая гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, и упомянутая гетероциклическая группа может быть один или несколько раз необязательно замещена –Q1;
а другие заместители являются такими, как описаны выше в воплощении (К).
Предпочтительно,
m равно 1;
С представляет собой цикл, выбранный из ряда, состоящего из бензо-, пиридо- и тиено-циклов, этот цикл может быть один или несколько раз замещен галогеном, -NH2, -NH-R5, -NH-R9, -OR10 или -R9, где R9 является -С1-4 прямой или разветвленной алкильной группой, a R10 является Н или –С1-4 прямой или разветвленной алкильной группой;
T1 представляет собой О или S,
R6 представляет собой Н;
R11 выбран из группы, состоящей из -Аr4, -(СН2)1-3-Аr4 и -С(O)-Аr4;
Аr2 представляет собой (hh);
Y представляет собой О;
каждая циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, тиазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, тиадиазолила, бензотриазолила, бензо[b]тиофенила, бензофуранила и индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей -Q1;
каждая циклическая группа Аr4 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, тетразолила, нафтила, пиридинила, оксазолила, пиримидинила или индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -NHR9 и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом;
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные –Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
Предпочтительные соединения этого предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
;
.
Более предпочтительно, когда R3 представляет собой -С(O)-Аr2, а другие заместители такие, как описаны выше.
Альтернативно, R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11.
Альтернативно, R3 представляет собой -С(O)-Н.
Предпочтительно, когда в любом из вышеперечисленных соединений воплощения (L) R8 выбран из группы, состоящей из:
-С(O)-R10,
-C(O)O-R9,
-C(O)-CH2OR10 и
-C(O)-CH2C(O)-R9.
Более предпочтительно, когда R8 представляет собой -C(O)-CH2-OR10, a R10 представляет собой Н или СН3.
Альтернативно, ингибиторами ICE воплощения (L) настоящего изобретения являются соединения формулы:
в которой:
m равно 1;
R1 представляет собой:
;
Y2 является Н2 или О;
каждый T1 независимо выбран из группы, состоящей из –О- или -S-;
R21 является -Н или –СН3;
Аr2 представляет собой:
,
где Y является О;
каждая циклическая группа Аr3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, пиридила, бензофуранила и индолила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждая циклическая группа Аr4 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, тетразолила, пиридинила, оксазолила, нафтила, пиримидинила и тиенила, причем упомянутая циклическая группа может необязательно иметь один или несколько заместителей –Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из –NH2, -Cl, -F, -Вr, -ОН, -R9, -NH-R5, где R5 представляет собой -С(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5 где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -NHR9 и ,
при условии, что –Аr3 имеет замещающую группу Q1, которая содержит одну или несколько добавочных групп –Аr3, упомянутые добавочные -Аr3 группы не должны быть замещены другими –Аr3.
а другие заместители являются такими, как описано выше в воплощении (L);
при условии, если:
m равно 1;
R15 является -ОН;
R21 является -Н и
Y2 является О и R3 является -С(O)-Н, то R5 не может быть:
-С(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный –Q1, 4-(карбоксиметокси)фенил, 2-фторфенил, 2-пиридил, N-(4-метилпиперазин)метилфенил, или
-C(O)-R9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
Y2 является О, R3 является -C(O)-CH2-T1-R11, T1 является О, а R11 является Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 5-(1-(4-хлорфенил)-3-трифторметил)пиразолил, то R5 не может быть:
-Н;
-С(O)-ОR10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой 4-(диметиламинометил)фенил, фенил, 4-(карбоксиметилтио)фенил, 4-(карбоксиэтилтио)фенил, 4-(карбоксиэтил)фенил, 4-(карбоксипропил)фенил, 2-фторфенил, 2-пиридил, N-(4-метилпиперазин)метилфенил, или
-C(O)-R9, где R9 представляет собой изобутил или –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 является фенилом;
и, если, R11 является -Аr4, а циклическая группа Аr4 представляет собой 5-(1-фенил-3-трифторметил)пиразолил или 5-(1-(4-хлор-2-пиридинил)-3-трифторметил)пиразолил, то R5 не может быть:
-C(O)-OR9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил;
и, если, R11 является -Аr4, а циклическая группа Аr4 представляет собой 5-(1-(2-пиридил)-3-трифторметил)пиразолил, то R5 не может быть:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой 4-(диметиламинометил)фенил, или
-C(O)-OR9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
Y2 является О, R3 является -C(O)-CH2-T1-R11, T1 является О, а R11 является -С-(O)-Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 2,5-дихлорфенил, то R5 не может быть:
-C(O)-R10, где R10 является –Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой 4-(диметиламинометил)фенил, 4-(N-морфолинметил)фенил, 4-(N-метилпиперазин)метилфенил,4-(N-(2-метил)имидазолилметил)фенил, 5-бензимидазолил, 5-бензтриазолил, N-карбоэтокси-5-бензтриазолил, N-карбоэтокси-5-бензимидазолил, или
-C(O)-OR9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, незамещенный Q1; и, если
Y2 является H2, R3 является -C(O)-CH2-T1-R11, T1 является О, а R11 является -С-(O)-Аr4, где циклическая группа Аr4 представляет собой 2,5-дихлорфенил, то R5 не может быть:
-C(O)-OR9, где R9 является –СН2-Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил.
Предпочтительно, если в любом из вышеперечисленных воплощений (L) R3 является -С(O)-Н и R5 является -C(O)-R10 или -C(O)-C(O)-R10, а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительно, если R10 является –Аr3, а другие заместители такие, как определены выше.
Более предпочтительно, если в этих более предпочтительных соединениях:
R5 является -C(O)-R10 и R10 является –Аr3, где циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, который может быть один или несколько раз замещен следующими группами:
R9, где R9 представляет собой С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу;
-F,
-Сl,
-N(H)-R5, где -R5 представляет собой -Н или -C(O)-R10,
где R10 представляет собой –C1-6 прямую или разветвленную алкильную группу, необязательно замещенную Аr3, где Аr3 является фенилом,
-N(R9)(R10), где R9 и R10 независимо представляют собой С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу, или
-O-R5, где R5 представляет собой Н или –С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу.
Предпочтительные соединения этого предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Наиболее предпочтительно, если Аr3 является фенилом, который может быть один или несколько раз замещен по 3 или 5 положению -Сl или по 4 положению -N(H)-R5, -N(R9)(R10) или -O-R5.
Предпочтительные соединения этого наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Другие предпочтительные соединения этого наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Альтернативно Аr3 является фенилом, который может быть один или несколько раз замещен по 3 или 5 положению –R9, где –R9 представляет собой –С1-4 прямую или разветвленную алкильную группу; и по 4 положению -О-R5.
Предпочтительные соединения этого наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Другие предпочтительные соединения этого наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Альтернативно, в этом более предпочтительном воплощении:
R5 представляет собой -С(O)-R10, где R10 является Аr3, а циклическая группа Аr3 выбрана из группы, состоящей из индолила, бензимидазолила, тиенила, хинолила, изохинолила и бензо[b]тиофенила, причем упомянутая циклическая группа может быть один или несколько раз замещена –Q1.
Предпочтительные соединения этого более предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
; и
.
Наиболее предпочтительно, если циклическая группа Аr3 является изохинолином, и упомянутая циклическая группа может быть один или несколько раз замещена –Q1.
Предпочтительные соединения этого наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Другие предпочтительные соединения этого наиболее предпочтительного воплощения включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
.
Альтернативно, в этом более предпочтительном воплощении R5 представляет собой -С(O)-R10, где R10 является Аr3, а циклическая группа Аr3 представляет собой фенил, замещенный .
Предпочтительное соединение этого более предпочтительного воплощения включает, не лимитируясь им, следующее соединение:
.
Предпочтительное соединение этого более предпочтительного воплощения включает, не лимитируясь им, следующее соединение:
.
Другие соединения воплощения (L) включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Другие соединения воплощения (К) включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
Другие соединения воплощения (L) включают, не лимитируясь ими, следующие соединения:
; и
.
Самыми предпочтительными соединениями воплощений (К) и (L) являются такие, в которых циклическая группа Аr3 представляет собой изохинолин.
Соединения данного изобретения описаны в United States Application Serial Nos. 08/575,641 и 08/598,332, находящейся на рассмотрении одновременно с настоящей заявкой, и описание которой включено здесь в качестве ссылки.
Соединения данного изобретения имеют молекулярную массу, меньшую или равную 700 Дальтонам, более предпочтительно от 400 до 600 Дальтон. Эти предпочтительные соединения могут легко абсорбироваться кровопотоком пациентов при пероральном введении. Такое усвоение при оральном применении делает эти соединения замечательными лекарственными препаратами для режимов лечения и профилактики заболеваний, опосредованных IL-1, апоптозом, IGIF или IFN-γ , посредством перорального введения.
Следует понимать, что соединения настоящего изобретения могут существовать в виде различных равновесных форм, в зависимости от условий, включающих выбранный растворитель, рН, и другие, известные опытным специалистам. Все такие формы данных соединений специально включены в настоящее изобретение. В частности, многие соединения данного изобретения, особенно такие, которые содержат альдегидные или кетоновые группы в R3 и карбоксильные группы в Т, могут принимать полу-кетальные (или полу-ацетальные) или гидратированные формы. Например, соединения воплощения (А) могут принимать формы, указанные ниже:
EQ1
В зависимости от выбора растворителя и других условий, известных опытным специалистам, соединения настоящего изобретения могут также принимать ацилоксикетальную, ацилоксиацетальную, кетальную или ацетальную формы:
Кроме того, следует понимать, что равновесные формы соединений настоящего изобретения могут включать таутомерные формы. Все такие формы данных соединений специально включены в настоящее изобретение.
Следует понимать, что соединения настоящего изобретения могут быть модифицированы подходящими функциональными группами, для улучшения избирательных биологических свойств. Такие модификации известны специалистам, в их число входят такие модификации, которые увеличивают биологическую проницаемость в данную биологическую систему (напр., в кровь, лимфатическую систему, центральную нервную систему), повышают усвоение при пероральном применении, повышают растворимость для введения посредством инъекции, снижают метаболизм и уменьшают скорость экскреции. Кроме того, эти соединения могут быть приведены к такой про-лекарственной форме, что желаемые соединения образуются в организме пациента в результате действия метаболических или других биохимических процессов на про-лекарство. Такие про-лекарственные формы обычно демонстрируют низкую активность или отсутствие активности в исследованиях in vitro. Некоторые примеры про-лекарственных форм включают кетальные, ацетальные формы, а также оксимы, имины и гидразины соединений, содержащих кетоновые или альдегидные группы, особенно такие, где они встречаются в группе R3 соединений настоящего изобретения. Другие примеры про-лекарственных форм включают полу-кетальные, полу-ацетальные, ацилоксикетальные, ацилоксиацетальные, кетальные и ацетальные формы, которые описаны в EQ1 и EQ2.
ICE И ТХ РАСЩЕПЛЯЮТ И, ТАКИМ ОБРАЗОМ,
АКТИВИРУЮТ ПРО-IGIF
Ранее протеазу ICE идентифицировали по ее способности вызывать in vivo и in vitro превращение неактивного пpo-IL-β в активный, зрелый IL-1β , молекулу с про-воспалительным действием. В этой работе мы показали, что ICE и его близкий гомолог ТХ (Caspase-4, С.Faucheu et al., EMBO. 14, р.1914 (1995)) могут протеолитически расщеплять неактивный про-IGIF. Эта стадия процессинга необходима для превращения про-IGIF в его активную, зрелую форму, IGIF. Расщепление про-IGIF под действием ICE и, предположительно, под действием ТХ также способствует экспорту IGIF из клеток.
Вначале мы использовали скоротечную совместную экспрессию плазмид, трансфицированных в Cos-клетки, для того, чтобы определить, действительно ли любой известный член семейства ICE/CED-3 протеаз способен вызывать превращение про-IGIF в IGIF в культурах клеток (Пример 23) (фиг. 1А).
На фиг. 1А показано, что ICE расщепляет про-IGIF в Cos-клетках, трансфицированных совместно плазмидами, экспрессирующими про-IGIF в присутствии активного ICE. Cos-клетки трансфицировали плазмидами, экспрессирующими только про-IGIF (линия 2), или в комбинации с плазмидами с указанной экспрессией, кодирующими дикий тип или неактивные мутанты семейства ICE/CED-3 протеаз (линии 3-12). Получали клеточные лизаты и анализировали их на присутствие белка IGIF с помощью иммуноблотинга с анти-IGIF антисывороткой. На линии 1 представлены лизаты клеток с имитацией трансфекции.
Совместная экспрессия про-IGIF и ICE или ТХ приводит к расщеплению про-IGIF с образованием полипептида, подобного по величине природному зрелому IGIF с молекулярной массой 18 кДа. Эта стадия процессинга блокируется точечными мутациями, которые изменяют остатки каталитического цистеина, и таким образом инактивируют ICE и ТХ (Y. Gu et al., EMBO. 14, р.1923 (1995)).
Совместная экспрессия СРР32 (Caspase-3), протеазы, участвующей в программируемой клеточной смерти (Т. Fernandes-Alnemri et al., J.Biol. Chem., 269, р.30761 (1994); D.W. Nicholson et al., Nature. 376, p.37 (1995)), приводит к расщеплению про-IGIF с образованием полипептида меньшей величины, тогда как совместная экспрессия СМН-1 (Caspase-7), близкого гомолога СРР32 (J.A.Lippke et al., J.Biol. Chem., 271, р.1825 (1996)), не приводит к какому-либо заметному расщеплению про-IGIF. Таким образом, оказалось, что ICE и ТХ способны расщеплять про-IGIF с образованием полипептида, подобного по величине природному зрелому IGIF с молекулярной массой 18 кДа.
Затем мы определяли способность этих цистеиновых протеаз расщеплять про-IGIF in vitro, используя очищенный рекомбинантный (Нis)6-меченный про-IGIF в качестве субстрата (Пример 23).
На фиг. 1В показано, что про-IGIF расщепляется in vitro под действием ICE. Очищенный рекомбинантный (His)6-меченный про-IGIF (2 мкг) инкубировали с указанной цистеиновой протеазой в присутствии или отсутствие ингибиторов ICE или СРР32, как описано в Примере 23. Продукты расщепления анализировали с помощью SDS-PAGE фореза с окрашиванием Кумасси синим.
ICE расщепляет про-IGIF с молекулярной массой 24 кДа на два полипептида величиной 18 кДа и 6 кДа.
N-концевой аминокислотный сиквенс продуктов расщепления, полученных в результате действия ICE, показал, что полипептид с молекулярной массой 18 кДа содержит такие же N-концевые аминокислотные остатки (Asn-Phe-Gly-Arg-Leu), как и природный IGIF. Этот результат показывает, что ICE расщепляет про-IGIF по аутентичному процессирующему положению (Asp35-Asn36) (H.Okamura et al., Infection and Immunity. 63, p.3966 (1995); H.Okamura et al., Nature, 378, p.88 (1995)). N-концевой аминокислотный сиквенс продуктов расщепления, полученных в результате действия СРР32, показал, что СРР32 расщепляет про-IGIF пo Asp69-Ile70.
Расщепление npo-IGIF под действием ICE является высоко специфичной реакцией с каталитической эффективностью (kcat/Км) 1,4× 107 М-1 с-1 (Км=0,6±0,1 мкМ; kcat=8,6±0,3 с-1) и ингибируется специфическими ингибиторами ICE (Ас-Туr-Val-Ala-Asp-aldehyde) и Сbz-Vаl-Аlа-Аsр-[2,6-дихлорбензоил)окси]метилкетон (N.A. Thomberry et al., Nature. 356, р.768 (1992); R.E. Dolle et al., J. Med. Chem., 37, p.563 (1994)).
На фиг. 1С показано, что расщепление под действием ICE in vitro активирует про-IGIF. К культуре клеток А.Е7 добавляли нерасщепленный про-IGIF, продукты его расщепления под действием ICE или СРР32, или рекомбинантный зрелый IGIF (rIGIF) до конечной концентрации 12 нг/мл или 120 нг/мл (см. Пример 23). Через восемнадцать часов проводили количественное определение содержания IFN-γ в культуральной среде с помощью ELISA-теста. В то время, как нерасщепленный npo-IGIF не обладал IFN-γ -индуцирующей активностью на детектируемом уровне, про-IGIF, расщепленный под действвием ICE, был активным в индуцировании продукции IFN-γ в Тh1-клетках.
Подобно ICE, его гомолог ТХ также расщепляет про-IGIF на полипептиды сходного размера. Однако значение его каталитической эффективности приблизительно на два порядка ниже, чем показанное для ICE.
Согласно наблюдениям, полученным в вышеописанных экспериментах с Cos-клетками, СРР32 расщепляет про-IGIF по другому положению (Аsр69-Ilе70) и получившиеся в результате полипептиды обладают низкой IFN-γ -индуцирующей активностью (фиг. 1С). СМН-1 и гранзим В не способны расщеплять про-IGIF в сколько-нибудь значительной степени.
Вместе эти результаты демонстрируют, что в экспериментах, проведенных как in vitro, так и на Cos-клетках, ICE и ТХ проявляют способность вызывать процессинг неактивного предшественника про-IGIF по аутентичному зрелому участку с образованием биологически активной молекулы IGIF.
ПРОЦЕССИНГ ПРО-IGIF ПОД ДЕЙСТВИЕМ ICE СПОСОБСТВУЕТ ЕГО ЭКСПОРТУ.
IGIF продуцируется in vivo активированными клетками Купфера и макрофагами и экспортируется из клеток при стимуляции эндотоксином (Н.Okamura et al., Infection and Immunity. 63, p.3966 (1995); H.Okamura et al., Nature. 378, p.88 (1995)). Для того чтобы определить, действительно ли внутриклеточное расщепление про-IGIF под действием ICE способствует экспорту зрелого IGIF из клетки, была использована система совместной экспрессии на Cos-клетках (Пример 23). Такой эффект наблюдали для про-IL-1β при расщеплении его под действием ICE с образованием активного IL-1β (N.А.Thomberry et al., Nature. 356, р.768 (1992)).
На фиг. 2А показаны результаты трансфекции в метаболически меченные 35S-метионином Cos-клетки плазмиды, экспрессирующей только про-IGIF (линии 2 и 6), или сочетания такой плазмиды с экспрессирующей плазмидой, кодирующей дикий тип (линии 3 и 7), или неактивный мутант ICE (линии 4 и 8) (см. Пример 24). Клеточные лизаты (слева) и инкубационную среду подвергали иммунопреципитации с антисывороткой против IGIF. Белки, осажденные в результате иммунопреципитации, анализировали методом SDS-PAGE и флюорографией (фиг. 2А).
Полипептид с молекулярной массой 18 кДа, совпадающий по размеру со зрелым IGIF, был обнаружен в инкубационной среде Cos-клеток, соэкспрессирующих про-IGIF и ICE, тогда как Cos-клетки, соэкспрессирующие про-IGIF и неактивный мутант ICE (ICE-C285S) или экспрессирующие один про-IGIF (-), экспортировали только очень низкие уровни про-IGIF и недетектируемые количества зрелого IGIF. Количественная оценка показала, что около 10% зрелого IGIF экспортируется из сотрансфицированных клеток, тогда как более чем 99% про-IGIF удерживается внутри клеток.
Также определяли наличие IFN-γ -индуцирующей активности в клеточных лизатах и инкубационной среде упомянутых выше трансфицированных клеток (см. Пример 24). IFN-γ -индуцирующая активность была обнаружена как в клеточных лизатах, так и в инкубационной среде Cos-клеток, соэкспрессирующих про-IGIF и ICE, но не была обнаружена в клетках, экспрессирующих только про-IGIF, либо только ICE (фиг. 2В).
Эти результаты показывают, что расщепление про-IGIF под действием ICE способствует экспорту зрелого активного IGIF из клеток.
ПРО-IGIF КАК ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ СУБСТРАТ ICE IN VIVO.
Для изучения роли ICE в протеолитической активации и экспорте IGIF в физиологических условиях проводили оценку процессинга про-IGIF и экспорта зрелого IGIF в активированных липополисахаридом (LPS) клетках Купфера, взятых у Propiobacterium acnes - стимулированных мышей дикого типа и ICE-дефицитных (ICE -/-) (Пример 25).
Как показано на Фиг. 3А, клетки Купфера из ICE -/- мышей являются дефектными в отношении экспорта IGIF. Лизаты клеток Купфера дикого типа и ICE -/- мышей содержали сопоставимые количества IGIF, что было показано с помощью ELISA-теста. Однако, IGIF смогли обнаружить только в инкубационной среде клеток дикого типа, но не в среде клеток ICE -/-. Таким образом, мыши с ICE-недостаточностью (ICE -/-) синтезировали про-IGIF, но не могли экспортировать его в виде внеклеточного про- или зрелого IGIF.
Для того чтобы определить способны ли мыши с недостаточностью ICE (ICE -/-) процессировать внутриклеточный про-IGIF при отсутствии экспорта IGIF, клетки Купфера от мышей дикого типа и ICE -/- метаболически метили 35S-метионином и проводили эксперименты с клеточными лизатами и инкубационными средами, используя иммунопреципитацию IGIF, как описано в Примере 25. Эти эксперименты показали, что непроцессированный про-IGIF присутствовал как в клетках Купфера дикого типа, так и в ICE -/-. Однако, зрелый IGIF с молекулярной массой 18 кДа присутствовал только в инкубационной среде клеток Купфера дикого типа, но не ICE -/- (фиг. 3В). Это показывает, что активный ICE необходим клеткам для экспорта процессированного IGIF из клетки.
Кроме того, инкубационная среда клеток Купфера дикого типа, но не клеток Купфера ICE -/-, содержала IFN-γ -индуцирующую активность, не относящуюся к действию IL-12, поскольку она была нечувствительной к нейтрализующим антителам к IL-12. Отсутствие IGIF в инкубационной среде ICE -/- клеток Купфера находится в соответствии с данными, полученными на Cos-клетках, показывающими, что процессинг про-IGIF под действием ICE необходим для экспорта активного IGIF.
На фиг. 3С и 3D показано, что в экспериментах in vivo ICE -/- мыши имеют пониженные сывороточные уровни IGIF и IFN-γ , соответственно. Мышам дикого типа (ICE +/+) и ICE -/- (n=3), праймированным инактивированными нагреванием Р. acnes, вводили LPS (Пример 26), и в сыворотке мышей определяли уровни IGIF (фиг. ЗС) и IFN-γ (фиг. 3D) через три часа после введения LPS с помощью ELISA-теста (Пример 25).
Сыворотка ICE -/- мышей, стимулированных Р. acnes и LPS, содержала пониженные уровни IGIF (фиг. 3С) и недетектируемый уровень IFN-γ -индуцирующей активности в присутствии анти- IL-12 антител. Вероятно, пониженные сывороточные уровни IGIF определяют значительно более низкие уровни IFN-γ в сыворотке ICE -/-мышей (фиг. 3D), поскольку мы не наблюдали значительных различий в продукции IL-12 в ICE -/- мышах в тех же условиях. В соответствии с этой интерпретацией находятся данные, что неприлипающие спленоциты мышей дикого типа и ICE -/- продуцируют сопоставимые количества IFN-γ при стимуляции рекомбинантным активным IGIF in vitro. Таким образом, нарушенная продукция IFN-γ не вызывается каким-либо очевидным дефектом Т-клеток ICE -/- мышей.
Рассматриваемые вместе, эти результаты устанавливают определяющее значение ICE в процессинге предшественника IGIF и в экспорте активного IGIF как in vitro, так и in vivo.
Для более детальной проверки взаимосвязи между уровнями IFN-γ в сыворотке и активностью ICE in vivo определяли временную зависимость после введения LPS мышам дикого типа и мышам с ICЕ-недостаточностью (Пример 26) (фиг. 4).
На фиг. 4 показано увеличение сывороточного уровня IFN-γ у мышей дикого типа, достигающего постоянного значения ≥ 17 нг/мл через 9-18 часов после введения LPS. Как и было предсказано в обсуждаемых выше экспериментах, сывороточные уровни IFN-γ значительно снижены у ICE -/- мышей, достигая 2 нг/мл через то же время, что составляет приблизительно 15% от уровня, наблюдаемого у мышей дикого типа (Фиг. 4).
Мышам дикого типа и ICE -/- вводили 30 мг/кг и 100 мг/кг (только ICE -/-) LPS и наблюдали клинические симптомы сепсиса и температуру тела каждые 4 часа. Результаты, приведенные на фиг. 4, демонстрируют значительное понижение температуры тела (от 36° С до 26° С) у мышей дикого типа в пределах 12 часов от введения LPS. Симптомы клинического сепсиса были очевидны и все животные умерли в течение 24-28 часов.
Напротив, у ICE -/- мышей, которым вводили 30 мг/кг LPS, наблюдали понижение температуры тела только на 3-4° С, минимальные симптомы нарушений и отсутствие гибели животных. У ICE -/- мышей после введения 100 мг/кг LPS наблюдали клинические симптомы, понижение температуры тела и смертность аналогично мышам дикого типа при дозе 30 мг/кг LPS.
ИНГИБИТОР ICE AC-YVAD-CHO В КАЧЕСТВЕ РАВНОЭФФЕКТИВНОГО ИНГИБИТОРА ПРОДУКЦИИ IL-1β И IFN-γ
Поскольку процессинг и секреция биологически активного IGIF опосредованы ICE, сравнивали активность обратимого ингибитора ICE (Ac-YVAD-CHO) по отношению к продукции IL-1β и IFN-γ при анализе мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) (Пример 27).
На (фиг. 5) приведены результаты, показывающие аналогичную способность ингибитора ICE Ac-YVAD-CHO к уменьшению продукции IL-1β и IFN-γ в РВМС человека с IC50, равной 2,5 мкМ для каждого. Сходные результаты получали при исследованиях спленоцитов мышей дикого типа.
Эти данные дополнительно проясняют, что про-IGIF является физиологическим субстратом для ICE и позволяют предположить, что ингибиторы ICE могут использоваться для регуляции физиологических уровней IGIF и IFN-γ .
Итак, обнаружено, что ICE регулирует уровни IGIF и IFN-γ in vivo и in vitro, и ингибиторы ICE могут снижать уровни IGIF и IFN-γ в клетках человека. Эти результаты описаны в заявке United States Application Serial №08/712878, одновременно находящейся на рассмотрении с данной заявкой, причем содержание первой включено в настоящее описание в качестве ссылки.
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ
Фармацевтические композиции и способы настоящего изобретения могут применяться для регуляции уровней IL-1, IGIF и IFN-γ in vivo. Способы и композиции настоящего изобретения таким образом могут применяться для лечения или замедления развития, снижения тяжести протекания состояний, опосредованных IL-1, IGIF и IFN-γ .
Соединения настоящего изобретения являются эффективными лигандами для ICE. Соответственно, эти соединения способны блокировать и ингибировать процессы, связанные с заболеваниями, опосредованными IL-1, апоптозом, IGIF и ifn-γ , и, таким образом, основную активность этого белка (ICE) при воспалительных, аутоиммунных, костно-деструкционных, пролиферативных, инфекционных и дегенеративных заболеваниях. Например, соединения настоящего изобретения ингибируют превращение предшественника IL-1β в зрелый IL-1β посредством ингибирования ICE. Поскольку ICE является незаменимым для продукции зрелого IL-1, ингибирование этого фермента эффективно блокирует инициацию физиологических эффектов и симптомов, опосредованных IL-1, таких, как воспаление, посредством ингибирования продукции зрелого IL-1. Таким образом, ингибируя активность предшественника IL-1β , соединения настоящего изобретения эффективно функционируют как ингибиторы IL-1.
Аналогично, соединения настоящего изобретения ингибируют превращение предшественника IGIF в зрелый IGIF. Таким образом, ингибируя продукцию IGIF, соединения настоящего изобретения эффективно функционируют как ингибиторы продукции IFN-γ .
Соответственно, одно из воплощений настоящего изобретения предоставляет способ снижения продукции IGIF у субъекта, включающий стадию введения субъекту фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество ингибитора ICE и фармацевтически приемлемый носитель.
Другое воплощение настоящего изобретения предоставляет способ снижения продукции IFN-γ у субъекта, включающий стадию введения субъекту фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество ингибитора ICE и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом воплощении способы настоящего изобретения включают стадию введения субъекту фармацевтической композиции, содержащей ингибитор ICE-родственной протеазы, способной к расщеплению про-IGIF с образованием активного IGIF, и фармацевтически приемлемый носитель. Как описано выше, такой ICE-родственной протеазой является ТХ. Таким образом, настоящее изобретение предоставляет способы и фармацевтические композиции для регуляции уровней IGIF и IFN-γ посредством введения ингибитора ТХ.
Могут быть также обнаружены другие ICE-родственные протеазы, способные вызывать процессинг про-IGIF в форму активного IGIF. Таким образом, очевидно, что ингибиторы таких ферментов могут быть идентифицированы специалистами в данной области, и тоже попадают в сферу настоящего изобретения.
Соединения данного изобретения могут применяться традиционным способом для лечения заболеваний, которые опосредуются IL-1, апоптозом, IGIF или IFN-γ . Такие способы лечения, их дозировочные уровни и потребности могут выбираться рядовыми специалистами из имеющихся в распоряжении способов и методик. Например, соединение настоящего изобретения может быть объединено с фармацевтически приемлемым адъювантом для введения пациенту, страдающему заболеванием, опосредованным IL-1, апоптозом, IGIF или IFN-γ , фармацевтически приемлемым способом и в количествах, эффективно уменьшающих тяжесть заболевания.
Альтернативно, соединения настоящего изобретения могут использоваться в композициях и способах для лечения или профилактики субъектов против заболеваний, опосредованных IL-1, апоптозом, IGIF или IFN-γ в течение расширенного промежутка времени. Эти соединения могут использоваться в таких композициях либо по одному, либо вместе с другими соединениями данного изобретения способом, согласующимся с традиционным применением ингибиторов ICE в фармацевтических композициях. Например, соединение настоящего изобретения можно объединять с фармацевтически приемлемым адъювантом, традиционно применяющимся в вакцинах, и вводить в профилактически эффективных количествах для защиты субъектов в течение расширенного промежутка времени против заболеваний, опосредованных IL-1, апоптозом, IGIF или IFN-γ .
Соединения настоящего изобретения можно также вводить совместно с другими ингибиторами ICE для повышения терапевтического или профилактического эффекта против различных заболеваний, опосредованных IL-1, апоптозом, IGIF или IFN-γ .
Кроме того, соединения настоящего изобретения могут быть использованы как в комбинации с обычными антивоспалительными агентами, так и с ингибиторами матриксной металлопротеазы, липоксигеназы и с антагонистами других цитокинов, отличающихся от IL-1β .
Соединения настоящего изобретения можно также вводить в комбинации с иммуномодуляторами (напр., бропиримином, антителами против человеческого альфа-интерферона, IL-2, GM-CSF, метионин энкефалином, интерфероном альфа, диэтилдитиокарбаматом, фактором некроза опухоли, налтрексон и rЕРО), или с
простагландинами, для предотвращения или подавления симптомов заболеваний, опосредованных IL-1, таких, как воспаление.
При введении соединений настоящего изобретения пациенту в сочетании с другими средствами, их можно вводить последовательно или совместно. Альтернативно, фармацевтические или профилактические композиции в соответствии с настоящим изобретением включают комбинацию ингибитора ICE настоящего изобретения и другого терапевтического или профилактического агента.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения включают любое соединение данного изобретения и их фармацевтически приемлемые соли с любым фармацевтически приемлемым носителем, адъювантом или наполнителем. Фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и наполнители, которые могут быть использованы в составе фармацевтических композиций данного изобретения, включают, не ограничиваясь ими, ионнообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лицитин, само-эмульгирующиеся системы доставки лекарств (SIDS), такие, как dα -токоферол, полиэтиленгликоль 1000 сукцинат, или другие аналогичные полимерные матрицы доставки, сывороточные белки, такие, как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие, как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, частичные смеси глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие, как сульфат протамина, гидрофосфат динатрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный оксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, карбоксиметилцеллюлоза натрия, полиакрилаты, воска, блок-полимеры полиэтилена с полиоксипропиленом, полиэтиленгликоль и ланолин. Для улучшения доставки соединений данного изобретения могут быть выгодно использованы циклодекстрины, такие как α -, β - и γ -циклодекстрины или химически модифицированные производные, такие как гидроксиалкилциклодекстрины, включая 2- и 3-гидроксипропил-β -циклодекстрины или другие солюбилизированные производные.
Фармацевтические композиции данного изобретения могут вводиться перорально, парентерально, ингаляционным распылением, местно, ректально, через нос, подъязычно, вагинально или через имплантированный резервуар. Авторы изобретения предпочитают пероральное введение. Фармацевтические композиции данного изобретения могут содержать любые общепринятые нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты или наполнители. В некоторых случаях для увеличения стабильности соединений, используемых для получения лекарственных средств либо формы доставки, рН готовой лекарственной формы доводят до нужного значения с помощью фармацевтически приемлемых кислот, оснований или буферов. Термин "парентеральный", как использован в настоящем описании, включает подкожную, внутрикожную, внутривенную, внутримышечную, внутрисуставную, внутрисиновиальную, внутригрудинную, внутритекальную, внутрь поврежденного органа и внутричерепную инъекцию или инфузионные методы.
Фармацевтические композиции могут быть представлены в виде стерильных готовых форм для инъекций, например, стерильной водной или масляной суспезии для инъекций. Эту суспензию можно приготовить в соответствии с методиками, известными специалистам, с использованием диспергирующих или увлажняющих агентов (как, например, Твин 80) и суспендирующих агентов. Стерильная готовая форма для инъекций может также быть представлена в виде стерильного раствора или суспензии для инъекции в нетоксичном парентерально-приемлемом разбавителе или растворителе, например, как раствор 1,3-бутандиола. Приемлемые носители и растворители, которые могут быть использованы, включают маннит, воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Дополнительно стерильные затвердевшие масла обычно используют в качестве растворителя или суспензионной среды. Для этой цели можно использовать любое пластичное отвержденное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Для получения форм для инъекций используют жирные кислоты, такие, как олеиновая кислота и их глицеридные производные, также, как природные фармацевтически приемлемые масла, такие, как оливковое масло или касторовое масло, особенно в виде их полиоксиэтилированных форм. Эти масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепочечные спиртовой разбавитель или дисперсант, такой, как Ph. Helv или аналогичный спирт.
Фармацевтические композиции данного изобретения могут вводиться перорально в виде любой перорально приемлемой дозировочной формы, включающей, не ограничиваясь ими, капсулы, таблетки, водные суспензии и растворы. В случае таблеток для перорального применения обычно используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также обычно добавляют смазывающие агенты, такие, как стеарат магния.
Для перорального введения в капсульнои форме используемые разбавители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. При пероральном введении водных суспензий активный ингредиент сочетают с эмульгатором и суспендирующим агентом. По необходимости могут добавляться определенные подсластители и/или ароматизаторы и/или красители.
Фармацевтические композиции данного изобретения могут также вводиться в виде суппозиториев для ректального введения. Эти композиции могут быть получены путем смешения соединения данного изобретения с подходящим нераздражающим эксципиентом, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре, и, поэтому будет плавиться в прямой кишке с выделением
активных компонентов. Такие материалы включают, не ограничиваясь ими, масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.
Местное применение фармацевтических композиций данного изобретения является наиболее подходящим для применения, когда требуемое лечение касается областей или органов, легко доступных для местного примененния. Для местного применения на коже в готовую форму с фармацевтической композицией следует включать подходящую мазь, содержащую активные компоненты, суспендированные или растворенные в носителе. Носители для местного введения соединений данного изобретения включают, не ограничиваясь ими, минеральное масло, жидкий парафин, вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен-, полиоксипропиленовое соединение, эмульгирующий воск и воду. В другом случае, готовая форма с фармацевтической композицей включает подходящий лосьон или крем, содержащий активное соединение, суспендированное или растворенное в носителе. Подходящие носители включают, не ограничиваясь ими, минеральное масло, моностеарат сорбитана, полисорбат 60, сложные цетиловые эфиры воска, цетарильный спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду. Фармацевтические композиции данного изобретения могут также местно применяться в нижней части кишечного тракта как готовые формы в виде ректальных суппозиториев, или в виде подходящих составов для клизм. Трансдермальные пластыри для местного применения также включены в данное изобретение.
Фармацевтические композиции данного изобретения могут вводиться посредством назальных аэрозолей или ингаляций. Такие композиции получают в соответствии с методиками, хорошо известными в области фармацевтических готовых форм, и могут быть приготовлены в виде солевых растворов с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, промоторов абсорбции для улучшения биодоступности, фторуглеродов и/или других солюбилизирующих или диспергирующих агентов, известных в данной области.
Применяемые дозировочные уровни активного ингредиента находятся примерно в интервале между 0,01 и 100 мг/кг массы тела в день, предпочтительно между примерно 1 50 мг/кг массы тела в день. Указанные уровни применяют для профилактики и лечения заболеваний, опосредованных IL-1, апоптозом, IGIF и IFN-γ , включая воспалительные, аутоиммунные, костно-деструкционные, пролиферативные, инфекционные, дегенеративные, некротические заболевания, остеоартрит, острый панкреатит, хронический панкреатит, астма, респираторный дистресс-синдром у взрослых, гломерулонефрит, ревматоидный артрит, системную красную волчанку, склеродермию, хронический тиреоидид, болезнь Грейва, аутоиммунный гастрит, инсулин-зависимый сахарный диабет (Тип 1), аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунную нейтропению, тромбоцитопению, хронический активный гепатит, миастенический отек, воспалительные заболевания кишечника, болезнь Крона, псориаз, реакции отторжения организма-хозяина против трансплантата, остеопороз, нарушения костной ткани, вызываемые множественной миеломой, хроническую и острую миелогенную лейкемию, метастатическую меланому, саркому Капоши, множественный миеломный сепсис, септический шок, шигеллез, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, церебральную недостаточность, сердечную недостаточность, атрофию мышц спины, рассеянный склероз, энцефалит, связанный со спидом, энцефалит, связанный с ВИЧ, старение, аллопецию и неврологические нарушения вследствие удара. Обычно фармацевтические композиции данного изобретения вводят от 1 до 5 раз в день, или, альтернативно, в процессе непрерывной инфузии. Такое введение может применяться как для хронической, так и для острой терапии. Количество активного ингредиента, которое может быть объединено с носителем с получением единичной дозировочной формы, варьирует в зависимости от организма, подвергающегося лечению, и, особенно, от способа введения. Типовой препарат содержит примерно 5-95% активного соединения (вес/вес). Предпочтительно такие препараты содержат примерно 20-80% активного соединения,
При необходимости в процессе улучшения состояния пациента может вводиться поддерживающая доза соединения, композиции или комбинации данного изобретения. Последовательно дозировка или частота введения, или и то и другое, могут быть уменьшены, в зависимости от симптомов, до уровня, при котором улучшение состояния сохраняется и происходит облегчение симптомов до нужного уровня; тогда лечение должно прекратиться. Однако, пациенты могут нуждаться в промежуточном лечении на долговременной основе при любом повторном появлении симптомов заболевания.
Опытным профессионалам хорошо известно, что для лечения могут потребоваться более низкие или более высокие дозы, чем упомянутые выше. Специальная дозировка и режим лечения для любого конкретного пациента будут зависеть от множества факторов, включая активность специфического используемого соединения, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, скорость экскреции, комбинацию лекарств, тяжесть и протекание заболевания, предрасположенность пациента к заболеванию и мнение лечащего врача.
Заболевания, опосредованные IL-1, которые могут быть вылечены или предотвращены с помощью соединений данного изобретения, включают, не ограничиваясь ими, воспалительные, аутоиммунные заболевания, костно-деструкционные нарушения, пролиферативные, инфекционные и дегенеративные заболевания. Заболевания, опосредованные апоптозом, которые могут быть вылечены или предотвращены с помощью соединений данного изобретения, включают дегенеративные заболевания.
Воспалительные заболевания, которые могут быть вылечены или предотвращены, включают, не ограничиваясь ими, остеоартрит, острый панкреатит, хронический панкреатит, астма, респираторный дистресс-синдром у взрослых. Предпочтительно, воспалительное заболевание является остеоартритом или острым панкреатитом.
Аутоиммунные заболевания, которые могут быть излечены или предотвращены, включают, не ограничиваясь ими, гломерулонефрит, ревматоидный артрит, системную красную волчанку, склеродермию, хронический тиреоидид, болезнь Грейва, аутоиммунный гастрит, инсулин-зависимый сахарный диабет (Тип 1), аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунную нейтропению, тромбоцитопению, хронический активный гепатит, миастенический отек, рассеянный склероз, воспалительные заболевания кишечника, болезнь Крона, псориаз и заболевания, связанные с реакциями отторжения организмом-хозяином трансплантата. Предпочтительно, аутоиммунные заболевания являются ревматоидным артритом, воспалительными заболеваниями кишечника, болезнью Крона или псориазом.
Костно-деструкционные нарушения, которые могут вылечиваться или предотвращаться, включают, не ограничиваясь ими, остеопороз и нарушения костной ткани, вызываемые множественной миеломой.
Пролиферативные заболевания, которые могут вылечиваться или предотвращаться, включают, не ограничиваясь ими, хроническую и острую миелогенную лейкемию, метастатическую меланому, саркому Капоши, множественную миелому.
Инфекционные заболевания, которые могут вылечиваться или предотвращаться, включают, не ограничиваясь ими, сепсис, септический шок и шигеллез.
Опосредованные IL-1 дегенеративные или некротические заболевания, которые могут вылечиваться или предотвращаться с помощью соединений данного изобретения, включают, не ограничиваясь ими, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, церебральную недостаточность и сердечную недостаточность. Предпочтительно дегенеративные заболевания являются болезнью Альцгеймера.
Опосредованные апоптозом дегенеративные заболевания, которые могут вылечиваться или предотвращаться с помощью соединений данного изобретения, включают, не ограничиваясь ими, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, церебральную недостаточность и сердечную недостаточность, атрофию мышц спины, рассеянный склероз, энцефалит, связанный со спидом, энцефалит, связанный с ВИЧ, старение, аллопецию и неврологические нарушения вследствие удара.
Способы настоящего изобретения могут применяться для лечения или замедления развития, тяжести протекания, или проявлений опосредованных IGIF или IFN-γ воспалительных, аутоиммунных, инфекционных, пролиферативных, костно-деструкционных, некротических и дегенеративных состояний, включая заболевания, нарушения или проявления, в которых состояния характеризуются повышенными уровнями продукции IGIF или IFN-γ .
Примеры таких воспалительных состояний включают, не ограничиваясь ими, остеоартрит, острый панкреатит, хронический панкреатит, астму, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, язвенный колит, церебральную недостаточность, сердечную недостаточность и респираторный дистресс-синдром у взрослых.
Предпочтительно воспалительное состояние является ревматоидным артритом, язвенным колитом, болезнью Крона, гепатитом и респираторным дистресс-синдромом у взрослых.
Примеры таких инфекционных состояний включают, не ограничиваясь ими, инфекционный гепатит, сепсис, септический шок и шигеллез.
Примеры таких аутоиммунных состояний включают, не ограничиваясь ими, гломерулонефрит, системную красную волчанку, склеродермию, хронический тиреоидид, болезнь Грейва, аутоиммунный гастрит, инсулин-зависимый сахарный диабет (Тип 1), юношеский диабет, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунную нейтропению, тромбоцитопению, миастенический отек, рассеянный склероз, псориаз, плоский лишай, заболевания, связанные с реакциями отторжения организмом-хозяином трансплантата, острый дерматомиозит, экзему, первичный цирроз, гепатит, увеит, болезнь Бехчета, поверхностные заболевания кожи, врожденную недостаточность. красных клеток, непластичную анемию, амиотрофический боковой склероз и нефротический синдром.
Предпочтительно аутоиммунное состояние является гломерулонефритом, инсулин-зависимым сахарным диабетом (Тип 1), юношеским диабетом, псориазом, заболеваниями, связанными с реакциями отторжения организмом-хозяином трансплантата, включая отторжение трансплантата и гепатит.
Примеры таких костно-деструкционных нарушений включают, не ограничивясь ими, остеопороз и связанные с множественной миеломой нарушения костей.
Примеры таких пролиферативных состояний включают, не ограничивясь ими, хроническую и острую миелогенную лейкемию, метастатическую меланому, саркому Капоши, множественную миелому.
Примеры таких нейродегенеративных состояний включают, не ограничивясь ими, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона.
Несмотря на то, что данное изобретение направлено на использование соединений, раскрытых в данном описании, для предотвращения и лечения заболеваний, опосредованных IL-1, апоптозом, IGIF и IFN-γ , соединения данного изобретения могут также быть использованы в качестве ингибиторов для других цистеиновых протеаз.
Соединения данного изобретения также применимы в качестве коммерческих реагентов, эффективно связывающихся с ICE, или с другими цистеиновыми протеазами. В качестве коммерческих реагентов соединения данного изобретения и их производные могут использоваться для блок-протеолиза целевого пептида в биохимических или клеточных методиках анализа ICE и его гомологов, либо могут быть химически модифицированы для связывания со стабильной смолой в качестве фиксированного субстрата для применения в аффинной хроматографии. Эти и другие применения, которые характерны для коммерческих ингибиторов протеаз, будут очевидны для специалистов в данной области.
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ N-АЦИЛАМИНО СОЕДИНЕНИЙ
Ингибиторы ICE данного изобретения могут быть синтезированы с использованием общепринятых методик. Является удобным, что эти соединения обычно синтезируют из легко доступных исходных материалов.
Соединения данного изобретения находятся в ряду наиболее легко синтезируемых известных ингибиторов ICE. Ранее описанные ингибиторы ICE часто содержат 4 или более хиральных центра и многочисленные пептидные связи. Относительная простота, с которой могут быть синтезированы соединения данного изобретения, составляет преимущество для крупномасштабного производства этих соединений.
Например, соединения данного изобретения могут быть получены с использованием способов, описанных в данном описании. Опытный практик может оценить, что эти способы являются не единственными путями, по которым могут быть синтезированы соединения, описанные и заявленные в данной заявке. Дальнейшие способы будут очевидны для рядовых специалистов в данной области. Кроме того, различные синтетические стадии, описанные в данной заявке, могут быть выполнены в альтернативных последовательности или порядке для получения требуемых соединений.
Это изобретение также предоставляет предпочтительный способ получения соединений данного изобретения. Соответственно, в другом воплощении (М) предоставлен способ получения N-ациламино соединений, включающий следующие стадии:
a) смешивание карбоновой кислоты с N-alloc-защищенной аминокомпонентой в присутствии инертного растворителя, трифенилфосфина, нуклеофильного удаляющего агента и тетракис-трифенилфосфин палладия (0) при температуре окружающей среды в инертной атмосфере; и
b) добавление к смеси стадии а) НОВТ и EDC; и необязательно включающий следующую стадию:
c) гидролиз смеси стадии b) в присутствии раствора, содержащего кислоту и Н2О, причем смесь стадии b) необязательно концентрируется перед гидролизом.
Предпочтительно в качестве инертного растворителя используют СН2Сl2, DMF или смесь СН2Cl2 и DMF.
В качестве нуклеофильного удаляющего агента предпочтительно используют димедон, морфолин, триметилсилилдиметиламин или диметилбарбитуровую кислоту. Более предпочтительно нуклеофильный удаляющий агент является триметилсилилдиметиламином или диметилбарбитуровой кислотой.
Предпочтительно раствор включает трифторуксусную кислоту с весовой концентрацией примерно 1-90%. Более предпочтительно раствор включает трифторуксусную кислоту с весовой концентрацией примерно 20-50%.
Альтернативно раствор включает соляную кислоту с весовой концентрацией примерно 0,1-30%. Более предпочтительно раствор включает соляную кислоту с весовой концентрацией примерно 5-15%.
Более предпочтительно в вышеупомянутом процессе инертный растворитель является СН2Сl2, DMF или смесь CH2Cl2 и DMF, а нуклеофильный удаляющий агент представляет собой димедон, морфолин, триметилсилилдиметиламин или диметилбарбитуровую кислоту.
Наиболее предпочтительно в вышеупомянутом процессе инертный растворитель является СН2Сl2, DMF или смесь CH2Cl2 и DMF, а нуклеофильный удаляющий агент представляет собой триметилсилилдиметиламин или диметилбарбитуровую кислоту.
Предпочтительно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII):
в которой:
R1 такой, как определен выше в воплощении (А);
R2 представляет собой:
,
в котором R51 такой, как определен выше в воплощении (В);
или
;
Предпочтительно N-alloc-защищенный амин представляет собой:
,
где R51 такой, как определен выше.
В предпочтительных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (А).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (В), и R2 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (В).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (С), и R2 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (С).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (D), и R2 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (D).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (Е), и R2 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (Е).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (F), и R2 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (F).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (G), и R1 такой, как определен выше в воплощении (G).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (G).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (Н), и R1 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (Н).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (I), и R2 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (I).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (J), и R2 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (J).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (К), и R2 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (К).
Альтернативно N-ациламино соединение представлено формулой (VIII), в которой R1 такой, как определен выше в воплощении (L), и R2 такой, как определен выше в воплощении (М).
Предпочтительно в этих альтернативных способах заместители являются такими, как определены выше в воплощении (L).
Для более глубокого понимания настоящего изобретения представлены следующие примеры. Эти примеры приведены только с иллюстративной целью и никаким образом не должны рассматриваться как ограничивающие область данного изобретения.
ПРИМЕР 1
ИНГИБИРОВАНИЕ ICE
Константы ингибирования (Ki) и значения IС50 получены для соединений данного изобретения с помощью трех способов, описанных ниже:
1. Ферментный анализ с использованием субстрата, поглощающего в УФ-видимой области
Этот анализ проводят, используя в качестве субстрата сукцинил-Tyr-Val-Ala-Asp-n-нитроанилид. Синтез аналогичных субстратов описан L.A.Reiter (Int. J. Peptide Protein Res. 43, 87-96 (1994)). Аналитическая смесь содержит:
65 мкл буфера (10 мМ Трис, 1 мМ DTT, 0,1% CHAPS pH 8,1)
10 мкл ICE (с конечной концентрацией 50 нМ для получения скорости ~ 1 мOD/мин)
5 мкл смеси DMSO/ингибитор
20 мкл 400мкМ раствора субстрата (конечная концентрация 80 мкМ)
100 мкл общий объем реакции
Определение ICE в видимой области проводят в 96-луночном планшете для микротитрования. Буфер, ICE и DMSO (если ингибитор присутствует) добавляют в лунки в порядке перечисления. Компоненты инкубируют при комнатной температуре в течение 15 минут, начиная с такого момента, когда все компоненты присутствуют во всех лунках. Считывающее устройство планшетов для микротитрования устанавливают для инкубации при 37° С. После инкубации в течение 15 минут субстрат добавляют непосредственно в лунки и реакцию регистрируют по высвобождению хромофора (pNA) при 405-603 нм при 37° С в течение 20 мин. Проводят линеаризацию данных и подсчитывают скорость в mOD/мин. DMSO присутствует только в экспериментах с ингибиторами, в других экспериментах используется буфер для доведения объема до 100 мкл.
2. Ферментный анализ с использованием флюоресцентного субстрата.
Этот анализ проводят согласно методике Thomberry et al. (Nature 356: 768-774 (1992)), используя субстрат 17, описанный в этой статье. Этим субстратом является:
ацетил-Туr-Vаl-Аlа-Аsp-амино-4-метилкумарин (АМС). Смешивают следующие компоненты:
65 мкл буфера (10 мМ Трис, 1 мМ DTT, 0,1% CHAPS pH 8,1)
10 мкл ICE (с конечной концентрацией 2-10 нМ)
5 мкл раствора ингибитора в DMSO
20 мкл 150 мкМ раствора субстрата (конечная концентрация 30 мкМ)
100 мкл общий объем реакции
Этот анализ проводят в 96-луночном планшете для микротитрования. В лунки добавляют буфер и ICE. Компоненты инкубируют при 37° С в течение 15 минут в терморегулируемом держателе планшет. После 15 минут инкубации реакцию инициируют добавлением субстрата непосредственно в лунки, и течение реакции регистрируют при 37° С в течение 30 минут по высвобождению флюорофора АМС при длине волны возбуждения 380 нм и длине волны эмиссии 460 нм. Проводят линеаризацию данных для каждой лунки и рассчитывают скорость в единицах флюоресценции в секунду.
Для определения констант ингибирования (Кi) фермента или вида ингибирования (конкурентное или неконкурентное), значения скорости реакции, определенные в ферментных анализах при различных концентрациях ингибиторов, приводят с помощью компьютерной обработки к стандартным уравнениям ферментной кинетики (см. I.H.Segel, Enzyme Kinetics, Wiley-Interscience, 1975).
Определение констант скорости второго порядка для необратимых ингибиторов проводили посредством приведения зависимости значения флюоресценции от времени к прогрессивным уравнениям Моррисона. Morrison, J.F., Mol. Cell. Biophys., 2, pp.347-368 (1985). Thomberry et al. опубликовали описание таких методов для определения констант скорости необратимых ингибиторов ICE. Thomberry, N.A., et al., Biochemistry, 33, pp.3923-3940 (1994). В случае соединений, для которых образование первичного комплекса не может быть зарегистрировано кинетически, константы скорости второго порядка (kinact) получают непосредственно из наклона линейной части кривых зависимости kobs от [I]. В случае соединений, для которых образование первичного комплекса с ферментом может быть зарегистрировано, для гиперболических кривых зависимости kobs от [I] подбирают уравнения, которые описывают кинетику насыщения, из которых получают предварительные значения Кi и k’. Затем константу скорости второго порядка kinact получают как k’/Ki.
3. Клеточный анализ РВМС
Анализ IL-1β в смешанной популяции мононуклеарных клеток периферической крови человека (РВМС), или популяции, обогащенной прилипающими мононуклеарными клетками.
Процессинг про-IL-1β под действием ICE можно детектировать в культуре клеток, используя различные клеточные источники. РВМС человека, полученные от здоровых доноров, представляют собой смешанную популяцию подтипов лимфоцитов и мононуклеарных клеток, которые продуцируют спектр интерлейкинов и цитокинов в ответ на многие классы физиологических стимуляторов. Прилипающие мононуклеарные клетки из популяции РВМС представляют собой обогащенный источник нормальных моноцитов для определенных исследований продукции цитокинов этими активированными клетками.
Экспериментальная процедура:
Готовят ряд начальных разведений тестируемых соединений в DMSO или этаноле, затем разводят средой RPMI-10% FBS (содержащей 2 мМ L-глютамин, 10 мМ HEPES, 50 ед. и 50 ед. пенициллин/стрептомицин на мл), получая соответственно препараты тестируемого соединения с 4-кратной конечной концентрацией, содержащие 0,4% DMSO или 0,4% этанола. Конечная концентрация DMSO составляет 0,1% во всех разведениях препаратов. Концентрационное титрование, которое проводят в интервале кажущихся значений Кi тестируемых соединений, определенных в тесте ингибирования ICE, обычно используют для первичного скрининга этих соединений.
Обычно тестируют 5-6 разведений соединения, а клеточную компоненту анализа повторяют дважды, с дупликатами по ELISA-тесту на каждый супернатант клеточной культуры.
Выделение РВМС и анализ IL-1:
Клетки светлого слоя кровяного сгустка, выделенные из одной пинты (0,57 л) крови человека (получают 40-45 мл конечного объема плазмы с клетками), разводят средой до 80 мл и в пробирки для разделения LeukoPREP (Becton Dickinson) помещают 10 мл суспензии клеток в каждую. После 15 мин центрифугирования при 1500-1800 g слой плазма/среда удаляют, а слой моноядерных клеток собирают пастеровской пипеткой и переносят в конические центрифужные пробирки объемом 15 мл (Coming). Добавляют среду до объема 15 мл, плавно перемешивают клетки переворачиванием и центрифугируют при 300 g в течение 15 мин. Осадок РВМС ресуспендируют в небольшом объеме среды, считают клетки и доводят их количество до 6× 106 клеток/мл.
Для проведения клеточного анализа в каждую лунку 24-луночного плоскодонного планшета для культур тканей (Coming) добавляют 0,5 мл разведения тестируемого соединения и 0,5 мл раствора LPS (Sigma #L-3012; раствор, полученный в полной среде RPMI с концентрацией 20 нг/мл; конечная концентрация LPS составляет 5 нг/мл). Добавленного объема тестируемого соединения 0,5 мл и LPS обычно достаточно для перемешивания содержимого лунок. В эксперимент включают 3 контрольные смеси, как с одним LPS, контролем раствора-наполнителя, так и/или с дополнительной средой для доведения конечного объема культуры до 2,0 мл. Культуры клеток инкубируют в течение 16-18 часов при 37° С в присутствии 5% СО2.
По окончании периода инкубации клетки собирают и переносят в конические центрифужные пробирки объемом 15 мл.
После центрифугирования в течение 10 мин при 200 g супернатанты собирают и переносят в пробирки типа Эппендорф объемом 1,5 мл. Можно отметить, что клеточный остаток может быть использован для биохимической оценки пpo-IL-1β и/или содержания зрелого IL-1β в экстрактах цитозоля методом вестерн-блоттинга или ELISA, с использованием специфической антисыворотки к пpo-IL-1β .
Выделение прилипающих мононуклеарных клеток:
РВМС выделяют и готовят, как описано выше. Сначала в лунки добавляют среду (1,0 мл), затем 0,5 мл суспензии РВМС. После одного часа инкубации планшеты плавно встряхивают и неприлипающие клетки удаляют из каждой лунки. Затем лунки аккуратно промывают три раза 1,0 мл среды и окончательно ресуспендируют в 1 мл среды. Обогащение для прилипающих клеток в общем случае составляет 2,5-3, 0× 105 клеток/лунку. Добавление тестируемых соединений, LPS, условия инкубации клеток и обработка супернатантов проводятся как описано выше.
ELISA:
Для измерения зрелого IL-1β применяли наборы Quantikine (R & D Systems). Анализы выполняют в соответствии с инструкцией производителя. В положительных контролях как для РВМС, так и для прилипающих мононуклеарных клеток, наблюдали уровни зрелого IL-1β приблизительно 1-3 нг/мл. Для выбора оптимального разведения супернатантов при тестировании анализы методом ELISA выполняли при разведениях супернатантов от LPS-положительных контролей, равных 1/5, 1/10 и 1/20.
Ингибирующая способность соединений может быть представлена значением IC50, являющейся концентрацией ингибитора, при которой детектируют 50% зрелого IL-1β по сравнению с положительными контролями.
Опытному практику ясно, что значения величин, полученные в клеточных анализах, приведенные в данном описании, могут зависеть от множества факторов, таких, как тип клеток, источник клеток, условия роста и т.п.
ПРИМЕР 2
ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НА МЫШАХ
Пептидильные ингибиторы ICE быстро выводятся со скоростью выведения выше, чем 100 μ /мин/кг. Соединения с более низкими скоростями выведения имеют улучшенные фармакокинетические свойства относительно пептидильных ингибиторов ICE.
Мы определяли скорости выведения на мышах (μ /мин/кг) для некоторых соединений настоящего изобретения, используя методы, описанные ниже:
Приготовление образцов и дозировка
Соединения растворяют в стерильном растворе TRIS (0,02 М или 0,05 М) с получением концентрации 2,5 мг/мл. При необходимости гарантии полного растворения, образец вначале растворяют в минимальном объеме диметилацетамида (который составляет максимум 5% от общего объема раствора) и затем разбавляют раствором TRIS.
Раствор препарата вводят CD-1 мышам (Charles River Laboratories - 26-31 г) через хвостовую вену в объемной дозе 10 мл/кг, дающей дозу препарата 25 мг/кг.
Мыши были разбиты на группы по 5 штук для каждой временной точки (обычно от 2 минут до 2 часов), затем в соответствующее время животных анестезировали галотаном, и кровь собирали в отдельные гепаринизированные пробирки путем отделения головы. Образцы крови охлаждали до 0° С, затем плазму отделяли и до анализа хранили при -20° С.
Биологический анализ
Концентрацию препаратов в образцах плазмы определяли с помощью ВЭЖХ-анализа с УФ или МС (ESP) детекцией. Применяли хроматографию на обращенной фазе, используя ряд связанных фаз от С1 до С18, элюировали смесями водный буфер/ацетонитрил в изократических условиях.
Количественную оценку проводили методами внешнего стандарта, используя калибровочные кривые, для получения которых использовали плазму с добавлением растворов препаратов с конечной концентрацией от 0,5 до 50 мкг/мл.
Перед анализом образцы плазмы депротеинизировали путем добавления ацетонитрила, метанола, трихлоруксусной или перхлорной кислоты с последующим центрифугированием при 10000g в течение 10 минут. Для анализов использовали объемы образцов от 20 до 50 мкл.
Соединение 214е
Дозирование и приготовление образцов
Препарат растворяли в стерильном 0,02 М Tris, получая раствор концентрации 2,5 мг/мл, который вводили 11 группам из 5 самцов CD-1 мышей через хвостовую вену в дозе 25 мг/кг. В каждой из следующих временных точек: 2, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90 и 120 минут, группу животных анестезировали, и кровь собирали в гепаринизированные пробирки. После отделения плазму хранили до анализа при -20° С.
Анализ
К аликвотам плазмы (150 мкл) добавляли 5% перхлорную кислоту (5 мкл), энергично перемешивали и оставляли на 90 мин до центрифугирования. Получившийся супернатант отделяли и 20 мкл вводи ли для ВЭЖХ-анализа.
Условия проведения ВЭЖХ
Колонка 100× 4,6 мм Kromasil KR 100 5С4
Подвижная фаза 0,1 М Tris рН 7,5 86%
Ацетонитрил 14%
Скорость потока 1 мл/мин
Детекция УФ при 210 нм
Время удерживания 3,4 мин
Результаты анализов показывают понижение значений уровня препарата в плазме от ~70 мкг/мл при 2 минутах до <2 мкг/мл при 90 и 120 минутах.
Соединение 217е
Дозировка и приготовление образцов
Препарат растворяли в стерильном 0,02 М Tris, получая раствор концентрации 2,5 мг/мл, который вводили 11 группам из 5 самцов CD-1 мышей через хвостовую вену в дозе 25 мг/кг. В каждой из следующих временных точек: 2, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90 и 120 минут, группу животных анестезировали, и кровь собирали в гепаринизированные пробирки. После отделения плазму хранили до анализа при -20° С.
Анализ
Аликвоты плазмы (100 мкл) разбавляли ацетонитрилом (100 мкл), энергично перемешивали 20 секунд и центрифугировали 10 минут. Получившийся супернатант отделяли и 20 мкл вводили для ВЭЖХ-анализа.
Результаты анализов показывают понижение значений концентрации в плазме от ~55 мкг/мл при 2 минутах до <0,2 мкг/мл при 60-120 минутах.
ПРИМЕР 3
Пептидильные ингибиторы ICE быстро выводятся со скоростью выведения выше, чем 80 мл/мин/кг. Соединения с более низкими скоростями выведения имеют улучшенные фармакокинетические свойства относительно пептидильных ингибиторов ICE.
Мы определяли скорости выведения на мышах (мл/мин/кг) для некоторых соединений настоящего изобретения, используя методы, описанные ниже:
Анализ выведения на крысах in vivo
За день до фармакокинетических исследований проводят каннюляцию шейного и каротидного сосудов крыс под анестезией. М.J.Free, R.A.Jaffee; “Cannulation techniques for the collection blood and other bodily fluids”; in: Animal Models; p.480-495; N.J.Alexander, Ed.; Academic Press; (1978). Препарат (10 мг/мл) вводили через шейную вену в среде, обычно состоящей из пропиленгликоля/физраствора, содержащих 100 мМ бикарбонат натрия в соотношении 1:1. Препарат вводили животным в дозах 10-20 мг/кг и образцы крови собирали через 0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 60 и 90 минут через постоянно находящийся в сонной артерии катетер. Кровь центрифугировали для получения плазмы, которую хранили до анализа при -20° С. Фармакокинетический анализ данных проводят методом нелинейной регрессии, используя стандартное програмное обеспечение, такое, как Rstrip (MicroMath Softwear, UT) и/или Pcnonlin (SCI Softwear, NC), для получения значений выведения.
Аналитика:
Крысиную плазму экстрагировали равным объемом ацетонитрила (содержащим 0,1% TFA). Образцы центрифугировали приблизительно при 1000× g и супернатанты анализировали с помощью градиентной ВЭЖХ. Типичная аналитическая процедура описана ниже.
200 мкл плазмы осаждали 200 мкл 0,1% раствора трифторуксусной кислоты (TFA) в ацетонитриле и 10 мкл 50% водного раствора хлорида цинка, энергично перемешивали, затем центрифугировали при ~1000× g, супернатанты собирали и анализировали с помощью градиентной ВЭЖХ.
Стандартная кривая получена с использованием концентраций 20, 10, 5, 2 и 1 мкг/мл.
ПРИМЕР 4
АНАЛИЗ ЦЕЛОЙ КРОВИ НА ПРОДУКЦИЮ IL-1β
Мы получили значения IC50 для ряда соединений настоящего изобретения, используя способы, описанные ниже:
Цель:
Анализ целой крови является простым методом определения продукции IL-1β (или других цитокинов) и активности потенциальных ингибиторов. Комплектность этой аналитической системы с ее полным комплектом лимфоидных и воспалительных типов клеток, спектром плазменных белков и красных кровяных клеток, является идеальной системой, воспроизводящей in vitro физиологические условия человека in vivo.
Материалы:
Непирогенные шприцы (~30 см3)
Непирогенные стерильные вакуумные пробирки, содержащие лиофилизованный
Na2EDTA (4,5 мг/10 мл пробирку)
Образец целой человеческой крови (~30-50 cc)
1,5 мл пробирки Эппендорфа
Маточные растворы тестируемого соединения (~25 мМ в DMSO или другом растворителе)
Раствор хлорида натрия (0,9%), не содержащий эндотоксина и сток-раствор липополисахарида в HBSS (Sigma; Cat. # L-3012) с концентрацией 1 мг/мл.
ELISA-набор для определения IL-1β (R & D Systems; Cat # DLB50)
ELISA-набор для определения TNFα (R & D Systems; Cat # DTA50)
Водная баня или инкубатор
Экспериментальная процедура анализа целой крови:
Устанавливают инкубатор или водяную баню при 30° С. Аликвоту крови 0,25 мл вносят в 1,5 мл пробирки Эппендорфа. Замечание: обязательно переворачивать пробирки с образцом целой человеческой крови после каждых двух аликвот. Различия в повторах могут происходить в результате того, что седиментирующие клетки неравномерно суспендированы. Использование пипетки с позитивным замещением также будет минимизировать различия между параллельными аликвотами.
Растворы препарата готовят в стерильном непирогенном физрастворе путем серийных разведений. Серии разведений, устанавливающие кажущуюся Кi для тестируемого соединения, которую определяют в анализе ингибирования ICE, обычно используют для первичного скрининга соединений. В случае очень гидрофобных соединений, готовят их разведения в свежей плазме, полученной от того же донора крови, или в PBS, содержащих 5% DMSO для увеличения растворимости.
Добавляют 25 мкл разведения тестируемого соединения, или контрольной среды, и мягко премешивают образец. Затем добавляют 5,0 мкл раствора LPS (из сток-раствора с концентрацией 250 нг/мл получают свежий с конечной концентрацией LPS 5,0 нг/мл), и снова перемешивают. Пробирки инкубируют при 30° С на водяной бане в течение 16-18 часов, время от времени перемешивая. Альтернативно пробирки могут быть помещены в перемешиватель, установленный на 4 цикла в минуту, на такой же инкубационный период. В этом анализе необходимо использовать двойные или тройные повторы со следующими контролями: негативный контроль - без LPS; позитивный контроль - без тестируемого ингибитора, контрольная среда - с самой высокой концентрацией DMSO или растворителя, использующегося в эксперименте. Во все контрольные пробирки добавляют дополнительно физраствор для нормализации объемов тестируемых образцов как контрольных, так и экспериментальных с целой кровью.
После периода инкубации образцы целой крови центрифугируют 10 минут при ~2000 об/мин в микроцентрифуге, плазму переносят в новые микроцентрифужные пробирки и центрифугируют при 1000xg для осаждения оставшихся тромбоцитов, если это необходимо. Образцы плазмы можно хранить при -70° С до анализа на уровни цитокинов методом ELISA-теста.
ELISA:
Мы использовали R & D Systems (614 McKinley Place N.E.Minneapolis, MN 55413) Quantikine наборы для количественного определения IL-1β и TNFα . Анализы проводили в соответствии с инструкциями производителя. В позитивных контролях наблюдаемые уровни IL-1β составляли ~1-5 нг/мл среди индивидуалов. Разведение плазмы 1:200 во всех образцах в наших экспериментах было достаточным для попадания результатов ELISA-тестов в линейный интервал стандартных кривых ELISA. Если наблюдаются различия в анализе целой крови, может возникнуть необходимость оптимизации стандартных разведений. Nerad, J.L. et al., J.Leukocyte Biol., 52, pp.687-692 (1992).
ПРИМЕР 5
ИНГИБИРОВАНИЕ ГОМОЛОГОВ ICE
1. Выделение гомологов ICE
Экспрессия ТХ в клетках насекомых с использованием экспрессионной системы бакуловируса. Мы субклонировали кДНК ТХ (Faucheu et al., supra 1995) в модифицированный pVL1393 трансифицирующий вектор, полученную плазмиду (pVL1393/TX) со-трансфицировали в клетки насекомых с вирусной ДНК и идентифицировали рекомбинантный бакуловирус. После образования рекомбинантного вирусного маточного раствора с высоким титром, в среде определяли активность ТХ, используя видимый анализ ICE. Обычно инфекция Spodoptera frugiperda (Sf9) клеток насекомых в MOI из 5 с рекомбинантным вирусным стоком приводит к максимальной экспрессии 4,7 мкг/мл через 48 часов. В этом анализе ICE использовали в качестве стандарта.
Были также экспрессированы Т7 меченные по амино концу версии ICE или ТХ. Вначале для того, чтобы способствовать идентификации и выделению рекомбинантных белков, разные системы исследовали на различные уровни экспрессии и относительные уровни апоптозов, вызванных различными гомологами. Апоптоз в инфицированных Sf9 клетках (определяемый эксклюзивным методом с использованием трипанового синего) был выше в линиях, экспрессирующих ICE или ТХ, по сравнению с клетками, инфицированными только вирусной ДНК.
Экспрессия и выделение N-концевого (His)6-меченого СРР32 в Е.coli.
кДНК, кодирующая полипептид СРР32 (Fernandes-Alnemri et al., supra 1994), начиная с Ser (29), была PCR амплифицирована с праймеров, которые были встроены в сайты фрейма XhoI как с 5’, так и с 3’ концов кДНК, и полученный фрагмент XhoI встраивали в экспрессионный вектор рЕТ-15b с вырезанным фрагментом XhoI для того, чтобы создать во фрейме слияние с (Нis)6-меткой на N-конце рекомбинантного белка. Полученный рекомбинантный белок начинается с аминокислотной последовательности где LVPRGS является местом, по которому происходит расщепление под действием тромбина, затем СРР32, начинающимся с Ser (29). Е.coli BL21(DE3), несущие плазмиды, выращивали до лог-фазы при 30° С и затем индуцировали 0,8 мМ IPTG. Клетки собирали через два часа после добавления IPTG. Получали лизаты и растворимые белки выделяли методом хроматографии на Ni-агарозе. Весь экспрессированный СРР32 белок был в активной форме. N-концевой сиквенс показал, что процессинг осуществляется по аутентичному положению между Asp (175) и Ser (176). Получили приблизительно 50 мкг белка СРР32 из 200 мл культуры. В результате титрования активного центра определили, что все белки были полностью активны. Препараты протеазы были также очень активны in vitro в отношении к расщепления PARP, а также синтетического субстрата DEVD-AMC (Nicholson et al, supra 1995).
2. Ингибирование гомологов ICE
Избирательность ряда обратимых ингибиторов гомологов ICE описана в Таблице 1. Анализ фермента ICE проводили в соответствии с методикой Wilson et al. (supra 1994) с использованием субстрата YVAD-AMC (Thornberry et al., supra 1992). Анализ активности ТХ проводили, используя субстрат ICE, в условиях, идентичных условиям, применяющимся при анализе ICE. Анализ СРР32 проводили, используя субстрат DEVD-АМС (Nicholson et al., supra 1995). В общем, существует низкая избирательность между ICE и ТХ для широкого ряда строительных блоков. Ни один из синтетических соединений, тестируемых для ICE, не являлся эффективным ингибитором СРР32. При анализе обратимых соединений в самой высокой концентрации (1 мкМ) ингибирования не обнаруживали.
Таблица 1 | |||
Соединение | Кi ICE (нМ) | Кi ТХ (нМ) | Кi СРР32 (нМ) |
214е | 7,5 | 7,0±1,1 | >1000 |
135а | 90 | 55±9 | >1000 |
125b | 60 | 57±13 | >1000 |
137 | 40 | 40±7 | >1000 |
Константы скорости второго порядка для инактивации ICE и его гомологов с селективными необратимыми ингибиторами представлены ниже (Таблица 2). Изучаемые необратимые соединения представляют собой широкий спектр ингибиторов ICE и его гомологов. Некоторая селективность, однако, наблюдается у необратимых соединений при сравнении ингибирования ICE и СРР32 (см. табл.2).
ПРИМЕР 6
ИНГИБИРОВАНИЕ АПОПТОЗА
Fas-индуцированный апоптоз в U937 клетках. Оценивали способность соединений блокировать анти-Fаs-индуцированный апоптоз. В предварительном эксперименте, используя RTPCR, определяли мРНК, кодирующие ICE, TX, ICH-1, CPP32 и СМН-1 в нестимулированных клетках U937. Эту клеточную линию применяли для изучения апоптоза. Клетки U937 вносили для засева культуры при концентрации 1× 105 клеток/мл и выращивали до концентрации ~5× 106 клеток/мл. Для экспериментов с апоптозом клетки в концентрации 2× 106 помещали в 24-луночные планшеты для культур тканей в 1 мл RPMI-1640 10% FPS и стимулировали антителами к анти-Fаs-антигену в концентрации 100 нг/мл (Medical and Biological Laboratories, LTD). После 24-часовой инкубации при 37° С процентное содержание апоптозных клеток определяли FACS-анализом, используя ApoTag реагенты.
Все соединения тестировали первоначально при 20 мкМ, а для определения значений IС50 проводили титрования с активными соединениями. Ингибирование апоптоза (>75% при 20 мкМ) наблюдали для 108a, 136 и 138. Значение IC50, равное 0,8 мкМ, было определено для 217е по сравнению с отсутствием ингибирования анти-Fas-индуцированного апоптоза для 214е при 20 мкМ.
ПРИМЕР 7
БЫСТРЫЙ АНАЛИЗ IN VIVO ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИ-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ
Продукция IL-1β , индуцированная LPS
Эффективность 214е и 217е оценивали на CD1 мышах (n=6 на условие), стимулированных LPS (20 мг/кг IP (интраперитонеально)). Тестируемое соединение приготовляли в смеси: оливковое масло:DMSO:этанол (90:5:5) и вводили методом IP инъекции через один час после LPS. Сывороточные уровни IL-1β определяли с помощью ELISA. Результаты, представленные на фиг.6, демонстрируют, что 214е дозо-зависимо ингибирует секрецию IL-1β с ED50 приблизительно равным 15 мг/кг. Подобные результаты получены во втором эксперименте. Значительное ингибирование секреции IL-1β наблюдали также у мышей, которым вводили 217е (фиг. 7). Однако, ясная зависимость доза-ответ не была выявлена.
Соединения 214е и 217е (50 мг/кг) вводили также через оральный зонд для избежания абсорбции. Результаты, представленные на фиг. 8, демонстрируют, что 214е, но не 217е, при пероральном введении ингибирует секрецию IL-1β , что позволяет предположить, что ингибиторы ICE обладают эффективностью, как антивоспалительные агенты, при пероральном применении.
Эффективность аналогов 214е также оценивали на мышах, стимулированных LPS, после IP (фиг. 9) и РО (перорального) (фиг. 10) введения.
Таблица 3 - % ингибирования продукции IL-1β аналогами 214е в мышах, стимулированных LPS, после IP и РО введения (50 мг/кг).
Таблица 3 | ||
Соединение | РО % ингибирования | IP % ингибирования |
214е | 75 | 78 |
265 | 27 | 30 |
416 | 52 | 39 |
434 | 80 | 74 |
438 | 13 | 40 |
442 | 10 | 0 |
2002 | - | 78 |
Следующие результаты показаны в табл.4.
Таблица 4 Cравнение эффективности пролекарства 214е в LPS-стимулированных мышах: временная зависимость ингибирования продукции IL-1β Время введения соединения (относительно времени стимуляции LPS), РО, 50 мг/кг | ||||
Соединение | -2 часа | -1 час | 0 часов | +1 час |
214е | 55% | |||
39* | -* | 80* | 75* | |
43* | 44* | 48* | 11* | |
-* | -* | -* | 47* | |
304а | 30 | 33 | 68 | 37 |
2100е | 49 | 54 | 94 | 66 |
2100а | 8 | 71 | 67 | 58 |
213е | 0 | 48 | 41 | 89 |
302 | 0 | 27 | 21 | 26 |
2100с | 0 | 0 | 85 | 40 |
2100d | 42 | 35 | 52 | 26 |
2100b | 0 | 0 | 47 | 26 |
2001 | ~63 | ~62 | ~57 | ~54 |
64* | 62* | 58* | 55* | |
* Значения, полученные в последующих анализах |
ПРИМЕР 8
ОПРЕДЕЛЕНИЕ В КРОВИ УРОВНЕЙ ПРОЛЕКАРСТВА 214Е
Мышам вводили РО дозу соединений 302 и 304а (50 мг/кг), приготовленых в 0,5% карбоксиметилцеллюлозе. Образцы крови собирали через 1 и 7 часов после введения дозы. Сыворотку отделяли преципитацией с равным объемом ацетонитрила, содержащего 2% муравьиной кислоты, с последующим центрифугированием. Супернатант анализировали методом жидкостной хроматографии-масспектрометрии (ESI-MS) с уровнем детекции от 0,03 до 3 мкг/мл. Соединения 302 и 304а демонстрируют детектируемые уровни в крови при пероральном введении, само соединение 214е при пероральном введении не демонстрирует уровня в крови выше 0,10 мкг/мл. Соединения 302 и 304а являются пролекарствами 214е и метаболизируются в 214е in viva (см. фиг. 11).
ПРИМЕР 9
Приведенные ниже данные (см. Таблицы 5 и 6) были получены для соединений настоящего изобретения с использованием методов, описанных в Примерах 1-8. Структуры соединений Примера 9 демонстрируются в Примерах 10-17.
Таблица 6 | |||||
Соедине-ние | Флюоресцентный анализ kinact М-1с-1 | Клетки РВМС avg. IC50 (нМ) | Целая кровь человека IC50 (НМ) | Выведение Мыши, в/в мл/мин/кг | Выведение Крысы, в/в мл/мин/кг |
108а | 1× 105 | 17500 | |||
136 | 5,4× 105 | 870 | 2800 | 93 |
Соедине-ние | Флюоресцентный анализ kinact M-1c-1 | Клетки РВМС avg. IC50 (нМ) | Целая кровь человека IC50 (нМ) | Выведение Мыши, в/в мл/мин/кг | Выведение Крысы, в/в мл/мин/кг |
138 | 1,2× 105 | 900 | 2900 | 116 | |
217d | 4,7× 105 | 340 | 4000 | ||
280 | 4× 105 | 650 | >1000 | 187 | |
283 | 1× 105 | <200 | 450 | 104 | |
284 | 3,5× 105 | 470 | 550 | 77 | 100 |
285 | 4,3× 105 | 810 | 1000 | 130 | 50 |
* Значения получены при повторном анализе. |
ПРИМЕР 10
Соединение 139 синтезировали способом, подобным способу, использованному для синтеза 47а.
Соединения 136 и 138 синтезировали способом, подобным способу, использованному для синтеза 57b.
Соединения 135а, 135b и 137 синтезировали способом, подобным способу, использованному для синтеза соединения 69а.
Соединения 813е, 814с, 814е, 817с, 817d, 817e, 820b, 823b, 823е, 826е, 827е, 830е, 832е, 835е, 838е, 846, 857, 865. 902, 904a, 907a, 907b,1004-1013, 1015-1045,1046-1068,1070-1091 и 1093-1099 синтезировали способом, подобным способу, использованному для синтеза соединения 264 и соответствующих соединений в Примерах 10 и 11.
Соединения 47а, 47b, 108а, 108b, 125b, 213е, 214с, 217с, 217d, 217е, 220b, 223b, 223е, 226е, 227е, 230е, 232е, 235е, 238е, 246, 257, 264, 265, 280-287, 302, 304а, 307а и 307b синтезировали, как описано ниже.
H. N-(N-ацетил-тирозинил-валинил-пипеколил)-3-амино-4-оксобутановая кислота.
Стадия А. N-(N-трет-бутоксикарбонилпипеколил)-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофуран.
Реакцию между N-трет-бутоксикарбонилпипеколиновой кислотой (460 мг, 2,0 ммоля) и N-аллилоксикарбонил-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофураном (530 мг, 1,82 ммоля) проводят по способу, аналогичному описанному Chapman (Bioorg. & Med. Chem. Lett. 2, pp. 613-618, (1992)), получая 654 мг указанного в заголовке соединения.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3 (в виде ротамеров)) δ 7,35 (m, 5Н), 6,88 (br. s, 1H), 4,9-4.45(m, 4H), 3,95+ (br. m, 2H), 3,06 (m, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,7 (br. m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,2 (m, 1H), 1,7-l,5(m, 3Н), 1,45 (два s, 9H).
Стадия В. N-пипеколил-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофуран. N-(N-трет-бутоксикарбонилпипеколил)-4-амино-5-бензилокси-2-оксо-тетрагидрофуран (654 мг) растворяют в 15 мл 25% раствора трифторуксусной кислоты в дихлорометане и перемешивют при комнатной температуре. Смесь концентрируют, получая резиноподобный остаток. Остаток растворяют в дихлорметане и промывают 10% раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют с получением 422 мг соединения, указанного в заголовке, в виде твердого вещества бежевого цвета.
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7,38 (m, 5H), 7,15 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 4,95-4,8 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,65 (d, 1H), 4,45 (m, 1H), 3,2 (m, 0,5H), 3,05 (m, 0,5H), 2,95 (m, 0,5H), 2,85 (m, 0,5H), 2,65 (m, 1H), 2,55-2,38(m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,8 (m, 1H), 1,6 (m, 2H), 1,38 (m, 2H).
Стадия С. N-(N-Ацетил-тирозинил-валинил-пипеколил)-4-амино-5-бензилокси-2 -оксо-тетрагидрофуран.
N-Ацетил-тирозинил-валин (464 мг, 1,44 ммоля) и N-пипеколил-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофуран (412 мг, 1,3 ммоля) растворяют каждый в 5 мл диметилформамида и дихлорометана, и охлаждают до 0° С. К охлажденному раствору добавляют 1-гидроксибензотриазол (НОВТ; 210 мг, 1,56 ммоля), затем 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид гидрохлорид (EDC; 326 мг, 1,7 ммоля). После перемешивания в течение 18 часов смесь разбавляют этилацетатом и промывают водой, 10% гидросульфатом натрия, 10% бикарбонатом натрия и водой. Органический слой концентрируют с получением неочищенного продукта, который очищают методом флэш-хроматографии (SiO2), элюируя 94:6:1 (дихлорометан:изопропанол:пиридин), и получают 370 мг указанного в заголовке соединения.
1Н ЯМР (500 МГц, СD3ОD (существующий как в виде диастереомеров, так и в виде ротамеров)) δ 7,35 (m, 5H), 7,05 (m, 2H), 6,68 (m, 2H), 5,65 & 5,25 (m, 1H), 4,9-3,95 (m, 8Н), 3,4-2,6 (m, 4H), 2,5-2,1 (m, 1H), 1,98 (s, 1H), 1,9 (s, 1H), 1,85 (s, 1H), 1,8-1,6 (m, 2H), 1,55-1,3 (m, 4H), 0,95-0,85 (m, 6H).
Стадия D. N-(N-Ацетил-тирозинил-валинил-пипеколил)-3-амино-4-оксобутановая кислота.
К раствору 100 мг N-(N-ацетил-тирозинил-валинил-пипеколил)-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофурана в 10 мл метанола добавляют 60 мг Pd(OH)2 на угле и смесь помещают в атмосферу водорода, создающуюся с помощью баллона. Смесь фильтруют через цилит и концентрируют, получая твердое вещество белого цвета. Это твердое вещество растворяют в 2 мл метанола и перетирают с диэтиловым эфиром, получая 26 мг указанного в заголовке соединения.
1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD (существующий как в виде диастереомеров, так и в виде ротамеров)) δ 7,1 (m, 2H), 6,7 (m, 2H), 5,2 (br. m, 1H), 4,8-3,6 (m, 6H), 3,2-2,5 (m, 4H), 2,5-2,1 (m, 1H), 1,95 (три s, 3Н), 1,9-1,3 (m, 6H), 1,1-0,7 (m, 6H).
К. N-[N-Ацетил-тирозинил-валинил-(4-бензилокси)пролинил]-3-амино-4-оксобутановая кислота.
Стадия А. N-(N-Аллилоксикарбонил-4-бензилоксипролинил)-3-амино-4-оксобутановой кислоты трет-бутиловый эфир семикарбазон.
Указанное в заголовке соединение получают в результате взаимодействия N-аллилоксикарбонил-4-бензилоксипролина с третбутиловым эфиром семикарбазоном 3-амино-4-оксобутановой кислоты (T.L. Graybill et. al., Abstracts of papers, 206th National
Meeting of the American Chemical Society, Abstract MEDI-235. Chicago, IL. (1993)) при таких же условиях конденсации пептида, как описано выше (соединение ; стадия С).
1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 9,05 (br. s, 1H), 15 7,85 (br. m, 1H), 7,4-7,2 (m, 5H), 7,15 (br. s, 1H), 6,55 (br. s, 1H), 5,9 (m, 1H), 5,1-4,9 (br. m, 2H), 4,65-4,4 (m, 4H), 4,2 (br. m, 1H), 3,75-3,5 (m, 2H), 2,75-2,55 (m, 2H), 2,5 (br. m, 1H), 2,25 (br. m, 1H), 1,4 (s, 9H).
Стадия В. N-(N-Ацетил-тирозинил-валинил-(4-бензилоксипролинил))-3-амино-4-оксобутановой кислоты трет-бутиловый эфир семикарбазон.
Указанное в заголовке соединение получают в результате взаимодействия N-ацетил-тирозинил-валина и N-(N-аллилоксикарбонил-4-бензилоксипролинил)-3-амино-4-оксобутановой кислоты трет-бутилового эфира семикарбазона в реакционных условиях, описанных для соединения , стадия А.
1Н ЯМР (500 МГц, СD3ОD) δ 7,35-7,2 (m, 6H), 7,0 (d, 2H), 6,65(d, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,6-4,45 (m, 4H), 4,3 (br. m, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,75-2,6 (m, 3H), 2,35 (m, 1H), 2,1 (m, 1H), 1,9 (s, 3H), 1,4 (s, 9H), 0,95 (d, 3H), 0,90 (s, 3H).
Стадия С. N-(N-Ацетил-тирозинил-валинил-(4-бензилоксипролинил))-3-амино-4-оксобутановая кислота.
N-(N-ацетил-тирозинил-валинил-(4-бензилоксипролинил))-3-амино-4-оксобутановой кислоты трет-бутиловый эфир семикарбазон (270 мг) растворяют в 10 мл 25% раствора трифторуксусной кислоты в дихлорметане и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Смесь концентрируют, получая твердый остаток. Остаток растворяют в 10 мл смеси метанол: уксусная кислота: 37% формальдегид (3:1:1) и перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь концентрируют, полученный остаток очищают методом флэш-хроматографии (SiO2), элюируя смесью дихлорметан/метанол/муравьиная кислота (100:5:0.5), и получают 37 мг указанного в заголовке соединения.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD (существующий в виде смеси диастереомеров полуацеталей 1:1)) δ 7,4-7,25 (m, 5H), 7,0 (d, 2H), 6,65 (d, 2H), 4,65-4,05 (m, 7H), 3,75-3,4 (m, 2H), 3,05-2,3 (m, 5H), 2,2-1,95 (m, 2H), 1,90 (s, 3Н), 1,0 (d, 3H), 0,95 (d, 3Н).
(а) X=O
(в) X=H2
(44а). К раствору (1S, 9S) т-бутил-9-амино-6,10-диоксо-октагидро-6Н-пиридазино-[1,2-а] [1,2]диазепин-1-карбоксилата (690 мг; 2,32 ммоля; GB 2128984) в диоксане (16 мл) и воде (4 мл) при 0°С добавляют твердый бикарбонат натрия (292 мг;
3,48 ммоля), затем по каплям добавляют 3-фенилпропионил хлорид (470 мг, 2,78 ммоля). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов, затем добавляют еще бикарбонат натрия (200 мг; 2,38 ммоля) и 3-фенилпропионил хлорид (100 мг; 0,6 ммоля). Смесь перемешивают еще 2 часа при комнатной температуре, разбавляют этилацетатом (50 мл), промывают насыщенным бикарбонатом натрия (2× 25 мл), высушивают (MgSO4) и концентрируют. Остаток очищают методом флэш-хроматографии (0-50% этилацетат/хлороформ), и, наконец, кристаллизуют в результате перетирания с эфиром, получая 860 мг (86%) твердого вещества белого цвета: т. пл. 137-138° С; [α ]
23 |
D |
1H ЯМР (CDCl3) δ 7,24 (5Н, m), 6,50 (1H, d, J=7.5), 5.24 (1Н, m), 4,90 (1H, m), 4,60 (1H, m), 3,44 (1H, m), 2,93 (2H, m), 2,84 (1H, m), 2,64 (1H, m), 2,54 (2H, m), 2,26 (2H, m), 1,70 (4H, m), 1,70 (9H, s). MC (FAB, m/z): 430 (M++1), 374, 242, 105, 91.
(44b) получают из (IS, 9S) т-бутил-9-амино-октагидро-10-оксо-6Н-пиридазино [1,2-а] [1,2] диазепин-1-карбоксилата (Аttwood et al., J. Chem. Soc. Perkin 1. pp. 1011-19 (1986)) так же, как и 44а, получая 810 мг (81%) бесцветного масла: [α ]
23 |
D |
1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,24 (5Н, m), 6,75 (1H, d, J=6,7), 5,27 (1H, m), 4,92 (1H, m), 3,39 (1H, m), 3,03 (4H, m), 2,55 (3Н, m), 2,33 (1H, m), 2,17 (1H, m), 1,80 (5Н, m), 1,47 (9H, s), 1,39 (1H, m). MC (FAB, m/z): 416 (M+ + 1), 360, 211, 143, 97.
(45а). К раствору (IS, 9S) т-бутил-6,10-диоксо-октагидро-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино-[1,2-а] [1,2]диазепин-1-карбоксилата (44а) (800 мг; 1,863 ммоля) в сухом дихлорметане (5 мл) при 0° С добавляют трифторуксусную кислоту (5 мл). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов и затем концентрируют. К остатку добавляют сухой эфир (10 мл) и затем удаляют под вакуумом. Этот процесс повторяют три раза для получения кристаллического твердого вещества. Твердое вещество перетирают с эфиром, получая 590 мг (85%) твердого кристаллического вещества белого цвета: т. пл. 196-197,5° С; [α ]
23 |
D |
1Н ЯМР (СD3ОD) δ 8,28 (1Н, d, J=7,4), 7,22 (5Н, m), 5,32 (1Н, dd, J=5,9, 2,9), 4,75 (1Н, m), 4,51 (1Н, m), 3,50 (1Н, m), 3,01 (1Н, m), 2,91 10 (2Н, m), 2,55 (2Н, m), 2,29 (3Н, m),1,95(2H,m),1,71(2H,m).
Аналитически рассчитано для С19Н23N3О5: С, 61,12; Н, 6,21; N, 11,25. Обнаружено: С, 60,80; Н, 6,28; N, 10,97. МС (FAB, m/z) 374 (M+ + 1), 242, 105, 91.
(45b) получают из (IS, 9S) т-бутил-октагидро-10-оксо-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксилата (44b) с помощью способа, описанного для соединения 45а, получая 657 мг (96%) 45b в виде кристаллического твердого вещества: т. пл. 198-202° С; [α ]
23 |
D |
1H ЯМР (СD3OD) δ 7,92 (1Н, d, J=7,9), 7,20 (5Н, m), 5,29 (1H, m), 4,90 (1Н, m), 3,47 (1Н, m), 3,08 (2Н, m), 2,90 (2Н, m), 2,55 (3Н, m), 2,36 (1Н, m), 1,81 (5Н, m), 1,43 (2Н, m). MC(FAB, m/z) 360 (M+ +1), 211, 143, 91.
(46а). К раствору (1S, 9S) 6,10-диоксо-октагидро-9-(3-фенил-пропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а] [1,2] диазепин-1-карбоксильной кислоты (45а) (662 мг; 1,773 ммоля) в сухом дихлорметане (9 мл) и сухом диметилформамиде (3 мл) при комнатной температуре добавляют хлорид бис(трифенилфосфин)палладия (30 мг) и (3S, 2R,S)-3-аллилоксикарбониламино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран (Chapman, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2, pp. 613-18 (1992)) (568 мг; 1,95 ммоля), затем по каплям добавляют гидрид три-н-бутилата олова (1,19 г; 4,09 ммоля). К смеси добавляют 1-гидрокси-бензотриазол (479 мг; 3,546 ммоля) и смесь охлаждают до 0° С перед добавлением гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (408 мг; 2,128 ммоля). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3,25 часов и разбавляют этилацетатом (50 мл), дважды промывают разбавленной соляной кислотой (20 мл), дважды насыщенным раствором бикарбоната натрия (20 мл), один раз насыщенным солевым раствором, затем высушивают (MgSO4) и концентрируют. Получившееся масло очищают методом флэш-хроматографии (0-100% этилацетат/хлороформ), получая 810 мг (81%) 46а в виде смеси аномеров: т. пл. 92-94° С; IR (КВr) 3311, 1791, 1659, 1651, 1536; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,49, 6,56 (1Н, 2d, J=6,7, 7,8), 7,29 (10Н, m), 6,37, 6,18 (1Н, 2d, J=7,7,7,6), 5,56, 5,34 (1Н, d, s, J=5,2), 5,08-4,47 (6Н), 3,18-2,80 (5Н), 2,62-2,28 (5Н), 2,04-1,53 (5Н). MC (FAB, m/z), 563 (M++1),328,149,91.
(46b) получают из 45b с помощью способа, описанного для соединения 46а, получая 790 мг (96%) стеклоподобного вещества: т.пл. 58-60° С; IR (КВr) 3316, 2940,1793,1678, 1641, 1523, 1453, 1120; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,28 (10Н, m), 6,52, 6,42 (1Н, 2d, J=7,2, 7,1), 5,53, 5,44 (1Н, d, s, J=5,2), 5,35 (1H, m), 4,6-4,9, 4,34 (4Н, m), 3,1-2,8 (6Н, m), 2,6-2,1 (7Н), 1,95-1,05 (5Н). MC (FAB, m/z), 549 (M+ + 1), 400, 310, 279, 91.
(47а). Смесь [3S, 2R,S, (1S,9S)] N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)-6,10-диоксо-октагидро-9-(3 -фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а] [1,2] диазепин-1 -карбоксамид (46а) (205 мг; 0,364 ммоля), 10% палладия на угле (200 мг) и метанола (20 мл) перемешивают под током водорода при атмосферном давлении в течение 5 часов. Смесь фильтруют и концентрируют, получая 154 мг (90%) стеклоподобного вещества: т. пл.116-118° С; [α ]
23 |
D |
(47b) получают из 46b no способу, описанному для 47а. Остаток очищают методом флэш-хроматографии (0-10% метанол/хлороформ), получая 65 мг (52%) стеклоподобного вещества; т.пл. 87-90° С; [α ]
23 |
D |
(56а). К раствору уксусной кислоты (55а) (WO 93 21213) в ТГФ (2 мл), перемешиваемому при комнатной температуре, добавляют 1-гидроксибензотриазол (60 мг, 0,448 ммоля) и гидрохлорид диметиламинопропил-3-этилкарбодиимида (47 мг, 0,246 ммоля). Через 5 мин добавляют воду (2 капли) и продолжают перемешивание еще 20 минут. Хлорид бис(трифенилфосфин)палладия II (6 мг) добавляют после раствора т-бутил 3-(аллилоксикарбониламино)-4-оксо-5-(2,6-дихлорбензоил-окси)пентаноата (WO 93 16710) (103 мг, 0,224 ммоля) в ТГФ (1 мл). Гидрид трибутил олова (0,09 мл, 0,336 ммоля) добавляют по каплям в течение 1 часа при комнатной температуре. Смесь перемешивают еще 3 часа и выливают в этилацетат, промывают 1М HCI, водным НаНСО3, насыщенным солевым раствором, высушивают над MgSO4 и концентрируют в вакууме. Остаток перетирают с пентаном и супернатант отбрасывают. Оставшееся твердое вещество очищают методом флэш-хроматографии (50% этилацетат/гексан), получая указанное в заголовке соединение 92 мг (63%) в виде бесцветного масла: [α ]
23 |
D |
IR (пленка) 3377, 3365, 3332, 3312, 1733,1691,1650,1599,1515, 1366, 1261,1153,1068, 747; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,09 (1Н, d, J=6,8), 7,84 (1Н, s), 7,58 (1Н, d, J=8,3), 7,33 (8Н, m), 7,02 (1Н, dd, J=6,9, 1,7), 6,33 (1Н, t, J=7,2), 5,20 (2Н, s), 5,12 (2Н, m), 4,89 (1H, dt), 4,65 (2Н, m), 2,80 (2Н, m), 1,38 (9Н, s).
(56b), получают по способу, описанному для (56а), который позволяет получать указанное в заголовке соединение (66%) в виде бесцветного масла: IR (пленка) 3364, 3313,1738, 1688,1648,1600,1566, 1514, 1433, 1369,1254, 1152; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,40 (1Н, d, J 7,6), 8,30 (1Н, s), 7,28 (13Н, m), 6,20 (1Н, d, J=7,6), 5,12 (2Н, q), 4,86 (1Н, m), 4,65 (2Н, q), 4,06 (2Н, s), 3,07-2,61 (6Н, m), 1,39 (9Н, s).
(57а; Q). Раствор эфира 56а (210 мг, 0,356 ммоля) в дихлорометане (0,5 мл) охлаждали до 0° С и обрабатывали трифторуксусной кислотой (0,5 мл), перемешивали и нагревали до 20° С не менее 30 минут. Раствор упаривают досуха при пониженном давлении, опять растворяют в дихлорметане и концентрируют (× 3). Остаток перетирают с этилацетатом и разбавляют эфиром, получая указанное в заголовке соединение 162 мг (85%) в виде бесцветного твердого вещества: т. пл 165-8° С (разложение); [α ]
23 |
D |
1Н ЯМР (d6-DMSO) δ 8,96 (1Н, d, J=7,3), 8,34 (1Н, s), 7,85 (1Н, dd, J=7,3), 7,58 (3Н, m), 7,35 (5Н, m), 6,29 (1Н, t, J=7,3), 5,26 (2Н, m), 5,15 (2Н, s), 4,69 (ЗН, m), 2,75 (2Н, m). Аналитически рассчитано для C27H23N3O9Cl2: С, 53.66; Н, 3.84; N, 6.95. Обнаружено: С, 53.36; Н, 3.90; N, 6,81. М.С. (+ FAB); 604 (M++ 1), 285, 241, 195, 173, 149, 91.
(57b; ), получают по способу, описанному для 57а, который позволяет получать указанное в заголовке соединение (78%) в виде бесцветных кристаллов: т. пл. 116-120° С (разложение); [α ]
23 |
D |
(65а). Смесь 2-нитро-6-метоксифенола (2,62 г, 15,5 ммоля) (ЕР 333176) и 10% палладия на угле (130 мг) в этаноле (50,0 мл) перемешивают в атмосфере Н2 в течение 75 мин. Смесь фильтруют через Celite®, затем немедленно обрабатывают п-толуолсульфоновой кислотой (32,0 мг) и триэтилортоформатом (6,45 мл, 38,8 ммоля), затем нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в атмосфере N2. Через 20 ч добавляют п-толуолсульфоновую кислоту (30,0 мг) и триэтилортоформат (6,45 мл, 38,8 ммоля). После суммарных 44 ч нагревания реакционной смеси дают охладиться и упаривают под вакуумом. Полученный остаток очищают методом флэш-хроматографии (25:75 этилацетат/гексан), и получают 1,97 г (85%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества желтого цвета: т. пл 28-31° С; IR (пленка) 1629, 1497, 1434, 1285,1097;
1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,09 (1Н, s), 7,40 (1Н, d, J=8,0), 7,28 (1Н, t, J=8,0), 6,89 (1Н, d, J=8,0), 4,02 (3Н, s); 13С ЯМР (CDCl3) δ 152,84, 145,82, 142,50, 139,99, 125,75, 113,42, 108,80, 56,97. Аналитически рассчитано для C8H7NO2. 0,1Н2О: С, 63.65; Н, 4.81; N, 9.29. Обнаружено: С, 63.43, Н, 4.88, N, 9.05. М.С. (+ FAB); 150 (М+ + 1).
(65b). К суспензии 4-гидроксибензоксазола (2,00 г, 14,8 ммоля) (Musser et al., J. Med. Chem., 30, pp. 62-67 (1987)) в ацетоне (80,0 мл) добавляют прокаленный К2СО3 (2,25 г, 16,3 ммоля), затем йодистый метан (1,38 мл, 22,2 ммоля). Реакционную смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в атмосфере N2 в течение 4,5 ч, затем фильтруют и упаривают под вакуумом, получая неочищенный продукт. Полученный остаток очищают методом флэш-хроматографии (25:75 этилацетат/гексан), и получают 2,0 г (91%) указанного в заголовке соединения в виде кристаллического твердого вещества белого цвета: т. пл 72-74° С; IR (КВr) 3089, 1619, 1610, 1503, 1496, 1322, 1275,1090, 1071, 780, 741; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 8,02 (1Н, s), 7,32 (1Н, t, J=8,0), 7,18
(1H, d, J=8,0), 6,81 (1H, d, J=8,0), 4,04 (3H, s). Аналитически рассчитано для C8H7NO2: С, 64.42; Н, 4.73; N, 9.39. Обнаружено: С, 64.40; Н, 4.84; N, 9.31; m/z (EI) 149 (M+ + 1, 100%).
(66а). К перемешиваемому раствору 65а (548,6 мг, 3,68 ммоля) в безводном ТГФ (18,5 мл) при -78° С в атмосфере N2 добавляют по каплям 1,56 М раствор н-бутилата лития в гексане (2,47 мл, 3,86 ммоля), получая раствор желтого цвета. После перемешивания при -78° С в течение 20 мин, добавляют сухой MgBr2OEt2 (1,045 г, 4,05 ммоля) в виде твердого вещества. Получившуюся смесь нагревают до -45° С и перемешивают в течение 15 мин. Получившуюся смесь затем снова охлаждают до -78° С и по каплям добавляют раствор (S)-Alloc-Asp(t-Bu)H (946,4 мг, 3,68 ммоля) в ТГФ (18,5 мл). Реакционную смесь перемешивают при -78° С в течение 30 мин, нагревают до 0° С и перемешивают 1 ч. Получившуюся гомогенную реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают 16 ч. Реакцию гасят 5% раствором бикарбоната натрия (3,5 мл), затем удаляют ТГФ под вакуумом. Получившийся водный остаток экстрагируют метиленхлоридом (× 6). Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают (MgSO4), фильтруют и упаривают под вакуумом, получая 1,8 г неочищенного продукта. После флэш-хроматографии (40:60 этилацетат/гексан) получают 1,21 г (81%) указанного в заголовке соединения в виде масла, представляющего собой смесь диастереомеров при С-4: IR (CH2CI2) 3425, 2983, 1725, 1504, 1290, 1157,1101; 1Н ЯМР(СDСl3) δ 7,35-7,19 (2Н, m), 6,89-6,81 (1H, m), 6,00-5,57 (2Н, m), 5,32-5,05 (3H, m), 4,68-4.35 (3H, m), 4,01 (3H, s), 2,86-2,59 (2Н, m), 1,45 (9Н, s). 1,41 (9Н, s); 13С ЯМР (СDСl3) δ 171,18, 171,09, 165,80, 165,30, 156,71, 156,60, 145,65, 142,76, 142,71, 140,82, 140,72, 133,23, 125,81, 125,72, 118,41, 118,21, 113,07, 112,87,108,95, 82,16, 70,28, 69,98, 66,52, 66,39, 57,03, 52,57, 52,29, 37,83, 36,86, 28,65. Аналитически рассчитано для C20H26N2O7·0,6Н2O: С, 57.57; Н, 6.57; N, 6.72. Обнаружено: С, 57.49, Н, 6.34, N, 6.60. М.С. (+FAB); 407 (M++1); 351,307, 154.
(66b) получают по способу, описанному для 66а, который позволяет получать 1,29 г (26%, 68% от регенерированного исходного вещества) указанного в заголовке соединения в виде масла, представляющего собой смесь диастереомеров при С-4: IR (СН2Сl2) 3400, 1725, 1625, 1505, 1369, 1354, 1281, 1263, 1226, 1158, 1092, 1048; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,34-7,24 (1Н, m), 7,16 (1Н, d, J=8,2), 6,79 (1Н, d, J=7,9), 6,00-5,50 (2Н, m), 5,30-5,05 (ЗН, m), 4,70-4,35 (4Н, m), 4,02 (3Н, s), 2,90-2,45 (2Н, m), 1,45-1,41 (9Н, 2 x s). Аналитически рассчитано для С20Н26N2O7·0,4Н2O: С, 58.07; Н, 6.53; N, 6.77. Обнаружено: С, 58.09; Н, 6.41; N, 6.63. М.С. (+ FAB); 407 (М+ + 1,88%); 351 (100).
(67а). К перемешиваемому раствору 66а (481,9 мг, 1,19 ммоля) и Ас-Туr(tВu)-Vаl-Аlа-ОН (586,3 мг, 1,30 ммоля) в метиленхлориде (3,5 мл) и DMF (3,5 мл) добавляют хлорид бис(трифенилфосфин) палладия (II) (18,0 мг), и по каплям добавляют гидрид трибутил олова (0,80 мл, 2,96 ммоля). Добавляют гидроксибензотриазол (320,4 мг, 2,37 ммоля) и смесь охлаждают до 0° С. Добавляют гидрохлорид 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида (278,2 мг, 1,42 ммоля), смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 16.5h. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и промывают дважды 1М кислым сульфатом натрия, дважды насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой высушивают (MgSO4), фильтруют и упаривают под вакуумом, получая 2,0 г неочищенного продукта. После флэш-хроматографии (95:5 метиленхлорид/метанол) получают 844,0 мг (94%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета: т. пл 205° С; IR (KBr) 3399, 3304, 2977, 1729, 1643, 1506, 1367, 1290, 1161;
1Н ЯМР (d6-DMSO) δ 8,24-7,78 (4Н, m), 7,43-7,32 (2Н, m), 7,23 (2Н, d, J=8.5), 7,16-7,07 (1Н, m), 6,93 (2Н, d, J=8,5), 6,52, 6,40 (1Н, 2 x d, J=5,5, J=5,0), 5,03, 4,78-4,49, 4,45-4,16 (5Н, brt, 2xm), 4,05, 4,04 (3Н, 2 × s), 3,08-2,35 (14Н, m), 2,11-1,89 (1Н, m), 1,83 (3Н, s), 1,49-1,32, 1,15, 1,0-0,81 (27Н, s, 2xm, J=7,0); 13С ЯМР (d6-DMSO) δ 175,55, 175,18, 173,88, 173,75, 173,05, 169,23, 157,28, 148,55, 146,16, 143,21, 136,63, 133,55, 128,87, 127,17, 115,78, 111,92, 84,02, 81,50, 71,40, 61,15, 60,05, 57,79, 53,39, 51,62, 43,76, 40,52, 34,58, 32,52, 31,60, 26,35, 23,11, 22,71, 21,76. Аналитически рассчитано для С39Н55N5O10·0.5Н2O: С, 61.40; Н, 7.40; N, 9.18. Обнаружено: С, 61.43; Н, 7.31; N, 9.07. М.С. (+ FAB); 754 (M+ + 1); 698, 338,267.
(67b) получают в соответствии со способом, описанным для 67а, который позволяет получать 1,05 г (94%) указанного в заголовке соединения в виде мелкого порошка белого цвета: т. пл 210-213° С (разл); IR (KBr) 3284, 2977, 1736, 1691, 1632, 1536, 1505, 1452, 1392, 1367, 1258, 1236, 1161, 1091; 1Н ЯМР (d6-DMSO) δ 8,20-7,75 (4Н, m), 7,40-7,10 (4Н, m), 7,00-6,80 (3Н, m), 6,45, 6,34 (1Н, 2 × d, J=5,3, J=5,0), 5,00-4,10 (5Н, m), 4,00, 3,99 (3Н, 2 × s), 3,00-2,25 (4Н, m), 1,95 (1Н, m), 1,78 (3Н, s), 1,39-0,80 (27Н, m). Аналитически рассчитано для С39Н55N5О10·0,5Н2O: С, 61.40; Н, 7.40; N, 9.18. Обнаружено: С, 61.58; Н, 7.38; N, 8.91. М.С. (+ FAB); 754 (M+ + 1, 30%); 72 (100).
(68а). Реагент Десс-Мартина (1,082 г, 2,55 ммоля) (Ireland et al., J. Org. Chem., 58, p. 2899 (1993); Dess et al., J. Org. Chem., 48, pp. 4155-4156 (1983)) добавляют к суспензии спирта 67а (641,0 мг, 0,85 ммоля) в метиленхлориде (46,0 мл) при перемешивании. Полученную смесь перемешивают в течение 1 ч, после чего распределяют между смесью: насыщенный раствор тиосульфата натрия: насыщенный раствор бикарбоната натрия (1:1, 86,0 мл) и этилацетатом (86,0 мл). Полученную органическую фазу промывают опять смесью: насыщенный раствор тиосульфата натрия: насыщенный раствор бикарбоната
натрия (1:1), насыщенным раствором бикарбоната натрия и насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу высушивают (MgSO4), фильтруют и упаривают под вакуумом, получая 660,0 мг неочищенного продукта. После флэш-хроматографии (94:6 метиленхлорид/метанол) получают 636,0 мг (100%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета: т. пл 209° С; [α ]
23 |
D |
(68b) получают в соответствии со способом, описанным для кетона 68а, который позволяет получать 420 мг (55%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета: т. пл 211-213° С (разл); [α ]
23 |
D |
(69a; ). Раствор эфира 68а (600,0 мг, 0,80 ммоля) в смеси метиленхлорида и трифторуксусной кислоты 1:1 (65,0 мл) перемешивают в течение 1 ч в сухой атмосфере N2. Затем раствор упаривают под вакуумом, помещают в эфир и снова упаривают. Этот
процесс повторяют шесть раз, получая неочищенный продукт в виде твердого вещества не совсем белого цвета. После флэш-хроматографии (градиент от 95:5 до 80:20 метиленхлорид/метанол) получают 420,8 мг (83%) указанного в заголовке соединения в виде гидроскопичного твердого вещества белого цвета. Продукт существует в виде смеси трех изомеров в СD3ОD, состоящей из кето-формы (с 50%), и ее ацилокси кетоформы (два изомера при С-4, с 50%): т. пл разложение выше 150° С; [α ]
23 |
D |
(69b; ) получают в соответствии со способом, описанным для кислоты 69а, который позволяет получать гидроскопичное соединение, указанное в заголовке 252 мг (96%). Продукт существует как смесь трех изомеров в СD3ОD, состоящая из кето формы и ее ацилокси кетальной формы (два изомера при С-4). Продукт существует как единственный изомер в d-6 DMSO: т. пл 200-203° С (разл.); [α ]
23 |
D |
IR (КВr) 3289,2968,1718,1713, 1658, 1634, 1548,1517,1506,1461, 1453, 1393,1369, 1268,1228, 1174, 1092; 1Н ЯМР (d6-DMSO) δ 9,20 (1Н, brs), 8,71 (1Н, d, J=6,2), 8,10 (2Н, m), 7,83 (1Н, d, J=8,7), 7,61 (1Н, t, J=8,2), 7,46 (1Н, d, J=8,2), 7,08 (ЗН, m), 6,65 (2Н, d, J=8,3), 5,50 (1Н, q, J=6,5), 4,50 (1Н, m), 4,37 (1Н, m), 4,20 (1Н, m), 4,05 (3Н, s), 3,09-2,77 (4Н, m), 1,94 (1Н, m), 1,79 (3Н, s), 1,23 (3Н, d, J=7,0), 0,82 (6Н, m). Аналитически рассчитано для C31H37N5O10·3Н2O: С, 55.85; Н, 6.05; N, 10.51. Обнаружено: С, 55.21; Н, 5.69; N, 10.13. М.С. (+ FAB); 640 (М+ + 1, 22%); 107 (100).
(99). Раствор 5-(2,6-дихлорофенил)оксазола (2,71 г, 12,7 ммоля; полученный по способу, подобному описанному в Tet. Lett. 23, р. 2369 (1972)) в тетрагидрофуране (65 мл), охлаждают до -78° С в атмосфере азота. К этому раствору добавляют н-бутиллитий (1,5 М раствор в гексане, 8,5 мл, 13,3 ммоля) и перемешивают при -78° С в течение 30 мин. Добавляют эфират бромида магния (3,6 г, 13,9 ммоля) и раствор оставляют нагреваться до -45° С в течение 15 мин. Реакционную смесь охлаждают до -78°С и по каплям добавляют альдегид 58 (3,26 г, 12,7 ммоля; Graybill et al., Int. J. Protein Res., 44, pp. 173-182 (1993)) в тетрагидрофуране (65 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 25 мин, затем оставляют нагреваться до -40° С, перемешивают в течение 3 ч и затем 1 ч при комнатной температуре. Реакцию гасят 5% NаНСО3 (12 мл) и перемешивают в течение 3 ч. Тетрагидрофуран удаляют под вакуумом и получившийся остаток экстрагируют дихлорметаном. Органический слой промывают насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают над сульфатом магния, фильтруют и упаривают, получая 6,14 г указанного в заголовке соединения. После очистки получают 4,79 г (80%) соединения 99:
1Н ЯМР (СDСl3) δ 1,45(s, 9Н), 2,7-2,5(т, 2Н), 2,8(dd, 1Н), 4,2, 4,4(2 × d, 1Н), 4,7-4,5(m, 3Н), 5,35-5,1(m, 2Н), 5,6, 5,7(2 × d, 1Н), 6,0-5,8(m, 1Н), 7,2(d, 1H), 7,3(m, 1H), 7,4(m, 2H).
a R=H
в R=COCH2CH2Ph
c R=CH2Ph
(104a). Безводный хлористый водород барботировали через раствор метилового эфира (3(S)-трет-бутоксикарбониламино-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-бензо[b] [1,4]диазепин-1-ил) уксусной кислоты (103, 1 г, 2,86 ммоля) в 25 мл этилацетата в течение 2 минут, затем перемешивали 1 час при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали, получая гидрохлорид метилового эфира 2-оксо-3(S)-амино-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил уксусной кислоты в виде твердого вещества белого цвета. Хлористоводородную соль и гидрокоричную кислоту (0,47 г, 3,15 ммоля) растворяют в 20 мл диметилформамида и охлаждают до 0° С. К раствору добавляют диизопропилэтиламин (1 мл, 5,72 ммоля) и затем добавляют N-гидроксибензотриазол и гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида. После перемешивания в течение 18 часов при комнатной температуре, смесь разбавляют 150 мл этилацетата и промывают 10% гидросульфатом натрия, 10% бикарбонатом натрия и насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой высушивают над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают, получая твердый неочищенный продукт, который очищают методом флэш-хроматографии, элюируя смесью 7:3 этилацетат/дихлорометан, и получают 600 мг (55%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,3-6,85 (9H,m), 6,55-6,0 (1Н, d), 4,88-4,82 (1H, m), 4,72-4,65 (1H, d), 4,28-4,22 (1H, m), 3,95-3,9 (1H, m), 3,78 (3Н, s), 3,65 (1H, br, s), 3,28-3,2 (1H, m), 2,95-2,84 (2Н, m), 2,55-2,4 (2Н, m).
(105а). Метиловый эфир (3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-бензо[b] [1, 4]диазепин-1-ил) уксусной кислоты (104а) растворяют в 90% метаноле. К реакционной смеси добавляют гидрат гидроксида лития и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь упаривают под вакуумом, получая твердое вещество белого цвета. Его растворяют в 20 мл воды, подкисляют до рН 5 и экстрагируют этилацетатом, получая 304 мг (88%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета. 1H ЯМР (СDСl3) δ 7,5-6,9 (11Н, m), 4,92-4,8 (1H, m), 4,7-4,58 (1H, d), 4,38-4,25 (1H, d), 3,88-3,78 (1H, m), 3,45-3,25 (1H, m), 3,05-2,85 (2Н, m), 2,55-2,45 (2Н, m).
(106a). N-[1-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил-метил) -2-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-бензо[b] [1,4]диазепин-3-ил]-3-фенилпропионамид получали из 105а по способу, используемому для получения соединения Н (стадия А), с получением 390 мг (93%) продукта в виде диастереомеров.
1Н ЯМР (CD3OD) δ 7,58-7,22 (14Н, m), 5,78-5,73 (0,5 H, d), 5,64 (0,5 H, s), 5,0-4,72 (4Н, m), 4,54-4,42 (2Н, m), 3,82-3,76 (0,5 H, m), 3,68-3,62 (0,5 H, m), 3,28-3,21 (0,5H, m), 3,19-3,12 (0.5Н, m), 3,07-2,98 (2Н, m), 2,78-2,48 (4Н, m). Полученный продукт превращали в 106а по способу, описанному для получения соединения Н (Стадия D), получая указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета (17%): 1Н ЯМР (СD3OD) δ 7,54-6,98 (9Н, m), 5,58-5,44 (1Н, m), 4,8-4,2 (4Н, m), 3,96-3,3 (2Н, m), 3,30-3,05 (1Н, m), 2,98-2,25 (5Н, m).
(104b). Безводный хлористый водород барботировали через раствор метилового эфира (3 (S)-трет-бутоксикарбониламино-2 -оксо-2,3,4,5 -тетрагидро-бензо [b] [1,4]диазепин-1 -ил) уксусной кислоты (103, 1 г, 2,86 ммоля) в 25 мл этилацетата в течение 2 минут, затем перемешивали 1 час при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали, получая гидрохлорид метилового эфира 2-оксо-3(S)-амино-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил уксусной кислоты в виде твердого вещества белого цвета. Хлористоводородную соль суспендируют в 20 мл дихлорметана и охлаждают до 0° С. К суспензии добавляют триэтиламин (1,6 мл, 11,5 ммоля), затем по каплям добавляют дигидроциннамоил хлорид (0,9 мл, 6 ммолей). Смесь нагревают до комнатной темпратуры и перемешивают в течение 18 часов. Смесь разбавляют 25 мл дихлорметана и дважды промывают 50 мл воды и один раз 50 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Органический слой высушивают над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают, получая вязкое желтое масло, которое очищают методом флэш-хроматографии, элюируя смесью 1:1 этилацетат/дихлорометан, и получают 1,35 г (92%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета. 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,45-7,02 (14 Н, m), 6,37-6,32 (1Н, d), 4,78-4,72 (1H, m), 4,52-4,3 (3H, m), 3,82-3,77 (1Н,m), 3,74 (3Н, s), 3,03-2,87 (4Н, m), 2,58-2,45 (2Н, m), 2,45-2,35 (1Н, m), 2,25-2,16 (1Н,m).
(105b). Метиловый эфир [2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]уксусной кислоты (104b; 680 мг, 1,32 ммоля) гидролизуют по способу, используемому для гидролиза 105а, и получают 645 мг (98%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,58 (1Н, br, s), 7,5-7,42 (1H, m), 7,35-6,95 (14H, m), 4,95-4,88 (1H, m), 4,64-4,55 (1H, d), 4,54-4,45 (1H, t), 4,15-4,05 (1H, d), 3,75 (1H, m), 3,05-2,75 (4H, m), 2,58-2,45 (2H, m), 2,45-2,28 (1H, m), 2,25-2,14 (1H, m).
(106b). [2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-
тетрагидробензо[b][1,4]диазепин-1-ил]уксусную кислоту и 3-амино-4-оксобутановой
кислоты трет-бутиловый эфир семикарбазон конденсируют по способу, используемому для получения соединения К (Стадия А), и получают 350 мг (85%) твердого вещества белого цвета. 1H ЯМР (СDСl3) δ 9,05 (1H, br, s), 7,58-7,55 (1H,d), 7,5-7,35 (1H, m), 7,35-6,95 (14 Н, m), 6,75-6,2 (1H, d), 6,25 (1H, br, s), 5,25 (1H, br, s), 4,95-4,88 (1H, m), 4,8-4,72 (1H, m), 4,55-4,4 (2H, m), 3,92-3,88 (1H, d), 3,73-3,68 (1H, m), 2,95-2,8 (4H, m), 2,8-2,72 (1H, m), 2,62-2,55 (1H, m), 2,55-2,45 (2H, m), 2,4-2,32 (1H, m), 2,2-2,12 (1H, m), 1,45 (9Н, s).
4-оксо-3-{2-[2-оксо-5-(3-фенилпропионил)-3-(3-фенил-пропионил-амино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b] [1,4]диазепин-1-ил]-ацетил-амино}бутановой кислоты трет-бутилового эфира семикарбазона удаляют защитные группы методом, описанным в получении соединения К (стадия С), и получают 118 мг (47%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета. 1Н ЯМР (CD3OD) δ 7,48-6,95 (14 Н, m), 4,65-4,15 (6Н, m), 3,5-3,4 (1Н, m), 2,85-2,72 (4Н, m), 2,65-2,5 (1Н, m), 2,5-2,34 (3Н, m), 2,34-2,15 (2H,m).
(104с). Метиловый эфир [2-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо-[b] [1,4] диазепин-1-ил] уксусной кислоты (104а; 500 мг, 1,31 ммоля), карбонат кальция (155 мг, 1,58 ммоля) и бензил бромид (170 мкл, 1,44 ммоля) помещают в 10 мл диметилформамида и нагревают до 80° С в течение 8 часов. Смесь разбавляют 150 мл этилацетата и промывают 4 раза 50 мл воды. Органический слой высушивают над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают, получая вязкое желтое масло, которое очищают методом флэш-хроматографии, элюируя смесью дихлорометан/этилацетат (8:2), и получают 460 мг (75%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета. 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,34-7,05 (14 Н, m), 6,32-6,28 (1Н, d), 4,84-4,76 (1H, d), 4,76-4,70 (1H, m), 4,43-4,37 (1H, d), 4,26-4,18 (1H, d), 4,06-4,00 (1H, d), 3,79 (3Н, s), 3,45-3,37 (1H, m), 3,02-2,95 (1H, m), 2,90-2,82 (2H, m), 2,5-2,34 (2H, m).
(105с) получают в результате гидролиза эфира (102с) по способу, описанному в Примере 105а, который дает 450 мг (98%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3OD) δ 7,5-7,05 (14 Н, m), 6,4 (1H, br, s), 4,85-4,55 (2H,m), 4,5-4,21 (2H, m), 4,12-3,92 (1H, d), 3,45-3,3 (1H. m), 3,1-2,8 (3Н, m), 2,55-2,28 (3Н, m).
(106с). [5 -бензил-2-оксо-3(S)-(3 -фенилпропиониламино)-2,3,4,5 -тетрагидро-бензо[b][1,4]диазепин-1-ил]уксусную кислоту и 3(S)-амино-4-оксобутановой кислоты трет-бутиловый эфир семикарбазон конденсировали по способу, используемому для получения соединения К (стадия А), получая 260 мг (85%) твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CD3OD) δ 7,35-7,0 (15 H, m), 4,94-4,88 (1H, m), 4,68-4,58 (1H, d), 4,57-4,52 (1H, m), 4,41-4,34 (1H, d), 4,3-4,23 (1H, d), 4,1-4,04 (1H, d), 3,13-3,11 (1H, m), 3,09-2,98 (1H, m), 2,78-2,72 (2Н, t), 2,65-2,57 (1H, m), 2,42-2,33 (3Н, m).
С 3(S)-{2-[5-Бензил-2-оксо-3(S)-(3-фенилпропиониламино)-2,3,4,5-тетрагидробензо[b][1, 4]диазепин-1-ил]-ацетиламино}-4-оксобутановой кислоты трет-бутилового эфира семикарбазона удаляли по способу, описанному в получении соединения К (стадия С), получая 168 мг (81%) соединения, указанного в заголовке, в виде твердого вещества белого цвета. 1H ЯМР (СD3OD) δ 7,37-7,0 (14Н, m), 4,75-4,62 (1H, m), 4,6-4,45 (2Н, m), 4,4-4,21 (2Н, m), 4,15-3,95 (2Н, m), 3,15-3,0 (2Н, m), 2,82-2,67 (2Н, m), 2,65-2,52 (1H, m), 2,5-2,32 (3Н, m).
(107a). Конечный семикарбазон получали конденсацией соединения 105b и т-бутил 3-(аллилоксикарбониламино)-4-оксо-5-(2,6-дихлоробензоил-окси)пентаноата (WO 93 16710) по способу, описанному для соединения 56а, с образованием 256 мг (58%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета. 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,45-7,04 (17Н, m), 6,45-6,34 (2Н, m), 5,28-5,21 (1H, m), 5,1-5,0 (1H, m), 4,95-4,90 (1H, m), 4,75-4,70 (1H, m), 4,55-4,44 (1H, m), 4,32-4,22 (1H, dd), 3,99-3,85 (1H, dd), 3,85-3,76 (1H, m), 3,06-2,83 (5H, m), 2,83-2,74 (1H, m), 2,6-2,44 (2Н, m), 2,43-2,33 (1H, m), 2,24-2,15(1H, m), 1,45 (9H,s).
(108а) получали из 107a по способу, описанному для соединения 57а, который дает 156 мг (68%) соединения, указанного в заголовке, в виде твердого вещества белого цвета. 1Н ЯМР (СD3OD) δ 7,5-6,9 (17Н, m), 5,16-5,02 (1Н, dd), 4,88-4,71 (2Н, m), 4,62-4,44 (2Н, m), 4,42-4,28 (2Н, m), 4,27-4,18 (1Н, m), 3,47-3,41 (1H, m), 2,90-2,60 (5H, m), 2,46-2,4 (2Н, m), 2,39-2,18 (2H,m).
(108b) получали по способу, описанному для соединения 69а с образованием указанного в заголовке соединения (50%) в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 7,41-6,88 (17Н, m), 5,6-5,55 (0,5H, t), 5,48-5,43 (0,5H, t), 4,64-4,45 (2Н, m), 4,45-4,30 (1H, m), 3,93 (1,5H, s), 3,90 (1,5H, s), 3,47-3,34 (1H, m), 3,10-2,85 (2Н, m), 2,84-2,63 (5H, m), 2,6-2,4 (2H,m), 2,3-2,1 (2H,m).
(123). Фторид калия (273 мг, 4,70 ммоля), затем 2-хлорфенилметил тиол (373 мг, 2,35 ммоля) добавляют при перемешивании к раствору (3S) т-бутил N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-бром-4-оксо-пентаноат (122; 749 мг, 2,14 ммоля; WO 93 16710) в диметилформамиде (20 мл). Смесь перемешивают в течение 3,5 ч, гасят водой (50 мл) и экстрагируют этилацетатом (2× 50 мл). Объединенные органические экстракты промывают водой (4× 50 мл), затем насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл). Их высушивают (MgSO4), концентрируют, получая масло, которое очищают методом флэш-хроматографии (10-35% этилацетат/гексан), и получают 832 мг (91%) бесцветного твердого вещества: т. пл. 45-6° С; [α ]
23 |
D |
(124а). Раствор 6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-пиридил уксусной кислоты (52b; 300 мг, 0,76 ммоля) в ТГФ (7 мл) перемешивают с 1-гидроксибензотриазолом (205 мг, 1,52 ммоля) и 1-(3-диметиламинопропил-3-этилкарбодиимид гидрохлоридом). Через 3 мин добавляют воду (12 капель) и смесь перемешивают 10 мин, затем обрабатывают т-бутил (3S) N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-(2-хлорфенилметилтио)-4-оксопентаноатом (123) (325 мг, 0,76 ммоля), хлоридом бис(трифенилфосфин)палладия II (20 мг) и гидридом трибутилолова (0,6 мл, 2,28 ммоля). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов, выливают в этилацетат и промывают водным раствором 1М НСl (× 2), водным раствором бикарбоната натрия, насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают (MgSO4) и концентрируют. Остаток перетирают с пентаном и супернатант отбрасывают. После хроматографии (силикагель, 50% этилацетат/гексан) получают бесцветную пену (439 мг, 81%): [α ]
23 |
D |
(124b) получают с помощью метода, подобного используемому для получения 124а из тиоэфира 123 и 3S(1S, 9S)-3-(6,10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро)-9-(3-фенилпропиониламино)-6Н-пиридазино[1,2-а] [1,2] диазепин-1-карбоновой кислоты (45а), с образованием 452 мг (50%) бесцветной пены: т. пл. 55-7° С; [α ]
23 |
D |
(125а). Раствор т-бутил-3(2(6-бензил-1,2-дигидро-2-оксо-3-(3-фенилпропиониламино)-1 -пиридил)ацетил-амино-5 -(2-хлорфенилметилтио)-4-оксопентаноата (124а) (400 мг, 0,56 ммоля) в дихлорометане (3 мл) при 0° С обрабатывают трифторуксусной кислотой (3 мл) и перемешивают при 0° С в течение 1 ч и 0,5 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют и снова растворяют в дихлорметане, затем еще раз концентрируют. Эту процедуру повторяют три раза. Остаток перемешивают в эфире в течение 1 часа и фильтруют, получая бесцветное твердое вещество (364 мг, 99%): т. пл. 165-7° С; [α ]
23 |
D |
(125b) получают с помощью метода, подобного используемому для получения 125а из т-бутилового эфира 124b, с образованием 362 мг (93%) бесцветного порошка: т. пл. 76-80° С; [α ]
23 |
D |
2-Хлорфенилметилиодид. Смесь 2-хлорфенилметилбромида (4 г, 19,47 ммоля) и Nal (14 г, 97,33 ммоля) в ацетоне (40 мл) перемешивают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждают, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток перетирают с гексаном и фильтруют. Раствор концентрируют в вакууме и получившееся масло очищают методом флэш-хроматографии (оксид кремния, гексан), получая указанное в заголовке соединение (4,67 г, 63%) в виде масла: 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,34 (4Н, m), 4,54 (2Н, s).
(201). Раствор (3S) т-бутил N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-гидрокси-4-оксопентаноата (81, Chapman, et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett., 2, pp. 613-618 (1992) 0,144 г, 0,5 ммоля) и 2-хлорфенилметилиодида (0,569 г, 1,5 ммоля) в CH2Cl2 (4 мл) интенсивно перемешивают с окисью серебра (0,231 г, 1 ммоль) и нагревают до 38° С в течение 40 часов. Реакционную смесь охлаждают, фильтруют и фильтрат упаривают. Остаток очищают методом флэш-хроматографии (оксид кремния, 0-20% этилацетат в гексане), получая продукт в виде бесцветного масла (0,138 г, 67%): [α ]
23 |
D |
(203). Раствор 2,4-дихлор-6-нитрофенола (202, 40 г содержащие 20% влаги) в EtOAc (500 мл) высушивают с помощью MgSO4, фильтруют и остаток промывают небольшим количеством EtOAc. Добавляют платину на угле (5% сульфидирования - 2 г) и смесь гидрогенируют до тех пор, пока не прекратится поглощение Н2. Добавляют триэтилортоформат (160 мл) и п-толуол сульфоновую кислоту (160 мг) и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч. После охлаждения и удаления отработанного катализатора с помощью фильтрации, раствор промывают насыщенным NаНСО3, водой и насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают с помощью MgSO4 и упаривают досуха. После перетирания с гексаном получают твердое вещество, которое отделяют фильтрацией, промывают гексаном и высушивают, получая указанное в заголовке соединение (25,5 г, 88%) в виде кристаллического твердого вещества: т. пл. 98-99° С; IR (КВr) 3119, 1610,1590,1510, 1452, 1393, 1296, 1067, 850; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,16 (1H,s), 7,69 (1Н, d, J=1,9), 7,42 (1Н, d, J=1,9). Аналитически рассчитано для С7Н3Сl2NО: С, 44,72; Н, 1,61; N, 7,45; Cl, 37,70. Обнаружено: С, 44,84; Н, 1,69; N, 7,31; Cl, 37,71.
(204). Магний бромид получают в результате взаимодействия Mg (7,45 г, 0,30 моля) в ТГФ (516 мл) с I2 (50 мг) и 1,2-дибромэтаном (26,3 мл, 57,3 г, 0,30 моля) при температуре кипения с обратным холодильником в течение 2 ч и затем охлаждают до -40° С. К полученной смеси добавляют быстро через канюлю раствор 2-дитио-5,7-дихлорбензоксазола при 70° С (полученный из 5,7-дихлорбензоксазола (203, 28,9 г, 0,154 моля) и бутиллития (100 мл 1,52 М в гексане) в ТГФ (150 мл) при -70° С). Смесь перемешивали при -40° С в течение 1 ч и затем охлаждали до -70° С перед добавлением раствора (3S)т-бутил N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-4-оксо-бутаноата (Chapman, et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett., 2, pp. 613-618 (1992)) (20,3 г, 0,078 моля) в ТГФ (160 мл) при температуре ниже -60° С. Реакционную смесь оставляют нагреваться до температуры окружающей среды, перемешивают в течение 16 ч, затем гасят раствором хлористого аммония и экстрагируют смесью 1:1 гексан:этилацетат 600 мл. Органическую фазу промывают водой и насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают над MgSO4 и упаривают до состояния сиропа (52,9 г). После флэш-хроматографии (SiO2 250g -11 аликвот 1:1 гексан:СН2Сl2×2, CH2Cl2, 5% ЕtOАс в CH2Cl2, 10% ЕtOАс в СН2Сl2, 20% EtOAc в CH2Cl2) получают загрязненный продукт 24,6 г, и после дополнительной хроматографии (SiO; 1:1 гексан: эфир) получают указанное в заголовке соединение в виде золотисто-коричневого стеклоподобного вещества (22,7 г, 64%); IR (пленка) 3343, 2980, 1723, 1712, 1520, 1456, 1398, 1369, 1254, 1158,993; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,60 (1H, m), 7,37 (1Н, m), 5,72 (1Н, m), 5,64 (0,5H, d), 5,10 (2,5H, m), 4,7-4,3 (4Н, m), 2,9-2,6 (2Н, m), 1,46 и 1,42 (9Н объединенный, 2× s). MC ES+ Da/e 445 (M + 1)+ Cl 35 62%, 447 (M + 1) Cl 37 40%, 389 100%.
(205а). К смеси ТГФ (200 мл) и воды (100 мл), содержащей NаНСО3 (16,6 г, 0,2 моля), добавляют т-бутиловый эфир глютаровой кислоты (10 г, 49,2 ммоля) и затем в течение 20 минут по каплям добавляют аллил хлорформат (6,8 мл, 64 ммоля). Смесь перемешивают 2 часа, экстрагируют EtOAc, промывают насыщенным раствором гидрокарбоната, водой и насыщенным солевым раствором, высушивают и упаривают до состояния масла 205а (9,5 г, 67,2%); [α ]
23 |
D |
1Н ЯМР (D6-DMSO) δ 6,10 (1H, d), 5,96-5,88 (1H, m), 10 5,31-5,12 (2Н, m), 4,45 (2Н, m), 3,90-3,84 (1H, t), 2,18 (2Н, m), 1,85-1,76 (2Н, m), 1,36 (9Н, s).
(205b) получают аналогично 205, с образованием бесцветного масла (6,27 г, 88%): [α ]
23 |
D |
(206а). К раствору соединения 205а (3,6 г, 12,5 ммоля) в ТГФ (100 мл) при 0° С добавляют N-метилморфолин (1,5 мл,13 ммолей), затем изобутилхлороформат, (1,1 мл, 13 ммолей). Через 15 мин к смеси добавляют суспензию NaBH4 (0,95 г, 25 ммолей) в ТГФ (100 мл) и МеОН (25 мл) при -78° С. Через 2 часа при -70° С, смесь гасят уксусной кислотой, разбавляют EtOAc, промывают 3 раза насыщенным раствором гидрокарбоната, водой и насыщенным солевым раствором, высушивают и упаривают. После флэш-хроматографии (2% МеОН в CH2Cl2) получают соединение 206а в виде бесцветного масла (2,4 г, 70%): [α ]
23 |
D |
(206b) получают способом, аналогичным используемому для получения соединения 206а, который позволяет получать соединение, указанное в заголовке в виде светло-желтого масла (3,42 г, 57%): [α ]
23 |
D |
1Н ЯМР (CDCl3) δ 5,98-5,81 (1H, m), 5,35-5,10 (3H, m), 4,55 (2Н, d), 3,70-3,56 (3H, m), 2,5C-2,47 (1Н, broad s), 2,37-2,30 (2Н, m), 1,89-1,74 (2Н, m), 1,44 (9Н, s). Аналитически рассчитано для С13Н23NО5: С, 57,13; Н, 8,48; N, 5,12. Обнаружено: С, 56,9; Н, 8,6; N, 5,6.
(207а). К раствору DMSO (1,51 г, 19,3 ммолей) в СН2Сl2 (25 мл) при -70° С добавляют оксалилхлорид (1,34 г, 19,3 ммолей). После 10 мин при -70° С, по каплям добавляют раствор (206а) (2,4 г, 8,8 ммолей) в СН2Сl2 (10 мл) и смесь перемешивают 15 минут при -70° С. Добавляют диизопропилэтиламин (3,4 г, 26,3 ммоля) и смесь перемешивают 15 минут при -25° С, затем разбвляют ЕtOАс (50 мл), промывают 2М раствором гидросульфата натрия и концентрируют, получая масло, которое немедленно используют без очистки: 1H ЯМР (CDCl3) δ 9,5 (1H, s), 6,0-5,5 (2H, m), 5,5-5,1 (2Н, m), 4,5 (2Н, m), 4,2 (1H, m), 2,4-2,10 (2H, m), 2,05 (2H, m), 1,36 (9H, s).
(207b) получают по способу, аналогичному способу получения 207а, в виде масла (2,95 г, 96%), которое используют в следующей стадии без дополнительной очистки: [α ]
23 |
D |
(208a). Краствору 207а (2,39 г, 8,8 ммолей), в МеОН (20 мл) добавляют ацетат натрия (0,72 г, 8,8 ммолей) и семикарбазид (0,98 г, 8,8 ммолей), перемешивают в течение ночи, концентрируют и разбавляют CH2Cl2 (100 мл), промывают водой, высушивают и концентрируют. После флэш-хроматографии (2% МеОН в СН2Сl2) получают 208a (2.10 г, 73%) в виде масла: [α ]
23 |
D |
(208b) получают аналогично 208а в виде стекловидного масла (2,37 г, 66%); [α ]
23 |
D |
211 (b) R1=MeSO2 | 212 (b) R1=MeSO2 |
(с) R1=МеСО | (с) R1=МеСО |
(d) R1=PhCH2OCO | (d) R1=PhCH2OCO |
(е) R'=PhCO | (e) R1=PhCO |
(f) R1=Fmoc | (f) R1=Fmoc |
(211b). Раствор т-бутил 9-амино-6,10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро-6Н-пиридазино[1,2-а] [1,2]диазепин-1-карбоксилат (GB 2,128,984; 831 мг, 2,79 ммоля) и диизопропилэтиламин (1,22 мл, 6,99 ммолей, 2,5 эквив.) в СН2Сl2 (10 мл) в атмосфере сухого азота обрабатывают метансульфонилхлоридом (237 мкл, 3,07 ммолей 1,1 эквив.).
Смесь перемешивают 1 ч, разбавляют EtOAc (75 мл) и промывают насыщенным NаНСО3 (50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (30 мл), высшивают (MgSO4) и концентрируют. После флэш-хроматографии (10-35% EtOAc в CH2Cl2) получают 211b (806 мг, 77%) в виде бесцветного твердого вещества: т. пл. 68-70° С; [α ]
23 |
D |
(211с). Уксусный ангидрид (307 мг, 3,01 ммоля) добавляют при перемешивании к смеси т-бутил 9-амино-6, 10-диоксо-1,2,5,4,7,8,9,10-октагидро-6Н-пиридазино[1,2-а] [1,2]диазепин-1-карбоксилата (GB 2,128,984; 813,7 мг, 2,74 ммоля), диизопропилэтиламина (884 мг, 6,84 ммоля) и СН2Сl2 (20 мл). Смесь выдерживают 1 ч, затем разбавляют EtOAc, промывают раствором NаНСО3, затем насыщенным солевым раствором, высушивают (MgSO4) и концентрируют, получая бесцветное масло. Продукт очищают методом флэш-хроматографии (0,5-8% МеОН/СН2Сl2), получая 211с (804 мг, 71%) в виде бесцветного порошка: т. пл. 162-3° С; [α ]
23 |
D |
(211d). Бензил хлорформат (1,07 гg) добавляют по каплям при перемешивании к охлажденной на льду смеси (1S,9S) т-бутил 9-амино-6,10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро-6Н-пиридазино[1,2-а] [1,2]диазепин-1-карбоксилата (GВ 2,128,984; 1,55 г, 5,21 ммолей), NaHCO3 (0,66 г, 7,82 ммолей), диоксана (32 мл) и воды (8 мл). Смесь выдерживают 15 мин при 5° С, затем 2 ч при комнатной температуре. Смесь разбавляют ЕtOАс (50 мл), дважды промывают нас. раствором. NaHCO3, высушивают (MgSO4) и концентрируют. Маслянистый остаток очищают методом флэш-хроматографии, получая 211d (1,98 г, 88%) в виде бесцветного масла: [α ]
23 |
D |
(211е). Раствор бензоилхлорида (1,61 г, 11,47 ммолей) в СН2Сl2 (15 мл) добавляют по каплям при перемешивании к охлаждаемой во льду смеси (1S,9S) т-бутил 9-амино-6,10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро-6Н-пиридазино [1,2-а] [1,2] диазепин-1-карбоксилата (GB 2,128,984; 3,1 г, 10,43 ммолей), сухого CH2Cl2 (20 мл) и диизопропилэтиламина (4,54 мл, 26,06 ммолей). Смесь держат на холоду 1 ч, затем оставляют при комнатной температуре в течение 0,5 ч. Смесь разбавляют СН2Сl2, промывают дважды насыщенным солевым раствором, высушивают (MgSO4) и концентрируют. Остаток очищают методом флэш-хроматографии (0-5% метанола в СН2Сl2) и получают 211е (4,0 г, 96%) в виде бесцветного стекловидного вещества: т. пл. 74-76° С; [α ]
23 |
D |
(211f) получают по способу, аналогичному способу получения 211е, за исключением того, что 9-фторенилметилхлорформат используют вместо бензоилхлорида, получая белое стеклоподобное твердое вещество 211f (2,14 г, 89%): т. пл. 190-192° С; [α ]
23 |
D |
(212b) синтезировали тем же способом, что и соединение 212е (635 мг, 85%), получая продукт в виде бесцветного порошка: т. пл. 209-12° С; [α ]
23 |
D |
(212с) получают из 211е тем же способом, что и соединение 212е, в виде белого стеклоподобного твердого вещества (595 мг, 77%): т. пл. >250° С; [α ]
23 |
D |
Точная масса, рассчитанная для C12H18N3O5 (MH+), составляет: 284,1246. Обнаружено: 284,1258.
(212d) получают из 211d тем же методом, что и соединение 212е в виде бесцветных кристаллов (170 мг, 97%): т. пл. 60-100° С; [α ]
23 |
D |
(212е). TFA (20 мл) добавляют при перемешивании к охлаждаемому во льду раствору т-бутилового эфира 211е (4,15 г, 10,34 ммолей) в сухом СН2Сl2 (20 мл). Смесь держат на холоду в течение 1,5 часов, затем оставляют на 2,5 часа при комн. темп. и концентрируют. TFA удаляют путем повторяющихся упариваний растворов остатка в СH2Сl2/эфире и в эфире. Финальное перетирание остатка с эфиром приводит к получению 212е 3,05 г (85%) в виде белого стеклоподобного твердого вещества: т. пл. 118-126° С; [α ]
23 |
D |
(212f) получают из 211f c 96% выходом тем же способом, что и 212е: т. пл. 120-126° С;
[α ]
23 |
D |
(213с) синтезировали из 212с тем же методом, что и соединение 213е, получая смесь диастереомеров (193 мг, 36%) в виде бесцветных кристаллов: IR (КВr) 3272, 1799, 1701, 1682, 1650, 1555. 1424, 1412, 1278, 1258, 1221, 1122,937; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,41-7,28 (5Н, m), 6,52 (0,5H, d), 6,38 (0,5H, d), 6,22 (0,5H, d), 5,57 (0,5H, d), 5,36 (0,5H, s), 5,10-5,05 (1H, m), 5,00-4,45 (5,5H, m), 3,19-2,84 (3Н, m), 2,72-2,56 (1H, m), 2,51-2,25 (2Н, m), 2,02 (ЗН, s), 1,98-1,70 (3Н, m), 1,66-1,56 (ЗН, m). Аналитически рассчитано для C23H28N4O7: С, 58,47; Н, 5,97; N, 11,86. Обнаружено: С, 58,37; Н, 6,09; N, 11,47. MC (ES -) 471 (М-1, 100%). Точная масса, рассчитанная для С23Н29N4О7 (МН+), составляет: 473,2036. Обнаружено: 473,2012. Точная масса, рассчитанная для C23H28N4O7Na (MNa+), составляет: 495,1856. Обнаружено: 495,1853.
(213е). Гидрид трибутилолова (2,2 мл, 8,18 ммолей) добавляют по каплям при перемешивании в атмосфере сухого азота к раствору кислоты 212е (1,95 г, 5,6 ммолей), (3S, 2RS) 3-аллилоксикарбониламино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофурана (Chapman, Bioorg. & Med. Chem. Lett., 2, pp. 615-618 (1992); 1,80 г 6,16 ммолей) и (Ph3P)2PdCl2 (50 мг) в сухом CH2Cl2 (36 мл). Через 5 мин добавляют 1-гидроксибензотриазол (1,51 г, 11,2 ммолей 6,72 ммолей), затем после охлаждения (лед/Н2О) этилдиметиламинопропил карбодиимид гидрохлорид (1,29 г, 6,72 ммоля). Через 5 мин охлаждающую баню удаляют и смесь выдерживают при комнатной температуре 4 ч, разбавляют ЕtOАс, промывают 1М НСl, насыщенным солевым раствором, насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, высушивют (MgSO4) и концентрируют. После флэш-хроматографии (силикагель, 0-90% ЕtOАс в СН2Сl2 получают продукт в виде твердого вещества белого цвета (2,34 г, 78%); IR (KBr) 3499, 1792, 1658, 1536, 1421, 1279, 1257, 1123, 977, 699; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,81 (2Н, m), 7,54-7,34 (8Н, m), 7,1, 6,97, 6,89, 6,48 (2Н, m, d, J 7,7, d, J=7,5, d, J=7,6), 5,57, 5,28 (1Н, d, J=5,2, s), 5,23-5,07 (2Н, m), 4,93-4,42, 3,22-2,70, 2,51-2,26, 2,08-1,69, 1,22 (15Н, 5m). Аналитически рассчитано для C28H30N4O7·0,5Н2O: С, 61,87; Н, 5,75; N, 10,32. Обнаружено С, 62,02; Н, 5,65; N, 10,25.
(214с) синтезируют из 213с с помощью метода, подобного используемому для синтеза 214е из 213е, в результате получают бесцветные кристаллы (140 мг, 99%): т. пл. 90-180° С; [α ]
23 |
D |
(214е). Смесь 213е (2,29 г, 4,28 ммоля), 10% палладия на угле (1,8 г) и МеОН (160 мл) перемешивали под током водорода при атмосферном давлении в течение 6,3 ч. После фильтрации и концентрирования гидрогенирование повторяют со свежим катализатором (1,8 г) в течение 5 ч. После фильтрации и концентрирования остаток перетирают с диэтиловым эфиром, хорошо промывают эфиром, получая 214е в виде твердого вещества белого цвета (1,67 г, 88%): т. пл. 143-147° С; [α ]
23 |
D |
1Н ЯМР (СD3ОD) δ 7,90 (2Н, m), 7,63-7,46 (3Н, m), 5,25 (1Н, m), 5,08-4,85 (1Н, m), 4,68-4,53 (2Н, m), 4,33-4,24 (1Н, m), 3,62-3,44, 3,22-3,11, 2,75-2,21, 2,15-1,92, 1,73-1,66 (11Н, 5m). Аналитически рассчитано для C21H24N4O7·Н2О: С, 54.54; Н, 5.67; N, 12.11. Обнаружено С, 54.48; Н, 5.63; N, 11.92.
(215с) синтезируют из 214с тем же способом, что и соединение 215е, получая смесь диастереомеров в виде белого стеклоподобного твердого вещества (398 мг, 84%): IR (КВr) 3338, 2977, 1738, 1658, 1562, 1541, 1433, 1368, 1277, 1150; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,36-7,32 (3Н, m), 6,91 (1Н, d), 6,30 (1Н, d), 5,15-5,09 (1Н, m), 5,01-4,88 (1Н, m), 4,61-4,44 (2Н, m), 4.37-4,08 (3Н, m), 3,32-3,18 (1Н, m), 3,04-2,89 (1Н, m), 2,82-2,51 (4Н, m), 2,39-2,29 (1Н, m), 2,08-1,64 (4Н, m) 2,02 (3Н, s). Аналитически рассчитано для C28H34N4Cl2O9: С, 52,26; Н, 5,64; N, 8,71. Обнаружено: С, 52,44; Н, 5,87; N, 8,16. MC (ES -) 645/3/1 (М-1, 26%), 189 (81), 134 (100). Точная масса, вычисленная для C28H37N4Cl2O9 (MH+), составляет: 643,1938. Обнаружено: 643,1924. Точная масса, вычисленная для C28H36N4Cl2O9Na (MNa+), составляет: 665,1757. Обнаружено: 665,1756.
(215d)) синтезируют из 214d тем же способом, что и соединение 215е, получая смесь диастереомеров в виде белого стеклоподобного твердого вещества (657 мг, 70%): IR (КВr) 3420,3361,2975,2931, 1716, 1658,1529,1434,1367,1348, 1250,1157,1083,1055; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,32 (8Н, m), 7,14 (1Н, d), 5,81 (1Н, d), 5,15 (1Н, m), 5,07 (2Н, s), 4,74-4,65 (1Н, m), 4,58-4,22 (4Н, m), 4,15-4,06 (1Н, m), 3,72 (1Н, m), 3,32-3,21 (1Н, m), 3,04-2,94 (1Н, m), 2,69-2,52 (3Н, m), 2,33-2,27 (1Н, m), 1,95-1,59 (4Н, m), 1,28 (9Н, s). Аналитически рассчитано для С34Н40N4Сl2O10·0,5 H2O: С, 54,70; Н, 5,54; N, 7,50. Обнаружено: С, 54,98; Н, 5,59; N, 7,24. МС (ES -) 737/5/3 (М-1, 22%), 193/1/89 (100). Точная масса, вычисленная для C34H41N4Cl2O10 (МН+), составляет: 735,2120. Обнаружено: 735,2181.
(215е) Гидрид трибутилолова (4,6 мл; 11,4 ммолей) добавляют по каплям при перемешивании к смеси (3S,4RS) т-бутил (N-аллилоксикарбонил)-3-амино-5-(2,6-дихлорбензоилокси)-4-гидроксипентаноата (полученного по способу, подобному описанному в Revesz et al., Tetrahedron. Lett., 35, pp. 9693-9696 (1994)) (2,64 г; 5,7 ммолей), (Ph3P)2PdCl2 (50 мг), CH2Cl2 (100 мл) и DMF (20 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивают в течение еще 10 мин, затем добавляют 1-гидроксибензотриазол (1,54 г, 11,4 ммолей). Смесь охлаждают до 0° С, затем добавляют гидрохлорид этилдиметиламинопропил карбодиимида (1,31 г; 6,84 ммолей). Смесь выдерживают при этой температуре 15 мин, затем при комнатной температуре 17 ч. Смесь разбавляют ЕtOАс (300 мл), промывают 1М НСl (2× 100 мл), нас.водн. NaHCO3 (3× 100 мл) и насыщенным солевым раствором (2× 100 мл), высушивают (MgSO4) и концентрируют. Остаток очищают методом флэш-хроматографии (2-5% (МеОН/СH2Сl2)), получая 3,24 г (81%) 215е в виде стеклоподобного твердого вещества: т. пл. 106-110° С;
IR (КВr) 3354, 1737, 1659, 1531,1433, 1276, 1150; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,80 (2Н, dd, J=7,9 и 1,5), 7,75-7,26 (6Н, m), 7,14-6,76 (2Н, m), 5,30-5,02 (2Н, m), 4,63-20 4,11 (5Н, m), 3,44-3,26 (2Н, m), 3,10-2,30 (5Н, m), 2,10-1,60 (5Н, m), 1,44 (9Н, s). Аналитически рассчитано для C33H38N4Cl2O9·0.75 Н2О: С, 55,12; Н, 5,54; N, 7,79; Cl, 9,86. Обнаружено: С, 55,04; Н, 5,34; N, 7,80; Cl, 10,24. MC (ES +) 709/7/5 (М+1), 378 (59), 324 (64), 322 (100).
(216с) синтезируют из 215е тем же методом, что и соединение 216е, получая стеклоподобное белое твердое вещество (300 мг, 83%): т. пл. 80-125° С; [α ]
23 |
D |
1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,39-7,32 (3Н, m), 7,13 (1Н, d), 6,34 (1Н, d), 5,22-5,17 (1Н, m), 5,11 (1Н, d), 5,04 (1Н, d), 4,99-4,88 (2Н, m), 4,64-4,52 (1Н, m), 3,29-3,11 (1Н, m), 3,05-2,67 (4Н, m), 2,39-2,29 (1Н, m), 2,02 (3Н, s), 1,98-1,75 (4Н, m), 1,46 (9Н, s). Аналитически рассчитано для С28Н34N4Сl2O9: С, 52,42; Н, 5,34; N, 8,73. Обнаружено: С, 52,53; Н, 5,70; N, 7,85. MC (ES -) 643/41/39 (M-1, 100%). Точная масса, рассчитанная для С28Н35N4Сl2O9 (МН+), составляет: 641,1781. Обнаружено: 641,1735. Точная масса, рассчитанная для С28Н34N4Сl2O9Nа (MNa+), составляет: 663,1601. Обнаружено: 663,1542.
(216d) синтезировали из 215d тем же методом, что и соединение 216е, получая 216d в виде белого стеклоподобного твердого вещества (688 мг, 68%): т. пл. 90-170° С; [α ]
23 |
D |
(216е). Реагент Десс-Мартина (3,82 г; 9,0 ммолей) добавляют при перемешивании к раствору спирта 215е (3,17 г; 4,5 ммолей) в СН2Сl2 (100 мл). Смесь перемешивают в течение 1 часа, разбавляют EtOAc (300 мл), затем промывают смесью 1:1 нас. раствора Na2S2O3 и нас. раствора NaHCO3 (100 мл), затем нас. солевым раствором (100 мл). Смесь высушивают (MgSO4) и концентрируют. Остаток очищают методом флэш-хроматографии, получая 2,2 г (70%) 216е в виде бесцветного твердого вещества: т. пл. 102-107° С; [α ]
23 |
D |
(217с) синтезировали из 216с тем же методом, что и соединение 217е, получая продукт в виде белого стеклоподобного твердого вещества (166 мг, 66%): т. пл. 85-175° С; [α ]
23 |
D |
(217d) синтезировали из 216d тем же методом, что и соединение 217е, получая 217d в виде белого стеклоподобного твердого вещества (310 мг, 9б%): т. пл. 85-110° С; [α ]
23 |
D |
(217е) TFA (25 мл) добавляют по каплям к охлаждаемому во льду раствору эфира 216е (2,11 г, 3,0 ммоля). Смесь перемешивают 20 мин при 0° С, затем при комнатной температуре 1 час. Смесь упаривают досуха, затем три раза упаривают с эфиром. Добавляют сухой эфир (50 мл) и фильтруют, получая 1,9 г (98%) 217е в виде бесцветного твердого вещества: т. пл. 126-130° С; [α ]
23 |
D |
(218b) получают из кислоты 212b и 99 по способу, аналогичному способу получения 215е с образованием диастереомеров (865 мг, 80%) в виде бесцветного твердого вещества: IR (KBr) 3298, 2974, 1723, 1659, 1544, 1518, 1430, 1394, 1370, 1328, 1273, 1256, 1156, 1134; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,45-7,28 (4Н, m), 7,26-7,15 (2Н, m), 5,26-5,10 (2Н, m), 4,80-4,67 (1Н, m), 4,59-4,42 (2Н, m), 3,32-3,17 (1Н, m), 2,96 (3Н, 2xs), 2,93-2,79 (1Н, m), 2,71-2,53 (4Н, m), 2,38-2,28 (1Н, m), 2,07-1,81 (4Н, m). Аналитически рассчитано для C28H35N5Cl2O9S· 0,5 Н2О: С, 48,21; Н, 5,20; N, 10,03. Обнаружено: С,48,35; Н, 5,26; N, 9,48. MC (ES+) 714/2/0 (M + Na, 25%), 692/90/88 (M+ + 1, 51), 636/4/2 (38), 246 (100). Точная масса, рассчитанная для C28H36N5Cl2O9S (MH+), составляет: 688,1611. Обнаружено: 688,1615.
(219b) получали из 218b по способу, аналогичному способу получения 216е, в виде не совсем белого порошка (675 мг, 81%): т. пл. 100-200° С; [α ]
23 |
D |
(220b) получают из 219b по способу, аналогичному способу получения 217е в виде бледно-кремового порошка (396 мг, 87%): т. пл. 100-200° С; [α ]
27 |
D |
(221b) получают из кислоты 212b и (3S,4RS) т-бутил N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-4-гидрокси-4-(5,7-дихлоробензоксазол-2-ил)бутаноата (204) по способу, аналогичному способу получения соединения 215е, с образованием смеси диастереомеров (460 мг, 70%) в виде стеклоподобного вещества: IR (пленка) 3325, 1725, 1664, 1453, 1399, 1373, 1327, 1274, 1256, 1155; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,57 (1Н, m), 7,36 (2Н, m), 6,06 (1Н, t), 5,29 (2Н, m), 4,79 (1Н, m), 4,47 (1Н, m), 3,23 (1Н, m). 2,97 и 2,94 (3Н объединенный, 2xs), 2,9-2,4 (4Н. m), 2,30 (1Н, m), 1,96 (4Н, m), 1,41 и 1,37 (9Н объединенный, 2xs). МС ES Da/e 660 (M -1)-Cl35 100%,662(М-1)-Сl37.
(221е) получают из кислоты (212е) и (3S, 4RS) т-бутил N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-4-гидрокси-4-(5,7-дихлорбензоксазол-2-ил)бутаноата (204) по способу, аналогичному способу получения соединения 215е с образованием смеси диастереомеров (613 мг, 87%) в виде стеклоподобного вещества: IR (пленка) 3328, 1729, 1660, 1534, 1454, 1422, 1399, 1276, 1254, 1155; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,80 (2Н, d), 7,60-7,35 (5Н, m), 7,05 (2Н, m), 5,13 (3Н, m), 4,74 (1Н, m), 4,51 (1Н, m), 3,25 (1Н, m), 3,1-2,6 (5Н, m), 2,33 (1Н, m), 2,1-1,5 (5Н, m), 1,43 и 1,41 (9Н объединенный, 2xs). MC ES Da/e 688 (M+1)+ Cl35 55%, 690 (M+1)+ Сl37 35%, 328 100%.
(222b) получают из 221b no способу, аналогичному способу получения 216е в виде бесцветного стеклоподобного вещества (371 мг, 86%): [α ]
26 |
D |
(222е) получают из 221е по способу, аналогичному способу получения 216е в виде бесцветного стеклоподобного вещества (480 мг, 84%): [α ]
25 |
D |
(223b) получают из 222b no способу, аналогичному способу получения 217е в виде не совсем белого твердого вещества (257 мг, 78%): [α ]
25 |
D |
(223е) получают из 222е по способу, аналогичному способу получения 217е в виде бледно-кремового твердого вещества (311 mg, 78%): т. пл. 167-180° С; [α ]
23 |
D |
(224e). 1-Гидроксибензотриазол (0,23 г, 1,71 ммоля) и гидрохлорид этил диметиламинопропилкарбодииимида добавляют при перемешивании к раствору кислоты 212е (0,295 г, 0,853 ммолей) в THF (5 мл). Через 5 мин добавляют воду (0,5 мл), затем через 7 мин добавляют раствор (3S) т-бутил-3-аллилоксикарбониламино-5-(2-хлор-фенил)метилтио-4-оксопентаноата (123, 0,478 г, 1,02 ммоля) и (РРh3) PdCl2 (20 мг) в THF (2 мл). Гидрид трибутилолова (0,65 мл, 2,33 ммолей) добавляют по каплям в течение 20 мин. Смесь выдерживают в течение 4,5 ч, затем разбавляют ЕtOАс, промывают 1М НСl, нас. солевым раствором, нас.водным раствором NaHCO3 и затем опять нас. солевым раствором. Смесь высушивают (MgSO4) и концентрируют. Остаток перетирают несколько раз с гексаном, который декантируют и выбрасывают, затем очищают методом флэш-хроматографии (10-100% ЕtOАс в CH2Cl2) и получают 0,2 г (35%) белого стеклоподобного твердого вещества: т. пл. 70-72° С; [α ]
26 |
D |
(225е) получают из кислоты 212е и (3S) т-бутил N-(аллилоксикарбонил)-3-амино-5-(2-хлорфенилметилокси)-4-оксопентаноата (201), используя способ, подобный способу получения 224е, с образованием 40 мг (23%) стеклоподобного твердого вещества: 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,83-7,73 (2Н, m), 7,67-7,10 (9Н, m), 5,23-5,09 (2Н, m), 4,59 (1Н, m), 4,45-4,22 (2Н, m), 3,7-3,19, 3,08-2,72, 2,71-2,47, 2,05-1,85, 1,72-1,61, 1,45-1,26 (2pH, 6m).
(226е) получают из 224е по способу, аналогичному способу получения соединения 217е, с образованием 0,22 г (81%) не совсем белого твердого вещества: т. пл. 95-100° С; [α ]
23 |
D |
(227е) получают из 225е по способу, аналогичному способу получения соединения 217е. Продукт дополнительно очищают методом флэш-хроматографии (0-5% МеОН/СН2Сl2), получая 19 мг (81%) стеклоподобного твердого вещества: 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,79 (2Н, m), 7,66-7,18 (9Н, m), 5,30-5,10 (2Н, m), 4,85 (1Н, m), 4,65 (2Н, m), 4,53 (1Н, m), 4,28 (2Н, m), 3,28, 3,01, 2,72, 2,33, 1,94, 1,60 (11Н, 6m). MC (ES, m/z) 597 (М+ -1, 100%).
(228е). 1-Гидроксибензотриазол (0,23 г, 1,68 ммоля) и, затем гидрохлорид этилдиметиламинопропил карбодиимида (0,21 г, 1,09 ммоля) добавляют при перемешивании к раствору кислоты 212е (0,29 г, 0,84 ммоля) в СН2Cl2 (3 мл) при комн. темп. Смесь выдерживают 10 мин, затем добавляют раствор (3RS, 4RS) т-бутил 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентаноата (Revesz, L. et al. Tetrahedron Lett., 52, pp. 9693-9696 (1994); 0,29 г, 1,40 ммоля) в СН2Сl2 (3 мл), затем 4-диметиламинопиридин (10 мг). Раствор перемешивают 17 ч, разбавляют ЕtOАс, промывают 1М НСl, нас. солевым раствором, нас.водным раствором NаНСО3 и затем опять нас. солевым раствором, высушивают (MgSO4) и концентрируют. Остаток очищают методом флэш-хроматографии (50-100% ЕtOАс/ СН2Сl2 и 5% MeOH/EtOAc), получая 0,25 г (56%) белого стеклоподобного твердого вещества: IR (KBr) 3343, 1726, 1658, 1536, 1426, 1279, 1257, 1157; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,84-7,79 (2Н, m), 7,57-7,40 (3Н, m), 7,05-6,92, 6,73 (2Н, 2m), 5,17-5,04 (2Н, m), 4,56, 4,35-4,21, 4,04 (5Н, 3m), 3,36, 3,09-2,34, 2,00 (11Н, 3m), 1,46 (9Н, s). Аналитически рассчитано для C26H35FN4O7·0,5 Н2О: С, 57,45; Н, 6,65; N, 10,31. Обнаружено: С, 57,64; Н, 6,56; N, 10,15.
(229е) получают из 228с по способу, аналогичному способу получения соединения 216е. После очистки методом флэш-хроматографии (30-50% ЕtOАс/СН2Сl2) продукт получают в виде белого стеклоподобного твердого вещества (0,194 г, 89%): IR (KBr) 3376, 1728, 1659, 1529,1424,1279,1256, 1156.
(230е) получают из 229е по способу, аналогичному способу получения соединения 217е, с образованием 230е в виде белого стеклоподобного твердого вещества (100%): т. пл. 105-125° С; [α ]
23 |
D |
(231е). Метиловый эфир N-флюоренилметилокси-карбонил-3-амино-3-цианопропионовой кислоты (EP 0547699 A1, 385 мг, 1,1 ммоля) обрабатывают 17 мл диэтиламина. После 1,5 часов перемешивания при комнатной температуре раствор концентрируют. Остаток хроматографируют на силикагеле (3% метанол в CH2Cl2) и получают свободный амин в виде бледно-желтого масла. К раствору этого масла и гидроксибензотриазола (297 мг, 2,19 ммоля) в DMF (5 мл) добавляют при 0° С этилдиметиламинопропил карбодиимид (232 мг, 1,21 ммоля, 1,1 эквив.), затем (IS, 9S) 9-(бензоиламино)-[6, 10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро-6Н-пиридазино[1,2-а] [1,2]диазепин-1-карбоновую кислоту (212е). После перемешивания в течение 5 мин при 0° С и затем в течение ночи при комнатной температуре, смесь разбавляют СН2Сl2 (50 мл) и получившийся раствор промывают последовательно 1М НСl (2× 30 мл), H2O (30 мл), 10% NаНСО3 (2× 30 мл) и нас. водн. NaCl, высушивают (MgSO4) и концентрируют. После очистки методом флэш-хроматографии (3% метанол в СН2Сl2) получают соединение 231е (404 мг, 83%) в виде твердого вещества: [α ]
20 |
D |
(232е). Раствор метилового эфира 231е (400 мг, 0,88 ммоля) в метаноле (30 мл) и воде (30 мл) охлаждают до 0° С и обрабатывают диизопропилэтиламином. Раствор перемешивают при 0° С в течение 10 мин и затем в течение ночи при комнатной температуре. Гетерогенную смесь концентрируют и полученное твердое вещество подвергают хроматографии на силикагеле (5% метанол/1% муравьиная кислота в СН2Сl2), получая свободную кислоту 232е (170 мг, 44%) в виде белого твердого вещества: т. пл. 155° С (разл.); [α ]
20 |
D |
(233е). К раствору (1S,9S) 6, 10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро-9-(бензоиламино)-6Н-пиридазино[1,2-а] [1,2]диазепин-1-карбоновой кислоты (212е) (345 мг, 10 ммолей), (208а) (361 мг, 1,1 ммоля, 1,1 экв.) и (Рh3Р)2РdСl2 (20 мг) в СН2Сl2 (5 мл), добавляют по каплям н-Вu3SnН (0,621 мл, 2,3 ммоля, 2,1 экв.). Полученный оранжево-коричневый раствор перемешивают при 25° С в течение 10 мин и затем добавляют 1-гидроксибензотриазол (297 мг, 2,2 ммоля, 2 экв.). Смесь охлаждают до 0° С и добавляют этилдиметиламинопропил карбодиимид (253 мг, 1,3 ммоля, 1,2 экв.). После перемешивания при 0° С в течение 10 мин и затем в течение ночи при комнатной температуре, смесь разбавляют ЕtOАс (50 мл) и полученный раствор промывают последовательно 1М НСl (3× 25 мл), 10% NaHCO3 (3× 25 мл) и нас.водн. NaCl, высушивают (MgSO4) и концентрируют. После флэш-хроматографии на силикагеле (2-10% метанол в СН2Сl2) получают соединение 233е (280 мг, 49%) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества: [α ]
20 |
D |
(236е) получают по способу, аналогичному способу получения 233е, используя (4R) т-бутил N-аллилоксикарбонил-4-амино-5-оксо-пентаноат семикарбазон (208b, 435 мг, 1,33 ммоля). Продукт получают в виде пены (542 мг, 71%): [α ]
20 |
D |
(234е). Раствор семикарбазона 233е (390 мг, 0,68 ммоля) в метаноле (10 мл) охлаждают до 0° С и затем обрабатывают 38% водн. раствором формальдегида (2 мл) и 1М НСl (2 мл). Затем реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор концентрируют до удаления метанола. Водн. раствор экстрагируют ЕtOАс (30 мл). Органический раствор промывают последовательно 10% NaHCO3 (30 мл) и нас.водн. NaCl (30 мл), высушивают (MgSO4) и концентрируют. После очистки методом флэш-хроматографии на силикагеле (2-5% метанол в СН2Сl2) получают 234е (179 мг, 51%) в виде белой пены: [α ]
20 |
D |
(237е) получают из 236е по способу, аналогичному способу получения 234е, с образованием белой пены (390 мг, 85%): [α ]
20 |
D |
(235е). Раствор т-бутилового эфира 234е (179 мг, 0,35 ммолей) в сухом СН2Сl2 (3 мл) охлаждают до 0° С и обрабатывают трифторуксусной кислотой (2 мл). Полученный раствор перемешивают при 0° С в течение 30 мин и затем 2 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют, остаток помещают в сухой СН2Сl2 (5 мл) и смесь снова концентрируют. Процесс повторяют еще раз с новой порцией СН2Сl2 (5 мл).
Полученный остаток кристаллизуют из диэтилового эфира. Осадок собирают и очищают на колонке с силикагелем (5% метанол в СН2Сl2), получая соединение 235е в виде твердого вещества белого цвета (111 мг, 70%): т. пл. 142° С (разл.); [α ]
20 |
D |
(238е) получают из 237е тем же способом, что и 235е, в виде бежевой пены (190 мг, 60%): [α ]
20 |
D |
(243) получают из (IS, 9S) т-бутил 9-амино-октагидро-10-оксо-6Н-пиридазино [1,2-а] [1,2] диазепин-1-карбоксилата (Attwood, et al., J. Chem. Soc. Perkin 1. pp. 1011-19 (1986)), по способу, описанному для 211е, с образованием 2,03 г (86%) бесцветной пены: [α ]
25 |
D |
(244) получают из (IS, 9S) т-бутил 9-бензоиламино-октагидро-10-оксо-6Н-пиридазино-[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксилата (243), по способу, описанному для 212е, с образованием 1,52 г (89%) белого порошка: т. пл. 166-169° С (разл.); [α ]
25 |
D |
(245) получают из (IS, 9S) 9-бензоиламино-октагидро-10-оксо-6Н-пиридазино [1, 2-а] [1, 2] -диазепин-1-карбоновой кислоты (244), по способу, описанному для 213е, с образованием 601 мг (76%) бесцветной пены: IR (KBr) 3401, 2945, 1794, 1685, 1638, 1521, 1451, 1120; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,87-7,77 (2Н, m), 7,57-7,14 (10Н, m), 5,59-5,47 (2Н, m), 4,97-4,32 (4Н, m), 3,27-1,35 (14Н, m). Аналитически рассчитано для C28H32N4O6·0,5 H2O: С, 63,50; Н, 6,28; N, 10,58. Обнаружено: С, 63,48; Н, 6,14; N, 10,52. MC (ES +, m/z) 521 (100%,M++1).
(246) получают из [3S, 2RS (1S,9S)]N-(2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)-9-бензоиламино-октагидро-10-оксо-6Н-пиридазино [1,2-а] [1,2] диазепин-1-карбоксамида (245), по способу, описанному для 214е, с образованием 396 мг (84%) белого порошка: т. пл. 110-115° С; [α ]
26 |
D |
(247). н-бутиллития (1,6 М в гексане) (22,3 мл, 35,7 ммолей) добавляют по каплям в течение 20 мин к раствору (2R)-(-)-2,5-дигидро-3,6-диметокси-2-(1-метилэтил)пиразина (5,8 мл, 6,0 г, 32,4 ммолей) в THF (250 мл), охлажденному до -75° С, с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру ниже -72° С. Реакционную смесь перемешивают 1 час при -75° С и добавляют раствор 2,6-ди-т-бутил-4-метоксифенил-2-бутеноата (Suzuck et al. Liebias Ann. Chem. pp. 51-61 (1992)) (9,9 г, 32,5 ммолей) в THF (60 мл) в течение 30 минут, поддерживая при этом температуру ниже -72° С. Реакционную смесь выдерживают 1,5 часа при -75° С, затем добавляют раствор ледяной уксусной кислоты (6 мл) в THF (25 мл) при -75° С, и раствор нагревают до комнатной температуры. Этот раствор выливают в 10% NH4Cl (300 мл) и экстрагируют диэтиловым эфиром (3× 250 мл). Объединенные органические фазы промывают нас. солев. раствором (2× 200 мл), высушивают над Na2SO4 и упаривают досуха при пониженном давлении. Полученное масло очищают методом флэш-хроматографии на силикагеле (20% гептан в СН2Сl2), с образованием указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого масла (13,5 г, 85%): [α ]
20 |
D |
(248). Раствор (247) (22,4 г, 45,8 ммолей) в ацетонитриле (300 мл) и 0.25N НСl (366 мл, 2 экв.) перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 4 дней. Ацетонитрил упаривают при пониженном давлении и к водной фазе добавляют диэтиловый эфир (250 мл). рН водной фазы доводят до рН 8-9 концентрированным раствором аммиака (32%), и фазы разделяют. Водную фазу экстрагируют диэтиловым эфиром (2× 250 мл). Объединенные органические фазы высушивают над Na2SO4 и упаривают досуха при пониженном давлении. Полученное масло очищают методом флэш-хроматографии на силикагеле (2% метанол в СН2Сl2), с образованием целевого продукта в виде светло-желтого масла (8,2 г, 45%): [α ]
20 |
D |
1Н ЯМР (CDCl3) δ 6,85 (2Н, s), 3,79 (3Н, S), 3,74 (3Н, s), 3,72-3,69 (1Н, m), 3,05-2,85 (1Н, m), 2,67-2,50 (2Н, m), 1,32 (18H, s), 0,93 (3Н, d, J=7). Аналитически рассчитано для C22H35NO5: С, 67,15; Н, 8,96; N, 3,5. Обнаружено: С, 67,20; Н, 9,20; N, 3,70.
(249). Раствор (2S, 3S)-5-[2,6-ди-т-бутил-4-метоксифенил]3-метилглутамата (248) (8,0 г, 20,3 ммолей) в 5N НСl (200 мл) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в циклогексане (× 4) и упаривают досуха (х4), получая твердое вещество белого цвета (7,9 г, 93%): т. пл. 230°С; [α ]
23 |
D |
(250). Диизопропилэтиламин (4,1 мл, 3,04 г, 23,5 ммолей, 1,25 экв) и фталевый ангидрид (3,5 г, 23,6 ммолей, 1,25 экв) добавляют к раствору (2S,3S)-5-[2,6-ди-т-бутил-4-метоксифенил]3-метилглутамата (249) (7,8 г, 18,6 ммолей) в толуоле (300 мл), и полученную смесь нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 3 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь упаривают досуха и полученное масло очищают методом флэш-хроматографии на силикагеле (2% метанол в СН2Сl2), получая целевой продукт в виде белой пены (8,35g, 87%): [α ]
20 |
D |
(251). Раствор аминокислоты (250) (1,2 г, 2,35 ммоля) в сухом диэтиловом эфире (10 мл) обрабатывают пентахлоридом фосфора (0,52 г, 2,5 ммоля) при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрируют, обрабатывают несколько раз толуолом и снова упаривают досуха. Полученный хлорид кислоты растворяют в сухом THF (5 мл) и СН2Сl2
(5 мл) и охлаждают до 0° С. К раствору добавляют т-бутил-1-(бензилоксикарбонил)-гексагидро-3-пиридазин-карбоксилат (0,753 г, 2,35 ммоля, 1 экв.) и N-этилморфолин (3 мл). Реакционную смесь перемешивают 30 мин при 0° С и затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь упаривают и к полученному остатку добавляют CH2Cl2 (30 мл). Раствор промывают 1М НСl, водой, 10% NaHCO3, высушивают (MgSO4) и упаривают. Полученную белую пену очищают на силикагеле (0-2% метанол в СН2Сl2), получая целевое соединение 251 в виде бледно-желтого стеклоподобного твердого вещества (740 мг, 39%): [α ]
20 |
D |
(254). Раствор защищенной кислоты (251) (715 мг, 0,893 ммоля) обрабатывали церия (IV) нитратом аммония (1,8 г, 3,3 ммоля, 3,7 экв.) в воде (3 мл) в течение 4 ч при комнатной температуре. Добавляют маннит (600 мг, 3,3 ммоля, 3,7 экв.) и смесь перемешивают 1 ч. К смеси добавляют диэтиловый эфир (50 мл) и воду (30 мл). После декантации водную фазу экстрагируют диэтиловым эфиром (4× 50 мл). Объединенную органическую фазу промывают водой, высушивают (MgSO4) и концентрируют. После хроматографии на силикагеле (10% метанол в CH2Cl2) получают 5-(1-бензилоксикарбонил-3-т-бутоксикарбонил-гексагидропиридазин-2-ил)карбонил-3-метил-4-фталимидопентановую кислоту (252) (360 мг, 64%): [α ]
20 |
D |
20 |
D |
20 |
D |
(255). Раствор бициклического соединения (254) (70 мг, 0,16 ммолей) в метаноле обрабатывали гидратом гидразина (0,02 мл, 4 ммолей, 2,5 экв.). После 5 ч перемешивания при комнатной температуре смесь концентрируют, к полученному остатку добавляют толуол и снова упаривают. Остаток обрабатывают 2М уксусной кислотой (2 мл) в течение 16 ч. Получившийся осадок отфильтровывают и промывают 2М уксусной кислотой (10 мл). Фильтрат подщелачивают твердым NаНСО3 и экстрагируют ЕtOАс.Органический раствор промывают водой, высушивают (MgSO4) и концентрируют. После очистки методом флэш-хроматографии на силикагеле (2% метанол в СН2Сl2) получают свободный амин в виде пены (50 мг, 100%). Этот амин (50 мг, 0,16 ммолей) растворяют в диоксане (1 мл) и воде (0,25 мл), обрабатывают NаНСО3 (0,034 г, 0,04 ммолей) и затем бензоилхлоридом (0,047 мл, 0,40 ммолей, 2,8 экв.). Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, после чего разбавляют ЕtOАс (15 мл). Органический раствор промывают 10% NaHCO3 и нас.водным раствором NaCl, высушивают (MgSO4) и концентрируют. После очистки методом флэш-хроматографии на силикагеле (2% метанол в CH2Cl2) получают бензамид 255 в виде пены (67 мг, 100%): 1H ЯМР (СDСl3) δ 7,89-7,39 (5Н, m), 6,79 (1H, d), 5,32-5,20 (1H, m), 4,98-4,82 (1H, m), 4,75-4,64 (1H, m), 3,84-3,65 (1H, m), 3,09-2,89 (1H, m), 2,45-2,18 (2H, m), 2,00-1,61 (4H, m), 1,48(9H,s), 1,28(3H,d),
(257). Раствор т-бутилового эфира 255 (67 мг, 0,16 ммоля) в CH2Cl2 (1 мл) обрабатывают при 0° С трифторуксусной кислотой (1 мл). Полученный раствор перемешивают при 0° С в течение 15 мин, и затем 1 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют, к остатку добавляют сухой СН2Сl2 (2× 2 мл) и смесь снова концентрируют (× 2). Остаток кристаллизуют из диэтилового эфира. Отфильтровывают осадок, получая свободную кислоту 255 в виде твердого вещества серого цвета (40 мг, 70%). Раствор кислоты (40 мг, 0,11 ммоля), N-аллилоксикарбонил-4-амино-5-бензилокси-2-оксотетрагидрофурана (Chapman, Bioorg. & Med. Chem. Lett., 2, pp. 615-18 (1992); 39 мг, 0,13 ммоля, 1,2 экв.) и по каплям n-Вu3SnН (0,089 мл, 0,33 ммоля, 3 экв.). Полученный раствор перемешивают 10 мин при 25° С, после чего добавляют 1-гидроксибензотриазол (36 мг, 0,266 ммоля, 2,4 экв.). Смесь охлаждают до 0° С и добавляют этилдиметиламинопропил карбодиимид (31 мг, 0,16 ммоля, 1,5 экв.). После перемешивания при 0° С в течение 10 мин и затем в течение ночи при комнатной температуре, смесь разбавляют ЕtOАс (20 мл) и полученный раствор промывают последовательно 1М НСl (2× 5 мл), 10% NаНСО3 (2× 5 мл) и нас. водным. NaCl (5 мл), высушивают (MgSO4) и концентрируют. После флэш-хроматографии на силикагеле (2% метанол в СН2Сl2) получают смесь диастереомеров (256) в виде твердого вещества серого цвета (50 мг, 82%). Этот продукт (256) используют без дальнейшей очистки (50 мг, 0,091 ммоля) и гидрируют в метаноле (5 мл), используя 10% Pd/уголь (30 мг) в течение 24 часов. Реакционную смесь фильтруют и полученный раствор концентрируют. После флэш-хроматографии на силикагеле (2-20% метанола в СН2Сl2) получают соединение 257 (9 мг, 21%) в виде твердого вещества белого цвета: 1H ЯМР (D4-MeOH) δ 7,88-7,29 (5Н, m), 5,18-4,99 (1H, m), 4,59-4,35 (3H, m), 4,26-4,11 (1Н, m), 3,65-3,41 (2Н, m), 3,18-2,91 (1H, m), 2,62-1,47 (8Н, m), 1,29-1,00 3H, 2d) (смесь ацеталя и полуацеталя). МС (ES -) 457.
(259). Бензилакрилат (1,13 мл, 7,34 ммоля) добавляют при перемешивании к суспензии бензоилгидразина (285) (1,0 г, 7,34 ммоля) в изопропаноле (28 мл). Смесь кипятят 20 ч с обратным холодильником, охлаждают до комнатной температуры и концентрируют. Остаток очищают методом флэш-хроматографии (20% ЕtOАс в СH2Сl2), получая 259 (1,098 г, 50%) в виде масла, которое кристаллизуется при стоянии: т, пл. 65° С; IR (КВr) 3283, 1723, 1644, 1316, 1201, 1156; 1Н ЯМР(CDСl3) δ 8,32-8,18 (1Н, m), 7,81-7,70 (2Н, m), 7,57-7,23 (8Н, m), 5,36-4,92 (1Н, brm), 5,11 (2Н, s), 3,26 (2Н, t, J=6,5), 2,59 (2Н, t, J=6,5);
13С ЯМР (CDCl3) δ 172,12, 167,27, 135,65, 132,54, 131,66, 128,45, 128,10, 128,06, 126,84, 66,31, 47,33, 33,31. Аналитически рассчитано для C17H18N2O3: С, 68,44; Н, 6,08; N, 9,39. Обнаружено: С, 68,42; Н, 6,10; N, 9,38. MC (ES +) 321 (M + Na, 38%), 299 (M+ + 1, 100).
(260). Раствор (3S)-1-бензил 3-т-бутил гексагидропиридазин-1,3-дикарбоксилата (Наssаll et al. J. Chem. Soc. Perkin 1, pp. 1451-1454 (1979)) (925,3 мг, 2,89 ммоля) и диизопропилэтиламина (0,70 мл, 4,0 ммоля) в 1,93М растворе фосгена в толуоле (17,96 мл, 34,7 ммоля) перемешивают 45 мин при комнатной температуре, затем концентрируют, получая твердое вещество желтого цвета. К этому твердому веществу добавляют толуол (18 мл), гидразид (259) (861,6 мг, 2,89 ммоля) и диизопропилэтиламин (0,70 мл, 4,0 ммоля). Смесь перемешивают 2,75 ч при комнатной температуре, затем концентрируют. Полученный остаток помещают в ЕtOАс, дважды промывают 1М НСl, нас. солевым раствором, затем высушивают (MgSO4), фильтруют и концентрируют, получая 2,15 г неочищенного вещества. После флэш-хроматографии (40% ЕtOАс в гексане) получают 1,65 г (89%) соединения, указанного в заголовке, в виде белой пены: т. пл. 40° С; [α ]
24 |
D |
(261). Раствор 260 (1,59 г, 2,47 ммоля) в МеОН (142 мл) обрабатывают 10% палладием на угле (230,0 мг) и перемешивают 1,5 ч в атмосфере Н2. Смесь отфильтровывают и растворитель упаривают, получая 1,04 г (100%) белой пены. Это вещество используют в следующей стадии без дополнительной очистки: т. пл. <40° С; [α ]
26 |
D |
(262). К раствору аминокислоты 261 (1,012 г, 2,41 ммоля) в сухом THF (26 мл) при 0° С добавляют N-этилморфолин (597 мкл, 4,69 ммоля), затем PCl5 (651,3 мг, 3,12 ммоля). Реакционную смесь перемешивают 2 часа при 0° С, затем оставляют нагреваться до комнатн. темп. и перемешивают еще 15,5 ч. Смесь концентрируют, к полученному остатку добавляют ЕtOАс, промывают дважды 1М НСl, нас. раствором NaHCO3, нас. солевым раствором, затем высушивают (MgSO4), фильтруют и концентрируют. После флэш-хроматографии (20% EtOAc в CH2Cl2) получают 727,3 мг (75%) указанного в заголовке соединения в виде белой пены: [α ]
26 |
D |
4,43 (1Н, m), 4,08-3,69 (3Н, m), 3,07-2,84 (1Н, m), 2,57-2,35 (1H, m), 2,34-2,14 (1H, m), 2,07-1,43 (3Н, m), 1,48 (9H, s);
13C ЯМР (СDСl3) δ 172,41, 169,04, 166,35, 158,35, 132,24, 132,03, 128,61, 127,31, 82,77, 55,41, 54,07, 41,57, 32,21, 28,04, 24,97, 20,37. Аналитически рассчитано для C20H26N4O5: С, 59,69; Н, 6,51; N, 13,92. Обнаружено: С, 59,53; Н, 6,53; N, 13,84. MC (ES +) 425 (M + Na, 71%), 403 (M+ + 1, 100), 145 (41).
(263). Раствор эфира 262 (720,0 мг, 1,80 ммолей) в смеси 1:1 СН2Сl2 и TFA (150 мл) перемешивают 1,3 ч в безводной атмосфере. Затем раствор упаривают под вакуумом, добавляют Et2O и снова упаривают. Этот процесс повторяют шесть раз до получения неочищенного продукта в виде не совсем белого твердого вещества. Продукт очищают методом флэш-хроматографии (5% МеОН в СН2Сl2), получая 520,0 мг (83%) указанного в заголовке соединения в виде белой пены: [α ]
25 |
D |
(264). К раствору кислоты 263 (300,0 мг, 0,87 ммоля) и (2RS,3S)-3-аллилоксикарбониламино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофурана (Chapman, Bioorg. & Med. Chem. Lett 2, pp. 615-18 (1992)) (277,6 мг, 0,95 ммоля) в сухом CH2Cl2 (2,5 мл) и в сухом DMF (2,5 мл) при комн. темп. добавляют хлорид бис(трифенилфосфин)палладия (13,0 мг), затем гидрид три-н-бутилолова (466,0 мкл, 1,73 ммоля). Реакционную смесь перемешивают 5 мин, после чего добавляют 1-гидроксибензотриазол (234,1 мг, 1,73 ммоля) и смесь охлаждают до 0° С перед добавлением гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (204,5 мг, 1,04 ммоля). Смесь оставляют нагреваться до комн. темп. и перемешивают 16,5 ч. Смесь разбавляют ЕtOАс, промывают 1М NaHSO4, дважды промывают нас. раствором NaHCO3, затем Н2O и нас. солевым раствором. Органический слой высушивают (MgSO4), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают методом флэш-хроматографии (5% МеОН в СН2Сl2), получая 358,3 мг (77%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета: IR (КВr) 3435, 1791, 1665, 1526, 1421, 1285; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,76 и 8,49 (1H, 2 xs), 7,92-7,73 (2Н, m), 7,62-7,24 (8,5H, m), 6,86 (0,5H, d, J=8,0), 5,53 и 5,33 (1Н, d, J=5,5, s), 4,95-4,34 (5Н, m), 4,04-3,54 (3Н, m), 3,03-2,64 (2Н, m), 2,49-2,14 (2Н, m), 2,11-1,46 (4Н, m); MC (ES +) 558 (M + Na, 100%), 536 (М+ + 1, 78), 404 (58).
(265). Смесь 264 (350,0 мг, 0,65 ммоля), 10% палладия на угле (350 мг) и метанола (36 мл) перемешивают 6,5 ч в атмосфере Н2. Смесь фильтруют и растворитель упаривают. Добавляют Et2O и растворитель снова упаривают. Этот процесс повторяют четыре раза до получения 283 мг (97%) указанного в заголовке соединения в виде белого кристаллического твердого вещества: т. пл. декарбоксилатов выше 140° С; [α ]
26 |
D |
(266). Раствор (2S) дициклогексиламиновой соли 3-бензилоксикарбониламино-2-трет-бутоксикарбониламинопропионовой кислоты (3 г, 5,8 ммолей) в дихлорометане (200 мл) промывали четыре раза раствором 1М НСl, высушивают (MgSO4) и концентрируют. Получившееся масло растворяют в сухом дихлорметане (35 мл), охлаждают до 0° С и обрабатывают трифторуксусной кислотой (35 мл). Этот раствор перемешивают 1,5 ч при 0° С, после чего упаривают досуха. К остатку добавляют дихлорметан (50 мл) и затем упаривают под вакуумом. Этот процесс повторяют шесть раз, получая в результате твердое вещество белого цвета. Белое твердое вещество суспендируют в толуоле (50 мл), обрабатывают порошкообразным фталевым ангидридом (940 мг, 6,35 ммоля) и кипятят с обратным холодильником 18 ч. Полученный раствор концентрируют, получая масло, которое очищают методом флэш-хроматографии (2-10% метанол/дихлорометан) с образованием 266, 2,01 г (94%), в виде белого порошка: IR (KBr) 3600-2500br, 1776, 1714, 1530, 1469, 1455, 1392, 1263, 1131, 722; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,83 (2Н, m), 7,72 (2Н, m), 7,29 (5Н, m), 5,41 (1Н, m), 5,03 (2Н, s), 3,90 (2Н, m); MC (ES-), 367 (M -1).
(267). Суспензию кислоты 266 (1,32 г, 3,58 ммоля) в сухом эфире (37 мг) обрабатывали пентахлоридом фосфора (1,04 г, 5 ммолей) и перемешивали 2 часа при комнатной темпратуре. Раствор отфильтровывают для удаления непрореагировавшего пентахлорида фосфора, после чего упаривают досуха. К остатку добавляют сухой толуол (25 мг), затем упаривают досуха. Этот процесс повторяют несколько раз. Получившееся масло растворяют в сухом дихлорметане (25 мг), охлаждают до 0° С и обрабатывают раствором (3S) т-бутил 1-бензилоксикарбонилпиридазин-3-карбоксилата (1,15 г, 3,58 ммоля) в сухом дихлорметане (2 мг), затем 5% водным раствором бикарбоната натрия (25 мг). Смесь интенсивно перемешивают 20 ч при комнатной температуре, затем разбавляют этилацетатом (100 мл) и подкисляют до рН2 с помощью 1М НСl. Органическую фазу дважды промывают разбавленным раствором НСl, затем нас. солевым раствором, высушивают (MgSO4) и концентрируют. Полученное масло очищают методом флэш-хроматографии (2-20% этилацетат/дихлорометан 10-20% метанол/дихлорометан), получая (267), 1,25 г (52%) в виде белого порошка: IR (КВr) 3367, 2955, 1722, 1517, 1455, 1387, 1369, 1251, 1153, 721; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,81 (2Н, m), 7,74 (2Н, m), 7,63 (1Н, brs), 7,31 (10Н, m), 5,46-4,76 (5Н, m), 4,07-3,54 (4Н, m), 2,4 (1Н, m), 2,0-1,6 (3Н, m), 1,40 (9Н, s); MC (ES+), 671 (M + 1), 693 (M + Na).
(268). Раствор эфира 267 (50 мг, 0,074 ммоля) в метаноле (15 мл) обрабатывают 10% палладием на угле (50 мг) и гидрируют при комнатной температуре и атмосферном давлении в течение 24 ч. Смесь тщательно вакуумируют для удаления водорода, после чего обрабатывают 37% водным раствором формальдегида (18 мг, 0,22 ммоля) и перемешивают 2 часа под током азота. Смесь фильтруют, упаривают досуха, и продукт очищают методом флэш-хроматографии (4-100% этилацетат/дихлорометан), получая 268 14,5 мг (48%) в виде масла: 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,85 (2Н, m), 7,71 (2Н, m), 5,78 (1H, dd, J=10, 5), 4,99 (1H, dd, J=6,1, 1,5), 4,07 (1H, d, J=10,6), 3,49 (1H, dd, J=14, 5), 3,39 (1H, d, J=10,3), 3,24 (1H, dd, J=14, 10,2), 3.17 (2Н, m), 2,39 (1H, m), 1,84-1,46 (3Н), 1,51 (9Н, s); MC (ES+), 415 (M + 1), 437 (M + Na).
Соединения 280-283 получают из 212b по способу, подобному используемому для получения 226е. Соединения 284-287 получают по способу, подобному используемому для получения 217е.
![]() | ||
Соединение | R5 | R |
280 | ![]() | ![]() |
281 | ![]() | ![]() |
282 | ![]() | ![]() |
283 | ![]() | ![]() |
284 | ![]() | ![]() |
285 | ![]() | ![]() |
286 | ![]() | ![]() |
287 | ![]() | ![]() |
(306а) получают тем же способом, что и 208а, за исключением того, что 2,6-дихлорфенилметоксиамин (полученный тем же способом, что и 306b) используют вместо семикарбазида, получая 870 мг (колич.) в виде прозрачного масла.
(306b) получают тем же способом, что и 208а, за исключением того, что 2-(фенил)этоксиамин (US 5 346 911) используют вместо семикарбазида, получая 395 мг (колич.) в виде прозрачного масла.
(307а) получают тем же способом, что и 233е, за исключением того, что 306а используют вместо 207а, с образованием 23 мг (23%) 307а в виде твердого вещества белого цвета.
(307b) получают тем же способом, что и 233е, за исключением того, что 306b используют вместо 207а, с образованием 43 мг (48%) 307Ь в виде твердого вещества белого цвета.
(308а) получают из 307а способом, подобным способу получения 235е из 234е, с образованием 15,2 мг (74%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 0,9(m), 1,3(s), 1,7(m), 1,8(m), 2,0(m), 2,1-2,2(m), 2,3(dd), 2,4-2,5(m), 2,6(m), 2,7-2,8(m), 3,l(m), 3,3(m), 3,4-3,5(m), 4,5(m), 4,9(m), 5,l(m), 5,3(d), 5,4(s), 6,8(d), 7,2-7,5(m), 7,8(dd), 8,4(dd).
(308b) получают из 307b способом, подобным способу получения 235е из 234е, с образованием 25,2 мг (68%) в виде твердого вещества белого цвета: 1H ЯМР (СD3ОD) δ 1,2(m), 1,6-1,7(m), 2,0-2,1(m), 2,2(m), 2,3(m), 2,5(m), 2,6-2,7(dd), 2,9(t), 3,0(t), 3,1(m), 3,3-3,5(m), 4,2(t), 4,25(m), 4,5(m), 5,2(t), 5,3(t), 6,7(d), 7,l-7,2(m), 7,35(dd), 7,4(m), 7,5(m). 7,8(dd), 8,3(dd).
(302).
Стадия А: 301 получают тем же способом, что и соединение 605а (Стадия А), за исключением того, что 212е используют вместо 603а с образованием 540 мг (34%) твердого вещества белого цвета.
Стадия В: 302. Раствор 301 (50,7 мг; 0,091 ммоля) в 2,8 мл МеОН/НОАс/37% водн. раств. формальдегида (5:1:1) перемешивают 5,5 ч при комн. темп. и реакционную смесь концентрируют до 0,7 мл под вакуумом. Остаток растворяют в 3 мл CH3CN и концентрируют до 0,7 мл (3× ), растворяют в толуоле, концентрируют до 0,7 мл под вакуумом (2× ) и концентрируют досуха. После хроматографии (флэш, SiO2 5% изопропанол/СН2Сl2) получают 302 (45,5 мг, 78%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (d6-DMSO) δ 1,0-1,15(m, 2H), 1,4(s, 9H), 1,65(m, 2H), 1,9-2,1(m, 2H), 2,15-2,4(m, 3Н), 2,55(m, 1H), 2,7-3,0(m, 2H), 4,3-4,6(m, 2H), 4,9(m, 1H), 5,2(m, 1H), 7,4-7,6(m, 2H), 7,8-8,0(m, 2H), 8,6(m, 1H), 8,8(m,1H), 9,4(s, 1H).
(304a).
Стадия А: Раствор 302 (90 мг; 0,18 ммоля) в 10 мл МеОН обрабатывают триметилортоформатом (1 мл) и гидратом п-толуолсульфоновой кислоты (5 мг; 0,026 ммоля), и реакционную смесь перемешивают 20 ч. Затем обрабатывают 3 мл нас.водного раствора NaHCO3 и концентрируют под вакуумом. К остатку добавляют ЕtOАс и промывают разбавленным водным раствором NaHCO3, высушивают над MgSO4 и концентрируют в вакууме, получая 80 мг 303а.
Стадия В: 303а растворяют в 2 мл TFA и перемешивают 15 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь растворяют в СН2Сl2 и концентрируют в вакууме (3× ). После хроматографии (флэш, SiО2, от 1% до 3% МеОН/ СН2Сl2) получают 43 мг (64%) 304a в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СDСl3) δ 1,55-1,8(m, 2H), 1,9-2,15(m, 4Н), 2,25-2,5(m, 2Н), 2,7-3,3(m, 4Н), 3,45, 3,6(s, s, 3H), 4,4, 4,75(2m, 1H), 4,6(m, 1H), 4,95, 5,4(t,d, 1H), 5,l-5,2(m, 1H), 6,45, 7,05(2d, 1H), 6,95(m, 1H), 7,45(m, 2H), 7,5(m, lH),7,85(m,2H).
Пример 11
Соединения 214е, 404-413,415-445,446-468,470-491 и 493-499 синтезируют так, как описано в Примере 11 и Таблице 7.
Стадия А. Синтез 401. Смолу TentaGel S® NH; (0,16 ммоля/г, 10,0 г) помещают в стеклянную воронку с пористым фильтром и промывают DMF (3× 50 мл), 10% (об./об.) DIEA в DMF (2× 50 мл) и в конце DMF (4× 50 мл). К смоле добавляют DMF в количестве, достаточном для образования взвеси, затем соединение 400 (1,42 г, 2,4 ммоля, полученное из т-бутилового эфира (3S)-3-(флуоренилметилоксикарбонил)-4-оксобутановой кислоты по методике A.M. Murphy et. al. J. Am. Chem. Soc., 114, 3156-3157 (1992)), гидрат 1-гидроксибензотриазола (HOBT· H2O; 0,367 г, 2,4 ммоля), O-бензотриазол-1-ил-N, N, N, N' -тетраметилуроний гексафторфосфат (HBTU; 0,91 г, 2,4 ммоля) и DIEA (0,55 мл, 3,2 ммоля). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи, используя кистевой встряхиватель. Смолу отделяют на стеклянной воронке с пористым фильтром путем вакуумной фильтрации и промывают DMF (3× 50 мл). Непрореагировавшие аминогруппы закрывают в результате взаимодействия смолы с 20% (об./об.) Ас2О/DMF (2× 25 мл) непосредственно в воронке (10 мин/промыв). Смолу промывают DMF (3× 50 мл) и CH2Cl2 (3× 50 мл) и затем сушат в течение ночи, получая 401 (11,0 г, количественный выход).
Стадия В. Синтез 402. Смолу 401 (6,0 г, 0,16 ммоля/г, 0,96 ммоля) подвергают набуханию на стеклянной воронке с пористым фильтром с помощью DMF (3× 25 мл). Fmoc-защитную группу снимают в 25% (об./об.) пиперидин/DMF (25 мл) в течение 10 мин (время от времени перемешивая) и затем в течение 20 мин в свежем пиперидиновом реагенте (25 мл). Затем смолу промывают DMF (3× 25 мл) и N-метипирролидоном (2× 25 мл). После перенесения смолы в 100-мл колбу добавляют N-метипирролидон до получения взвеси и затем 212f (0,725 г, 1,57 ммоля), НОВТ· Н2О (0,25 г, 1,6 ммоля), HBTU (0,61 г, 1,6 ммоля) и DIEA (0,84 мл, 4,8 ммоля). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, используя кистевой встряхиватель. Обработка смолы и закрытие непрореагировавших защитных групп с помощью 20% (об./об.) Ас2О в DMF проводят, как описано для 401, получая 402 (6,21 г, количественный выход).
Стадия С. Синтез 403. Это соединение получают из смолы 402 (0,24 г, 0,038 ммоля), используя Advanced ChemTech 396 Multiple Peptide synthesizer. Автоматические циклы состоят из автоматических промывок DMF (3× 1 мл), удаления защитных групп с помощью 25% (v/v) пиперидина в DMF (1 мл) в течение 3 мин, затем со свежим реагентом (1 мл) в течение 10 мин, получая смолу 403. Смолу промывают DMF (3× 1 мл) и N-метипирролидоном (3× 1 мл).
Стадия D. Способ 1. (409). Смолу 403 ацилируют раствором 0,4М тиофен-3-карбоновой кислоты и 0,4М НОВТ в N-метилпирролидоне (1 мл), раствором 0,4М HBTU в N-метилпирролидоне (0,5 мл) и раствором 1,6М DIEA в N-метилпирролидоне (0,35 мл), реакционную смесь перемешивают 2 часа при комн. темп. Стадию ацилирования повторяют. Наконец, смолу промывают DMF (3× 1 мл), СН2Сl2 (3× 1 мл) и высушивают под вакуумом. Альдегид удаляют со смолы и проводят общее депротектирование путем обработки 95% TFA/5% Н2О (об./об., 1,5 мл) в течение 30 мин при комн. темп. После промывания смолы удаляющим реагентом (1 мл), объединенные фильтраты добавляют к холодной смеси 1:1 Еt2O:пентан (12 мл) и получившийся осадок отделяют центрифугированием и декантацией. Осадок растворяют в смеси 10% СН3Со/90% Н2O/0,1% TFA (15 мл) и лиофилизируют, получая 409 в виде белого порошка. Это соединение очищают полу-препаративной RP-ВЭЖХ с колонкой Rainin Microsorb™ С 18 (5 μ , 21,4× 250 mm), элюируя линейным градиентом CH3CN (5% -45%), содержащим 0,1% TFA (об./об.) в течение 45 мин при 12 мл/мин. Фракции, содржащие целевой продукт, собирают и лиофилизируют, получая 409 (10,8 мг, 63%).
Стадия D. Способ 1А. Синтез 418. По способу, подобному способу 1, смолу 403 ацилируют с помощью 4-(1-флуоренилметоксикарбониламино)бензойной кислотой и повторяют. Fmoc-группу удаляют, как описано в Стадии С, и свободный амин ацилируют 20% (об./об.) Ас2О в DMF (1 мл) и 1,6М DIEA в N-метилпирролидоне (0,35 мл) в течение 2 ч при комн. темп. Стадию ацилирования повторяют. После удаления альдегида получают 418 (3,2 мг).
Стадия D. Способ 1В. Синтез 447. По способу, подобному способу 1А, смолу 403 ацилируют с помощью 0,4М 4-(1-флуоренилметоксикарбониламино)бензойной кислотой. Стадию ацилирования повторяют один раз. Fmoc-группу удаляют, как раньше, и свободный амин взаимодействует с 1М метансульфонилхлоридом в CH2Cl2 (0,5 мл) и 1М пиридином в CH2Cl2 (0,60 мл) в течение 4 ч при комн. темп. После удаления альдегида получают 447 (10,0 мг).
Стадия D. Способ 2. Синтез 214е. По способу, подобному способу 1, смолу 403 ацилируют с помощью 0,5М бензоил хлорида в N-метилпирролидоне (1 мл) и 1,6М DIEA в N-метилпирролидоне (0,35 мл) в течение 2 ч при комн. темп. Стадию ацилирования повторяют. После удаления альдегида со смолы получают 214е (5,1 мг, 30%).
Стадия D. Способ 3. Синтез 427. По способу, подобному способу 1, смола 403 взаимодействует с 1,0 М бензолсульфонил хлоридом в СН2Сl2 (0,5 мл) и 1М пиридином в CH2Cl2 (0,60 мл) в течение 4 ч при комн. темп. Реакцию повторяют. После удаления альдегида со смолы получают 427 (7,2 мг, 40%).
Стадия D. Способ 4. Синтез 420. По способу, подобному способу 1, смола 403 взаимодействует с 0,5М метилизоцианатом в N-метилпирролидоне (1 мл) и 1,6М DIEA в N-метилпирролидоне (0,35 мл) в течение 2 ч при комн. темп. Реакцию повторяют. После удаления альдегида со смолы получают 420 (8,3 мг, 55%).
Стадия D. Способ 5. Синтез 445. По способу, подобному способу 1, смолу 403 ацилируют с помощью 0,27М имидазол-2-карбоновой кислоты (1 мл) в 2:1 DMF:H2O (с 1 экв. DIEA) и 1М гидрохлоридом 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидом (EDC) в смеси 2:1 N-метилпирролидон/Н2О (0,35 мл) в течение 3 ч при комн. темп. После удаления альдегида со смолы получают 445 (9,5 мг).
Аналитические анализы ВЭЖХ:
(1) Waters DeltaPak С 18, ЗООА (5μ , 3.9× 150 мм). Линейный градиент СН3СN (5% - 45%), содержащий 0,1% TFA (об./об.) в течение 14 мин при 1 мл/мин.
(2) Waters DeltaPak С 18, ЗООА (5μ , 3.9× 150 мм).
Линейный градиент CH3CN (0% - 25%), содержащий 0,1% TFA (об./об.) в течение 14 мин при 1 мл/мин.
(3) Waters DeltaPak C18, ЗООА (5μ , 3.9× 150 мм). Изократическое элюирование 0.1% TF А/вода (об./об.) при 1 мл/мин.
(4) Waters DeltaPak C18, ЗООА (5μ , 3.9× 150 мм). Линейный градиент CH3CN (0%-30%), содержащий 0,1% TFA (об./об.) в течение 14 мин при 1 мл/мин.
(5) Waters DeltaPak C18, ЗООА (5μ , 3.9× 150 мм). Линейный градиент CH3CN (0%-35%), содержащий 0,1% TFA (об./об.) в течение 14 мин при 1 мл/мин.
Пример 12
Соединения 605a-j, 605m-q, 605s, 605t и 605v синтезируют с помощью способов,
описанных ниже.
Соединение № | R2 | R5 |
600а/103 | Н | СН3 |
600b | Н | CH2Ph |
600с | СН3 | СН2Рh |
Стадия А. (25)-2-трет-Бутоксикарбониламино-3-(2-нитрофенил-амино)пропионовая кислота. (2S)-2-трет-Бутоксикарбониламино-3-аминопропионовую кислоту (10 г, 49 ммолей), 2-фторнитробензол (5,7 мл, 54 ммолей) и NaHCO3 (8,25 г, 98 ммолей) помещают в 130 мл DMF и нагревают 18 ч, при 80° С. Реакционную смесь упаривают под вакуумом, получая вязкий остаток оранжевого цвета, который растворяют в 300 мл Н2О и экстрагируют Et2O (3× 150 мл). Водный раствор подкисляют до рН 5 с помощью 10% NaHSO4 и экстрагируют ЕtOАс (3× 250 мл). Объединенные экстракты высушивают над безводным Na2SO4, фильтруют и упаривают, получая 12,64 г (83%) указанного в заголовке соединения в виде аморфного твердого вещества оранжевого цвета: 1Н ЯМР (CD3OD) δ 8,15-8,10 (1H,d), 7,54-7,48 (1H,t), 7,13-7,08 (1H, d), 6,73-6,65 (1H, t), 4,45-4,35 (1H, m), 3,9-3,8 (1H, dd), 3,65-3,55 (1H, dd), 1,45 (9H, s).
Стадия В. (2S)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-аминофенил-амино)-пропионовая кислота. Смесь (2S)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-нитрофениламино)пропионовой кислоты (12,65 г, 40,5 ммоля) и 0,5 г 10% Pd/C в 100 мл МеОН перемешивают 4 ч, в водороде под давлением 1 атм. Раствор фильтруют через целит 545 и фильтрат упаривают под вакуумом, получая 11,95 г указанного в заголовке соединения с количественным выходом в виде темно-коричневого твердого вещества, которое используют без очистки: 1H ЯМР (CD3OD) δ 6,75-6,70 (3H,m), 6,65-6,58 (1H, m), 4,35-4,3 (1H, m), 3,6-3,38 (2Н, m), 1,45 (9H, s).
Стадия С. (3S)-2-Оксо-3-трет-бутоксикарбониламино-1,3,4,5-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепин. Гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (8,54 г, 44,5 ммоля) добавляют к охлажденному (0° С) раствору (2S)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-аминофениламино)пропионовой кислоты (11,95 г, 40,5 ммоля) в 100 мл DMF и перемешивают 18 часов. Реакционную смесь выливают в 700 мл ЕtOАс и промывают четыре раза 100 мл H2O. Органический слой высушивают над безводным Na2SO4, фильтруют, упаривают и получают коричневое твердое вещество, которое очищают методом флэш-хроматографии, элюируя смесью 3:7 ЕtOАс/гексан. В результате получают 8 г (71%) указанного в заголовке соединения: 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,78 (1Н, s), 7,02-6,95 (1H, m), 6,88-6,82 (1H, m), 6,82-6,78 (1H, m), 6,75-6,70 (1H, m), 5,8-5,7 (1H, d), 4,55-4,45 (1H, m), 3,95 (1H, s), 3,9-3,82 (1H, m), 3,48-3,40 (1H,m), 1,45 (9H,s).
Стадия D. (600а/103). 1,0 M раствор амида бис(триметилсилил)лития (3,4 мл, 3,4 ммоля) в THF добавляют по каплям к охлажденному до -78° С раствору (3S)-2-оксо-3-трет-бутоксикарбониламино-2,3,4,-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепина (0,94 г, 3,38 ммоля) в 20 мл безводного THF и перемешивают 30 мин. К реакционной смеси добавляют по каплям метилбромацетат (0,44 мл, 4 ммоля) и нагревают до комн. темп. Реакционную смесь разбавляют 100 мл ЕtOАс и промывают 0,3N KHSO4 (50 мл), Н2О (2× 50 мл), нас. солевым раствором. Объединенную органическую фазу высушивают над безводным Na2SO4, фильтруют, упаривают и получают смолу, которую очищают методом флэш-хроматографии, элюируя смесью 3:7 ЕtOАс/гексан. В результате получают 0,98 г (83%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета. 1H ЯМР (CDCl3) δ 7,15-7,07 (2Н, m), 6,98-6,94 (1H, m), 6,88-6,84 (1H, d), 5,62-5,55 (1H, d), 4,71-4,65 (1H, d), 4,65-4,6 (1H, m), 4,33-4,27 (1H, d), 3,96-3,90 (1H, m), 3,78 (3Н, s), 3,44-3,37 (1H,m), 1,4 (9H,s).
(600b). Получают по способу, аналогичному способу получения 600а/103 (Стадия D), за исключением того, что вместо метилбромацетата используют бензилбромацетат, с образованием 600b с количественным выходом.
(600с), Стадия А, (2S)-2-трет-Бутоксикарбониламино-3-(2-нитро-3,5-диметилфениламино)-пропионовая кислота. Получают по способу, описанному для 600а/103 (Стадия А), за исключением того, что вместо 2-фторнитробензола используют 2-фтор-4,6-диметил-нитробензол с образованием целевого продукта с выходом 93%.
Стадия В. (2S) -2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-амино-3,5-диметилфенил-амино)-пропионовая кислота. (2S)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-нитро-3,5-диметилфенил-амино)пропионовую кислоту превращают в соединение, указанное в заголовке, по способу, описанному для получения 600а/103 (Стадия В).
Стадия С. 2-Oксо-(3S)-3-трет-бутоксикарбониламино-2,3,4,5-тетрагидро-7,9-диметил-1Н-1,5-бензодиазепин. Охлажденный до 0° С раствор (2S)-2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-амино-3,5-диметилфенил-амино)-пропионовой кислоты (763 мг, 2,36 ммоля) и N-метилморфолина (483 мг, 4,78 ммоля) в 60 мл безводного THF обрабатывают по каплям изобутилхлорформатом (352 мг, 2,5 ммоля). Реакционную смесь перемешивают 2 ч, при 0° С, 1 ч при комн. темп. и выливают в EtOAc. Смесь промывают 5% водн. раствором NaHSO4, нас.водным раствором NaHCO3 и нас.водным раствором NaCl, высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (флэш, SiO2, от 10% до 25% и до 50% EtOAc/CH2Cl2) получают 490 мг (68%) целевого продукта.
Стадия D (600с). (2S)-2-трет-Бутоксикарбониламино-3-(2-амино-3,5-диметилфенил-амино)-пропионовую кислоту превращают в 600с с выходом 75% по способу, аналогичному способу получения 600b.
(602а) Стадия А. Безводный НСl барботируют через раствор метилового эфира (3S)-2-оксо-3-трет-бутоксикарбониламино-2,3,4,5-тетрагидро-1 Н-1,5-бензодиазепин-1 -уксусной кислоты (600а/103, 4,0 г, 11,4 ммоля) в 20 мл СН2Сl2 в течение 20 мин, после чего перемешивают 1 ч при комн. темп. Реакционную смесь упаривают, получая гидрохлорид метилового эфира (3S)-2-оксо-3-амино-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепин-1-уксусной кислоты в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия В. Твердое вещество белого цвета растворяют в 70 мл DMF и добавляют бензойную кислоту (1,5 г, 12,3 ммоля). Реакционную смесь охлаждают в бане со смесью лед/Н2O и обрабатывают гидрохлоридом 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (2,4 г, 12,5 ммоля), 1-гидроксибензотриазолом (1,7 г, 12,6 ммоля) и диизопропилэтиламином (3,0 г, 23,2 ммоля). Реакционную смесь перемешивают 18 ч при комн. темп. в атмосфере азота и выливают в Н2О. Водную смесь экстрагируют ЕtOАс (2× ). Объединенные органические слои промывают 0,5 N водн. раствором NaHSO4, Н2О, нас.водным раствором NaHCO3, Н2О и нас.водным раствором NaCl, высушивают над MgSO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (флэш, SiO2, от 10% до 30% EtOAc/CH2Cl2) получают 3,4 г (85%) метилового эфира (3S)-2-оксо-3-(бензоиламино)-2,3,4,5-тетрагадро-1Н-1,5-бензодиазепин-1-уксусной кислоты в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия С. Способ А. (602а). Раствор метилового эфира (3S)-2-оксо-3-(бензоиламино)-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепин-1-уксусной кислоты (200 мг, 0,57 ммоля) в СН2Сl2 (10 мл) обрабатывают триэтиламином (119 мг, 1,13 ммоля) и 3-фенилпропионилхлоридом (114 мг, 0,68 ммоля). Реакционную смесь перемешивают 30 мин при комн. темп. и разбавляют СН2Сl2. Раствор промывают 10% водн. НСl, нас.водным раствором NаНСО3 и нас.водным раствором NaCl, высушивют над Na2SO4 и концентрируют в вакууме, получая 240 мг (87%) 602а в виде белой пены.
Стадия С. Способ В. (602g). Охлажденный до 0° С раствор бензилового эфира (3S)-2-оксо-3-(бензоиламино)-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепин-1 -уксусной кислоты (600b) (465 мг, 1,10 ммоля) в СН2Сl2 (5 мл) обрабатывают раствором ацетоуксусной кислоты в 1 мл СН2Сl2 с последующим медленным добавлением гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (431 мг, 2,2 ммоля) в 2 мл СН2Сl2 в атмосфере Na. Через 15 мин реакционную смесь выливают в ЕtOАс, промывают 5% водным раствором NaHSO4, высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (флэш, SiO2, от 0% до 10% до 25% МеОН/СН2Сl2) получают 580 мг бензилового эфира (3S)-2-оксо-3-(бензоиламино)-5-ацетоацетил-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепин-1 -уксусной кислоты в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия С. Способ С. (602j). Смесь охлажденного до 0° С раствора бензилового эфира (3S)-2-оксо-3-(бензоиламино)-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепин-1-уксусной кислоты (600b) (461 мг, 1,07 ммоля) в THF (5 мл) и нас.водного раствора NаНСО3 (2,5 мл) при интенсивном перемешивании обрабатывают раствором метилхлорформата (151 мг, 1,6 ммоля) в THF (0,35 мл) и реакционную смесь перемешивают 45 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в CH2Cl2 и промывают Н2О, высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (флэш, SiO2, от 0% до 10% МеОН/СН2Сl2) получают 525 мг 602j в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия С. Способ D. (602р). Раствор 600а/103 (400 мг, 1,1 ммоля) и бензилизоцианата (166 мг, 1,2 ммоля) в 10 мл CH2Cl2 и 10 мл DMF нагревают при 80° С в течение 3 дней. Реакционную смесь охлаждают до комн. темп., выливают в Н2О и экстрагируют EtOAc (2× ). Объединенные органические слои промывают Н2О (4× ) и нас.водным раствором NaCl, высушивают над MgSO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (флэш, SiO2, от 50% до 80% EtOAc/гексан) получают 602р в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия С. Способ Е. (602v). Раствор гидрохлорида метилового эфира (3S) 2-оксо-3-амино-5-(3-фенилпропионил)-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепин-1-уксусной кислоты (560 мг, 1,34 ммоля), бензальдегида (146 мг, 1,34 ммоля) и ацетата натрия (220 мг, 2,68 ммоля) в метаноле (20 мл) обрабатывают 4Å-ситами (2 г) и NaCNBH3 (168 мг, 2,68 ммоля). После перемешивания в течение 2,5 ч реакционную смесь подкисляют 10% водным раствором НСl до рН2 и промывают Et2O (2× 75 мл). Органические слои концентрируют в вакууме, получая масло. После хроматографии (флэш, SiO2, от 0 до 35% EtOAc/CH2Cl2) получают 250 мг (40%) 602v в виде прозрачного масла.
Стадия D. Способ А.
(603а). Метиловый эфир (3S)-2-оксо-3-бензоиламино-5-(3-фенилпропионил)-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепин-1 -уксусной кислоты (602а; 1,25 г, 2,57 ммоля) растворяют в 11 мл THF, МеОН и Н2О (5:5:1), обрабатывают LiОН· Н2О (42 мг, 0,62 ммоля) и перемешивают 64 ч при комн. темп. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, разбавляют водой и подкисляют 1N водн. раствором НСl, получая 230 мг 603а в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия D. Способ В.
(603d). Смесь бензилового эфира (3S)-2-оксо-3-(бензоиламино)-5-ацетил-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-1,5-бензодиазепин-1-уксусной кислоты (602d; 510 мг, 1, 08 ммоля) и 5% Pd/C (250 мг) в МеОН (10 мл) перемешивали 0,5 ч в атмосфере Н2 (1 атм). Реакционную смесь фильтруют и концентрируют в вакууме, получая 410 мг 603d в виде твердого вещества белого цвета.
Соединения Таблицы 8 получают так, как описано в Таблице 9, используя способы Примера 12.
Таблица 8 | ||||
Соединение № | R2 | R3 | R4 | R5 |
602b | H | PhCH2C(O) | PhC(O) | CH2Ph |
602с | H | PhC(O) | PhC(O) | CH2Ph |
602d | H | СН3С(О) | PhC(O) | CH2Ph |
602е | H | СН3ОСН2С(О) | PhC(O) | CH2Ph |
602f | H | (СН3)2СНСН2С(O) | PhC(O) | CH2Ph |
602g | H | СН3С(O)СН2С(O) | PhC(O) | CH2Ph |
602h | H | СН3ОС(O)С(O) | PhC(O) | CH2Ph |
602i | H | СН3С(O)С(O) | PhC(O) | CH2Ph |
602j | H | СН3ОС(О) | PhC(O) | CH2Ph |
602k | H | СН3С(О) | Boc | CH2Ph |
6021 | СН3 | СН3С(О) | Boc | CH2Ph |
602m | H | СН3SO2 | PhC(O) | СН3 |
602p | H | PhCH2NHC(O) | PhC(O) | СН3 |
602q | H | ![]() | PhC(O) | CH2Ph |
602r | H | PhCH2CH2C(O) | PhCH2CH2C(O) | CH2Ph |
602s | H | 4-пиридил-СН2С(O) | PhC(O) | CH2Ph |
Соединения Таблицы 10 получают так, как описано в Таблице 11, используя способы Примера 12.
Таблица 10 | ||||
Соединение № | R2 | R3 | R4 | R5 |
602n | H | СН3С(О) | Naphthylene-2-C(O) | CH2Ph |
602о | СН3 | СН3С(О) | PhC(O) | СН2Рh |
602t | H | 3-СН3РhСН2С(O) | PhC(O) | CH2Ph |
602u | H | СН3С(О) | Fmос | CH2Ph |
602v | H | PhCH2CH2CO | PhCH2 | СН3 |
Таблица 11 | ||||
№ | Исходное соединение | 1) Стадия С, R3Х способ (выход, %) | 3) Стадия С R4X способ (выход, %) | Стадия D способ (выход, %) |
603n | 602k | СН3С(O)Сl А (quant.) | naphthylenе- 2-С(O)Сl А (70) | В (quant.) |
603о | 602l | СН3С(O)Сl A (quant.) | PhC(O)Cl А (73) | В (quant.) |
603t | 602k | 3-СН3РhСН2С(O)Сl A (quant.) | PhC(O)Cl А (93) | В (95) |
603u | 602k | СН3С(O)Сl A (quant.) | Fmoc-Cl С (82) | С (98) |
603v | 600а/103 | PhCH2CH2C(O)Cl А | PhCHO Е(40) | А (95) |
Соединения Таблицы 12 получают с помощью методов, описанных ниже.
Таблица 12 | |||
Соединение № | R2 | R3 | R4 |
605а | Н | PhCH2CH2C(O) | PhC(O) |
605b | H | PhCH2C(O) | PhC(O) |
605с | Н | PhC(O) | PhC(O) |
605d | H | СН3С(О) | PhC(O) |
605е | H | СН3ОСН2С(O) | PhC(O) |
605f | H | (СН3)2СНСН2С(O) | PhC(O) |
605g | H | СН3С(O)СН2С(O) | PhC(O) |
605h | H | СН3ОС(O)С(O) | PhC(O) |
605i | H | СН3С(O)С(O) | PhC(O) |
605j | H | СН3ОС(О) | PhC(O) |
Соединение № | R2 | R3 | R4 |
605m | H | CH3SO3 | PhC(O) |
605n | H | СН3С(О) | Нафтил-2-С(O) |
605o | СН3 | СН3С(О) | PhC(O) |
605p | H | PhCH2NHC(O) | PhC(O) |
605q | H | ![]() | PhC(O) |
605s | H | 4-пиридил-СН2С(O) | PhC(O) |
605t | H | 3-СН3РhСН2С(O) | PhC(O) |
605v | H | PhCH2CH2C(O) | PhCH2 |
(605a). Стадия А. 3(S)-3-(1-Флюоринилметилоксикарбониламино)-4-оксомасляной кислоты трет-бутиловый эфир семикарбазон (210 мг, 0,45 ммоля), полученный по методике, аналогичной получению бензилоксикарбонильного аналога по Grayblll et al., Int. J. Protein Res., 44, pp. 173-82 (1994), растворяют в 10 мл DMF и 2 мл диэтиламина и перемешивают в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрируют под вакуумом с получением семикарбазона трет-бутилового эфира 3(S)-3-амино-4-оксомасляной кислоты. Раствор вышеупомянутого остатка и соединения 603а (200 мг, 0,42 ммоля) в 5 мл DMF и 5 мл СН2Cl2 при 0° С обрабатывают 1-гидроксибензотриазолом (57 мг, 0,42 ммоля) и гидрохлоридом 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (98 мг, 0,51 ммоля). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов, выливают в ЕtOАс (75 мл) и промывают 0,3N водным раствором KHSO4, нас. водным раствором NaHCO3 и нас.водным раствором NaCl, высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (флэш, SiO2, от 0% до 4% МеОН/0,1% NH4OН/СН2Сl2) получают 240 мг (83%) 604а.
Стадия В. 604а перемешивают с 10 мл 33% TFA/H2O в течение 4 ч и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в 7 мл смеси МеОН/уксусная кислота/37% водн. раствор формальдегида (5:1:1) и перемешивают 18 ч. После хроматографии (Reverse Phase С 18, 4,4 mm lDx25 cm, от 15% до 70% СН3СN/0,1% TFA/H2O) получают 32 мг (16%) 605а в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3ОD, существует в виде диастереомеров полуацеталя) δ 7,85-7,78 (2Н, d), 7,5-7,32 (6Н, m), 7,32-7,28 (1Н, m), 7,18-6,98 (5Н, m), 4,92-4,85 (2Н, m), 4,5-4,32 (2Н, m), 4,31-4,20 (2Н, m), 3,7-3,6 (1Н, m), 2,90-2,75 (2Н, m), 2,65-2,5 (1H, m), 2,48-2,25 (3H, m).
Следующие соединения получают аналогичным способом:
(605b). 148 мг (33%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CD3OD) δ 7,9-6,9 (m, 16H), 4,9 (s, 2H), 4,5 (m, 1H), 4,4 (m, 2H), 3,75 (s, 1H), 3,6 (dd, 1H), 3,45 (dd, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H).
(605с). 319 мг (56%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 7,9-6,9 (m, 16H), 5,1 (m, 1H), 4,9 (dd, 1H), 4,7 (m, 1H), 4,6 (dd, 1H), 4,4 (m, 2H), 4,05 (m, 1H), 2,7 (m,1H), 2,5(m, 1H).
(605d). 190 мг (38%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,9(d, Н), 2,4(m, 1Н), 2,65(m, 1H), 3,7(m, 1H), 4,25(m, 1H), 4,45(m, 2H), 4,8-5,05(m, 3H), 7,3-7,7(m, 7H), 7,9(d, 2H).
(605e). 250 мг (78%) 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 1,87 (bs), 1,95 (s, 2H), 2,1 (bs), 2,4 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,59 (bs), 3,75 (bs), 3,87 (bs), 4,19 (m), 4,37 (m), 4,50-4,78 (bm), 4,92 (m), 5,27 (bs), 7,41-7,58 (m, 7H) и 7,87 ppm (d, 2H).
(605f). 210,5 мг (46%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 7,9-7,4 (m, 9Н), 5,1 (m. 1H), 4,9 (m, 1H), 4,6 (dd, 1H), 4,4 (m, 2H), 4,1 (d, 1H), 3,8 (m, 1H), 3,5 (q, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,0 (m, 3H), 1,2 (t, 1H), 0,9 (d, 3H), 0,8 (d, 3H).
(605g). 81 мг (19%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CD3OD) δ 7,9-7,3 (m, ПН), 4,9-4,8 (m, 2H), 4,6-4,4 (m, 3H), 4,3 (m, 1H), 3,75 (q, 1H), 3,55 (d, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m,1H),2,05(s,3H).
(605h). 227 мг (54%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,5(m, 1H), 2,7(m, 1H), 3,55(s, 3H), 3,8-4,0(m, 2H), 4,4(m, 1H), 4,6-4,8(m, 2H), 4,95(d, 1H), 5,1(m, 1H), 7,3-7,7(m, 7H), 7,9(d, 2H), 8,6(d, 1H).
(605l). 150 мг (37%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CD3OD) δ 7,9-7,3 (m, 12Н), 5,1 (m, 1H), 4,65 (t, 1H), 4,55 (dd, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,1 (d, 1H), 3,9 (q, 1H), 3,45 (q, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,25 (s, 3H).
(605j). 234 мг (44%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 7,9-7,4 (m, 12Н), 5,0 (m, 1H), 4,8-4,5 (m, 3H), 4,4 (m, 1H), 4,3 (t, 1H), 3,9-3,75 (m, 2H), 3,6 (s, 3H), 2,7(m,1H),2,5(m,1H).
(605m). 64,5 мг (34%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (DMSO-d6, существует в виде диастереомеров полуацеталя и открытой формы альдегида) δ 9,48 (0,2Н, s), 8,85-8,72 (1H, m), 8,65-8,60 (0,8 H, d), 8,30-8,26 (0,2 H, d), 7,95-7,88 (2H,d), 7,6-7,45 (6Н, m), 7,44-7,38 (1H, m), 5,78-5,75 (0,2H, d), 5,48 (0,6H, s), 4,85-4,70 (2H, m), 4,62-4,54 (1H, d), 4,50-4,40 (2H, m), 4,25-4,14 (1H, m), 3,9-3,85 (1H, m), 3,16 (3H, s), 3,05-2,3 (2, m).
(605n). 103 мг (17%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 1,9(s, 3H), 2,5(m, 1H), 2,65(m, 1H), 3,75(m, 1H), 4,3(m,1H), 4,5-4,7(m, 3H), 4,85-5,l (m, 2H), 7,3-7,65(m, 6H), 7,85-8,05(m, 4H), 8,45(s, 1H).
(605o). 42 мг (12%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CD3OD, существует в виде диастереомеров полуацеталя) δ 7,85-7,74 (2H, m), 7,5-7,44 (1H, m), 7,43-7,35 (4H, m), 5,6-5,05 (2H, m), 4,82-4,42 (2H, m), 4,40-3,95 (2H, m), 3,6-3,5 (1H, m), 2,7-2,38 (2H, m), 2,32 (3H, s), 2,27 (3H, s), 1,92 (3H,s).
(605р). 165 мг (37%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 2,45(m, 1H), 2,7(m, 1H), 3,8(m, 1H), 4,15-4,5(m, 4H), 4,5-4,75(m, 2H), 4,8-5,0(m, 2H), 7,1-7,7(m, 12H),7,9(d,2H).
(605q). 210 мг (66%) 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,95 (s, 2H), 2,4 (m, 2Н), 2,65 (m, 2H), 3,29 (s, 3Н), 3,78 (m), 3,87 (bs), 4,0 (d, 1H), 4,32 (m), 4,50-4,15 (m), 4,95 (m), 5,27 (bs), 7,45-7,65 (m, 7H) и 7,89 ppm (d, 2H).
(605s). 128 мг (19%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 8,5-7,4 (m, 13H), 5,0 (m, 1H), 4,7 (m, 1H), 4,5 (m, 2H), 4,45-4,4 (m, 3Н), 3,8-3,7 (m, 2H), 2,7 (m, 1Н),2,5(m,1Н).
(605t). 132 мг (24%) в виде твердого вещества белого цвета: 1H ЯМР (CD3OD) δ 7,8-6,7 (m, 13H), 4,9 (t, 1H), 4,75 (dd, 1H), 4,2 (dd, 1H), 4,1 (m, 2H), 3,8 (dd, 1H), 3,6 (q, 1H), 3,45 (dd, 1H), 3,3 (dd, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,15 (s, 3Н).
(605v). 88 мг (28%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СD3OD) δ 7,63-7,51 (2H. m), 7,5-7,35 (7H, m), 7,25-7,10 (3H,m), 7,1-7,02 (2H, m), 5,04-4,96 (1H, m), 4,75-4,57 (2H, m), 4,38-4,26 (2H,m), 4,24-4,12 (2H, m), 4,10-4,02 (1H, d), 4,88-4,80 (1H, m), 2,90-2,80 (2H, m), 2,78-2,63 (1H,m), 2,55-2,35 (2H, m), 2,34-2,22 (1H, m).
Соединения Таблицы 13 описаны ниже.
Таблица 13 | |||||
# | R2 | R3 | R4 | R6 | R7 |
609а | H | РhСН2СН2С(О) | PhCH2CH2C(O) | Сl | Сl |
609b | H | СН3С(О) | PhC(O) | Сl | Сl |
(609а). Стадия А. Раствор соединения 204 (223 мг, 0,5 ммоля) и соединения 603 г (300 мг, 0,36 ммоля) в 4 мл DMF и 4 мл СН2Сl2 обрабатывают (Рh3Р)2РdСl2 (10 мг), 1-гидроксибензотриазолом (135 мг, 1,0 ммоля) и гидрохлоридом 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (115 мг, 0,6 ммоля). Гидрид 3-н-бутилолова (219 мг, 0,75 ммоля) добавляют по каплям к реакционной смеси, которую перемешивают в течение 18 ч. Реакционную смесь выливают в ЕtOАс и промывают 10% водн. раствором NaHSO4, нас.водным раствором NaHCO3 и нас.водным раствором NaCl, высушивают над Nа2SO4 и концентрируют под вакуумом. После очистки методом флэш-хроматографии (SiO2, градиент от 0 до 50% ЕtOАс/гексан) получают 360 мг соединения 607а в виде пены (86%).
Стадия В. Раствор соединения 607а (360 мг) в 5 мл СН2Сl2 добавляют по каплям к суспензии 1,1,1-триацетокси-1,1-дигидрокси-1,2-бензиодиоксол-3(1Н)-она (362 мг, 0,85 ммоля) в 20 мл CH2Cl2. Реакционную смесь перемешивают в течение 4,5 часа, разводят СН2Сl2 и промывают смесью нас. водный раствор NаНСО3/ нас. водный раствор Nа2S2О3 1:1, нас. водным раствором NаНСО3 (2× ) и нас. водным раствором NaCl, высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После очистки методом флэш-хроматографии (SiO2, 20% EtOAc/CH2Cl2) получают 340 мг кетона 608а (95%).
Стадия С. Соединение 608а (300 мг, 0,36 ммоля) растворяют в 25 мл 25% TFA/ CH2Cl2 и перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов и концентрируют под вакуумом. После очистки методом флэш-хроматографии (SiO2, градиент 0-5% МеОН/СН2Сl2) получают 118 мг соединения 609а в виде твердого вещества белого цвета (42%): 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 7,62-6,65 (16Н, m), 4,85-4,7 (1Н, m), 4,68-4,42 (2Н, m), 4,40-4,15 (2Н, m), 3,48-3,28 (1Н, m), 3,0-2,9 (1Н, m), 2,9-2,6 (4Н, m), 2,55-2.18 (3Н, m), 2,16-1,96 (2Н, m).
(609b) получают из 603d тем же способом, что и 609а, с образованием 287 мг (43% общий выход) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (DMSO-d6) δ 1,6(s, 3Н), 2,7-3,1 (m, 2Н), 3,45(m, 1Н), 4,4(t, 1H), 4,7(m, 2H), 4,95(m, 1H), 5,2, 5,4(2s, 1H), 7,2-7,65(m, 8H), 7,9(d, 2H), 8,8(t, 1H), 8,9-9,1(2s, 1H), 12,6(br, 1H).
(612) получают по способу, подобному способу получения соединения 607а (только стадии А и С), используя 603m (150 мг, 0,36 ммоля) вместо 603r и т-бутиловый эфир (3S)-3-(аллиоксикарбониламино)-4-оксо-5-(2,6-дихлорбензоил-окси)пентановой кислоты (110; 160 мг, 0,36 ммоля, WO 93/16710) вместо 606а, с образованием 612 (56%) в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,85-7,10 (12Н, m), 5,4-4,65 (4Н, m), 4,6-4,15 (4Н, m), 3,10-2,72 (5Н, s & m).
Пример 13
Соединения 619-635 синтезируют так, как описано в Примере 13 и Таблице 14.
Синтезы соединений 619-635.
Стадия А. Синтез соединения 614. Смолу TentaGel S® NH2 (0,16 ммоля/г, 10,0 г) помещают в стеклянную воронку с пористым фильтром и промывают диметилформамидом (3× 50 мл), 10% (об./об.) диизопропилэтиламином (DIEA) в диметилформамиде (2× 50 мл) и в конце диметилформамидом (4× 50 мл). К смоле добавляют диметилформамид в количестве, достаточном для получения взвеси, затем соединение 400 (1,42 г, 2,4 ммоля, полученное из т-бутилового эфира (3S)3-(флуоренилметилоксикарбонил)-4-оксомасляной кислоты по методике, описанной А.М. Murphy et. al. J. Am. Chem. Soc., 114, 3156-3157 (1992)), гидрат 1-гидроксибензотриазола (HOBT· H2O; 0,367 г, 2,4 ммоля), гексафторфосфат O-бeнзотриазол-N,N,N,N'-тетраметилурония (HBTU; 0,91 г, 2,4 ммоля) и DIEA (0,55 мл, 3,2 ммоля). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, используя кистевой встряхиватель. Смолу отделяют на стеклянной воронке с пористым фильтром путем вакуумной фильтрации и промывают диметилформамидом (3× 50 мл). Непрореагировавшие аминогруппы закрывают в результате взаимодействия смолы со смесью 20% (об./об.) уксусный ангидрид/диметилформамид (2× 25 мл) непосредственно на воронке (10 мин/промыв). Смолу промывают диметилформамидом (3× 50 мл) и дихлорметаном (3× 50 мл), затем сушат в течение ночи под вакуумом, получая 614 (11,0 г, количественный выход).
Стадия В. Синтез 616. Смолу 614 (3,0 г, 0,16 ммоля/г, 0,48 ммоля) подвергают набуханию в стеклянной воронке с пористым фильтром путем промывания диметилформамидом (3× 15 мл). Затем удаляют защитную группу Fmoc, обрабатывая смолу смесью 25% (об./об.) пиперидин/диметилформамид (15 мл) в течение 10 мин (время от времени перемешивая) и затем свежим пиперидиновым реагентом (15 мл) в течение 20 мин. После чего смолу промывают диметилформамидом (3× 15 мл), затем N-метилпирролидоном (2× 15 мл). Смолу переносят в колбу объемом 100 мл, добавляют N-метилпирролидон, получая взвесь, затем соединение 603u (0,736 г, 0,72 ммоля), НОВТ· Н2О (0,112 г, 0,73 ммоля), HBTU (0,27 г, 0,73 ммоля) и DIEA (0,26 мл, 1,5 ммоля). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, используя кистевой встряхиватель. Смолу обрабатывают и закрывают непрореагировавшие группы с помощью 20% (об./об.) раствора уксусного ангидрида в диметилформамиде так, как описано для соединения 614, получая 616 (3,13 г, количественный выход).
Стадия С. Синтез 617. Это соединение получают из смолы 616 (0,24 г, 0,038 ммоля), используя множественный пептидный синтезатор Advanced ChemTech 396. Автоматические циклы включают промывание смолы диметилформамидом (3× 1 мл), удаление защитных групп обработкой 25% (об./об.) раствором пиперидина в диметилформамиде (1 мл) в течение 3 мин, затем свежим реагентом (1 мл) в течение 10 мин, получая смолу 617. Смолу промывают диметилформамидом (3× 1 мл) и N-метилпирролидоном (3× 1 мл).
Стадия D. Способ 1. (624). Смолу 617 ацилируют 0,4М раствором тиофен-3-карбоновой кислоты и 0,4М НОВТ в N-метилпирролидоне (1 мл), 0,4М раствором HBTU в N-метилпирролидоне (0,5 мл) и 1,6М раствором DIEA в N-метилпирролидоне (0,35 мл) и реакционную смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре. Стадию ацилирования повторяют. В конце смолу промывают диметилформамидом (3× 1 мл), дихлорметаном (3× 1 мл) и сушат в вакууме. Удаление альдегида и всех защитных групп проводят путем обрабатывания смесью 95% TFA/ 5% Н2О (об./об., 1,5 мл) в течение 30 мин при комнатной температуре. После промывания смолы удаляющим реагентом (1 мл), объединенные фильтраты добавляют к холодной смеси 1:1 эфир:пентан (12 мл) и получившийся осадок отделяют центрифугированием и декантацией. Полученный осадок растворяют в смеси 10% ацетонитрил/90% Н2O/0,1% TFA (15 мл) и лиофилизируют, получая неочищенный продукт 624 в виде белого порошка. Это соединение очищают методом полу-препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ с колонкой Rainin Microsorb™ C18 (5 u, 21,4× 250 mm), элюируя линейным градиентом ацетонитрила (5% -45%), содержащим 0,1% TFA (об./об.), в течение 45 мин при 12 мл/мин. Фракции, содержащие целевой продукт, собирают и лиофилизируют, получая 624 (10,0 мг, 54%).
Стадия D. Способ 1А. Синтез 627. Следуя способу, подобному способу 1, смолу 617 ацилируют 4-(1-флуоренилметоксикарбониламино)бензойной кислотой и повторяют. Защитные группы Fmoc удаляют, как описано в Стадии С, и свободные амино-группы ацилируют 20% (об./об.) раствором уксусного антидрида в диметилформамиде (1 мл) и 1,6М DIEA в N-метилпирролидоне (0,35 мл) в течение 2 ч при комн. темп. Стадию ацилирования повторяют. После удаления альдегида получают 627 (4,2 мг, 20%).
Стадия D. Способ 2. Синтез соединения 632. Следуя способу, подобному способу 1, смолу 617 ацилируют 0,5М раствором хлорангидрида коричной кислоты в N-метилпирролидоне (1 мл) и 1,6М DIEA в N-метилпирролидоне (0,35 мл) в течение двух часов при комнатной температуре. Стадию ацилирования повторяют. После удаления альдегида получают 632 (11,1 мг, 58%).
Стадия D. Способ 3. Синтез соединения 629. По способу, аналогичному способу 1, смола 617 взаимодействует с 1,0М раствором бензолсульфонилхлорида в дихлорметане (0.5 мл) и 1М растворе пиридина в дихлорметане (0,60 мл) в течение 4 часов при комнатной температуре. Реакцию повторяют. После отщепления альдегида со смолы получают 629 (4,7 мг, 24%).
Аналитическая ВЭЖХ:
(1) Waters DeltaPak С 18, 300А (5 μ , 3,9× 150 мм). Линейный градиент ацетонитрила (5% -45%), содержащий 0.1% TFA (об./об.) в течение 14 мин при 1 мл/мин (см. табл.14).
Пример 14
Соединения 1605a-j, 1605m, 1605n, 1605p, 1605t и 1605v синтезируют так, как описано ниже.
(3S) N-(2-Оксо-3-трет-бутоксикарбониламино-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо [3,4-b][1,4]-диазепин (1600).
Стадия A. (3S) 2-трет-Бутоксикарбониламино-3-(3-нитропиридин-2-иламино)пропионовую кислоту получают по способу, подобному способу получения (2S) 2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-нитрофениламино)пропионовой кислоты на Стадии А синтеза 600а/103, за исключением того, что вместо 2-фторнитробензола используют 3-хлор-3-нитропиридин, получая 4,05 г (64%) твердого вещества желтого цвета.
Стадия В. (2S) 2-Трет-бутоксикарбониламино-3-(3-аминопиридин-2-иламино)пропионовую кислоту получают по способу, подобному способу получения (2S) 2-трет-бутоксикарбониламино-3-(2-аминофениламино)пропионовой кислоты на Стадии В синтеза 600а/103, получая 3,68 г (колич.) темного твердого вещества.
Стадия С. Метиловый эфир (2S) 2-трет-бутоксикарбониламино-3-(3-аминопиридин-2-иламино)пропионовой кислоты. Раствор (2S) 2-трет-бутоксикарбониламино-3-(3-аминопиридин-2-иламино)пропионовой кислоты (360 мг, 1,21 ммоля) и МеОН (59 мг, 1,82 ммоля) в безводном СН2Сl2 (20 мл) обрабатывают 4-диметиламинопиридином (DMAP, 163 мг, 1,33 ммоля) и гидрохлоридом 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (280 мг, 1,45 ммоля). Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч, разбавляют EtOAc (150 мл), промывают водой (2× ), нас.водным раствором NaHCO3 и нас.водным раствором NaCl, высушивают над Nа2SO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (флэш, SiO2, от 0 до 5% МеОН/СН2Сl2) получают 250 мг (67%) указанного в заголовке соединения в виде светло-коричневого твердого вещества
Стадия D. (1600). Раствор метилового эфира (2S) 2-трет-бутоксикарбониламино-3-(3-аминопиридин-2-иламино)пропионовой кислоты (70 мг, 0,225 моля) и 25% метоксид натрия/МеОН (130 мкл, 0,56 ммоля) в безводном МеОН (4 мл) нагревают при 60° С в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, остаток растворяют в 2 мл Н2О и экстрагируют EtOAc (3× ). Объединенные экстракты высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (флэш, SiO2, от 0% до 3% МеОН/ CH2Cl2) получают 7,5 мг (3%) соединения 1600 в виде светло-коричневого твердого вещества: 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 7,96-7,92 (1Н, d), 7,75-7,65 (1Н, br. s), 7,14-7,08 (1H, d), 6,73-6,65 (1H, m), 5,83-5,75 (1H, br. s), 5,4-5,25 (1H, br. s), 4,6-4,5 (1H,m), 3,95-3,84 (1H, m), 3,55-3,48 (1H, m), 1,4 (9H, s).
Стадия Е. 1601 получают из 1600 по способу стадии D, использующемуся для получения 600а/103.
Синтез 1603.1603 получают из 1601, используя способ получения 603 из 600.
Синтез 1605.
1605 получают из 1603 по способу, описанному для синтеза 605 из 603 (см. табл.15).
Таблица 15 | ||
1605 | R3 | R4 |
а | РhСН2СН2СО | PhCO |
b | РhСН2СО | PhCO |
с | PhCO | PhCO |
d | СН3СО | PhCO |
е | СН3ОСН2СО | PhCO |
f | (СН3)2СНСН2СО | PhCO |
g | СН3СОСН2СО | PhCO |
h | СН3ОСОСО | PhCO |
i | СН3СОСО | PhCO |
j | СН3ОСО | PhCO |
m | СН3SO3 | PhCO |
n | СН3СО | Naphthyl-2-CO |
p | PhCH2NHCO | PhCO |
t | 3-СН3РhСН2СО | PhCO |
V | PhCH2CH2CO | PhCH2 |
Пример 15
Соединения 1610-1621 получают из 1600 по способам, подобным использующимся для получения соединений 619-635 из 600а/103 и 600b.
где для соединений 1610-1621
а R3=СН3С(О)-
b R3=СН3ОСН2С(O)-:
R4 | |
1610 | ![]() |
1611 | ![]() |
1612 | ![]() |
1613 | ![]() |
1614 | ![]() |
1615 | ![]() |
1616 | ![]() |
1617 | ![]() |
1618 | ![]() |
1619 | ![]() |
1620 | ![]() |
1621 | ![]() |
Пример 16
Соединения, включающие строительные блоки (e11), (y1), (y2), (z) и (e12), могут быть синтезированы так, как описаны ниже.
Синтез строительного блока R1, где R1 представляет собой (e11), a Y2 представляет собой =O.
Синтез строительного блока R1, где R1 представляет собой (y1), а Y2 представляет собой =O.
Синтез строительного блока R1, где R1 представляет собой (у2), а Y2 представляет собой Н2 и Х7 представляет собой О.
Синтез строительного блока R1, где R1 представляет собой (у2), a Y2 представляет собой =O и X7 представляет собой NH.
Синтез строительного блока R1, где R1 представляет собой (у2), a Y2 представляет собой Н2 и X7 представляет собой NH.
Синтез строительного блока R1, где R1 представляет собой (z), a Y2 представляет собой О.
Синтез строительного блока R1, где R1 представляет собой (е12), a Y2 представляет собой =O.
Пример 17
Получение соединений 2001, 2002, 2100а-е и 2201 описано ниже.
(2000). К раствору т-бутил 9-амино-6,10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро-6Н-пиридазино [1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксилата (GB 2,128,984; 340 мг, 5 ммоля) в CH2Cl2 добавляют бензоилмуравьиную кислоту (260 мг, 1,7 ммоля), НОВТ (230 мг, 1,7 ммоля) и EDC (340 мг, 1,7 ммоля). Полученную смесь перемешивают 16 часов при температуре окружающей среды, выливают в IN HCl и экстрагируют CH2Cl2. Затем органические экстракты промывают нас. раствором NаНСО3, высушивают над MgSO4 и концентрируют, получая 1999 в виде бледно-желтого твердого вещества. Это твердое вещество растворяют в CH2Cl2 (25 мл) и TFA (25 мл) перемешивают в течение ночи и концентрируют в вакууме, получая 560 мг 2000 в виде масла.
(2001) синтезируют из 2000 тем же способом, что и соединение 213е, получая 410 мг (63%) соединения 2001 в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CDCl3, смесь диастереомеров) δ 8,25 (1Н, d), 8,23 (1H, d), 7,78 (1H, dd), 7,65 (1H, bm), 7,50 (2H, m), 7,40-7,25 (4H, m), 6,55 (1H, d), 5,57 (1H, d), 5,10 (1H, t), 5,05-4,95 (2H, m), 4,90, (1H, d), 4,80 (1H, d), 4,72 (1H, bm), 4,65 (1H, m), 4,55 (1H, m), 4,45 (1H, t), 3,25 (1H, m), 3,15 (1H, m), 3,00 (2H, bm), 2,90 (1H, dd), 2,70 (1H, m), 2,47 (1H, dd), 2,45 (1H, m), 2,35 (1H, m), 2,00-1,75 (4H, m), 1,60 (1H, bm).
(2002). Соединение 2001 (58,6 мг, 0,10 ммоля) обрабатывают 15 мл TFA/MeCN/вода (1:2:3) и перемешивают 6,5 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагируют эфиром. Водный слой концентрируют с азеотропным удалением воды, используя MeCN. Продукт суспендируют в СН2Сl2, концентрируют в вакууме и осаждают в эфире, получая 46,8 мг (99%) 2002 в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CD3OD) δ 9,05 (0.25Н, d), 8,15 (1H, d), 7,68 (1H, t), 7,64 (0,25H, d), 7,55 (3Н, t), 7,35 (0,5H, m), 5,22 (1H, t), 4,90 (1H, m), 4,58 (1H, dd), 4,50 (1H, m), 4,28 (1H, bm), 3,45 (1H, m), 3,10 (1H, bt), 2,68 (1H, ddd), 2,60-2,45 (2H, m), 2,30 (1H, dd), 2,15-2,05 (2H, m), 1,90 (2H, bm), 1,68 (1H,bm).
(2100a). Раствор 214е (101 мг, 0,23 ммоля) в изопропаноле (10 мл) перемешивают при комнатной температуре с каталитическим количеством п-толуолсульфоновой кислоты (10 мг). Через 75 минут реакционную смесь выливают в насыщенный раствор NaHCO3 и экстрагируют СН2Сl2. Объединенные экстракты высушивают над Na2SO4 и концентрируют. После флэш-хроматографии (SiO2, от СН2Сl2 до ЕtOАс) получают 56 мг (51%) 2100a в виде твердого вещества белого цвета: 1H ЯМР (СDСl3, смесь диастереомеров) δ 7,9-7,8 (2H,m), 7,6-7,5 (1Н, m), 7,5-7,4 (2Н, m), 7,1 (0,5H, d), 6,9 (0,5Н, d), 6,4 (0,5H,d), 5,6 (0,5H, d), 5,3 (0,5H, s), 5,2-5,1 (1H, m), 4,95 (0,5H, m), 4,75-4,5 (1,5Н, m), 4,35 (0,5H, t), 4,1 (0,5H, m), 3,98 (0,5H, m), 3,3-2,75 (4Н, m), 2,5-2,4 (2H,m), 2,25 (1H, m), 2,1-1,9 (3H,m) 1,75-1,55 (2H,m).
(2100b). Раствор 214е (16 мг, 0,036 ммоля) в этаноле (2 мл) перемешивают при комнатной температуре с каталитическим количеством п-толуолсульфоновой кислоты (2 мг). Через 5 дней реакционную смесь выливают в насыщенный раствор NaHCO3 и экстрагируют СН2Сl2. Объединенные экстракты высушивают над Na2SO4 и концентрируют. После флэш-хроматографии (SiO2, СН2Сl2:ЕtOАс 95:5 об./об.) получают 16 мг (81%) 2100b в виде твердого вещества белого цвета: 1H ЯМР (CDCl3) δ 7,85-7,74 (2H,m),7,55-7,38 (3H,m), 7,04-6,95 (1H,d), 6,61-6,48 (1H,d), 5,15-5,08 (1H,m), 4,63-4,53 (1H,m), 4,52-4,45 (1H,m), 4,42-4,35 (1H,m), 4,15-4,05 (2H,m), 3,74-3,60 (2H,m), 3,57-3,42 (2H,m), 3,39-3,28 (1H,m), 3,03-2,93 (1H,m), 2,92-2,82 (1H,m), 2,65-2,52 (2H,m), 2,42-2,25 (1H,m), 2,20-1,88 (4H,m), 1,76-1,50 (2H,m), 1,35-1,10 (9H,m).
(2100с). Раствор 214е (165 мг, 0,37 ммоля) в метаноле (5 мл) перемешивают при комнатной температуре с каталитическим количеством п-толуолсульфоновой кислоты (17,5 мг). Через 4 дня реакционную смесь разбавляют ЕtOАс и промывают 10% раствором NaHCO3 (3× ) и нас.водным раствором NaCl. Объединенные экстракты высушивают над Nа2SO4 и концентрируют. После флэш-хроматографии (SiO2, EtOAc) получают 127 мг (68%) 2100с в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СDСl3) δ 7,82 (2Н, d), 7,55-7,50 (1H, m), 7,47-7,43 (2H, m), 7,02 (1H, d), 6,53 (1H, d), 5,20-5,10 (1H, m), 4,56-4,50 (1H, m), 4,45-4,50 (1H каждый, два m), 3,69 (3Н, s), 3,41 (3Н, s), 3,43 (3Н, s), 3,35-3,25 (1H, m), 3,06-2,98 (1H, m), 2,94-2,83 (1H, m), 2,65-2,53 (2H, m), 2,35-2,32 (1H, m), 2,15-2,07 (1Н,т), 2,00-1,89 (3Н, m), 1,75-1,56 (2H, m).
(2100d). Раствор 214е (53 мг, 0,12 ммоля) в изопропаноле (5 мл) перемешивают при 50° С с каталитическим количеством п-толуолсульфоновой кислоты (5 мг). Через 3 дня реакционную смесь выливают в насыщенный раствор NаНСО3 и экстрагируют СН2Сl2.
Объединенные экстракты высушивают над Na2SO4 и концентрируют. После флэш-хроматографии (SiO2, CH2Cl2:EtOAc (от 4:1 до 1:1 об./об.)) получают 49 мг (68%) 2100d в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,85 (2Н, d), 7,50-7,43 (1H, m), 7,41-7,35 (2H, m), 7,02 (1H, d), 6,47 (1Н, d), 5,13-5,07 (1Н, m) 5,00-4,9 (1H, m), 4,61-4,55 (2Н, m), 4,37-4,30(1H, m), 3,80-3,70 (1H, m), 3,90-3,80 (1H, m), 3,42-3,35 (1H, m), 3,03-2,93 (1H, m), 2,91-2,81 (1H, m), 2,62-2,50 (2H, m), 2,38-2,33 (1H, m), 2,12-2,06 (1H,m), 1,97-1,81 (3H, m), 1,70-1,60 (2H, m), 1,28-1,05 (18H,m).
(2100e) синтезируют из 302 по способу, использующемуся для синтеза 304а, получая 2100е, за исключением того, что этанол и триэтилортоформат используют вместо метанола и триметилортоформата. После хроматографии (SiO2, 5% этанол/СН2Сl2)получают 92 мг (68%) твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (СDСl3, смесь диастереомеров) δ 7,90-7,80 (2H, m), 7,60-7,50 (1H, m), 7,50-7,40 (2H, m), 7,30 (0,5H, d), 7,00 (0,5H, d), 6,50 (0,5H, d), 5,50 (0,5H, d), 5,20-5,10 (1,5H, m), 4,95 (0,5H, m), 4,75-4,65 (0,5H, m), 4,65-4,50 (1H, m), 4,38 (0,05H, t), 4,00-3,90 (0,5H, m), 3,85-3,75 (0,5H, m), 3,75-3,65 (0,5H, m), 3,65-3,55 (0,5H, m), 3,30-2,70 (4Н, m), 2,50-2,35 (2H, m), 2,30 (1H, d), 2,15-1,90 (3H, m), 1,80-1,60 (2H, m), 1,25-1,20 (3H, два t).
(2201) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для синтеза 605b, получая 2201: 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,30-8,22 (1H,m), 8,05-7,98 (1H, d), 7,96-7,83 (1H,m), 7,77-7,68 (1H,m), 7,67-7,40 (7H,m), 5,12-5,02 (1H,m), 4,98-4,41 (5H,m), 4,38-4,24 (1H,m), 4,07-4,00 (1H,d), 3,92-3,80 (2H,m), 3,32 (3H,s), 2,75-2,60 (1H,m), 2,58-2,35 (1H,m).
Пример 18
Мы получили следующие данные для выбранных соединений настоящего изобретения с помощью способов, описанных в данной заявке (Таблица 16, см. Пример 7; Таблицы 17 и 18, см. Примеры 1-4). Структуры и способы получения соединений настоящего изобретения описаны в Примерах 28-31.
Таблица 16. Сравнение эффективности пролекарств на мышах после введения LPS: Ингибирование продукции IL-1β . Процент ингибирования продукции IL-1β после обработки соединением данного изобретения представлен как функция от времени, прошедшего после введения LPS ("-" означает, что значения ингибирования в этот относительный промежуток времени не были получены).
Соединение | -2 ч | -1 ч | 0 ч | +1 ч |
213f | (-4) | - | 8 | - |
213h | 9 | - | 53 | - |
213i | (-11) | - | 62 | - |
213k | 0 | - | 68 | - |
213l | (-18) | - | 80 | - |
213m | 26 | - | 42 | - |
213o | 4 | - | 8 | - |
213р | 21 | - | 29 | - |
213q | 17 | - | 91 | - |
213r | 59 | - | 37 | - |
213x | 0 | - | 78 | - |
213y | 29 | - | 50 | - |
214е | 39 | - | 70 | 75 |
43 | 44 | 48 | 11 | |
- | - | - | 47 | |
214k | 12 | - | 31 | - |
214l | 0 | - | 54 | - |
214m | 0 | - | 17 | - |
214w | 11 | - | 91 | - |
2641 | 0 | - | 23 | 1 |
404 | - | - | - | 56 |
55 | - | 6 | - |
Соединение | -2 ч | -1 ч | 0 ч | +1 ч |
412 | 0 | - | 0 | - |
11 | - | 37 | - | |
418 | - | - | - | 64 |
25 | - | 52 | - | |
434 | - | - | - | 80 |
0 | - | 63 | - | |
450 | 0 | - | 35 | - |
452 | - | - | - | 70 |
28 | - | 89 | - | |
456 | - | - | - | 56 |
41 | - | 69 | ||
470 | 0 | 36 | - | |
471 | 0 | - | 34 | |
475 | 0 | - | 15 | - |
481 | 27 | - | 0 | - |
486 | 19 | - | 15 | - |
487 | 17 | - | 20 | - |
528 | 25 | - | 67 | - |
550f | 0 | - | 50 | - |
550h | 55 | - | 73 | - |
550i | (-10) | - | 23 | - |
550k | 36 | - | 34 | - |
550l | 9 | - | 38 | - |
550m | 45 | - | 52 | - |
550n | 19 | - | 65 | - |
550o | 19 | - | 64 | - |
550p | 30 | - | 60 | - |
655 | 0 | - | 68 | - |
656 | 31 | - | 16 | - |
662 | 41 | - | 75 | - |
668 | - | - | - | 53 |
695а | 49 | - | 78 | - |
1015 | 15 | - | 28 | - |
2001 | 64 | 62 | 58 | 55 |
2001а | 10 | - | 16 | - |
2002 | 5 | - | 87 | - |
2100h | 34 | - | 32 | - |
2100i | 19 | - | 74 | - |
2100j | 48 | 41 | 0 | 33 |
2100k | 30 | 50 | 32 | 72 |
2100l | 52 | - | 28 | - |
2100m | 40 | - | 42 | - |
2100n | 21 | 9 | 64 | 73 |
2100o | 31 | 44 | 68 | 64 |
Таблица 17. Данные для выбранных соединений настоящего изобретения, полученные с помощью способов, описанных в примерах 1-4. | |||||
Соединение | УФ-видимый Кi (нМ) | Клетки РВМС средн. IC50 (нМ) | Целая кровь человека IC50 (нМ) | Выведение Мыши, в/в мл/мин/кг | Выведение Крысы, в/в мл/мин/кг |
213f | - | 3000 | |||
213g | 2200 | ||||
213h | 1500 | ||||
213i | 1100 | ||||
213j | |||||
213k | 2000 | ||||
213l | 2000 | ||||
213m | 2500 | ||||
213o | 5000 | 3300 | |||
213р | <300 | ||||
213q | <300 | ||||
213r | <300 | ||||
213v | 0.5 | 1,100 | 1100 | 41 | 23 |
213x | 4500 | 2500 | |||
213y | 930 | ||||
214j | 4.2 | 2500 | 6000 | ||
214k | 0.2 | 500 | 580 | 22 | |
214l | 6 | 1900 | 1100 | 12 | |
214m | 1.5 | 530 | 2200 | 33.4 | |
214w | 0.6 | 620 | 370 | 15 | |
246b | 30000 | >30000 | 87 | ||
264l | 3000 | ||||
265a | 2600 | 25000 | |||
265c | 1100 | 4500 | 32 | ||
265d | 500 | 1500 | 35 | ||
265f | 1200 | 24 | |||
280b | 13000 | ||||
280c | 10000 | 86 | |||
280d | 25000 | ||||
283b | 1750 | 41 | |||
283c | 4000 | 50 |
Соединение | УФ-видимый Кi (нМ) | Клетки РВМС средн. IC50 (нМ) | Целая кровь человека IC50 (нМ) | Выведение Мыши, в/в мл/мин/кг | Выведение Крысы,в/в мл/мин/кг |
283d | >8000 | 10000 | |||
308с | 3000 | ||||
308d | 3000 | ||||
500 | 25 | 1800 | 1800 | ||
501 | 2.5 | 1800 | 1600 | ||
505с | 1500 | ||||
505d | >20000 | ||||
505f | 550 | - | |||
510a | 65 | 200 | 267 | ||
510d | 2300 | >20000 | |||
511с | 730 | >20000 | 78 | 40 | |
528 | 2200 | ||||
550f | 1100 | ||||
550h | 1800 | ||||
550i | 1400 | ||||
550k | 3000 | ||||
5501 | 750 | ||||
550m | 2000 | ||||
550n | <300 | ||||
550o | 450 | 3000 | |||
550p | 2900 | ||||
550q | 700 | ||||
640 | 155 | 2250 | 3900 | ||
642 | 35 | 8000 | 2900 | ||
645 | 150 | ||||
650 | 550 | 4000 | |||
653 | 30 | 2300 | 6000 | ||
655 | |||||
656 | 0.6 | 2100 | 1600 | 2.9 | |
662 | 0.5 | 1800 | 800 | 2.75 | |
668 | 9 | 5200 | 3700 | 29 | |
669 | 14 | 10000 | |||
670 | 4500 | ||||
671 | 5 | 2000 | 2500 | 33.2 | |
677 | 610 | ||||
678 | 5 | 2700 | 2200 | ||
680 |
Соединение | УФ-видимый Кi (нМ) | Клетки РВМС средн. IC50 (нМ) | Целая кровь человека IC50 (нМ) | Выведение Крысы, в/в мл/мин/кг | Выведение Мыши, в/в мл/мин/кг |
681 | 9 | 3000 | 5000 | ||
682 | 1300 | ||||
683 | 400 | >20000 | >20000 | ||
684 | 15 | 5000 | 2800 | ||
686 | 4 | 4000 | 9000 | ||
688а | 3000 | ||||
688b | 1300 | ||||
689а | 0.8 | 910 | 2500 | ||
689b | 2.2 | 600 | 2000 | ||
690а | 1600 | ||||
690b | |||||
691а | 2.1 | 2900 | 1200 | 9.9 | |
691b | 11.5 | 1,900 | 1400 | ||
692а | |||||
692b | 1800 | ||||
693 | |||||
694 | 3 | 2600 | 2100 | ||
695а | |||||
695b | |||||
695с | 2500 | ||||
696 | 4.5 | 2000 | 2900 | 13 | |
700 | 275 | ||||
701 | 90 | ||||
702 | 45 | >5000 | 20000 | ||
703 | 5 | 1400 | 20000 | ||
704 | 30 | 2600 | 9800 | ||
705 | 5 | 2300 | 3200 | ||
706 | 5 | 2400 | 5800 | ||
707 | 180 | ||||
708 | 140 | ||||
709 | 10 | 2100 | 14000 | ||
710 | 110 | ||||
711 | 175 | ||||
910 | 10 | 3400 | 3800 | ||
911 | 9 | 3500 | 1900 | ||
912 | 10 | 4200 | 3800 | ||
913 | 4.5 | 2400 | 7000 |
Соединение | УФ-видимый Кi (нМ) | Клетки РВМС средн. IC50 (нМ) | Целая кровь человека IC50 (нМ) | Выведение Мыши, в/в мл/мин/кг | Выведение Крысы, в/в мл/мин/кг |
914 | 5.2 | 2600 | 2800 | ||
915 | 11.5 | >8000 | 1900 | ||
918 | 7 | 1150 | |||
919 | 4 | 2000 | 4300 | ||
920 | 16 | 2100 | 3000 | ||
921 | 8.5 | 1800 | 3000 | ||
1018 | 170 | 4000 | 5500 | - | 9,1 |
1052 | 100 | 2500 | - | 16 | |
1053 | 27 | 2000 | >20000 | 34 | |
1056 | 170 | 17 | |||
1075 | 120 | 5000 | 5500 | 14.5 | |
1095 | 360 | 6000 | 28 | ||
1105 | 250 | 3500 | 3000 | ||
1106 | 75 | 4000 | 1700 | ||
1107 | 65 | ||||
1108 | 22 | 1400 | 2600 | ||
1109 | 80 | ||||
1110 | 45 | ||||
1111 | 18 | 6050 | 4400 | ||
1112 | 3.5 | 1800 | 2300 | ||
1113 | 290 | ||||
1114 | 125 | ||||
1115 | 250 | ||||
1116 | 215 | ||||
1117 | 35 | 1700 | 1300 | ||
1118 | 380 | ||||
1119 | 515 | ||||
1120 | 95 | ||||
1121 | 170 | ||||
1122 | 400 | ||||
1123 | 30 | 2,400 | 4500 | ||
1124 | 270 | ||||
1125 | 55 | 2300 | 9000 | ||
2001а | 3000 | ||||
2100f | |||||
2100g | |||||
2100h | 2000 |
Продолжение Таблицы 17 | |||||
Соединение № | УФ-видимый, Ki(нМ) | Клетки РВМС сред. IC50 (нМ) | Целая кровь человека IC50 (нМ) | Введение Мыши, в/в мл/мин/кг | Введение Крысы, в/в мл/мин/кг |
2100i | |||||
2100j | 30000 | 12000 | |||
2100k | 520 | 4000 | 600 | ||
2100l | 750 | 2200 | |||
2100m | |||||
2100n | 670 | 770 | 4000 | ||
2100o | 670 | 1150 | 1500 |
Мы получили следующие данные для выбранных соединений настоящего изобретения с помощью способов, описанных в данной заявке (см. Примеры 1-4). Структуры и способы получения соединений настоящего изобретения описаны в Примерах 28-31.
Таблица 18 | |||||
Соединение | Флюоресцентный анализ kinact m-1c-1 | Клетки РВМС avg. IC50 (нМ) | Целая кровь человека IC50 (нМ) | Введение Мыши, в/в мл/мин/кг | Введение Крысы, в/в мл/мин/кг |
286 | 370000 | 300 | 1600 | 119 | |
505b | 190000 | 1500 | 2100 | 161 | 196 |
505е | 420000 | 9000 | 1000 |
Пример 19
Точный (быстрый) in vivo анализ эффективности препаратов, как анти-воспалительных агентов
Результаты, приведенные в Таблице 19, показывают, что соединения 412f, 412d и 696а ингибируют продукцию IL-1β в LPS-стимулированных мышах при пероральном введении. Использовали следующие среды для лекарств: этанол/РЕG/вода, β -циклодекстрин, лаброзол/вода или кремофор/вода. Соединения вводили через определенные промежутки времени после LPS-стимуляции. Схема описана в Примере 7.
Таблица 19. Ингибирование (%) продукции IL-1β в LPS-стимулированных мышах. | |||
Соединение | Доза 10 мг/кг | Доза 25 мг/кг | Доза 50 мг/кг |
412f | 17% | 25% | 32% |
412е | 5% | 17% | 61% |
696а | 0 | 45% | 52% |
Пример 20
Стимуляция мышей интраперитонеальным введением каррагенана
Воспалительное состояние у мышей индуцируют интраперитонеальной (IP) инъекцией 10 мг каррагенана в 0,5 мл физ. раствора (Griswold et al., Inflammation, 13, pp. 727-739 (1989)). Препараты вводили перорально через зонд, используя следующие среды для лекарств: этанол/РЕG/вода, β -циклодекстрин, лаброзол/вода или кремофор/вода. Мышей умершвляют через 4 часа после введения каррагенана, затем проводят IP инъекцию 2 мл физ. раствора, содержащего 5 ед./мл гепарина. После легкого массажа перитонеальной области делают небольшой надрез, содержимое собирают и записывают объем. До центрифугирования образцы держат во льду. Центрифугируют для удаления клеток (130× g, 8 мин при 4° С), полученный супернатант хранят при -20° С. Уровни IL-1β в перитонеальной жидкости определяют с помощью ELISA-теста.
Результаты, приведенные в таблице 20, демонстрируют, что пролекарство 412f ингибирует продукцию IL-1β в каррагенан-стимулированных мышах после перорального введения препарата. Соединение 214е не ингибировало продукцию IL-1β при пероральном введении в дозе 50 мг/кг.
Таблица 20. Ингибирование (%) продукции IL-1β соединениями 412f и 412d в каррагенан-стимулированных мышах. | ||
Доза (мг/кг) | Соединение 412f | Соединение 412d |
1 | 30% | 0 |
10 | 54% | 32% |
25 | 49% | 31% |
50 | 73% | 36% |
100 | 75% | 53% |
Пример 21
Коллаген-индуцированный артрит типа II
Коллаген-индуцированный артрит типа II вызывали у самцов мышей DBA/I J по методике, описанной Wooley and Geiger (Wooley, P.H., Methods in Enzvmology. 162, pp. 361-373 (1988) and Geiger, Т. Clinical and Experimental Rheumatology. 11,pp. 515-522 (1993)). Коллаген типа II из грудины цыпленка (4 мг/кг в 10 мМ уксусной кислоте) эмульгировали в равном объеме полного адъюванта Фрейнда (FCA) повторяющимися пассажами (400) между двумя стеклянными шприцами объемом 10 мл с иглой с двойным центром 16 калибра. Мышей иммунизировали путем внутридермальной инъекции (50 мкл; 100 мкл СII на мышь) эмульсии коллагена спустя 21 день в противоположно-боковом положении основания хвоста. Препараты вводили дважды в день (10, 25 и 50 мг/кг) перорально через зонд с интервалом приблизительно в 7 часов. Используемые среды для лекарств включают этанол/РЕG/вода, β -циклодекстрин, лаброзол/вода или кремофор/вода. Обработку препаратом начинали в пределах 2 часов после введения усилителя иммунизации СII. Воспалительное состояние оценивали по шкале увеличения тяжести от 1 до 4 по двум передним лапкам, эти значения складывали и получали конечное значение.
Результаты, представленные на фиг.12,13 и 14, демонстрируют, что пролекарства 412f, 412d и 696а ингибируют воспалительное состояние у мышей с коллаген-индуцированным артритом при пероральном введении. Соединение 214е не ингибировало воспаления в дозе 50 мг/кг при пероральном введении через зонд один раз в день.
Пример 22
Определение биодоступности препаратов in vivo
Препараты (10-100 мг/кг) вводят крысам перорально (10 мл/кг), используя следующие среды для лекарств: этанол/РЕG/вода, β -циклодекстрин, лаброзол/вода или кремофор/вода. Образцы крови берут из сонной артерии через 0,25, 0,50, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6 и 8 часов после введения препарата, центрифугируют, получая плазму, и хранят при -70° С до анализа. Концентрации альдегида определяют, используя ферментный анализ. Фармакокинетический анализ данных проводят с помощью метода нелинейной регрессии, используя RStrip (MicroMath Software, UT). Значения доступности препаратов определяли следующим образом: (AUC препарата после перорального введения пролекарства/AUC препарата после в/в введения препарата)х(в/в дозировка/пероральн. дозировка)× 100%.
Результаты, приведенные в Таблице 21, демонстрируют, что пролекарства 412f, 412d и 696а дают значительный уровень лекарства в крови и обладают хорошей доступностью при пероральном применении. При пероральном применении препарата 214е его присутствие в крови не было обнаружено.
Таблица 21. Биодоступность соединений 412f, 412d, 696a и 214е при пероральном применении у крыс. | |||
Соединение | Доза (мг/кг) | Cмакс (мкг/мл) | Доступность препарата (%) |
412f | 25 | 2,4 | 32 |
412d | 25 | 2,6 | 35 |
696a | 50 | 1,2 | 10 |
214е | 45 | 0,2 | 0,9 |
Пример 23
ICE расщепляет и активирует про-IGIF
Плазмиды с экспрессией ICE и гомолога ICE
0,6 kb кДНК, кодирующая мышиный про-IGIF полной длины цепи (Н. Okamura et al,. Nature. 378, р.88 (1995)), была встроена в экспрессионный вектор млекопитающих pCDLSRa (Y. Takebe et al., Mol. Cell Biol., 8, p. 466 (1988)).
Обычно плазмиды (3 мкг), кодирующие активный ICE (выше) или три фермента, родственных ICE, TX, CPP32 и СМН-1, встроенные в pCDLSRα экспрессионный вектор (С. Faucheu et al., ЕМВО. 14, р. 1914 (1995); Y. Gu et al., EMBO. 14, p. 1923 (1995); J.A.Lippke et al., J.Biol. Chem. 271, p. 1825 (1996)), трансфицировали в сливающиеся монослои Cos-клеток в плашках диаметром 35 мм, используя DEAE-декстрановый метод (Y. Gu et al., ЕМВО J., 14, р. 1923 (1995)). Через двадцать четыре часа клетки лизировали и лизаты подвергали электрофорезу SDS-PAGE и иммуноблотингу, используя антисыворотку, специфичную для IGIF (Н. Okamura et al., Nature, 378, р.88 (1995)).
С помощью полимеразной цепной реакции сайты Nde I встраивали по 5' и 3' концам мышиной про-IGIF кДНК, используя следующие праймеры:
GGAATTCCATATGGCTGCCATGTCAGAAGAC (начальный) и GGTTAACCATATGCTAACTTTGATGTAAGTTAGTGAG (противоположный). Полученный фрагмент Nde I лигировали в Е. coli экспрессионный вектор рЕТ-15В (Novagen) в сайт Nde I для создания плазмиды, управляющей синтезом полипептида, состоящего из 213 аминокислот и включающего пептид из 21 остатка ( где LVPRGS является сайтом, расщепляющим тромбин), присоединенного во фрейме к N-концу про-IGIF по Аlа2, что подтверждается ДНК-сиквенсом этой плазмиды и N-концевым сиквенсом экспрессируемых белков. Штамм Е. coli BL21(DE3), несущий плазмиду, индуцировали 0,8 мМ изопропил-1-тио-β -D-галактопиранозидом в течение 1,5 часа при 37° С, собирали, подвергали лизису посредством микрофлюидизации (Microfluidic, Watertown, MA) в буфере А (20 мМ фосфат натрия, рН 7,0, 300 мМ NaCl, 2 мМ дитиотреитол, 10% глицерин, 1 мМ фенилметилсульфонил фторид и 2,5 мкг/мл лейпептин). Лизаты осветляли с помощью центрифугирования при 100000× g в течение 30 мин. Затем (His)6-меченный белок про-IGIF выделяли из супернатанта с помощью хроматографии на Ni-NTA-агарозе (Qiagen) в условиях, рекомендуемых производителем.
Реакция расщепления npo-IGIF in vitro
Реакционную смесь реакции расщепления in vitro (30 мкл), содержащую 2 мкг очищенного npo-IGIF и очищенные протеазы различных концентраций в буфере, содержащем 20 мМ Hepes, рН 7,2, 0,1% Triton Х-100, 2 мМ DTT, 1 мМ PMSF и 2,5 мкг/мл лейпептина, инкубировали 1 час при 37° С. Условия расщепления под действием гранзима В использовались такие, как описано выше (Y.Gu et al., J. Biol. Chem., 271, p. 10816 (1996)). Продукты расщепления анализировали с помощью электрофореза SDS-PAGE на 16% гелях и окрашивания Кумасси синим, подвергали N-концевому аминокислотному сиквенсу на ABI автоматическом пептидном секвенаторе в условиях, рекомендуемых производителем.
Кинетические параметры расщепления IGIF под действием ICE
Кинетические параметры (kcat/Км, Км и kcat) расщепления IGIF под действием ICE определяли следующим образом. Про-IGIF, меченный 35S-метионином (3000 cpm, полученный in vitro транскрипцией и трансляцией с использованием TNT Т7-связанной системой лизатов ретикулоцитов (Promega) и кДНК про-IGIF в векторе рSР73 в качестве шаблона) инкубировали в реакционной смеси объемом 60 мкл, содержащей от 0,1 до 1 нМ рекомбинантного ICE и от 190 нМ до 12 мкМ немеченного про-IGIF в течение 8-10 мин при 37° С. Концентрации продукта расщепления определяли с помощью анализов SDS-PAGE и Phospholmager. Кинетические параметры рассчитывали путем приведения методом нелинейной регрессии зависимости значений скорости от концентрации к уравнению Михаэлиса-Ментен, используя программу Enzfitter (Biosoft).
Определение индукции синтеза IFN-γ
Клетки А.Е7 Th1 (H. Quill and R. H. Schwartz, J. Immunol., 138, p. 3704 (1987)) (0,3× 103 клеток в 0,15 мл среды Click, дополненной 10% FBS, 50 мкМ 2-меркаптоэтанола 50 ед./мл IL-2) в 96-луночных планшетах обрабатывали IGIF в течение 18-20 часов и супернатант культуры анализировали на содержание IFN-γ методом ELISA (Endogen, Cambridge, MA).
Пример 24
Процессинг про-IGIF под действием ICE в Cos-клетках
Cos клетки трансфицировали различными комбинациями экспрессирующих плазмид, как описано в Примере 23. Трансфицированные Cos клетки (3,5× 105 клеток в 35-мм плашках) подвергали мечению в течение 7 часов, используя 1 мл свободной от метионина DMEM, содержащей 2,5% нормальной DMEM, 1% диализированной фетальной бычьей сыворотки и 300 мкСi/мл 35S-метионина (35S-Express Protein Labeling-Mix, New England Nuclear). Клеточные лизаты (приготовленные в 20 мМ Hepes, pH 7.2 150 мМ NaCl, 0,1% Triton Х-100, 5 мМ этилмалеимид, 1 мМ PMSF, 2,5 мкг/мл лейпептин), или культуральную среду, выдерживающуюся в тех же условиях, подвергали иммунопреципитации с анти-IGIF антителами, которые распознают как предшественник, так и зрелую форму IGIF (H. Okamura et al., Nature, 378, р. 88 (1995)). Иммунопреципитированные белки анализировали методами SDS-PAGE (электрофорез на полиакриламидном геле) и флюорографии (фиг.2А).
Мы также определяли наличие IFN-γ индуцирующей активности в клеточных лизатах и культуральной среде трансфицированных клеток (фиг.2В). Трансфицированные Cos клетки (3,5× 105 клеток в 35-мм плашках) выращивали в 1 мл среды в течение 18 часов. Среду собирали и использовали в анализе индукции IFN-γ при конечном разбавлении 1:10 (Пример 23). Осадки Cos клеток от той же трансфекции подвергали лизису в 100 мкл 20 мМ Hepes, pH 7,0, путем трехкратного замораживания-оттаивания. Лизаты осветляли центрифугированием, как описано выше, и использовали в анализе при разбавлении 1:10.
Пример 25
IGIF является физиологическим субстратом для ICE
Дикий тип (ICE+/+) и ICE-/- мышей праймировали инактивированными под действием тепла Р. acnes, клетки Купфера выделяли из этих мышей через 7 дней после праймирования и затем стимулировали 1 мкг/мл LPS в течение 3 часов. Количество IGIF в культуральной среде измеряли с помощью ELISA-теста.
Мышам дикого типа или с дефицитом по ICE вводили интраперитонеально убитые тепловой обработкой р. acnes по описаной методике (Н.Okamura et al., Infection and Immunity. 63, p. 3966 (1995)). Клетки Купфера получали через семь дней в соответствии с методикой Tsutsui et al. (Н. Tsutsui et al., Hepato-Gastroenterol., 39, р. 553 (1992)), за исключением того, что вместо nycodenz градиента использовали метризамид. В каждом эксперименте клетки Купфера от 2-3 животных объединяли и культивировали в среде RPMI 1640, дополненной 10% фетальной сывороткой ягнят и 1 мкг/мл. Клеточные лизаты и культуральную среду получали спустя 3 часа.
Клетки Купфера от мышей дикого типа и ICE-/- мышей метаболически метили 35S-метионином так же, как и Cos клетки (описано выше в Примере 24) за исключением того, что вместо DMEM использовали не содержащую метионина RPMI 1640. Эксперименты по иммунопреципитации проводили на клеточных лизатах и культуральной среде, и иммунопреципитаты анализировали методами SDS-PAGE и флюорографии, как описано в Примере 23. См. фиг.3.
Пример 26
Индукция продукции INF-γ in vivo
LPS в смеси с 0,5% карбоксиметилцеллюлозой в PBS, рН 7,4, вводили мышам путем внутриперитонеальной инъекции (LPS 30 мг/кг) в дозировочном объеме 10 мл/кг. Кровь собирали каждые 3 часа в течение 24 часов от групп из трех мышей дикого типа или с дефицитом по ICE. Уровни INF-γ в сыворотке определяли методом ELISA (Endogen).
Пример 27
Анализ ингибирования IGIF и IFN-γ
Ингибирование процессинга IGIF под действием ингибиторов ICE определяли в анализе ингибирования ICE, как описано в данной заявке (см. Пример 1 и Таблицу 22).
Анализ человеческих РВМС
Клетки светлого слоя кровяного сгустка человека получали от доноров крови и выделяли мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) центрифугированием в LeukoPrep пробирках (Becton-Dickinson, Lincoln Park, NJ). РВМС добавляли (3× 106 /лунка) к 24-луночным Corning планшетам для культивирования тканей и после одного часа инкубации при 37° С не прилипшие клетки удаляли осторожным промыванием. Прилипшие мононуклеарные клетки стимулировали LPS (1 мкг/мл) в присутствии или отсутствие ингибитора ICE в 2 мл RPMI-1640-10% FBS. После 16-18 часов инкубации при 37° С количественно определяли содержание IGIF и IFN-γ в супернатантах культуры с помощью ELISA - теста.
Например, мы получили следующие данные для соединения 412 настоящего изобретения, используя описанные здесь методы. Структура соединения 412 показана в таблице 22.
Таблица 22 | ||
соединение | УФ-видимый Кi (нМ) | Клетки РВМС средн. IС50 (нМ) |
412 | 1,3 | 580 |
Пример 28
Соединения данного изобретения могут быть получены различными способами. Далее иллюстрируется предпочтительный способ:
К раствору соединения А (1,1 эквивалент) в CH2Cl2 (или DMF или CH2Cl2/DMF (1:1)) добавляют трифенилфосфин (0-0,5 эквивалентов), нуклеофильный агент (2-50 эквивалентов) и тетракис-трифенилфосфин палладий (0) (0,05-0,1 эквивалента) при температуре окружающей среды в инертной атмосфере (азота или аргона). Через 10 мин эту реакционную смесь необязательно концентрируют, затем добавляют раствор кислоты A-I или A-II в CH2Cl2 (или DMF или СН2Сl2/DMF (1:1)), после чего добавляют НОВТ (1,1 эквивалент) и EDC (1,1 эквивалент). Полученную реакционную смесь оставляют перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 1-48 часов, получая продукты конденсации C-I или C-II.
Различные нуклеофильные агенты могут быть использованы в вышеупомянутом процессе. Merzouk and Guibe, Tetrahedron Letters, 33, pp. 477-480 (1992); Guibe and Balavoine, Journal of Organic Chemistry, 52, pp. 4984-4993 (1987). Предпочтительные нуклеофильные агенты, которые могут быть использованы, включают следующие соединения: димедон, морфолин, триметилсилил диметиламин и диметил барбитуровую кислоту. Более предпочтительными нуклеофильными агентами являются триметилсилил диметиламин (2-5 эквивалентов) и диметил барбитуровая кислота (5-50 эквивалентов). Если нуклеофильным агентом является триметилсилил диметиламин, вышеупомянутую реакционную смесь надо концентрировать перед добавлением A-I или А-II.
Другие соединения данного изобретения могут быть получены гидролизом соединений, представленных формулами C-I и C-II, с получением соединений, представленных формулами H-I и H-II, как продемонстрировано на следующей схеме:
Гидролиз можно проводить в различных условиях в присутствии кислоты и воды. Кислоты, которые могут быть использованы, включают п-толуолсульфоновую, метансульфоновую, серную, перхлорную, трифторуксусную и хлористоводородную. Например, могут быть использованы растворы трифторуксусной кислоты (1-90% по весу) или хлористоводородной кислоты (0,1-30% по весу) в СН3СN/Н2О (1-90% Н2О по весу) в интервале температур 0-50° С.
Пример 29
Соединения 213f, 213g, 213h, 213i, 213j, 213k, 2131, 213m, 214f, 214g, 214h, 214i, 214j, 214k, 2141, 214m, 550f, 550g, 550h, 550i, 550j, 550k, 5501 и 550m получают следующим образом.
![]() | |
![]() | ![]() |
![]() | ![]() |
![]() | ![]() |
![]() | ![]() |
Соединение (213f) синтезируют из 212f по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 504 мг соединения 213f в виде твердого вещества желтого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,10(br. m, 0.25Н), 1,30(br. m, 2H), 1,50(br. m, 1H), 1,65(br. m, 1,5H), 1,80(br. m, 0,25H), 1,90(br. m, 0,25H), 1,95(br. m, 0,5H,), 2,05(br. m, 0.25H), 2,15(m, 1H). 2,3(m, 1H), 2,5(br. m, 1H), 2.6(dd, 1H), 2,8(m, 1H), 3,l(br. s, 3H), 3,15(br. m, 1H), 3,32(br. s, 3H), 3,5(m, 1H), 4,5(br. m, 1H), 4,62(d, 0,25H), 4,72(m, 3H), 4,95(m, 1H), 5,1(br. t, 0.25H), 5,15(br. t, 0,75H), 5,7(d, 1H), 6,75(d, 2H), 7,35(br. s, 5H), 7,75(d, 2H).
Соединение (213g) синтезируют из 212g по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 400 мг соединения 213g, 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 1,5(br. m, 1H), 1,65(br. m, 2H), 1,70(br. m, 0,25H), 1,90(br. m, 1H), 1,95(br. m, 1H), 2,05(br. m, 0,25H), 2,10(m, 1H), 2,3(m, 1H), 2,5(m, 2H), 2,59(d, 1H), 2,6(d, 1H), 2,78(d, 1H), 2,8(d, 1H), 2,93(br. s, 4H), 3,05(br. m, 1H), 3,15(br. m, 0.25H), 3,3(br. s, 3H), 3,5(m, 2H), 4,5(br. m, 2H), 4,65(d, 1H), 4,7(br. m, 2H), 4,95(br. m, 1H), 5,15(br. t, 0,25H), 5,2(br. t, 0.75H), 5.2(d, 1H), 6,95(d, 1H), 7,15(d, 1H), 7,25(br. s, 1H), 7,3(br. t, 2H), 7,45(br. s, 6H).
Соединение (213h) синтезируют из 212h по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 296 мг соединения 213h, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,55-1,68(m, 1H), 1,7-2,05(m, 3H), 2,3-2,5(m, 2H), 2,65-2,8(m, 1H), 2,85-2,93(m, 1H), 2,95-3,25(m, 3H), 4,44-4,65(m, 2H), 4,68-4,82(m, 1H), 4,9-4,95(d, 1H), 5,05-5,18(m, 2H), 5.28(s, 0,5H), 5,55-5,58(d, 0.5H), 6.52-6.58(d, 0,5H), 6,7-6,76(m, 2H), 6,82-6.85(d, 0.5H), 7,3-7,4(m. 5H), 7,52-7,58(m, 1H),7.75(s,0.5H), 7,8(s, 0.5H).
Соединение (213i) синтезируют из 212i по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 1,1 г соединения 213i, 1Н ЯМР (СDСl3) δ 1,55-2,05(m, 6H), 2,26-2,5(m, 2H), 2,68-2,82(m, 1H), 2,85-2,92(m, 1H), 2,95-3,25(m, 2H), 3,82(s, 1,5H), 3,85(s, 1,5H), 4,4-4,65(m, 2H), 4,7-4,78(m, 1H), 4,88-4,95(m, 1H), 5,05-5,23(m, 1H), 5,28(s, 0,5H), 5,55-5,58(d, 0,5H), 6,6-6,65(m, 1H), 6,8-6,84(m, 1H), 6,9-6,95(m, 3H), 7,3-7,45(m, 4H), 7,78-7,85(m, 2H).
Соединение (213j) синтезируют из 212j по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 367 мг соединения 213j, 1Н ЯМР (СDСl3) δ 1,55-2,05(m, 12Н), 2,25(d, 1H), 2,35(m, 1H), 2,48(m, 2H), 2,75(m, 2H), 2,9(m, 1H), 2,95-3,25(m, 5H), 4,45(t, 1H), 4,5-4,6(m, 4H), 4,7(m, 1H), 4,75(d. 1H), 4,88(m, 1H), 5,05(m, 2H), 5,15(q, 1H), 5,3(s, 1H), 5,58(d, 1H), 6.5(d, 1H), 6,9(d, 1H), 7,05(d, 1H), 7,25-7,35(m, 5H), 7,6(s, 2H), 7.7(s, 2H).
Соединение (213k) синтезируют из 212k по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 593 мг соединения 213k, 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 1,5(m, 1H), 1,6-1,7(m, 2H), 1,75-1,95(m,4H), 2,15(m, 2H), 2,3(m, 1H), 2,6(m, 1H), 2,7(m, 1H), 3,05(m, 2H), 3,15(m, 1H), 3,5(m, 2H), 4,45(m, 2H), 4,65(d, 1H), 4,7(m, 1H), 4,95(m, 1H), 5,15(m, 1H), 5,4(3, 1H). 5,7(d, 1H), 7,3(m, 5H), 7,85(s, 2H).
Соединение (213l) синтезируют из 2121 по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 133 мг соединения 2131, 1Н ЯМР (СDСl3) δ 1,55-l,7(m, 1H), 1,75-2,05(m, 3H), 2,25(s, 1,5H), 2,27(s, 1,5H), 2,3-2,48(m, 2H), 2,7-2,83(m, 1H), 2,85-2,94(dd,1H), 2,95-3,25 (m, 2H), 4,42-4,65 (m, 2H), 4,68-4,85 (m, 1H), 4,88-4,95 (m, 1H), 5,05-5,18 (m, 2H), 5,32 (s, 0,5H), 5,55-5,6 (d, 0,5H), 6,48-6.55 (d, 1H), 6,88-6,92 (d, 1H), 7,0-7,04 (d, 0,5H), 7,15-7,2 (d, 0,5H), 7,3-7,4 (m, 4H), 7,64-7,78 (m, 2H), 7,88-7,94 (m, 1H), 8,45-8,56 (m, 1H).
Соединение (213m) синтезируют из 212m по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 991 мг соединения 213m, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,5-2,15 (m, 5Н), 2,2-2,55 (m, 3Н), 2,6-3,3 (m, 4H), 3,95 (2s, 3Н), 4,45-4,7 (m, 2H), 4,7-4,85 (m, 1H), 4,85-4,95 (m, 1H), 5,05-5,25 (m, 1H), 5,3 (s, 0,5Н), 5,6 (d, 0,5Н), 6,55 (d, 0,5H), 6,85 (d, 0,5Н), 7,0 (d, 0,5H), 7,25-7,6 (m, 5,5H), 7,75 (s, 1H), 7,85 (s, 1H).
Соединение (550f) синтезируют из 212f по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 420 мг соединения 550f в виде не совсем белого твердого вещества, 1Н ЯМР (СDСl3) δ 1,2-l,25 (br. t, 3Н), 1,35 (m, 1H), 1,55 (br. m, 1H), 1,88-2,02 (br. m, 4H), 2,3 (d, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,55-2,75 (m, 3H), 3,0 (s, 6H), 3,25 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 4,3 (1, 1H), 4,55 (m, 2H), 4,68 (br. m, 1H), 3,9 (m, 1H), 4,3 (t, 1H), 4,55 (m, 2H), 4,68 (br. m, 1H), 4,95 (br. m, 1H), 5,1 (br. m, 2H), 5,45 (d, 1H), 6,5 (m, 2H), 7,7 (m, 2H).
Соединение (550h) синтезируют из 212h по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 195 мг соединения 550h в виде твердого вещества белого цвета. 1H ЯMP (DMSO-d6) δ 1,1-1,18 (2t, 3H), 1,6-1,7 (m, 2H), 1,88-2,05 (m, 2H), 2,1-2,35 (m, 3H), 2,48-2,56 (m, 1H), 2,75-2,8 (m, 0,75H), 2,88-3,08 (m, 1,25H), 3,25-3,4 (m, 1H), 3,55-3,8 (m, 2H), 4,35-4,45 (m, 1H), 4,55-4,62 (m, 1H), 4,8-4,88 (m, 1H), 4,98-5,03 (m, 0,25H), 5,1-5,13 (m, 0,75H), 5,33 (s, 0,25H), 5,58-5,6 (d, 0,75H), 5,9-6,0 (br. s, 2H), 6,8-6,85 (d, 1H), 7,58-7,62 (d, 1H), 7,82 (s, 1H), 8,22-8,28 (d, 1H), 8,48-8,52 (d, 0,75H), 8,72-8,76 (d, 0,25H).
Соединение (550i) синтезируют из 212i по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 135 мг соединения 550i, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,18-1,28 (2t, 3Н), 1,6-1,75 (m, 1,5Н), 1,9-2,1 (ml, 3,5H), 2,22-2,3 (d, 0,5H), 2,38-2,47 (m, 1,5H), 2,7-2,8 (m, 0,5H), 2,8-2,93 (m, 1H), 2,94-3,15 (m, 1,5H), 3,15-3,28 (m, 1H), 3,55-3,62 (q, 0,5H), 3,62-3,73 (q, 0,5H), 3,78-3,88 (q, 0,5H), 3,88 (s, 3H), 3,9-3,95 (q, 0,5H), 4,33-4,4 (m, 0,5H), 4,5-4,55 (m, 1H), 4,68-4,76 (m, 0,5H), 4,9-4,95 (m, 0,5H), 5,1-5,2 (m, 1,5H), 5,18 (s, 0,5H), 5,48-5,52 (d, 0,5H), 6,48-6,55 (d, 0,5H), 6,85-6,9 (m, 1H), 6,9-6,95 (П1, 2H), 7,34-7,38 (d, 0,5H), 7,78-7,85 (m, 2H).
Соединение (550k) синтезируют из 212k по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 174 мг соединения 550k в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (DMSO-d6) δ 1,15 (2t, 3Н), 1,6-1,75 (m, 2H), 1,9-2,05 (m, 2H), 2,1-2,4 (m, 5H), 2,5-2,55 (m, 1H), 2,7-2,8 (m, 0,5H), 2,85-3,0 (m, 1H), 3,0-3,1 (m, 0,5H), 3,55-3,7 (m, 1H), 3,7-3,8 (m, 1H), 4,2 (t, 0,5H), 4,35-4,45 (m, 0,5H), 4,55-4,65 (m, 0,5H), 4,8-4,9 (m, 0,5H), 5,05 (t, 0,5H), 5,15 (t, 0,5H), 5,35 (s, 0,5H), 5,6 (d, 0,5H), 7,95 (s, 2H), 8,5 (d, 0,5H), 8,65 (d, 1H), 8,75 (d, 0,5H), 10,9 (br. s, 1H).
Соединение (550l) синтезируют из 212l по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 151 мг соединения 550l, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,2-1,28 (2t, 3Н), 1,6-1,72 (m, 1,5Н), 1,88-2,15 (m, 3,5Н), 2,22-2,28 (m, 0,5Н), 2,28 (s, 3H), 2,38-2,48 (m, 1.5Н), 2,66-2,92 (m, 1,5Н), 2,95-3,14 (m, 1,5Н), 3,2-3,34 (m, 1H), 3,56-3,63 (q, 0,5H), 3,63-3,72 (q, 0,5Н), 3,8-3,85 (q, 0,5H), 3,9-3,95 (q, 0,5H), 4,32-4,38 (m, 0,5Н), 4,5-4,62 (m, 1H), 4,68-4,75 (m, 0,5Н), 4,88-4,92 (m, 0,5Н), 5,08-5,2 (m, 1,5Н), 5,18 (s, 0,5H), 5,46-5,5 (d, 0,5H), 6,5-6,55 (d, 0,5Н), 6,98-7,05 (m, 1H), 7,42-7,48 (d, 0,5H), 7,63-7,78 (m, 2,5H), 7,9-7,94 (d, 0,5H), 8,44-8,52 (m, 1H).
Соединение (550m) синтезируют из 212m по способу, использующемуся для получения 213е из 212е с образованием 301 мг соединения 550m в виде твердого вещества белого цвета: 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,2-l,35 (2t, 3H), 1,5-1,8 (m, 2H), 1,9-2,15 (5Н), 2,25 (d, 0,5Н), 2,4-2,5 (m, 2H), 2,65-2,8 (m, 0,5H), 2,8-3,0 (m, 0,5H), 3,0-3,2 (m, 1H), 3,2-3,35 (m, 0,5H), 3,55-3,65 (m, 0,5H), 3,65-3,75 (m, 0,5H), 3,8-3,9 (m, 0,5H), 3,9-4,0 (m, 0,5H), 4,4-4,45 (m, 0,5H), 4,55-4,65 (m, 0,5H), 4,7-4,8 (m, 0,5H), 4,85-4,95 (m, 0,5H), 5,05-5,2 (m, 0,5H), 5,2 (s, 0,5H), 5,5 (d, 0,5H), 6,5 (d, 0,5H), 6,9 (d, 0,5H), 6,95 (d, 0,5H), 7,35 (d, 0,5H), 7,75 (s, 1H), 7,85 (s, 1H).
Соединение (214j) синтезируют из 213j по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 62 мг соединения 214j в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 0,9 (t, 1H), 1,3 (br. s, 1H), 1,7 (br. m, 1H), 1,9 (br. m, 1H), 2,1 (br. s, 1H), 2,25 (q, 1H), 2,35 (ln, 1H), 2,48 (m, 2H), 2,65 (t, 1H), 3,15 (br. t, 1H), 3,5 (br. m, 1H), 4,3 (br. s, 1H), 4,55 (m, 2H), 4,95 (t, 1H), 5,25 (br. s, 1H), 7,6 (br. s, 1H), 7,85 (br. s, 1H).
Соединение (214k) синтезируют из 213k по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 80 мг соединения 214k в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 1,6-1,7 (m, 1H), 1,8-2,0 (m, 2H), 2,0-2,1 (m, 2H), 2,15-2,25 (m, 1H), 2,3-2,4 (m, 1H), 2,4-2,55 (m, 2H), 2,6-2,75 (m, 1H), 3,05-3,2 (m, 1H), 3,4-3,6 (m, 2H), 4,2-4,3 (m, 1H), 4,45-4,6 (m, 1H), 4,8-5,0 (m, 1H), 5,1-5,2 (m, 1H), 7,85 (s, 2H).
Соединение (2141) синтезируют из 2131 по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 91 мг соединения 214l в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (DMSO-d6) δ 1,65 (br, m, 6H), 1,9 (br, m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,3 (m, 3H), 2,6-2,85 (m, 3H), 5,29 (m, 2Н), 3,0 (m, 1H), 4,15 (br, q, 1H), 4,4 (m, 3H), 5,0 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,45 (s, 1H), 7,8 (d, 2H), 7,95 (d, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,65 (m, 2H), 9,65 (s, 1H).
Соединение (214m) синтезируют из 213m по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 105 мг соединения 214m в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 1,6-1,75 (m, 1H), 1,85-1,95 (m, 1H), 2,0-2,1 (m, 2H), 2,15-2,25 (m, 1H), 2,3-2,4 (m, 1H), 2,45-2,55 (m, 2H), 2,65-2,75 (m, 1H), 3,4-3,55 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,2-4,3 (m, 1H), 4,45-4,6 (m, 1H), 4,9-5,0 (m, 1H), 5,15-5,2 (m, 1H), 7,9 (s, 2H).
Соединения 308с и 308d получают следующим образом.
Соединение (308с) синтезируют из 212е по способу, использующемуся для получения 308b из 212е с образованием 266 мг соединения 308с, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,6-1,7 (m, 1H), 1,88-1,98 (m, 3H), 2,02-2,15 (m, 1H), 2,3-2,4 (m, 1H), 2,65-2,95 (m, 3H), 3,04-3,09 (m, 1H), 3,12-3,25 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 4,5-4,58 (m, 1H), 4,88-4,95 (m, 1H), 5,1-5,25 (m, 2H), 6,86-6,9 (d, 2H), 7,15-7,25 (m, 2H), 7,36-7,4 (m, 1H), 7,75-7,8 (d, 2H).
Соединение (308d) синтезируют из 212е по способу, использующемуся для получения 308b из 212е с образованием 270 мг соединения 308d. 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,55-1,65 (m, 1H), 1,8-2,1 (m, 4H), 2,3-2,4 (m, 1H), 2,65-2,88 (m, 3H), 2,9-3,3 (m, 3H), 4,5-4,58 (m, 1H), 4,88- 4,95 (m, 1H), 5,05 (s, 2H), 5,1-5,2 (m, 1H), 6,82-6,95 (m, 2H), 7,02-7,15 (m, 2H), 7,28 (m, 5H), 7,45 (m, 1H), 7,72 (d, 2H).
Соединения 2100f, 2100g, 2100h, 2100i и 2100j получают по описанной ниже схеме.
(2101а) синтезируют из аллилоксикарбониламино-β -трет-бутил аспартата по способу, используемому Chapman (Bioorg. & Med. Chem. Lett., 2, pp.615-618 (1992)) для получения (3S,2RS) 3-аллилоксикарбониламино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофурана, используя 4-хлорбензиловый спирт вместо бензилового спирта, получая 1,84 г соединения 2101а в виде кристаллического твердого вещества.
Соединение (2100f) синтезируют из 212е по способу, использующемуся для получения 213е из 212е, используя 2101а, с образованием 380 мг соединения 2100f, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,8-2,0 (m, 10Н), 2,30 (d, 1H), 2,31-2,5 (m, 3H), 2,7-2,9 (m, 3H), 3,05 (m, 2H), 3,1-3,2 (m, 4H), 4,45 (q, 1H), 4,5-4,6 (m, 3H), 4,7 (d, 2H), 4,85 (d, 1H), 4,9 (l, 1H), 5,2 (l, 1H), 5,15 (m, 2H), 5,25 (s, 1H), 5,55 (d, 1H), 6,5 (d, 1H), 6,9 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,25 (m, 3H), 7,35 (t, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,55 (1H), 7,8 (m, 3H).
Соединение (2101b) синтезируют из (3S,2RS) 3-аллилоксикарбониламино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран по способу, использующемуся для получения 2100d из 214е, используя Н2SО4 вместо pTSA, с образованием 2101b.
(2100g) синтезируют из 212е по способу, использующемуся для получения 213е из 212е, используя 2101b, получая 31 мг 2100g, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,19 (d), 1,94 (br s), 2,00-2,12 (т), 2,24 (d), 2,42 (dd), 2,71-2,83 (m), 3,02 (dd), 3,12-3,27 (шир. m), 3,93 (m), 4,32-4,37 (m), 4,52-4,63 (m), 4,90-4,95 (m), 5,12-5,20 (m), 5,28 (s), 6,93 (d), 7,10 (d), 7,41-7,50 (m), 7,51-7,58 (m), 7,84 (d).
(2100h). Раствор 214е (287 мг, 0,65 ммоля) в пиридине (5 мл) обрабатывают Ас2О (0,4 мл, 3,62 ммолей). Через 6 часов реакционную смесь выливают в 5% NaHSO4 и экстрагируют 3 раза EtOAc. Объединенные органические слои промывают нас. солевым раствором, высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (SiO2, EtOAc) получают 119 мг соединения 2100h, 1H ЯМР (CDCl3), смесь четырех диастереомеров) δ 1,80-2,05 (m), 2,12 (s), 2,13 (s), 2,19 (s), 2,212 (d), 2,67-2,75 (m), 2,80-2,95 (m), 3,00-3,20 (m), 3,21-3,33 (m), 3,50-3,95 (четыре дискретных мультиплета), 4,19 (m), 4,55 (m), 4,57-4,65 (m), 4,69 (m), 4,85-4,95 (m), 5,04 (m), 5,10 (s), 5,10-5,22 (m), 6,46 (d), 6,03 (s), 6,50 (d), 6,58 (d), 6,75 (d), 6,95-7,05 (m), 7,22 (m), 7,30 (m), 7,71 (d), 7,75-7,83 (m).
(2100i). К раствору соединения 2100b (1,5 г, 2,7 ммолей) в СН3СN (10 мл) добавляют IN НСl при температуре окружающей среды. Через 6 часов добавляют твердый NаНСО3 и продукт экстрагируют EtOAc, высушивают над MgSO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (SiO2, 30-100% CH2Cl2 в EtOAc) получают 123 мг соединения 2100i, 1H ЯМР (CDCl3) δ 1,25 (1, 3H), 1,6-1,8 (m, 1Н), 1,9-2,2 (m, 5H), 2,4-2,5 (m, 1H), 2,75-2,9 (m, 2H), 3,0-3,1 (m, 2H), 3,2-3,25 (m, 1H), 4,05-4,2 (m, 1IH), 4,5-4,7 (m, 1H), 5,1-5,25 (m, 1H), 7,0-7,2 (m, 2H), 7,4-7,45 (m, 2H), 7,5 (t, 1H), 7,8 (t, 2H), 9,5 (s, 1H).
Соединение (2100j) синтезируют из 213j по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 62 мг соединения 2100j, 1H ЯМР (СDСl3) δ 1,3 (t, 3H), 1,6-1,8 (m, 2Н), 1,9-2,25 (m, 4Н), 2,25 (s, 3H), 2,3-2,45 (m, 1H), 2,8-3,0 (m, 1H), 3,0-3,25 (m, 2H), 3,4-3,45 (m, 2H), 4,1-4,2 (m, 2H), 4,55-5,47 (m, 1H), 5,1-5,25 (m, 1H), 6,8 (s, IH), 7,0-7,1 (m, 2H), 7,5 (t, 1H), 7,8 (t, 2H), 9,5 (s, 1H).
Соединения 500 и 501 описаны в Таблице 23. Эти соединения получают с помощью способов, сходных со способами получения соединений 404-449 (см. Пример 11).
Соединения, описанные ниже (213m, 213n, 213o, 213p, 213q, 213r, 213s, 213t, 213u, 213v, 213w, 213x и 214w), получают с помощью способов, использующихся для получения соединений 213b-f.
Соединения 419, 415, 450, 456, 475, 404, 486, 487, 417, 408 и 418 тоже могут быть получены по описанной ниже схеме.
соединение | R1 |
213m, 419 | МеОС (О)- |
213n, 415 | ![]() |
213о, 450 | ![]() |
213р, 456 | ![]() |
213q, 475 | ![]() |
213r, 404 | ![]() |
213s, 486 | ![]() |
213t, 487 | ![]() |
213u, 417 | ![]() |
213v, 408 | ![]() |
213w, 214w | ![]() |
213х, 418 | ![]() |
Соединение (213n) выделяют из смеси диастереомеров (соотношение изомеров син.:анти 6:4) (1,43 г, 82%) в виде твердого вещества белого цвета: т.пл. 206-10° С; IR (КВr) 3288, 1787, 1680, 1657, 1651, 1619, 1548, 1440, 1256, 1135; 1Н ЯМР (DMSO-d6) δ 8,75 (0,4Н, d), 8,55 (0,6H, d), 8,45 и 8,43 (1Н, 2xd), 7,50 (1Н, d), 7,42 (1Н, s), 7,40-7,27 (5Н, m), 7,01 (1Н, d), 6,11 (2Н, s), 5,67 (0,6Н, d), 5,43 (0,4H, s), 5,10-5,00 (1Н, m), 4,90-4,59 (3,5H, m), 4,45-4,25 (1,5Н, m), 3,47-3,20 (1Н, m), 3,20-2,70 (2Н, m), 2,65-2,35 (1Н, m), 2,35-2,00 (3Н, m), 2,00-1,75 (2Н, m), 1,65-1,40 (2Н, m). Аналитически рассчитано для С29Н30N4O9: С, 60,20; Н, 5,23; N, 9,68. Обнаружено: С, 60,08; Н, 5,32; N, 9,50. MC (ES+) 580 (M+ + 2, 35%), 579 (М+ + 1, 100), 404 (5), 367 (5), 236 (7), 107 (5).
(213о) анти-изомер в виде пенистого твердого вещества белого цвета (0,73 г, 69%): т.пл. 135-40° С; [α ]
21 |
D |
(213р) выделяют в виде белой пены (1,2 г, 77%): [α ]
20 |
D |
(213q) выделяют в виде белого стеклоподобного твердого вещества (80%): т.пл. 145-149° С; [α ]
23 |
D |
(213r) выделяют как смесь диастереомеров (соотношение изомеров син.:анти 55:45) в виде пенистого твердого вещества белого цвета (1,46 г, 89%): т.пл. 106-10° С; IR (KBr) 3306,2947, 1791, 1659, 1650, 1535, 1421, 1256, 1122; 1Н ЯМР (D6-DMSO) δ 8,76 (0,45H, d), 8,56 (0,55Н, d), 8,49 и 8,47 (1Н, 2 х d), 7,41-7,19 (9Н, m), 5,67 (0,55Н, d), 5,43 (0,45Н, 20 s), 5,11-5,02 (1Н, m), 4,86-4,55 (3,5Н, m), 4,45-4,25 (1,5Н, m), 3,40-3,20 (1Н, m), 3,20-2,70 (2Н, m), 2,65-2,40 (1Н, m), 2,34 (3Н, s), 2,30-1,70 (5Н, m), 1,65-1,40 (2Н, m). Аналитически рассчитано для С29H32N4O7: С, 62,66; Н, 5,95; N, 10,08. Обнаружено: С, 62,91; Н, 6,00; N, 9,70. MC (ES+) 550 (М+ + 2, 43%), 549 (M+ + 1, 100), 374 (3), 280 (4), 279 (20), 118 (5).
(213s) выделяют как анти-изомер в виде пенистого твердого вещества белого цвета (0,64 г, 77%): т.пл. 137-41° С; [α ]
21 |
D |
(213t) выделяют в виде пенистого твердого вещества белого цвета (0,63 г, 80%): т.пл. 159-64° С; [α ]
21 |
D |
(213u) выделяют в виде твердого вещества белого цвета (81%): т.пл. 120-132° С; IR (KBr) 3361-3334, 1792, 1659, 1585, 1536, 1499, 1457, 1416, 1340, 1236, 1126, 989; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,39-7,29 (6Н, m), 7,12 (1H, s), 7,03 (1H, s), 6,92, 6,83, 6,48 (приблиз./3Н, 3d, J=8,1, 7,5, 8,1), 5,57 (d, 15 J=5,3), 5,27 (1H, s), 5,23-5,06, 4,91-4,71, 4,64-4,43 (6Н, 3m), 3,92, 3,91, 3,89, 3,88 (9Н, 4s), 3,32-2,70, 2,52-2,08, 1,91, 1,63 (1H, 4m),
(213v) выделяют в виде твердого вещества белого цвета (78%): т.пл. 121-7° С; IR (KBr) 3534-3331, 1791, 1659, 1528, 1420, 1256, 1122; 1Н ЯМР (СDСl3) δ 8,34-8,29 (1H, m), 7,98-7,87 (2Н, m), 7,68-7,45 (4Н, m), 7,34-7,24 (5Н, m), 7,04 (d, J=6,8), 6,78 (d, J=7,8), 6,66 (d, J=7,7), 6,48 (2Н, d, J=7,5). 5,56 (d, J=5,4), 5,15 (1H, s), 5,30-5,14, 5,0, 4,89 (d, J=11,2), 4,71-4,41 (6Н), 3,18-2,80, 2,50-2,27, 2,08-1,60 (11H, 3m).
(213w) выделяют как смесь диастереомеров (65/35) в виде твердого вещества белого цвета (0,9 г, 65%): т.пл. 110-115° С (разлож.); IR (KBr) 3409, 2945, 1792, 1658, 1606, 1534, 1486, 1420, 1330, 1276, 1209, 1122, 980, 960; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,66 (0,35H, d, J=6,9), 7,46-7,20 (7Н, m), 6,93 (0,35H, d, J=7,7), 6,85 (0,65H, d, J=7,6), 6,73 (0,65H, d, J=7,6), 5,96 (0,35Н, bs), 5,85 (0,65H, bs), 5,56 (0,65H, d, J=5,2), 5,28 (0,35Н, bs), 5,20-4,98 (2Н, m), 4,96-4,40 (4Н, m), 3,28-2,55 (3Н, m), 2,53-2,32 (1H, m), 2,23 (6Н, 2s), 2,03-1,40 (7Н, m), MC (ES+) 577, (ES+) 579.
(213х) выделяют в виде бесцветного порошка (691 мг, 86%): т.пл. 150-70° С; [α ]
22 |
D |
(415) получают тем же способом, что и соединение 214е, с образованием белого твердого вещества (297 мг, 84%): т.пл. 158-62° С; [α ]
24 |
D |
(450) получают тем же способом, что и соединение 214е с образованием белого пенистого твердого вещества (378 мг, 94%): т.пл. 175-9° С; [α ]
22 |
D |
(456) получают тем же способом, что и соединение 214е с образованием белого твердого вещества (0,73 г, 72%): т.пл. >260° С; [α ]
20 |
D |
(475) получают тем же способом, что и описанный для соединения 214е с образованием белого твердого вещества (79%): т.пл. 150° С (размягч.) 190-210° С; [α ]
23 |
D |
(404) получают тем же способом, что и соединение 214е с образованием белого твердого вещества (0,79 г, 86%): т.пл. 156-9° С; [α ]
25 |
D |
(486) получают тем же способом, что и соединение 214е с образованием белого твердого вещества (325 мг, 89%): т.пл. 165-9° С; [α ]
22 |
D |
(487) получают тем же способом, что и соединение 214е с образованием белого пенистого твердого вещества (335 мг, 93%): т.пл. 176-80° С; [α ]
22 |
D |
(417) получают по способу, подобному способу, описанному для получения соединения 214е с образованием твердого вещества белого цвета (0,63 г, 92%): т.пл. 145-155° С (приблиз./ не резко); [α ]
27 |
D |
(408) получают по способу, подобному способу, описанному для получения соединения 214е с образованием твердого вещества белого цвета (73%): т.пл. 157-165° С (не резко); [α ]
27 |
D |
(214w) получают тем же способом, что и соединение 214е с образованием 210 мг (62%) белого твердого вещества: т.пл. >260° С; [α ]
20 |
D |
(550q) синтезировали по способу, использующемуся для получения соединения 213е, с образованием 550q.
(213y) синтезировали по способу, использующемуся для получения соединения 213е, с образованием 213y.
(412а) синтезировали по способу, применяющемуся для получения соединения 550q, ииспользуя 513а-1, с образованием 412а.
(412b) синтезировали по способу, применяющемуся для получения соединения 550q, ииспользуя 513а-2, с образованием 412b.
(412с) синтезировали по способу, применяющемуся для получения соединения 550q, ииспользуя 513b-1, с образованием 412с.
(412d) синтезировали по способу, применяющемуся для получения соединения 550q, ииспользуя 513b-2, с образованием 412d: 1Н ЯМР (CDCl3) δ 9,5 (1H, d), 8,9 (1H, d), 8,5 (1H, d), 7,9-7,8 (2H, m), 7,8-7,65 (2H, m), 6,55 (1H, d), 5,55 (1H, d), 5,25-5,1 (2H, m), 4,75-4,65 (1H, m), 4,65-4,6 (1H, m), 4,4-4,3 (1H, m), 3,25-3,15 (1H, m), 3,15-3,05 (1H, m), 2,95-2,8 (2H, m), 2,55-2,4 (2H, m), 2,15-1,5 (14H, m).
(412e) синтезировали по способу, применяющемуся для получения соединения 550q, ииспользуя 513f-1, с образованием 412e.
(412f) синтезировали по способу, применяющемуся для получения соединения 550q, используя 513f-2, с образованием 412f.
Соединения 410 и 412 получают по способам, использующимся для получения соединения 605 из 604.
соединение | R1 |
502y, 410 | ![]() |
502z, 412 | ![]() |
(410) выделяют методом флэш-хроматографии (5-25% метанола в дихлорметане), получая 296 мг (94%) бесцветного твердого вещества: т.пл. 90-200° С; IR (КВr) 3338, 3096, 2950, 1787, 1726, 1657, 1546, 1420, 1279, 1258, 1125, 1092, 984, 933; 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 8,41 (1Н, d), 8,13 (1Н, d), 7,54-7,41 (3Н, m), 7,20 (1Н, d), 5,19-5,11 (1H, m), 4,54-4,30 (1Н, П1), 3,27 (1Н, m), 3,18-3,03 (1Н, m), 2,81-2,64 (2Н, m), 2,56-1,59 (7Н, m). Аналитически рассчитано для C19H22N4O7S· 2,5 Н2О: С, 46,05; Н, 5,49; N, 11,31. Обнаружено: С, 46,36; Н, 5,25; N, 11,10. МС (ES+) 449 (M - 1, 80%), 113 (100). Точная масса, рассчитанная для C19H23N4O7S (MH+) составляет: 451,1287. Обнаружено: 451,1295.
(412) получают по способу, подобному описанному для получения соединения 605, с образованием стеклоподобного твердого вещества белого цвета (69%): т.пл. 138-141° С; [α ]
23 |
D |
(502y) синтезируют по способу, использующемуся для получения соединения 604 из 603, с образованием бледно-кремового порошка: т.пл. 120-180° С; [α ]
23 |
D |
(502z) получают по способу, подобному описанному для получения соединения 604, с образованием бледно-желтого твердого вещества (90%): т.пл. 142-145° С; [α ]
24 |
D |
соединение | R4 | R1 |
415а | ![]() | ![]() |
415b | ![]() | ![]() |
415с | ![]() | ![]() |
214w-1 | ![]() | ![]() |
214w-2 | ![]() | ![]() |
214w-3 | ![]() | ![]() |
214w-4 | ![]() | ![]() |
214w-5 | ![]() | ![]() |
214w-6 | ![]() | ![]() |
214w-7 | ![]() | ![]() |
412g | ![]() | ![]() |
412h | ![]() | ![]() |
Соединения (415а), (415b), (415с), (214w-1), (214w-2), (214w-3), (214w-4), (214w-5), (214w-6), (214w-7), (412g) и (412h) синтезировали с помощью способов, использующихся для получения 550q.
(415) синтезировали по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001, с образованием 415.
(214w) синтезировали по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001, с образованием 214w.
![]() | |
соединение | R |
2100k | ![]() |
2100l | ![]() |
2100m | ![]() |
2100n | ![]() |
2100о | ![]() |
(2100k) получают с помощью способа, подобного способу получения соединения 213е, с образованием смеси диастереомеров (75/25) в виде твердого вещества белого цвета (258 мг, 83%): т.пл. 101° С; [α ]
25 |
D |
(2100l) получают тем же способом, что и соединение 213е (74%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. 172-80° С; [α ]
23 |
D |
(2100m) получают тем же способом, что и соединение 213е (76%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. ~140° С, повторная плавка 187-9° С; [α ]
23 |
D |
(2100n) получают с помощью способа, описанного для получения соединения 213е, с образованием белого стекловидного твердого вещества (76%): т.пл. 112-5° С; [α ]
23 |
D |
Соединение (2100о) (содержащее около 7% (2S)) получают по способу, подобному описанному для получения 213е, с образованием белого стекловидного твердого вещества (81%): т.пл. 115-7° С; [α ]
23 |
D |
(550n) получают по способу, подобному способу получения 213е, с образованием смеси диастереомеров (65/35) в виде рыжевато-коричневого порошка (390 мг, 28%): т.пл. 139-145° С; [α ]
23 |
D |
(550о) получают по способу, подобному способу получения 213е, с образованием бесцветного твердого вещества (1,071 г, 80%): т.пл. 155-70° С; [α ]
22 |
D |
(550р) получают по способу, подобному способу получения 213е, с образованием смеси диастереомеров в виде белой пены (820 мг, 47%): [α ]
24 |
D |
соединение | R |
503а 504а 286 | ![]() |
503b 504b 505b | ![]() |
503с 504с 505с | ![]() |
503d 504d 505d | ![]() |
503е 504е 505е | ![]() |
(503а) получают из 212b и (3S,4R) т-бутил(N-аллилоксикарбонил)-3-амино-4-гидрокси-5-(1-нафтоилокси)пентаноата по способу, описанному для получения соединения (213е), с образованием 533 мг (81%) не совсем белой пены: [α ]
22 |
D |
(504а) синтезируют из 503а по способу, использующемуся для получения 216е из 215е, с образованием 446 мг (91%) бесцветной пены: [α ]
21 |
D |
(286) получают из 504а по способу, описанному для получения 217, с образованием 356 мг (93%) белого порошка: т.пл. 120-123° С; [α ]
23 |
D |
(503b) синтезируют тем же способом, что и соединение 213е, получая не совсем белый порошок (671 мг, 88%): т.пл. 90-120° С; IR (KBr) 3345, 2977, 1727, 1664, 1532, 1450, 1423, 1369, 1323, 1310, 1276, 1257, 1154, 1101, 990, 766; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,61-7,55 (2Н, m), 7,51-7,42 (3Н, m), 6,86 (1Н, d), 5,69 (1Н, d), 5,21 (1Н, m), 4,64-4,38 (2Н, m), 4,15-4,05 (3Н, m), 3,84 (1Н, s), 3,31-3,14 (2Н, m), 2,97-2,87 (1Н, m), 2,94 (3Н, s), 2,76 (3Н, s), 2,64-2,48 (3Н, m), 2,39-2,29 (1Н, m), 2,04-1,61 (5Н, 10 m). Аналитически рассчитано для C31H41N5O11S· H2O: С, 52,46; Н, 6,11; N, 9,87; S, 4,52. Обнаружено: С, 52,34; Н, 5,92; N, 9,56; S, 4,44. MC (ES+) 714 (47%), 692 (M+ + 1, 84), 636 (100).
(504b) синтезируют тем же способом, что и соединение 216b, получая бесцветный порошок (601 мг, 93%): т.пл. 75-115° С; [α ]
23 |
D |
(505b) синтезируют тем же способом, что и соединение 217, получая бесцветный порошок (499 мг. 96%): т.пл. 95-145° С; [α ]
23 |
D |
(503с) синтезируют тем же способом, что и соединение 213е, получая бесцветный порошок (446 мг, 84%): IR (KBr) 3345, 2976, 2935, 1727, 1664, 1603, 1535, 1483, 1451, 1416, 1395, 1369, 1328, 1297, 1277, 1237, 1155, 1135, 1076, 990, 755; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,98-7,89 (1Н, m), 7,55-7,45 (1Н, m), 7,39-7,18 (3Н, m), 7,14-7,07 (1Н, m), 7,00-6,90 (3Н, m), 6,75 (1Н, d), 5,57-5,50 (1Н, m), 5,21-5,09 (1Н, m), 4,64-4,42 (2Н, m), 4,36-4,12 (3Н, m), 3,95-3,87 (1Н, m), 3,39-3,18 (1Н, m), 3,00-2,82 (1Н, 5 m), 2,95 (3Н, s), 2,69-2,48 (3Н, m), 2,42-2,28 (1Н, m), 2,07-1,62 (6Н, m), 1,42 (9Н, s). Аналитически рассчитано для С33Н42N4O11S· Н2O: С, 54,99; Н, 6,15; N, 7,77; S, 4,45. Обнаружено: С, 54,95; Н, 5,95; N, 7,34; S, 4,20. MC (ES+) 725 (26%), 720 (47), 703 (M+ + 1, 34), 433 (100), 403 (89).
(504с) синтезируют тем же способом, что и соединение 216е, получая бесцветный порошок: т.пл. 85-100° С; [α ]
22 |
D |
(505с) синтезируют тем же способом, что и соединение 217, получая бесцветную пену (252 мг, 72%): т.пл. 90-125° С; [α ]
23 |
D |
(503d) синтезируют тем же способом, что и соединение 213е, получая бесцветное твердое вещество (563 мг, 90%): IR (KBr) 3349, 2978, 2935, 1724, 1664, 1583, 1536, 1489, 1443, 1370, 1327, 1271, 1226, 1189, 1155, 1073, 990, 755; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,77 (1Н, d), 7,67 (1Н, m), 7,45-7,10 (6Н, m), 7,00 (2Н, d), 5,93-5,80 (1Н, m), 5,36-5,30 (1Н, m), 4,63-4,24 (5Н, m), 4,15-4,09 (1Н, m), 3,37-3,22 (1Н, m), 2,98-2,74 (1Н, m), 2,94 (3H, s), 2,70-2,47 (3H, m), 2,40-2,30 (1Н, m), 2,15-1,60 (5Н, m), 1,42 (9Н, s). Аналитически рассчитано для С33Н42N4O11S· Н2O: С, 54,99; Н, 6,15; N, 7,77; S, 4,45. Обнаружено: С, 54,60; Н, 5,88; N, 7,49; S, 4,50. MC (ES+) 725 (19%), 720 (91), 703 (M+ + 1, 74), 647 (76), 629 (100), 433 (78).
(504d) синтезируют тем же способом, что и соединение 216е, получая бесцветный порошок (466 мг, 85%): т.пл. 75-100° С; [α ]
22 |
D |
(505d) синтезируют тем же способом, что и соединение 217, получая бесцветную пену (353 мг, 73%): т.пл. 80-115° С; [α ]
23 |
D |
(503е) получают по способу, описанному для получения 213е, с образованием не совсем белого твердого вещества (70%): т.пл. 100-103° С; [α ]
25 |
D |
(504е) получают по способу, описанному для получения 216е, с образованием твердого вещества белого цвета (98%): т.пл. 91-98° С; [α ]
25 |
D |
(505е). Раствор соединения 217 (0,33 г, 0,51 ммоля) в сухом дихлорметане (3 мл) охлаждают (лед/вода), защищая от попадания влаги. При перемешивании добавляют трифторуксусную кислоту (2 мл). После удаления охлаждающей бани раствор выдерживают 2 часа при комнатной температуре и концентрируют в вакууме. Остаток упаривают три раза из дихлорметана, перетирают с диэтиловым эфиром и фильтруют. Твердое вещество очищают методом флэш-хроматографии (силикагель, 0-6% метанол в дихлорметане), получая продукт в виде белого стекловидного твердого вещества (0,296 г, 98%): т.пл. 110-122° С; [α ]
22 |
D |
соединение | R1 |
506а | PhC (O)- |
507а | |
506b | MeS (O)2- |
507b | |
506с | МеОС (О)- |
507с | |
506g | СН3С (О)- |
507g |
(506а). Раствор соединения 212е (321 мг, 0,929 ммоля) и (3S) т-бутил 3-амино-5-диазо-4-оксопентаноата (198 мг, 0,929 ммоля) в дихлорметане (3 мл) охлаждают до 0° С и добавляют N,N-диизопропилэтиламин (0,16 мл, 1,86 ммоля) и [2- (1Н-бензотриазол-1-ил)]-1,1,3,3-тетраметил-уроний тетрафторборат (328 мг, 1,02 ммоля). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, разбавляют этилацетатом и промывают 1М NaHSO4 (x2), водным раствором NаНСО3 (х2), нас. солевым раствором, высушивают над сульфатом магния и упаривают. После хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом, получают 506а (425 мг, 85%) в виде бесцветной пены: [α ]
23 |
D |
(506b) получают тем же способом, что и соединение 506а. 74% в виде желто-оранжевого твердого вещества: т.пл. 75° С (разлож.); [α ]
20 |
D |
(506с) получают тем же способом, что и соединение 506а, с образованием бледно-желтой пены (405 мг, 82%): [α ]
20 |
D |
(506g) получают тем же способом, что и соединение 506а. 81%: [α ]
28 |
D |
(507а). Раствор соединения 506а (3,0 г, 5,55 ммоля) в сухом дихлорметане (40 мл) охлаждают до 0° С и в течение 4 мин по каплям добавляют 30% раствор бромистоводородной кислоты в уксусной кислоте (1,1 мл, 5,55 ммолей). Смесь перемешивают 9 мин при 0° С и гасят водным раствором бикарбоната натрия. Продукт экстрагируют этилацетатом, промывают водным раствором бикарбоната натрия, нас. солевым раствором, высушивают (MgSO4) и упаривают, получая 2,97 г (92%) в виде бесцветной пены: [α ]
23 |
D |
(507b) получают тем же способом, что и соединение 507а. (68%) в виде оранжевой пены: [α ]
20 |
D |
(507с) получают тем же способом, что и соединение 507а, с образованием бледно-желтой пены (320 мг, 78%): [α ]
20 |
D |
(507g) получают тем же способом, что и соединение 507а, с образованием бледно-желтой пены (84%): [α ]
22 |
D |
соединение | R |
508а 284 | ![]() |
508b 285 | ![]() |
(508а). К раствору соединения 506с (547 мг, 1 ммоль) в DMF (4 мл) добавляют фторид калия (145 мг, 2,5 ммолей, 2,5 экв.). После 10 мин перемешивания при комнатной температуре добавляют 2,6-дихлорбензойную кислоту (229 мг, 1,2 ммоля, 1.2 экв.). Реакционную смесь выдерживают 3 часа при комнатной температуре, затем добавляют этилацетат (30 мл). Раствор промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (30 мл), нас. солевым раствором, высушивают над MgSO4 и концентрируют в вакууме, получая 590 мг (90%) бледно-желтой пены: [α ]
22 |
D |
(284) синтезируют из 508а по способу, использующемуся для получения 505 из 504, с образованием 330 мг (65%) твердого вещества белого цвета: т.пл. 115° С (разлож.); [α ]
20 |
D |
(508b) синтезируют тем же способом, что и соединение 508а, получая бледно-желтую пену (460 мг, 82%): [α ]
22 |
D |
(285) синтезируют тем же способом, что и соединение 284, получая твердое вещество белого цвета (303 мг, 78%): т.пл. 110° С (разлож.); [α ]
20 |
D |
соединение | R |
509а 510а | ![]() |
509b 280 | ![]() |
509с 283 | ![]() |
509d 510d | ![]() |
(510а). Раствор соединения 506а (2,27 г, 4,2 ммолей) в сухом дихлорметане (50 мл) обрабатывают 30% раствором бромистоводородной кислоты в уксусной кислоте (1,84 мл, 9,2 ммолей, 2,2 экв.) при 0° С в атмосфере азота. После 10 мин перемешивания при 0° С реакция завершается и в среде выкристаллизовывается твердое вещество белого цвета. Твердое вещество отфильтровывают и промывают этилацетатом и диэтиловым эфиром, получая 2,20 г (100%) [3S(1S,9S)]5-бром-3-(9-бензоиламино-6,10-диоксо-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоксамидо)-4-оксопентановой кислоты, которую используют без дополнительной очистки: 1H-ЯМР (D6-DMSO) δ 8,87 (1H, d, J=7,3), 8,63 (1H, d, J=7,6), 7,91-7,87 (2H, m), 7,60-7,44 (3H, m), 6,92 (1Н, bs), 5,14-5,09 (1H, m), 4,92-4,65 (2H, m), 4,43 (2H, АВ), 4,41-4,35 (1H, m), 3,33-3,22 (1H, m), 2,98-2,90 (1H, m), 2,89-2,57 (2H, m), 2,35-15 2,15 (3H, m), 1,99-1,91 (2H, m), 1,75-1,60 (2H, m). Раствор бромкетона (535 мг, 1 ммоль) в сухом DMF (10 мл) обрабатывают фторидом калия (150 мг, 2,5 ммолей, 2,5 экв.) в атмосфере азота. После 5 мин перемешивания при комнатной температуре добавляют 2-меркаптотиазол (140 мг, 1,2 ммоля, 1,2 экв.). Реакционную смесь выдерживают в течение ночи и добавляют этилацетат (150 мл) затем органическую фракцию промывают нас. солевым раствором, высушивают над сульфатом магния и упаривают под вакуумом. Остаток кристаллизуют из диэтилового эфира, фильтруют и очищают на силикагеле, используя градиент МеОН (от 0% до 5%) в дихлорметане. После упаривания получают 344 мг (60%) твердого вещества белого цвета: т.пл. 90-95° С (разлож.); [α ]
20 |
D |
Аналитически рассчитано для C25H27N5O4S2·H2O: С, 50,75; Н, 4,94 N, 11,84. Обнаружено: С, 51,34; Н, 4,70; N, 11,58. МС (ES+) 572.
(509b). Раствор соединения 507а (100 мг, 0,17 ммоля) в сухом диметилформамиде (1,5 мл) обрабатывают 1-фенил-1Н-тетразол-5-тиолом (33 мг, 0,187 ммоля) и фторидом калия (15 мг, 0,34 ммоля). Смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре, разбавляют этилацетатом, промывают водным раствором бикарбоната натрия (х2), нас. солевым раствором, высушивают (MgSO4) и упаривают. Продукт очищают методом флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом, с образованием 103 мг (88%) бесцветной пены: [α ]
23 |
D |
(280) синтезируют по способу, использующемуся для получения 505 из 504. Раствор соединения 509b (98 мг, 0,142 ммоля) в дихлорметане (1 мл) охлаждают до 0° С и добавляют трифторуксусную кислоту (1 мл). Смесь перемешивают 15 мин при 0° С и 30 мин при комнатной температуре, затем упаривают при пониженном давлении. Остаток перетирают с сухим толуолом и упаривают. Хроматографируют на силикагеле, элюируя 10% метанолом в дихлорметане, и получают бесцветное стеклоподобное вещество, которое кристаллизуют из смеси дихлорметан/диэтиловый эфир, с образованием 62 мг (69%) бесцветного твердого вещества: т.пл. 145° С (разлож.); [α ]
22 |
D |
(509с) получают тем же способом, что и соединение 509b, с образованием бесцветного стеклоподобного вещества (34%): [α ]
22 |
D |
(283) получают тем же способом, что и соединение 280, с образованием бесцветной пены (100%): т.пл. ~125° С; [α ]
19 |
D |
(509d) синтезируют тем же способом, что и соединение 509b, получая бесцветное твердое вещество (49,6 мг, 82%): 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,02 (1H, s), 7,95-7,86 (1H, m), 7,84-7,76 (2Н, m), 7,62-7,35 (4H, m), 7,22-7,07 (1H, m), 6,43 (1H, d), 5,26-5,08 (2Н, m), 5,03-4,72 (3H, m), 4,66-4,50 (1H, m), 3,43-3,19 (1H, m), 3,15-2,97 (1H, m), 2,86-2,72 (3H, m), 2,48-2,31 (1H, m), 2,18-1,60 (6Н, m), 1,43 (9Н, s).
(510d) синтезируют тем же способом, что и соединение 280, получая бесцветное твердое вещество (25,7 мг, 57%): т.пл. 140-80° С; IR (KBr) 3391, 2945, 1733, 1664, 1530, 1422, 1363, 1277, 1259, 1204; 1Н ЯМР (CD3OD) δ 8,23 (1Н, s), 7,94 (1Н, d), 7,87 (2Н, d), 7,54-7,42 (3H, m), 6,48 (1Н, d), 5,22-5,15 (1Н, m), 4,57-4,46 (1Н, m), 3,62-3,41 (1Н, m), 3,22-3,13 (1Н, m), 3,02-2,81 (2Н, m), 2,70-1,80 (6Н, m). Аналитически рассчитано для С26Н28N6O8·1,5Н2O: С, 54,30; Н, 5,35; N, 14,61. Обнаружено: С, 54,14; Н, 5,35; N, 13,04. MC (ES+) 551 (M - 1, 100%). Точная масса, рассчитанная для C26H29N6O8S (MH+), составляет 553,2047. Обнаружено: 553,2080.
соединение | R |
504f 505f | ![]() |
504g 280b | ![]() |
504h 283b | ![]() |
(505f) получают тем же способом, что и соединение 508а, используя 507b и 3-хлор-2-гидрокси-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, затем сразу гидролизуют 504f трифторуксусной кислотой, получая рыжевато-коричневый порошок (65 мг, 30%): [α ]
20 |
D |
(504g) получают тем же способом, что и соединение 509b, (83%) в виде бесцветной пены: [α ]
23 |
D |
(280b) получают тем же способом, что и соединение 280, (100%) в виде бесцветной пены: т.пл. 120-5° С; [α ]
25 |
D |
(504h) получают тем же способом, что и соединение 509b (24%) в виде бесцветной пены: [α ]
23 |
D |
(283b) получают тем же способом, что и соединение 280, (100%) в виде бесцветной пены: т.пл. 120-5° С; [α ]
25 |
D |
соединение | R |
508с 511с | ![]() |
508d 280с | ![]() |
508е 283с | ![]() |
(508с) получают тем же способом, что и соединение 509b, с образованием 544 мг (97%) бледно-желтой пены: [α ]
20 |
D |
(511с) получают тем же способом, что и соединение 280 с образованием 370 мг (79%) белого порошка: т.пл. 105° С (разл.); [α ]
22 |
D |
(508d) синтезируют тем же способом, что и соединение 509b, получая бесцветное твердое вещество (269 мг, 87%): т.пл. 80-110° С; [α ]
23 |
D |
(280с) синтезируют тем же способом, что и соединение 280, получая бледно-кремовое вещество (203 мг, 88%): т.пл. 105-130° С; [α ]
22 |
D |
(508е) синтезируют тем же способом, что и соединение 509b, получая бледно-оранжевое твердое вещество (199 мг, 25%): т.пл. 80-120° С; [α ]
23 |
D |
(283с) синтезируют тем же способом, что и соединение 280, получая не совсем белый порошок (167 мг, 98%): т.пл. 90-105° С; [α ]
22 |
D |
соединение | R |
512а 280d | ![]() |
512b 283d | ![]() |
(512a) получают тем же способом, что и соединение 509b, в виде бесцветной пены (83%): [α ]
23 |
D |
(280d) получают тем же способом, что и соединение 280, в виде бесцветной пены (77%): [α ]
22 |
D |
(512b) получают тем же способом, что и соединение 509b, в виде бесцветной пены: IR (KBr) 3333, 1727, 1661, 1542, 1427, 1369, 1279, 1257, 1232, 1156; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,30 (2Н, m), 7,20 (3H, m), 6,45 (1H, d, J=7,4), 5,17 (1H, m), 4,91 (3H, m), 4,55 (1H, m), 3,27 (1H, m), 3,14-2,70 (4H, m), 2,41 (1H, m), 2,04 (3H, s), 2,10-1,65 (6H, m), 1,44 (9H, s).
(283d) получают тем же способом, что и соединение 280, в виде бесцветной пены (100%): [α ]
22 |
D |
(245b) получают из (1S,9R) 9-бензоиламино-1,2,3,4,7,8,9,10-октагидро-10-оксо-6Н-пиридазино[1,2-а][1,2]диазепин-1-карбоновой кислоты по способу, описанному для получения соединения 245, с образованием 416 мг (85%) бесцветной пены (смесь диастереомеров ~ 1:1): IR (KBr) 3392, 3302, 2942, 1792, 1642, 1529, 1520, 1454, 1119; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,79 (2Н, m), 7,51-7,09 (10Н, m), 5,52 (0,5H, d, J=5,3), 5,51 (0,5H, s), 5,36 (1H, m), 4,84 (1H, m), 4,74-4,59 (1,5Н, m), 4,51 (1H, m), 4,38 (0,5H, m), 3,22-2,83 (5Н, m), 2,51 (1H, m), 2,25 (2Н, m), 2,01-1,46 (6H, m). Аналитически рассчитано для C28H32N4O6·0,75H2O: С, 62,97; Н, 6,32; N, 10,49. Обнаружено: С, 63,10; Н, 6,16; N, 10,21. MC (ES+) 521 (M + 1, 100%).
(246b) получают из 245b по способу, описанному для получения соединения 246, с образованием 104 мг (33%) белого порошка: т.пл. 115-119° С; [α ]
24 |
D |
Соединения 513a-j получают по описанной ниже схеме.
соединение | R |
513а | ![]() |
513а-1 | ![]() |
513а-2 | ![]() |
513b | ![]() |
513b-1 | ![]() |
513b-2 | ![]() |
513с | ![]() |
513d | ![]() |
513e | ![]() |
513f | ![]() |
513f-l | ![]() |
513f-2 | ![]() |
(513а) получают тем же способом, что и соединение 513d/e, с образованием смеси диастереомеров (670 мг, 50%) в виде масла: IR (KBr) 3331, 2946, 1790, 1723, 1713, 1531, 1329, 1257, 1164, 1120, 1060, 977, 937, 701; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,36-7,18 (5H, m), 5,99-5,83 (1Н, m), 5,41-5,34 (2Н, m), 5,28-5,18 (2Н, m), 4,59-4,56 (2Н, m), 4,32-3,96 (2Н, m), 3,85-3,73 (1Н, m), 3,02-2,76 (3H, m), 2,49-2,34 (1H, m).
(513b) получают как и соединение 513d/e, с образованием 8 г (51%) смеси диастереомеров в виде прозрачного масла: [α ]
20 |
D |
(513с) синтезируют тем же способом, что и соединение 513d/e, получая единственный изомер (20%) в виде бледно-желтого масла: [α ]
24 |
D |
(513d) и (513d/e) получают по способу, описанному Chapman Biorg. & Med. Chem. Lett., 2, pp. 615-618 (1992)]. После экстракции этилацетатом и промывания NаНСО3, продукт высушивают (MgSO4), фильтруют и упаривают, получая масло, которое содержит продукт и бензиловый спирт. Добавляют гексан (200 мл) (используют 200 мл гексана на каждые 56 г AllocAsp (CO2tBu)CH2OH), смесь перемешивают и охлаждают в течение ночи. Получают маслянистое твердое вещество. Жидкость декантируют и оставляют для хроматографии. Маслянистый остаток растворяют в этилацетате и упаривают, получая масло, которое кристаллизуют из 10% раствора этилацетата в гексане (~ 500 мл). Твердое вещество фильтруют, получая 513d (12,2 г, 19%): т.пл. 108-110° С; [α ]
24 |
D |
Жидкие фракции объединяют и упаривают, получая масло (~ 200 г), содержащее бензиловый спирт. Добавляют смесь гексан/этилацетат (9:1, 100 мл) и продукт очищают методом хроматографии, элюируя 10% раствором этилацетата в гексане для удаления избытка бензилового спирта, и затем смесью дихлорметан/гексан (1:1, содержащей 10% этилацетата). В результате получают соединение 513е, содержащее некоторое количество 513d (20,5 г, 32%): т.пл. 45-48° С; [α ]
24 |
D |
(513f) синтезируют тем же способом, что и соединение 513d/e, получая бесцветное масло (152 мг, 79%): IR (пленка) 3334, 2983, 2941, 1783, 1727, 1713, 1547, 1529, 1422, 1378, 1331, 1313, 1164, 1122, 1060, 938; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 6,09-5,82 (2Н, m), 5,50-5,18 (3H, m), 4,64-4,54 (2Н, m), 4,27-4,16 (1Н, m), 3,95-3,78 (1Н, m), 3,73-3,56 (1Н, m), 3,05-2,77 (1Н, m), 2,56-2,37 (1Н, m), 1,35-10 1,17 (4Н, m). Аналитически рассчитано для С10Н15NO5: С, 52,40; Н, 6,60; N, 6,11. Обнаружено: С, 52,16; Н, 6,62; N, 5,99. MC (ES+) 229 (М+ + 1, 100%).
(513g). 4-Диметиламино-пиридин (76,0 мг, 622 ммолей) добавляют к раствору 2-феноксибензоил хлорида (579 мг, 2,49 ммолей) и соединения 517 (600 мг, 2,07 ммоля) в пиридине (10 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов, затем добавляют нас. солевой раствор (25 мл) и экстрагируют этилацетатом (30 мл, 20 мл). Объединенные органические экстракты промывают 1М хлористоводородной кислотой (3× 25 мл), насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (2× 25 мл) и нас. солевым раствором (25 мл), высушивают (MgSO4) и концентрируют. Бледно-оранжевое масло очищают методом колоночной хроматографии (1-10% ацетона в дихлорметане), получая 447 мг (44%) бесцветного масла: IR (пленка) 3375, 2980, 1721, 1712, 1602, 1579, 1514, 1484, 1451, 1368, 1294, 1250, 1234, 1161, 1137, 1081, 754; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,98-7,93 (1Н, m), 7,50-7,41 (1Н, m), 7,35-7,25 (2Н, m), 7,22-7,03 (3H, m), 6,95 (3H, d), 5.95-5,76 (1H, m), 5,57 (1Н, d), 5,30-5,13 (2Н, m), 4,51 (2Н, d), 4,25 (2Н, d), 4,18-4,04 (1Н, m), 3,88 (1Н, m), 3,50 (1Н, m), 2,51 (2Н, m), 1,41 (9Н, s), MS (ES+) 508 (57%), 503 (76), 486 (M+ + 1, 45), 468 (27), 412 (100). Точная масса, рассчитанная для С26Н32NО8 (МH+), составляет: 486,2128. Обнаружено: 486,2158.
(513h) получают из (3S,4R) т-бутил(N-аллилоксикарбонил)-3-амино-4,5-дигидроксипентаноата по способу, описанному для 513g, получая 562 мг (85%) бесцветного масла: IR (пленка) 3418, 2980, 1722, 1711, 1512, 1368, 1278, 1245, 1198, 1157, 1139; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,90 (1Н, d, J=8,6), 8,21 (1Н, dd, J 1,2, 7,3), 8,04 (1Н, d, J=8,2), 7,89 (1H, dd, J=1,5, 7,9), 7,67-7,46 (3H, m), 5,88 (1H, m), 5,49 (1H, d, J=15 9,0), 5,35-5,18 (2H, m), 4,57-4,46 (4Н, m), 4,19 (2H, m), 2,67 (2Н, m), 1,40 (9Н, s). Аналитически рассчитано для C24H29NO7: С, 65,00; Н, 6,59; N, 3,16. Обнаружено: С, 64,74; Н, 6,56; N, 3,09. MC (ES+) 466 (M+Na, 100%), 444 (М + 1, 39), 388 (44).
(513i) получают тем же способом, что и соединение 513g, с образованием бесцветного масла (569 мг, 85%): IR (пленка) 3400, 1723, 1712, 1584, 1528, 1489, 1443, 1367, 1276, 1232, 1190, 1161, 1098, 1074, 995, 755; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,65-8,59 (1H, d), 7,84-7,66 (2H, m), 7,45-7,11 (5Н, m), 7,05-6,97 (2H, m), 6,00-5,78 (1H, m), 5,54-5,14 (2H, m), 4,62-4,52 (2H, m), 4,42-4,32 (2H, m), 4,08-4,22 (2H, m), 2,78-2,47 (2H, m), 1,44 (9Н, s), MS (ES+) 508 (100%), 486 (M+ + 1, 33). Точная масса, рассчитанная для C26H32NO8 (MH+), составляет: 486,2128. Обнаружено: 486,2121.
(513j) синтезируют тем же способом, что и соединение 513g, получая бледно-оранжевое масло (905 мг, 91%): IR (пленка) 3418, 3383, 2980, 1722, 1711, 1601, 1517, 1450, 1424, 1368, 1308, 1252, 1154, 1100, 994, 767, 698; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,62-7,55 (2H, m), 7,51-7,42 (3H, m), 5,98-5,76 (1H, m), 5,33-5,18 (2H, m), 4,53 (2H, d), 4,18 (2H, d), 3,91 (1H, m), 3,80 (1H, m), 2,76 (3H, s), 2,5010 (2H, m), 1,43 (9Н, s). Аналитически рассчитано для С24Н30N2O8·0,5Н2O: С, 59,62; Н, 6,46; N, 5,79. Обнаружено: C, 59,46; Н, 6,24; N, 5,72. MC (ES+) 497 (100%), 475 (M+ + 1, 15), 419 (48).
(514) получают по способу, описанному в Н.Matsunaga, et al., Tetrahedron Letters 24, pp. 3009-3012 (1983), как чистый диастереомер (60%), в виде масла: [α ]
23 |
D |
(516). Соединение 514 (3,02 г, 9,00 ммолей) и 10% палладий на угле (300 мг) в этаноле (30 мл) перемешивают 2 часа под током водорода. Суспензию фильтруют через целлит и 0,45 мм мембранный фильтр, фильтрат концентрируют, получая соединение 515 в виде бесцветного масла (2,106 г, 95%), которое используют без дальнейшей очистки. Это масло (1,93 г, 7,88 ммолей) растворяют в воде (10 мл) и добавляют 1,4-диоксан и гидрокарбонат натрия (695 мг, 8,27 ммолей). Смесь охлаждают до 0° С и по каплям добавляют аллил хлорформат (1,04 г, 919 мл, 8,66 ммолей). Через 3 часа смесь экстрагируют эфиром (2× 50 мл). Объединенные эфирные экстракты промывают водой (2× 25 мл) и нас. солевым раствором (25 мл), высушивают (MgSO4) и концентрируют, получая бесцветное масло. После колоночной флэш-хроматографии (10-35% этилацетата в гексане) получают бесцветное твердое вещество (2,69 г, 95%): т.пл. 64-5° С; [α ]
23 |
D |
(517). Раствор соединения 516 (2,44 г, 7,41 ммолей) в 80% водном растворе уксусной кислоты (25 мл) перемешивают 24 часа при комнатной температуре, затем концентрируют и подвергают азеотропной перегонке с толуолом (2× 25 мл). Остаток обрабатывают нас. солевым раствором (25 мл) и экстрагируют этилацетатом (2× 25 мл). Органические фракции высушивают (MgSO4) и концентрируют, получая бесцветное масло. После флэш-хроматографии (20-80% этилацетата в дихлорметане) получают бесцветное твердое вещество (1,99 г, 90%): т.пл. 74-5° С; [α ]
25 |
D |
Пример 30
Соединения 1105-1125 получают по способам, описанным ниже. Физические характеристики перечислены в Таблице 24.
Стадия А. Синтез соединения 401. Смолу TentaGel S® NH2 помещают в металлокерамический сосуд для встряхивания и промывают диметилацетамидом (3× 15 мл). Соединение 400 (1,36 г, 2,3 ммолей) растворяют в DMA (10 мл) и добавляют O-бензотриазол-N,N,N,N’-тетраметилуроний гексафторфосфат (HBTU; 0,88 г, 2,3 ммолей) и DIEA (0,8 мл, 4,6 ммолей). Раствор переносят на смолу и затем добавляют 5 мл DMA. Реакционную смесь перемешивают 1,5 часа при комнатной температуре, используя кистевой встряхиватель. Смолу фильтруют и промывают диметилацетамидом (4× 15 мл).
Стадия В. Синтез 1102. Со смолы 401 удаляют защитные группы с помощью 20% (об./об.) пиперидин/диметилацетамида (15 мл) в течение 10 мин (встряхивание) и затем еще 10 мин со свежим пиперидиновым реагентом (15 мл). После чего смолу промывают диметилацетамидом (6× 15 мл) и затем N-метилпирролидоном (2× 25 мл).
Соединение 1101 (0,979 г, 2,11 ммолей) растворяют в диметилацетамиде (8 мл). Добавляют HBTU (0,81 г, 2,1 ммолей) и DIEA (0,75 мл, 4,3 ммолей), раствор добавляют к смоле, после него добавляют диметилацетамид (4 мл). Реакционую смесь перемешивают 2 часа при комнатной температуре с помощью кистевого встряхивателя. Обработку смолы проводят так, как описано для 401, с образованием 1102.
Стадия С. Синтез 1103. Это соединение получают из смолы 1102 (0,040 ммолей), используя множественный пептидный синтезатор Advanced ChemTech 396. Автоматические циклы состоят из промыва смолы диметилформамидом (2× 1 мл), снятия защитных групп в 25% (об./об.) растворе пиперидина в диметилформамиде (1 мл) в течение 3 мин и затем в течение еще 10 мин в свежем реагенте (1 мл), с образованием
смолы 1103. Смолу промывают диметилформамидом (3× 1 мл) и N-метилпирролидоном (3× 1 мл).
Смолу ацилируют раствором 0,4М карбоновой кислоты и 0,4М НОВТ в N-метилпирролидоне (0,5 мл), раствором 0,4М HBTU в N-метилпирролидоне (0,5 мл) и раствором 1,6М DIEA в N-метилпирролидоне (0,25 мл) и реакционную смесь перемешивают 2 часа при комнатной температуре. Стадию ацилирования повторяют. Наконец, смолу промывают N-метилпирролидоном (1× 1 мл), диметилформамидом (4× 1 мл), дихлорметаном (5× 1 мл) и высушивают под вакуумом. Альдегид отщепляют от смолы и проводят общее снятие защитных групп путем обработки 95% TFA/5% H2O (об./об., 1,5 мл) в течение 30 мин при комн. температуре. После промывания смолы расщепляющим реагентом (1 мл) объединенные фильтраты добавляют к холодной смеси 1:1 эфир:гексан (10 мл) и получившийся осадок выделяют центрифугированием и декантацией. Получившийся осадок растворяют в смеси 10% ацетонитрил/90% Н2O/0,1% TFA (5 мл) и лиофилизируют, получая неочищенный продукт 1105-1125 в виде белого порошка. Это соединение очищают методом полу-препаративной RP-HPLC на колонке Rainin Microsorb™ С 18 (5 μ , 21,4× 250 мм), элюируя линейным градиентом ацетонитрила (8% 48%), содержащим 0,1% TFA (об./об.), в течение 30 мин при скорости потока 12 мл/мин. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют и лиофилизируют, получая 1105-1125 (10,8 мг, 63%).
Аналитические методы ВЭЖХ:
(1) Waters DeltaPak С 18, 300 (5μ , 3,9× 150 мм). Линейный градиент ацетонитрила (0% 25%), содержащий 0,1% TFA (об./об.) в течение 14 мин при скорости потока 1 мл/мин.
(2) Waters DeltaPak C18, 300 (5μ , 3,9× 150 мм). Линейный градиент ацетонитрила (5% 45%), содержащий 0,1% TFA (об./об.) в течение 14 мин при скорости потока 1 мл/мин.
(259b) синтезируют по способу, использующемуся для получения 259 из 258, с образованием воскоподобного твердого вещества (87 г, 51%): т.пл. 54-55° С; IR (пленка)
3324, 2978, 1732, 1713, 1455, 1367, 1277, 1254, 1171; 1Н ЯМР (СDCl3) δ 7,35 (5H, m), 6,15 (1Н, bs), 5,13 (2Н, s), 3,15 (2Н, t, J=6,5), 2,54 (2Н, t, J=6,5), 1,45 (9Н, s). Аналитически рассчитано для C15H22N2O3: С, 61,21; Н, 7,53; N, 9,52. Обнаружено: С, 61,29; Н, 7,51; N, 9,51. MC (ES+)295 (M+ + 1).
(260b) синтезируют по способу, использующемуся для получения 260 из 259 с образованием смолы (81 г), которую используют в следующей стадии без очистки. Аналитические данные для чистого образца: IR (пленка) 3318, 2976, 1733, 1451, 1412, 1393, 1366, 1256, 1161; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,34 (10Н, m), 6,68 (0,5H, bs), 5,11 (4Н, m), 4,63 (0,5Н, bs), 4,14 (1Н, m), 3,53 (2Н, m), 3,08 (1Н, m), 2,63 (2Н, m), 2,10-1,60 (4Н, m), 1,60-1,35 (19H, m+2xs).
(261b), синтезируют по способу, использующемуся для получения 261 из 260, получая смолу, которую очищают методом флэш-хроматографии (1:1 этилацетат/дихлорметан), получая указанное в заголовке соединение 261b (36,0 г, 79,4% после 2 стадий): IR (пленка) 3267, 2979, 2937, 1728, 1668, 1394, 1369, 1245, 1159; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 7,6 (1Н, bs), 6,8 (1Н, 20 vbs), 4,47 (1Н, bs), 3,73 (2Н, bs), 2,98 (1Н, bs), 2,66 (3H, n), 2,04 (1Н, bs), 1,84 (1H, m), 1,6-1,2 (21Н, m+ s).
(262b) синтезируют по способу, использующемуся для получения 262 из 261, с образованием указанного в заголовке соединения 262b (18,6 г, 54%) в виде масла: [α ]
20 |
D |
(518). Соединение 262b (2,43 г, 6,1 ммолей) растворяют в 1М растворе хлористого водорода в этилацетате (30 мл) и перемешивают 20 часов при комнатной температуре. Добавляют твердый бикарбонат натрия (4 г, 46,5 ммолей) и 20 мл воды, смесь перемешивают 5 мин до разделения, и водную фракцию экстрагируют этилацетатом. Объединенный органический раствор промывают водой, нас. солевым раствором, высушивают (MgSO4) и концентрируют. После очистки методом флэш-хроматографии (50% этилацетат в дихлорметане - 100% этилацетат) получают чистый продукт 518 (1,08 г, 59%) в виде нестабильного масла: [α ]
20 |
D |
(520). Соединение 519 (9,4 г, 35,6 ммолей) суспендируют в метаноле (230 мл) и охлаждают до 0° С в ледяной бане. Добавляют по каплям тионил хлорид (3 мл, 4,89 г, 41,1 ммолей) в течение 30 мин и смесь перемешивают 48 часов при температуре окружающей среды. Растворитель удаляют под вакуумом при 30° С и маслянистый остаток растворяют в этилацетате (500 мл). Органический раствор промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и нас. солевым раствором, высушивают (MgSO4) и концентрируют, получая соединение 520 (7,84 г, 79%) в виде масла: [α ]
22 |
D |
(521). Используя метод, подобный описанному выше для соединения 260, получают соединение 521, 96% в виде неочищенного масла: [α ]
22 |
D |
(522). Используя метод, подобный описанному выше для соединения 261, получают соединение 522, 92% в виде твердого вещества белого цвета: т.пл. 146-148° С (разлож.); [α ]
22 |
D |
(523). Соединение 522 (7,15 г, 19,1 ммолей) растворяют в дихлорметане (100 мл), содержащем диметилформамид (0,5 мл), и охлаждают до 0° С. Добавляют тионил хлорид (1,6 мл, 2,61 г, 22 ммоля) и N-этилморфолин (4,86 мл, 440 мг, 38,2 ммолей) и смесь перемешивают 2 часа. Органическую смесь промывают 2М раствором бисульфата натрия (50 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл) и нас. солевым раствором (50 мл), высушивают (MgSO4) и концентрируют. Остаток перетирают с эфиром, получая соединение 523 в виде твердого вещества белого цвета (5,73 г, 84%): т.пл. 186-188° С (разлож.); [α ]
22 |
D |
(524) синтезируют из 523 по способу, использующемуся для получения 518.
Соединения 262a-k по способам, использующимся для получения 211b-f.
![]() | |
262a-k | 263a-k |
соединение | R |
262a 263а | ![]() |
262b 263b | ![]() |
262с 263с | ![]() |
262d 263d | ![]() |
262e 263е | ![]() |
262f 263f | ![]() |
262g 263g | ![]() |
262h 263h | ![]() |
262i 263i | ![]() |
262j 263j | ![]() |
262k 263k | ![]() |
(262а). Получают 443 мг (91%) указанного в заголовке соединения: т.пл. 56-7° С; [α ]
25 |
D |
(262с) Получают 120 мг (80%) бесцветной пены: [α ]
22 |
D |
(262d) (81%) получают в виде бесцветной пены: [α ]
22 |
D |
(262е) получают в виде белого пенистого твердого вещества (155 мг, 53%): т.пл. 53-7° С; [α ]
22 |
D |
(262f) получают в виде твердого вещества белого цвета (273 мг, 93%): т.пл. 102-6° С; [α ]
22 |
D |
(262g) (13 г) получают в виде твердого вещества белого цвета (298 мг, 70%): т.пл. 138-43° С; [α ]
23 |
D |
(262h) получают в виде твердого вещества белого цвета (325 мг, 73%): т.пл. 209-12° С; [α ]
24 |
D |
(262i) получают в виде белого стеклоподобного твердого вещества (76%): т.пл. 85-9° С; [α ]
25 |
D |
(262j) получают в виде белого кристаллического твердого вещества (79%): т.пл. 182-3° С (разлож.); [α ]
22 |
D |
(262k) (83%) получают: [α ]
22 |
D |
Соединения 263a-k синтезируют с помощью способов, использующихся для получения 212b-f.
(263а) 348 мг (94%) получают в виде белого пенистого твердого вещества: т.пл. [α ]
21 |
D |
(263b). 200 мг (100%) получают в виде твердого вещества белого цвета: т.пл. 155° С; [α ]
20 |
D |
(263с) 216 мг, (100+%) получают в виде бесцветной пены: [α ]
23 |
D |
(263d) (100+%) получают в виде бесцветной пены: [α ]
24 |
D |
(263е) получают в виде белого пенистого твердого вещества (117 мг, 98%): т.пл. 109-14° С; [α ]
24 |
D |
(263f) получают в виде белого пенистого твердого вещества (199 мг, 92%): т.пл. 149-52° С; [α ]
24 |
D |
Аналитически рассчитано для С16Н19N5O5·0,75Н2O: С, 51,26; Н, 5,51; N, 18,68. Обнаружено: С, 51,11; Н, 5,23; N, 18,42. МС (ES+); 361 (М+, 20%), 360 (M+ - 1, 100), 241 (11), 240 (89), 196 (15), 175 (29), 111(12).
(263g) получают в виде твердого вещества белого цвета (259 мг, 92%): т.пл. 248-51° С; [α ]
24 |
D |
(263h) получают в виде твердого вещества белого цвета (282 мг, 99%): т.пл. 210-5° С; [α ]
24 |
D |
(263i) получают в виде белого стеклоподобного твердого вещества (приблиз. 100%), используя без очистки: 1H ЯМР (CDCl3) δ 9,23 (1Н, s), 7,72 (2Н, d, J=8,8), 6,81 (2Н, d, J=8,9), 5,22 (1H, m), 4,51 (1H, m), 3,97-3,72 (2H, m), 3,81 (3H, s), 3,03 (1H, m), 2,51-2,46 (1H, m), 2,31-2,25 (1H, m), 2,03 (1H, m), 1,72 (2H, m).
(263j) получают в виде твердого вещества белого цвета (100%): т.пл. 73-83° С (разлож.); [α ]
22 |
D |
(263k) (100%) получают: т.пл. 130-142° С; IR (KBr) 3272, 2945, 1738, 1650, 1611, 1501, 1445, 1309, 1255, 1171; 1H ЯМР (CDCl3) δ 9,35 (1Н, s), 7,74 (2Н, d), 7,38 (5Н, m), 6,85 (2Н, d), 5,40 (1Н, bs), 5,19 (1Н, s), 5,02 (2Н, s), 4,49 (1Н, d), 3,92 (2Н, m), 3,68 (1Н, m), 2,99 b (1Н, bs), 2,43 (1Н, bs), 2,22 (1Н, bs), 1,99 (1Н, bs), 1,68 (2Н, bs).
(525l) синтезируют по способу, использующемуся для получения 211, с образованием белого кристаллического твердого вещества (3,35 г, 83%): т.пл. 214-5° С; [α ]
20 |
D |
(263l). Суспензию 5251 (3,32 г, 8,2 ммолей) в тетрагидрофуране (60 мл) обрабатывают раствором LiOH× H2O (0,69 г, 16,4 ммолей, 2,0 экв.) в воде (20 мл). Полученную смесь перемешивают 1 час, концентрируют и остаток растворяют в воде (50 мл). Раствор подкисляют с помощью 2М NaHSO4 и продукт экстрагируют ЕtOАс (порциями по 100 мл и 50 мл). Объединенные растворы промывают нас. солевым раствором (2× 50 мл), высушивают (MgSO4) и концентрируют с образованием 263l в виде белого кристаллического твердого вещества (2,87 г, 90%): т.пл. 154-8° С; [α ]
20 |
D |
соединение | R1 |
264а 265а | ![]() |
264с 265с | ![]() |
264d 265d | ![]() |
264е 1095 | ![]() |
264f 265f | ![]() |
264g 1075 | ![]() |
264h 1018 | ![]() |
264i 1052 | ![]() |
264j 1027 | ![]() |
264k 1056 | ![]() |
264l 1015 | ![]() |
(264а) синтезируют тем же способом, что и соединение 213е с образованием твердого вещества белого цвета (240 мг, 82%): IR (KBr) 3380, 3066, 2947, 1789, 1750,1691, 1454, 1417, 1368, 1298, 1262, 1235, 1193, 1118, 756, 696; 1H ЯМР (D6-DMSO) δ 8,59 (1Н, d, J=6,8), 8,48 (1H, s), 8,25-8,09 (3H, m), 7,85-7,75 (3H, m), 7,36 (5Н, m), 5,39 (1Н, m), 4,21 (2Н, АВ, J=14,2), 4,53-4,49 (1Н, m), 4,25-4,10 (2Н, m), 3,65-3,44 (3H, m), 3,13-2,99 (1Н, m), 2,43-2,16 (1Н, m), 1,72-0,72 (7Н, m). Аналитически рассчитано для С30Н31N5О8S: 57,96; Н, 5,03; N, 11,27. Обнаружено: С, 57,28; Н, 5,14; N, 10,48. MC (ES+) 622.
(264с) получают тем же способом, что и соединение 213е, (55%) в виде бесцветной пены: т.пл. 135-40° С; [α ]
22 |
D |
(264d) получают тем же способом, что и соединение 213е, (72%) в виде бесцветной пены: [α ]
22 |
D |
(264е) синтезируют по способу, использующемуся для получения 213е, с образованием смеси диастереомеров (соотношение изомеров син:анти 9:1) в виде белого стеклоподобного твердого вещества (128 мг, 78%): т.пл. 103-8° С; IR (KBr) 3419, 3302, 1793, 1664, 1535, 1421, 1327, 1256, 1123, 973; 1Н ЯМР (D6-DMSO) δ 10,20 (0,9H, s), 9,35 (0.1Н, s), 8,74 (0,1H, d) , 8,49 (0,9H, d), 7,36-7,15 (10Н, m), 5,67 (0.9Н, d), 5,44 (0,1H, s), 4,85-4,75 (1Н, m), 4,74-4,60 (1H, m), 4,77 и 4,63 (2Н, dd), 4,30-4,10 (1H, m), 3,80-3,40 (3H, m), 3,43 (2Н, s), 3,10-2,40 (3H, m), 2,25-2,15 (1H, m), 2,00-1,35 (4Н, m). Аналитически рассчитано для C28H31N5O7·0,5H2O: С, 60,2; Н, 5,77; N, 12,53. Обнаружено: С, 60,38; Н, 5,83; N, 12,13. МС (ES+) 551 (M+ + 2, 33%), 550 (M+ + 1, 100), 480 (7), 343 (8), 279 (4).
(264f) получают тем же способом, что и соединение 213е с образованием чистого син-изомера в виде белого пенистого твердого вещества (225 мг, 82%): т.пл. 130-5° С; [α ]
24 |
D |
(264g) получают тем же способом, что и соединение 213е, с образованием чистого анти-изомера в виде твердого вещества белого цвета (284 мг, 80%): т.пл. 148-53° С; [α ]
24 |
D |
(264h) получают тем же способом, что и соединение 213е с образованием смеси диастереомеров (соотношение изомеров син:анти 9:1) в виде твердого вещества белого цвета (276 мг, 70%): т.пл. 147-52° С; IR (KBr) 3444, 3304, 1793, 1665, 1602, 1531, 15 1505, 1423, 1294, 1264, 1181, 1123, 966; 1Н ЯМР (D6-DMSO) δ 10,41 (1Н, s), 10,22 (1Н, s), 8,71 (0,1H, d), 8,48 (0,9H, d), 7,78 (2Н, d); 7,67 (2H, d), 7,35-7,30 (5Н, m), 5,68 (0,9H, d), 5,45 (0,1H, s), 4,88-4,80 (1Н, m), 3,75-4,60 (1H, m), 4,77 и 4,63 (2H, dd), 4,30-20 4,20 (1H, m), 3,90-3,50 (3H, m), 3,10-2,50 (3H, m), 2,35-2,20 (1H, m), 2,07 (3H, s), 2,05-1,35 (4Н, m). Аналитически рассчитано для C29H32N6O8·1H2O: С, 57,04; Н, 5,61; N, 13,76. Обнаружено: С, 56,79; Н, 5,50; N, 13,53. MC (ES+) 594 (M+ + 2, 34%), 593 (M+ + 1, 100), 387 (8), 386 (38), 358 (8), 162 (19).
(264i) получают по способу, описанному для получения соединения 213е с образованием твердого вещества белого цвета (70%): т.пл. 116-118° С; IR (KBr) 3315, 2951, 1793, 1664, 1607, 1502, 1258, 1177; 1Н ЯМР (CDCl3) δ 8,07 (1H, s), 7,77 (2H, d, J=8,6), 7,35 (5Н, m), 6,94 (2H, d, J=8,5), 6,74 (1H), 4,89 (1H, d, J=11,1), 4,74 (1H, m), 4,60 (1H, d, J=11,0), 4,48, 4,41 (1H, 2m), 3,86 (3H, s), 3,79, 3,71-3,53 (3H, 2m), 2,87 (2H, m), 2,44 (1H, m), 2,18, 1,91, 1,68 (5Н, 3m).
(264j) синтезируют тем же способом, что и соединение 213е с образованием пены (88%): [α ]
24 |
D |
(264k) получают по способу, использующемуся для получения соединения 213е (96%): IR (PBr) 3294, 2946, 1793, 1658, 1606, 1535, 1501, 1248, 1174, 1119. 1H ЯМР (CDCl3) δ 8,91 (1H, s), 7,85 (3H, m), 7,4 (10Н, m), 7,02 (2Н, d), 5,35 (1H, s), 5,10 5 (2Н, s), 4,8-4,3 (5Н, m), 4,00 (1H, bs), 3,78 (2Н, m), 2,90 (2Н, m), 2,5-1,5 (6Н, m).
(264l) получают тем же способом, что и соединение 213е, с образованием смеси диастереомеров (соотношение изомеров син:анти 1:1) в виде твердого вещества белого цвета (1,72 г, 71%): т.пл. 148-60° С; IR (KBr) 3314, 1780, 1677, 1658, 1651, 1550, 1485, 1439, 1258, 1132, 1038, 943; 1H ЯМР (D6-DMSO) δ 10,39 (1H, s), 8,71 (0,5Н, d), 8,49 (0,5Н, d), 7,44 (1H, d), 7,42-7,30 (6Н, m), 7,03 (1H, d), 6,12 (2Н, s), 5,68 (0,5H, d), 5,45 (0,5H, s), 4,90-4,82 (1H, m), 15 4,82-4,58 (2,5H, m), 4,40-4,10 (1,5Н, m), 3,90-3,65 (2Н, m), 3,65-3,43 (1H, m), 3,09 (0,5Н, dd), 2,90-2,55 (1,5H, m), 2,45-2,10 (2Н, m), 2,10-1,35 (4Н, m). Аналитически рассчитано для С28Н39Н5O9·0,2Н2O: С, 57,67; Н, 5,08; N, 12,01. Обнаружено: С, 58,01; Н, 5,33; N, 11,51. MC (ES+) 581 (M+ + 2, 33%), 580 (М+, 100), 374 (9), 373 (48), 345 (12), 261 (4), 239 (7), 149 (9).
(265а) получают тем же способом, что и соединение 265 с образованием твердого вещества белого цвета (37 мг, 17%): т.пл. 126-30° С (разлож.); [α ]
20 |
D |
(265с) получают тем же способом, что и соединение 265, (90%), в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. ~150° С (разлож.); [α ]
23 |
D |
(265d) получают тем же способом, что и соединение 265, (85%) в виде бесцветного твердого вещества: т.пл. ~176-85° С; [α ]
23 |
D |
(1095) получают тем же способом, что и соединение 265, с образованием твердого вещества белого цвета (84 мг, 90%): т.пл. 180-6° С; [α ]
22 |
D |
(265f) получают тем же способом, что и соединение 265 с образованием белого пенистого твердого вещества (130 мг, 88%): т.пл. 157-62° С; [α ]
24 |
D |
(1075) получают тем же способом, что и соединение 265, с образованием твердого вещества белого цвета (184 мг, 83%): т.пл. 210-5° С; [α ]
24 |
D |
(1018) получают тем же способом, что и соединение 265 с образованием твердого вещества белого цвета (177 мг, 82%): т.пл. 235-40° С; [α ]
23 |
D |
(1052) синтезируют по способу, использующемуся для получения 265, с образованием твердого вещества белого цвета (0,194 г, 100%): т.пл. 138-142° С; [α ]
20 |
D |
(1027) синтезируют по способу, подобному способу получения соединения 265, с образованием белой пены (88%): [α ]
24 |
D |
(1056) получают по способу, использующемуся для получения соединения 265 (95%): т.пл. >300° С; IR (KBr) 3392, 1660, 1610, 1507, 1442, 1280, 1171, 1149, 1133. 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 7,74 (2Н, d J=8,7), 6,84 (2Н, d J=8,7), 4,58 (1Н, m), 4,41 (1Н, bd, J=12,6), 4,28 (1Н, m), 3,85 (3H, m), 2,98 (1Н, m), 2,8-2,3 (3H, m), 2,3-1,6 (4H,m).
(1015) получают тем же способом, что и соединение 265, с образованием твердого вещества белого цвета (142 мг, 58%): т.пл. 170-5° С; [α ]
23 |
D |
(526) получают тем же способом, что и соединение 502, с образованием стекловидного твердого вещества: [α ]
20 |
D |
(1053) получают тем же способом, что и соединение 214, с образованием твердого вещества белого цвета (106 мг, 73[α ]
20 |
D |
(528) получают тем же способом, что и соединение 213е с образованием смеси диастереомеров (соотношение изомеров син-.анти 1:1) в виде кремоподобного белого пенистого твердого вещества (1,05 г, 58%): т.пл. 124-32° С; IR (KBr) 3312, 2979, 1790, 1664, 1610, 1532, 1485, 1285, 1120, 1037,932; 1Н ЯМР (D6-DMSO) δ 10,39 (1Н, s), 8,71 (0,5H, d), 8,43 (0,5H, d), 7,15 (1Н, d), 7,36 (1Н, s), 7,04 (1Н, d), 6,12 (2H, s), 5 5,58 (0,5H, d), 5,34 (0,5H, s), 4,95-4,85 (1Н, m), 4,70-4,52 (0,5H, m), 4,35-4,10 (1,5H, m), 3,95-3,50 (5Н, m), 3,03 (0,5H, dd), 2,90-2,55 (1,5H, m), 2,46-2,20 (2Н, m), 2,10-2,40 (4Н, m), 1,16-1,13 (3H, 2xt). Аналитически рассчитано для С23Н27N5O9·0,6Н2O: С, 52,29; Н, 5,38; N, 13,26. Обнаружено: С, 52,53; Н, 5,35; N, 12,78. МС (ES+ 519) (M+ + 2, 27%), 518 (М+ + 1, 100), 472 (7), 374 (12), 373 (53), 345 (14), 149 (12).
Пример 31
Получение соединений 640, 642, 645, 650, 653, 655, 656, 662, 668, 669, 670, 671, 677, 678, 681, 682, 683, 684, 686, 688a, 688b, 6891, 689b, 690a, 690b, 691a, 691b, 695a, 695b, 695с, 692а, 692b, 693 и 694 описано ниже.
(638) синтезируют из 600а по споособам, использующимся для получения 602m из 600а с образованием 2,4 г соединения 638 в виде твердого вещества белого цвета.
(639). К раствору 638 (630 мг, 1,76 ммолей) и 2-нафтилметилбромида (428 мг, 1,94 ммолей) в CH3CN добавляют К2СО3 (608 мг, 4,4 ммолей). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды. Через 18 часов реакционную смесь разбавляют CH2Cl2, промывают водой, затем нас. солевым раствором, высушивают над Nа2SO4 и концентрируют в вакууме. После флэш-хроматографии (SiO2, от 0 до 20%, EtOAc/CH2Cl2) получают 450 мг соединения 639.
(640) синтезируют по способу, использующемуся для получения 605v из 602v, с образованием 205 мг соединения 640 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (СDСl3) δ 2,4-2,55(m, 1Н), 2,65-2,8(m, 1H), 3,2(s, 3H), 3,72-3,78(m, 1H), 3,85-4,0(m, 2H), 4,22-4,28(d, 1H), 4,26-4,5 (m, 4H), 4,58-4,75 (m, 1H), 4,78-4,85 (m, 1H), 5,0-5,08 (t, 1H), 7,35-7,65 (m, 7H), 7,85-8,02 (m, 4H).
(642) синтезируют из 638 по способу, использующемуся для получения 605m с образованием 213 мг соединения 642, 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 2,5(n, 1H), 2,68 (ddd, 1H), 3,25(s, 2H) , 3,3(s, 3H), 3,78(m, 2H), 4,0(d, 1H), 4,3(m, 1H), 4,6(m, 2H), δ 4,85 (br, s, 2H), 7,08-7,22(m, 2H), 7,35(m, 1H), 7,4-7,65(m, 4H), 7,7(dd, 1H), 8,1 (dd, 1H).
(643). К суспензии N-ацетилглицина (200 мг, 1,7 ммолей) в CH2Cl2 (2,5 мл), содержащей DMF (0,005 мл), добавляют оксалилхлорид (0,450 мл, 5,1 ммолей). После перемешивания в течение 30 минут при температуре окружающей среды смесь концентрируют, получая 643 в виде неочищенного продукта.
(644) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 602d из 600b, используя 643, с образованием 112 мг соединения 644.
(645) синтезируют из 644 по способу, использующемуся для получения 605d из 602d, с образованием 43 мг соединения 645 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (СD3ОD) δ 1,95(s, 3Н), 2,4(m, 1Н), 2,65 (m, 1H), 3,4 (s, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,4-4,6 (m, 2H), 5,0 (m, 1H), 7,4-7,7 (m, 6H), 7,85-8,0 (m, 2H).
(646) получают из N-Fmoc-саркозина по способу, использующемуся для получения 643, с образованием соединения 646 в виде неочищенного продукта.
(647) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для синтеза 602d из 600b, используя 646, с образованием 481 мг соединения 647.
(648) синтезируют из 647 по способу, использующемуся для получения 604d из 602d, с образованием 409 мг 648.
(649). Раствор 648 (409 мг, 0,465 ммолей) в смеси MeCN:Et2NH (4:1, об./об.) перемешивают при температуре окружающей среды. Через 45 мин, реакционную смесь концентрируют в вакууме. После флэш-хроматографии (SiO2, от 5% до 20% МеОН в СН2Сl2) получают 241 мг соединения 649.
(650) синтезируют из 649 по способу, использующемуся для получения 605d из 604 с образованием 179 мг соединения 650 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,4-2,6 (m, 2H), 2,7 (s, 3Н), 3,5 (q, 1H), 3,8 (m, 2H), 4,2-4,4 (m, 2H), 4,3-4,45 (m, 1H), 5,0-5,1 (m, 2H), 7,4-7,7 (m, 6H), 7,85-7,9 (m, 2H), 8,2 (m, 1H).
(652) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 602n из 600b, используя реагент, полученный в результате взаимодействия DMF с 3 эквивалентами оксалилхлорида в CH2Cl2 растворе, такой как R3X, с образованием 404 мг соединения 652.
(653) синтезируют из 652 по способу, использующемуся для получения 605d из 602d, с образованием 84 мг соединения 653 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (СD3OD) δ 2,3(m, 1H), 2,55(dd, 1H), 3,75(br, s, 1H), 4,25-4,6(m 5H), 5,15(m, 1H), 7,2-7,45(m, 6H), 7,8-7,9(dd, 3H), 8,l(s, 1H), 8,2(m, 2H).
(654) синтезируют из 600b, используя способы, подобные используемым для получения 603d из 600b, с образованием 775 мг соединения 654.
(655) синтезируют из 654 по способу, использующемуся для получения 213е, с образованием 304 мг 655, 1H ЯМР (СD3ОD) δ 2,4 (d, 1H), 2,6-2,75 (m, 2H), 3,0 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,8 (с, 1H), 4,0 (t, 2H), 4,4(m, 2H), 4,5-4,55(m, 2H), 7,2-7,45 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
(656) синтезируют из 655 по способу, подобному используемому для получения 2002 из 2001, с образованием 136 мг соединения 656 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,85 (s, 3Н), 2,5 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,7 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,55 (m, 2H), 7,4-7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
(657). К раствору бензилгликолята (6,0 г, 36,1 ммолей) в СН2Сl2 охлаждают в водяной бане со льдом, добавляют флуоренилметокси хлорформиат (14 г, 1,5 экв.), затем диизопропилэтиламин (9 мл, 1,5 экв.). Через 1 час реакционную смесь выливают в насыщенный водный раствор хлорида аммония и экстрагируют СН2Сl2, высушивают над Na2SO4, затем концентрируют в вакууме. Продукт перетирают с МеОН, получая 2,2 г соединения 657 как первый сбор твердого вещества белого цвета.
(658). К раствору соединения 657 (2,2 г, 5,93 ммолей) в тетрагидрофуране добавляют 5% Pd/C (220 мг). Полученную суспензию энергично перемешивают в атмосфере водорода. Через 90 мин реакционную смесь фильтруют через целит. Фильтрат выливают в насыщенный водный раствор NaHCO3 и промывают дважды EtOAc. Затем водный слой подкисляют и продукт экстрагируют дважды СН2Сl2, высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме с образованием 1,46 г (88%) соединения 658 в виде твердого вещества белого цвета.
(659) получают из 658 по способу, использующемуся для получения 643, с образованием соединения 659 в виде неочищенного продукта.
(660) синтезируют из 600b, используя 659, по способу, использующемуся для получения 604d из 600b с образованием 453 мг соединения 660.
(661). Раствор соединения 660 (423 мг) в смеси MeOH:Et2NH (1:1, об./об.) перемешивают при температуре окружающей среды. Через 10 минут реакционную смесь концентрируют в вакууме до небольшого объема. Вызывают выпадение осадка путем добавления эфира, в результате получают 230 мг соединения 661.
(662) синтезируют из 661 по способу, использующемуся для получения 605d из 604, с образованием 37 мг соединения 662 в виде белого твердого вещества, 1H ЯМР (СD3ОD) δ 2,45(m, 1H), 2,7(m, 1H), 3,75(m, 1Н), 3,9(d, 1H), 4,15(d, 1H), 4,35(m, 1H), 4,5(t, 2Н), 4,7(dd, 1H), 7,4-7,6(m, 4Н), 7,85(s, 2H).
(663). К раствору бензилгликолята (46,91 г, 0,282 моля) и диизопропилэтиламина (74 мл, 0,423 моля) в СH2Сl2, охлажденному на водяной бане, добавляют раствор TIPSOTf (95 г, 0,31 моля) в СН2Сl2. Полученную смеь оставляют нагреваться до температуры окружающей среды, затем выливают в воду, промывают дважды 10% водным раствором NaHSO4, высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После флэш-хроматографии (SiO2, от 0 до 5% ЕtOАс в гексане) получают 71,6 г соединения 663.
(664). К раствору соединения 663 (0,4 г, 1,2 ммолей) в ЕtOАс добавляют 10% Pd/C (33 мг). Полученную суспензию перемешивают в атмосфере водорода. Через 15 часов реакционную смесь фильтруют через целит и фильтрат концентрируют в вакууме с образованием 0,29 г масла. К раствору этого масла в 1,4-диоксане добавляют NаНСО3 (0,5 М, 2,4 мл). Полученный раствор концентрируют в вакууме из толуола, получая соединение 664 в виде воскообразного твердого вещества.
(665) синтезируют из 664 по способу, подобному использующемуся для получения 643, с образованием 665 в виде неочищенного продукта.
(666) синтезируют из 600b, используя 665, по способу, использующемуся для получения 604d из 600b, с образованием 131 мг соединения 666.
(667). К раствору соединения 666 (131 мг, 0,17 ммолей) в тетрагидрофуране, охлажденном в водяной бане со льдом, добавляют тетрабутиламмоний фторид (1 М, 0,190 мл). Через 2 часа реакционную смесь выливают в воду, экстрагируют дважды EtOAc, высушивают над MgSO4 и концентрируют в вакууме, получая 63 мг соединения 667 в виде твердого вещества белого цвета.
(668) синтезируют из 667 по способу, использующемуся для получения 605d из 604d с образованием 48 мг соединения 668 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,45 (m, 1H), 2,67 (d, 1H), 3,78 (d, 1H), 3,85 (br, m, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,5 (m, 2H), 4,65 (m, 1H), 4,95 (br, s, 2H), 7,4-7,5 (m, 4H), 7,52-7,65 (m, 3H), 7,88 (d, 2H).
(669) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 605d из 600b с образованием 63 мг соединения 669 в виде белого твердого вещества, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,9 (s, 3H), 2,4-2,7 (m, 2H), 3,6-3,7 (m, 2H), 3,9 (s, 3H), 4,2-4,4 (m, 2H), 4,4-4,6 (m, 3H), 7,4-7,8 (m, 4H), 7,9 (s, 2H).
(670) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 655 из 600b, с образованием 218 мг соединения 670 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,7, 1,75 (2s, 3H), 2,15, 2,2 (2s, 6H), 2,4-2,5 (m, 1H), 2,6-2,75 (m, 1H), 3,65-3,75 (m, 2H), 4,2-4,3 (m, 2H), 4,45-4,6 (m, 3H), 7,35-7,6 (m, 4H), 7,5 (s, 2H).
(671) синтезируют из 670 по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 253 мг соединения 671 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,9 (s, 3H), 2,25 (s, 6H), 2,4-2,5 (m, 1H), 2,6-2,75 (m, 1H), 3,65-3,75 (m, 2H), 4,2-4,3 (m, 2H), 4,45-4,6 (m, 3H), 7,35-7,6 (m, 4H), 7,5 (s, 2H).
(672) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения соединения 602n из 600b, используя 665, с образованием 1,08 г соединения 672.
(673). К раствору соединения 672 (1,08 г, 1,69 ммолей) в CH2Cl2 добавляют 2,6-лютадин (0,8 мл), затем TMSOTf (l мл, 5,1 ммолей). Через 1 час реакционную смесь выливают в NaHCO3 и экстрагируют СН2Cl2, высушивают над MgSO4 и концентрируют в вакууме до небольшого объема, который непосредственно используют в следующей реакции.
(674) синтезируют из 673 по способу, использующемуся для получения 602b с образованием 0,91 г соединения 674.
(675). Раствор соединения 674 (0,365 г, 0,5 ммолей) в МеОН перемешивают с IN раствором NaOH (1,2 мл, 1,2 ммолей). Через 16 часов реакционную смесь концентрируют в вакууме, затем растворяют в воде и промывают дважды эфиром. Водный слой подкисляют с помощью IN HCl и продукт экстрагируют в EtOAc, высушивают над MgSO4 и концентрируют в вакууме с образованием 337 мг соединения 675 в виде твердого вещества.
(676) синтезируют из 675 по способу, использующемуся для получения 213е, с образованием 166 мг соединения 676 в виде твердого вещества белого цвета.
(677). Раствор TBAF (6 мл, 3 ммоля) в НОАс (0,46 мл, 8 ммолей) добавляют к соединению 676 (0,213 г, 0,256 ммолей). Через 16 часов реакционную смесь выливают в EtOAc и промывают дважды NaHCO3, один раз нас. солевым раствором, высушивают над MgSO4 и и концентрируют в вакууме с образованием 139 мг соединения 677 в виде твердого вещества, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,4(d, 1H), 2,5 (dd, 1H), 2,8 (dd, 1H), 2,92 (dd, 1H), 3,15 (m, 10 2Н), 3,55-3,65 (m, 2Н), 3,72 (s, 6H), 3,92 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,42 (d, 1H), 4,6 (dd, 1H), 4,65-4,8 (m, 2Н), 4,88 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 6,55 (m, 2H), 6,75 (d, 1H), 7,25-7,55 (m, 8H), 7,75 (m, 2Н).
(678) синтезируют по способу, использующемуся для получения 667 из 666 с образованием 54 мг соединения 678 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,45 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,5 (m, 2H), 3.75 (or, s, 6H), 4,05 (d, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,51-4,6 (m, 2H), 4,8 (br, m, 2H), 6,7 (d, 2H), 7,4-7,5 (br, m, 3H), 7,6-7,65 (br, m, 2H).
(680) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 677 из 600b с образованием 140 мг соединения 680 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 2,31 (d, 1H), 2,4 (dd, 2H), 2,75 (dd, 2H), 2,85 (dd, 1H), 3,36 (br, s, 1H), 3,45 (br, 5 s, 1H), 3,6 (br, t, 2H), 3,82 (br, m, 2H), 3,95 (br, d, 2H), 4,35 (m, 2H), 4,42 (d, 1H), 4,55 (m, 1H), 4,70 (d, 1H), 4,82 (br, s, 2H), 5,5 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 7,25 (br, m, 5H), 7,35-7,46 (br, m, 3H), 7,5-7,6 (m, 2H), 8,15 (br, d, 2H).
(681) синтезируют из 680 по способу, использующемуся для получения 678 из 677 с образованием 45 мг соединения 681 в виде серого твердого вещества, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,5 (m, 1H), 2,7 (dt, 1H), 3,65-3,85 (br, m, 3H), 4,05 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,5-4,7 (br, m, 3H), 4,85 (br, s, 2H), 7,3 (br, m, 2H), 7,4-7,7 (m, 5H), 8,15 (d, 2H).
(682) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 655 из 600b с образованием 495 мг соединения 682 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 2,00 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,47 (d, 1H), 2,58 (dd, 1H), 2,85 (dd, 1H), 2,89 (dd, 1H), 3,9 (m, 2H), 4,05-4,15 (m, 2H), 4,19 (dd, 1H), 4,45 (m, 2H), 4,55-5,05 (m, 8H), 5,55 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,25-7,55 (m, 10Н), 7,75 (d, 2H).
(683) синтезируют из 682 по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 82 мг соединения 683 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,1 (s, 3Н), 2,5 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 4,29 (dd, 1H), 4,31 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,55 (d, 1H), 4,6 (d, 1H), 4,72 (d, 1H). 4,95 (br, s, 2H), 7,45 (br, m, 2H), 7,52-7,65 (br, m, 5H), 7,88 (d, 2H).
(684) синтезируют из 600b, по способу, использующемуся для получения 605d из 600b с образованием 72 мг соединения 684 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,9 (s, 3Н), 2,25 (s, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 3,3 (s, 1H), 3,7 (s, 3Н), 4,25 (m, 1H), 4,45-4,6 (m, 3Н), 7,4 (br, s, 2H), 7,55 (br, d, 4H).
(685) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 676 из 600b с образованием 165 мг соединения 685.
(686). К раствору соединения 685 (165 мг, 0,21 ммолей) в THF добавляют раствор соединения TBAF (1M, 0,21 мл). Продукт отделяют фильтрацией после осаждения из реакционной смеси. После хроматографии на обращенной фазе (от 10% до 80% MeCN в воде/0,1% TFA) получают 25 мг соединения 686 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,37-2,42 (m), 2,59-2,70 (m), 3,60-3,89 (m), 4,01 (d), 4,20-4,31 (m), 4,42-4,70 (m), 4,80-5,05 (m), 6,79 (d), 7,32-7,65 (m),7,81(s).
(687а) синтезируют из 600b, по способам, подобным использующимся для получения 654 из 600b, с образованием 1,6 г соединения 687а.
(687b) синтезируют из 600b, по способам, подобным использующимся для получения 654 из 600b, с образованием 1,1 г соединения 687b.
(688а). К раствору соединения (3S,2R,S)-3-аллилоксикарбониламино-2-бензилокси-5-оксотетрагидрофуран (Chapman, Biorg. Med. Chem. Lett., 2, pp. 613-618 (1992)) (1,13 г, 1,2 экв.) в CH2Cl2 добавляют трифенилфосфин (423 мг, 0,5 экв.), диметилбарбитуровую кислоту (1,26 г, 2,5 экв.) и тетракистрифенилфосфин палладий (0) (373 мг, 0,1 экв.). Через 5 минут реакционную смесь охлаждают на водяной бане со льдом, после чего добавляют раствор соединения 687а в DMF (1,6 г, 1 экв.), НОВТ (480 мг, 1,1 экв.) и EDC (681 мг, 1,1 экв.). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды. Через 16 часов реакционную смесь выливают в NaHSO4 и экстрагируют дважды EtOAc. Органический слой промывают NaHCO3, нас. солевым раствором, высушивают над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После хроматографии (SiO2, от 20% до 100% EtOAc в CH2Cl2) получают 880 мг соединения 688а в виде твердого вещества не совсем белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,55 (dd, 1H), 2,7 (dd, 1H), 3,0 (m, 1H), 3,6 (m, 1H), 3,75 (d, 1H), 3,9-4,0 (m, 2H), 4,3-4,45 (m, 3H), 4,5-4,6 (m, 3H), 4,7 (m, 2H), 5,35 (s, 1H), 5,55 (d, 1H), 7,1-7,5 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
(688b) синтезируют из 687b по способу, использующемуся для получения 688а из 687а с образованием 960 мг соединения 688b в виде твердого вещества не совсем белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,6 (dd, 1H), 2,7 (dd, 1H), 3,0 (dd, 1H), 3,2 (s, 3H), 3,7 (m, 3Н), 3,9 (m, 2H), 4,4-4,5 (m, 2Н), 4,6 (m, 3Н), 5,35 (s, 1H), 5,55 (d, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,4-7,5 (m, 4H).
(689a) синтезируют из 688а по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 184 мг соединения 689a в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,45 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 3,3 (s, 3Н), 3,7-3,85 (m, 2H), 4,0 (d, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,5-4,6 (m, 3Н), 7,3-7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
(689b) синтезируют из 688b по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 412 мг соединения 689b в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,5 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,3 (s, 3Н), 3,7-3,85 (m, 2H), 4,05 (dd, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,6 (m, 2H), 7,45-7,4 (m, 2H), 7,5 (s, 2H), 7,55 (m, 2H).
(690а) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения соединения 676 из 600b, 688а из 687а, затем 677 из 676 с образованием 863 мг соединения 690а в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 62,2 (s, 6H), 2,45 (d, 0,5H), 2,6-2,9 (m, 1H), 3,05 (dd, 0,5H), 3,65-3,85 (m, 2H), 3,95-4,1 (m, 1H), 4,35-5,0 (m, 7H), 5,35 (s, 0,5H), 5,65 (d, 0,5H), 7,2-7,4(m, 4H), 7,4-7,7 (m, 7Н).
(690b) синтезируют из 600b по способам, использующимся для получения 677 из 600b с образованием 200 мг соединения 690b, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,49 (d, 1H), 2,65 (d, 1H), 2,66 (d, 1H), 2,85 (d, 1H), 2,87 (d, 1H), 3,05 (dd, 1H), 3,35 (br, s, 1H), 3,72 (br, s, 2H), 4,01 (m, 2H), 4,45 (br, m, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,7 (m, 1H), 4,8 (m, 1H), 4,95 (br, s, 2H), 5,65 (d, 1H), 6,8 (d, 2H), 7,2-7,35 (br, m, 3H), 7,45 (m, 2H), 7,75 (d, 2H).
(691a) синтезируют из 690а по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 560 мг соединения 691a в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,15 (s, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,55(m, 1H), 3,7 (d, 1H), 4,0 (d, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,5-4,6 (m, 3H), 7,3-7,5 (m, 6H).
(691b) синтезируют из 690b по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 410 мг соединения 691b в виде белого твердого вещества, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,5 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,8 (d, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,5 (m, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,95 (br, s, 2H), 6,8 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,6 (m, 2H), 7,75 (d, 2H).
(695а) синтезируют из 600b по способам, использующимся для получения 677 из 600b с образованием 75 мг соединения 695а, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,2 (s, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,75 (d, 1H), 4,0 (d, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,5 (m, 3H), 7,4-7,6 (m, 6H).
(695b) синтезируют из 600b по способам, использующимся для получения 677 из 600b с образованием 880 мг соединения 695b, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 2,1 (s, 3H), 2,25-2,5 (m, 2H), 2,8-2,92 (m, 0,5H), 3,15-3,2 (m, 0,5H), 3,45-3,6 (m, 2H), 3,75-3,95 (m, 2Н), 4,15-4,25 (m, 1H), 4,35-4,6 (m, 2H), 4,6-4,88 (m, 3H), 5,22 (s, 0,25H), 5,33 (s, 0.25Н), 5,52-5,58 (d, 0,5H), 7,15-7,45 (m, 9,5H), 7,5-7,75 (m, 5H), 8,3-8,35 (m, 0,5H), 9,08-9,18 (m, 1Н).
(695с) синтезируют из 600b по способам, использующимся для получения 677 из 600b с образованием 840 мг соединения 695с, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 2,23 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,45-2,62 (m, 1H), 2,8-2,9 (dd, 0,5H), 2,9-3,05 (dd, 0,5H), 3,45-3.63 (m, 5 1H), 3,64 (s, 1,5Н), 3,68 (s, 1,5H), 3,78-4,05 (m, 2Н), 4,2-4,33 (m, 1H), 4,4-4,63 (m, 2H), 4,65-4,94 (m, 2H), 4,95-5,1 (m, 1H), 5,45 (s, 0,5H), 5,5-5,6 (d, 0,5H), 6,9-6,95 (d, 1H), 7,25-7,7 (m, 12H).
(692a) синтезируют из 600b по способам, использующимся для получения 661 из 600b, исключая стадии получения 604d из 603d, используя вместо них способ получения 688а из 687а с образованием 854 мг соединения 692a, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,45 (d, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,0 (m, 1H), 3,5-3,7 (m, 4H), 4,0 (q, 2H), 4,45 (m, ЗН), 4,55 (m, 4H), 5,35 (s, 1H), 5,6 (d, 1H), 7,2-7,5 (m, 9H), 7,85 (s, 2H).
(692b) синтезируют из 600b по способам, использующимся для получения 661 из 600b, исключая стадии получения 604d из 603d, используя вместо них способ получения 688а из 687а, с образованием 207 мг соединения 692b, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,05 (t, 3Н), 1,15 (t, 3Н), 2,45 (d, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,55 (m, 2H), 3,6-3,75 (m, 5H), 4,0 (dd, 2H), 4,3 (d, 1H), 4,4-4,7 (m, 5H), 5,25 (s, 1H), 5,5 (d, 1H), 7,25-7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 2H).
(693) синтезируют из 600b по способам, использующимся для получения 688а из 600b с образованием 30 мг соединения 693, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,7 (s, 3H), 1,8 (s, 3Н), 2,51 (d, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 3,0 (m, 1H), 3,75 (br, d, 2H), 4,0-4,1 (cd, 2H), 4,5-5,0 (m, 6H), 5,45 (s, 1H), 5,55 (s, 1H), 7,15-7,85 (m, 14H).
(694) синтезируют из 691с по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001 с образованием 380 мг соединения 694 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,25 (s, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,65 (m, 5H), 4,0 (d, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,55 (d, 2H), 4,95 (m, 1H), 7,4-7,6 (m, 6H).
Соединения 700-711 получают по способам, подобным использующимся для получения соединений 619-635 (см. Пример 13). Физические характеристики для соединений 700-711 перечислены в Таблице 25.
Соединения 910-915 и 918-921 получают так, как описано ниже. Физические характеристики для этих соединений перечислены в Таблице 26.
Стадия А. Синтез соединения 401. Смолу TentaGel S® NH (0,25 ммолей/г, 6,8 г) помещают в стеклянный встряхиватель и промывают диметилацетамидом (3× 20 мл). К раствору соединения 400 (1,70 г, 2,9 ммолей, полученного из т-бутилового эфира (3S) 3-(флуоренилметилоксикарбонил)-4-оксомасляной кислоты по методике A.M. Murphy et al. J. Am. Chem. Soc., 114, 3156-3157 (1992)) в диметилацетамиде (15 мл) добавляют O-бензотриазол-N,N,N,N’-тетраметилуроний гексафторфосфат (HBTU; 1,09 г, 2,9 ммолей) и DIEA (1,0 мл, 5,7 ммолей). Этот раствор добавляют к смоле, затем добавляют диметилацетамид (5 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре, используя кистевой встряхиватель. Смолу отделяют путем фильтрации с отсасыванием и промывают диметилацетамидом (6× 20 мл). Образец смолы (7,4 мг) тщательно промывают 50% метанолом в дихлорметане, высушивают путем отсасывания. Удаление защитных групп Fmoc с помощью 20% пиперидина в диметилацетамиде (10,0 мл) и УФ-анализ раствора показывает замещение 0,19 ммоля/г.
Стадия В. Синтез соединения 903. Со смолы 401 удаляют защитные группы с помощью 20% (об./об.) пиперидин/диметилацетамида (20 мл) в течение 10 мин (при встряхивании) и затем в течение еще 10 мин со свежим пиперидиновым реагентом (20 мл). Затем смолу промывают диметилацетамидом (6× 20 мл). Раствор соединения 902 (1,52 г, 2,81 ммолей) обрабатывают HBTU (1,07 г, 2,83 ммолей) и DIEA (1,0 мл, 5,7 ммолей) и переносят на смолу, затем добавляют диметилацетамид (5 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 2,5 ч при комнатной температуре, используя кистевой встряхиватель. Смолу отделяют путем фильтрации с отсасыванием и промывают диметилацетамидом (4× 20 мл) и дихлорметаном (4× 20 мл), и высушивают под током азота. Замещение смолы, проведенное, как описано для 401, составляло 0,169 ммолей/г.
Стадия С. Синтез соединения 905. Смолу 903 (7,54 г, 1,27 ммолей) и димедон (2,19 г, 15,6 ммолей) помещают в 100 мл круглодонную колбу и добавляют свежеперегнанный безводный тетрагидрофуран (60 мл). Добавляют тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,32 г, 0,28 ммоляl) и создают атмосферу азота, реакционную смесь в запечатанном сосуде перемешивают в течение 15 часов на кистевом встряхивателе. Смолу фильтруют, промывают диметилацетамидом (4× 20 мл), дихлорметаном (4× 20 мл) и диметилацетамидом (1× 20 мл). К смоле добавляют дополнительное количество диметилацетамида для получения взвеси, затем пиридин (1,5 мл, 18,5 ммолей) и раствор соединения 904 (5,5 ммолей) в дихлорметане (10 мл). Реакционную смесь встряхивают в атмосфере азота в течение 8 ч, затем фильтруют. Смолу промывают диметилацетамидом (5× 20 мл) и дихлорметаном (5× 20 мл).
Стадия D. Синтез соединения 906. Это соединение получают из Смолы 905 (0,24 г, 0,038 ммолей), используя множественный пептидный синтезатор Advanced ChemTech 396. Автоматические циклы состоят из промывания смолы диметилформамидом (3× 1 мл), удаления защитных групп с помощью обработки 25% (об./об.) раствором пиперидина в диметилформамиде (1 мл) в течение 10 мин и затем свежим реагентом (1 мл) в течение 20 мин, в результате получают смолу 906. Смолу промывают диметилформамидом (3× 1 мл) и N-метилпирролидоном (3× 1 мл).
Стадия Е. (910-922) Смолу 906 ацилируют раствором 0,4М карбоновой кислоты и 0,4М НОВТ в N-метипирролидоне (0,5 мл), раствором 0,4М HBTU в N-метилпирролидоне (0,5 мл) и раствором 1,6М DIEA в N-метипирролидоне (0,25 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Смолу промывают N-метилпирролидоном (1× 1 мл), диметилформамидом, (4× 1 мл), 50% метанолом в дихлорметане (5× 1 мл) и высушивают на воздухе. Альдегид удаляют со смолы и проводят общее удаление защитных групп путем обработки 95% TFA/5% Н2О (об./об., 1,5 мл) в течение 30 мин при комнатной температуре. После промывания смолы удаляющим реагентом (2× 1 мл), объединенные фильтраты добавляют к охлажденной смеси 1:1 эфир:гексан (35 мл) и полученный осадок выделяют путем центрифугирования и декантации. Полученный осадок растворяют в ацетонитриле (0,5 мл) и Н2О (0,5 мл) и фильтруют через 0,45 - микронные микроцентрифужные фильтры. Это соединение очищают методом полупрепаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ с колонкой Rainin Microsorb™ CIS (5μ , 21,4× 250 мм), элюируя линейным градиентом ацетонитрила (10%-50%), содержащим 0,1% TFA (об./об.) в течение 30 мин при скорости потока 12 мл/мин. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют и лиофилизируют, получая соединения 910-922.
Аналитические процедуры ВЭЖХ:
(1) Waters DeltaPak CIS, 300 (5μ , 3,9× 150 мм). Линейный градиент ацетонитрила (0% - 25%), содержащий 0,1% TFA (об./об.) в течение 14 мин при скорости потока 1 мл/мин.
(2) Waters DeltaPak C18, 300 (5μ , 3,9× 150 мм). Линейный градиент ацетонитрила (5% - 45%), содержащий 0,1% TFA (об./об.), в течение 14 мин, при скорости потока 1 мл/мин.
(696) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 691а из 600b, с образованием 696. 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,45(m, 1Н), 2,7(m, 1H), 3,75(d, 1H), 3,95(q, 1H), 4,05(d, 1H), 4,3(m, 1H), 4,45-4,65(m, 2H), 5,05(m, 1H), 7,5-7,6(m, 3H), 7,7(t, 1H), 7,8(t, 1H), 7,98(t, 1H), 8,55(d, 1H), 9,l(d, 1H).
(728)
(696а) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 690а из 600b, с образованием 696а. 1Н ЯМР (CDCl3) δ 0,95(t, 2H), 1,25(t, 1H), 1,4 (m, 2H), 1,55(m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,85(m, 1H), 2,95(dd, 1H), 3,15(m, 1H), 3,55(m, 1H), 3,9(m, 2H), 4,35(t, 1H), 4,4-4,55(m, 2H), 4,75(m, 1H), 4,8-5,05(m, 2H), 5,45(s, 1H), 5,55(d, 1H), 6,85 (d, 1H), 7,15(d, 1H), 7,2-7,5(m, 5H), 7,6-7,8(m, 3H), 8,45(d, 1H), 9,05(d, 1H), 9,35(d, 1H).
(696b) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 690а из 600b, с образованием 696b. 1Н ЯМР (CDCl3) δ 0,9(m, 3H), 1,15(q, 3H), 1,15(m, 1H), 1,65(m, 1H), 2,5(m, 1H), 2,8(m, 1H), 2,95-3,0(m, 2H), 3,6(m, 2H), 3,7-3,85(m, 4H), 4,0(m, 2H), 4,3(m, 1H), 4,55(m, 1H), 4,65(m, 1H), 4,85-4,95(m, 1H), 5,05(m, 1H), 5,35(s, 1H), 5,45(d, 1H), 6,85(d, 1H), 7,25(d, 1H), 7,35-7,85(6H), 8,85(dd, 2H), 9,05(m, 1H),9,35(dd,2H).
(696с) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 690а из 600b, с образованием 696с. 1Н ЯМР (CD3OD) δ 1,25(t, 1H), 1,65(q, 1H), 1,9(m, 1H), 2,9(m, 1H), 3,05(m, 1H), 3,9(d, 1H), 4,2(m, 1H), 4,3(d, 1H), 4,7-5,0(m, 3H), 5,25(m, 1H), 5,7(s, 1H) , 5,9(d, 1H), 7,5(d, 2H), 7,7-7,9(m, 3H), 8,0(t, 1H), 8,2(m, 2H), 8,75(d, 1H), 9,35(d, 1H).
(696d) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 690а из 600b, с образованием 696d. 1Н ЯМР (CDCl3) δ 0,9 (t, 1H), 1,2(t, 1H), 1,3-1,45(m, 2H), 1,6-1,8(m, 4H), 2,45(m, 1H), 2,8(m, 1H), 3,0(m, 1H), 3,4(q, 1H), 3,5(d, 1H), 4,0(m, 2H), 4,2-4,3(m, 2H), 4,55(d, 1H), 4,65 (m, 1H) , 4,9 (m, 1H), 5,05(m, 1H), 5,4(s, 1H), 5,5(d, 1H), 6,8(d, 1H), 7,3-7,9(m, 6H), 8,5(d, 1H), 9,05(d, 1H), 9,4(d, 1H).
(696e) синтезируют из 600b по способу, использующемуся для получения 690а из 600b, с образованием 696e. 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,2(t, 1H), 2,4(m, 1H), 2,8 (m, 2H), 3,6(d, 1H), 3,7(q, 1H), 4,0(m, 2H), 4,3(d, 2H), 4’’, 65 (m, 1H), 4,85(t, 1H), 5,0(m, 1H), 5,35(d, 1H) , 6,5(d, 1H), 7,15-7,85(m, 8H), 8,45(d, 1H), 9,05(d, 1H), 9,4(d, 1H).
Пример 32
Результаты даны в табл.27.
Таблица 27 | |||||
Соединение | УФ- видимый Кi (нМ) | Клетки РВМС средн. IC50 (нМ) | Целая кровь человека IC50 (нМ) | Выведение Мыши, в/в мл/мин/кг | Выведение Крысы, в/в мл/мин/кг |
688с | 200 | ||||
689b-1 | 3.5 | 2700 | - | ||
696-1 | 0.5 | ||||
696-2 | 0.5 | ||||
697 | 1.8 | 5000 | |||
698 | 18 | 13500 | |||
699 | 1.1 | ||||
699а-2 | |||||
720 | 2.7 | ||||
721 | 1.3 | 5000 | |||
722 | 5 | 5000 | |||
723 | 2.3 | 2000 | |||
724 | 2 | 1800 | |||
725 | 3.7 | 3000 | |||
726 | 300 | ||||
727 | 50 | 2300 | |||
728 | 300 | ||||
729 | 28 | 2800 | |||
730 | 90 | 8000 | |||
731 | 150 | ||||
732 | 5 | 1800 | |||
733 | 5 | 1500 | |||
734 | 9 | 6000 | |||
735 | 6 | 10000 |
Пример 33
Соединения 684а, 688b-l, 688с, 689b-l, 690a-l, 696-1, 696-2, 696а-2, 696а-1, 697, 697а, 698, 698а, 699, 699а, 699а-1, 699а-2, 800 и 801 получают так, как описано в таблице 28.
Таблица 28![]() | ||||
CIP# | R4 | R3 | R5 | R1 |
684а | ![]() | ![]() | H | ![]() |
688b-l | ![]() | ![]() | F | ![]() |
688с | ![]() | ![]() | Н | ![]() |
689b-l | ![]() | ![]() | F | ![]() |
690a-l | ![]() | ![]() | Н | ![]() |
CIP# | R4 | R3 | R5 | R1 |
696-1 | ![]() | ![]() | F | ![]() |
696-2 | ![]() | ![]() | Сl | ![]() |
696а-2 | ![]() | ![]() | Сl | ![]() |
696а-1 | ![]() | ![]() | F | ![]() |
697 | ![]() | ![]() | Н | ![]() |
697а | ![]() | ![]() | H | ![]() |
698 | ![]() | ![]() | Н | ![]() |
698а | ![]() | ![]() | H | ![]() |
699 | ![]() | ![]() | H | ![]() |
699а | ![]() | ![]() | H | ![]() |
CIP# | R4 | R3 | R5 | R1 |
699a-l | ![]() | ![]() | F | ![]() |
699a-2 | ![]() | ![]() | F | ![]() |
800 | ![]() | ![]() | Н | ![]() |
801 | ![]() | ![]() | Н | ![]() |
(690а-1) синтезировали по способу, использующемуся для получения 690а и 2100b, с образованием 690а-1, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,15(t, 6Н), 1,3(t, 3H), 2,25(s, 6H), 2,60(d, 2Н), 3,50(m, 2Н), 3,70(m,4Н), 4,05(m, 2Н), 4,15(m, 2Н), 4,30(d, 1H), 4,45(m, 1H), 4,50(d, 1H), 4,55(d, 1H), 0 4,70(t, 1H), 5,05(m, 1H), 5,30(s, 1H), 6,70(d, 1H), 7,10(d, 2H), 7,30-7,50(m, 7Н).
(697а) синтезировали по способу, использующемуся для получения 677, с образованием 840 мг соединения 697а, 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,78 (br, s, 2H), 2,48-2,58 (d, 0,5H), 2,6-2,7 (m, 0,5H), 2,8-2,9 (m, 0,5H), 2,92-3,03 (m, 0,5H), 3,55-3,8 (m, 2H), 3,92-4,02 (d, 1H), 4,25-4,3 (d, D,5H), 4,37-4,42 (d, 0,5H), 4,43-4,48 (m,0,5H), 4,55-4,65 (m, 1,5H), 4,7-5,12 (m, 5H), 5,44 (s, 0,5H), 5,58-5,63 (d, 0,5H), 6,95-8,1 (m, 13Н).
(697) синтезируют по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001, с образованием 140 мг соединения 697, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,38-2,5 (m, 1H), 2,55-2,75 (m, 1H), 3,68-3,9 (m, 3H), 3,95-4,03 (m, 1H), 4,2-4,3 (m, 1H), 4,4-4,7 (m, 4H), 7,35-7,8 (m, 6H).
(684а) синтезируют по способу, использующемуся для получения соединения 2100j, с образованием 684а, 1Н ЯМР (500 МГц, СDСl3, смесь диастереомеров) δ 1,3 (s, 9H), 1,8(s, 3H), 2,1 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,3(s, 6H), 3,3-3,5(m, 3H), 3,65(s, 3H), 3,9(n, 1H), 4,1(d, 1H), 4,3(d, 1H), 4,6-4,8(m, 3H), 5,0(m, 1H), 6,7(s, 1H), 7,0(d, 1H), 7,1 (d, 1H), 7,2-7,5 (m,6H).
(698a) синтезируют по способу, использующемуся для получения соединения 652, с образованием 795 мг 698a, 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3, смесь диастереомеров) δ 2,8(m, 2H), 4,0(m, 1H), 4,5-4,8(m, 4H), 5,2(m, 1H), 5,5(s, 1H), 5,75(d, 1H), 7,3-7,85(m, 11H), 7,9(t, 1H), 8,2(d, 1H), 8,6(m, 1H), 9,3(m, 1H).
(698) синтезируют по способу, использующемуся для получения соединения 653, с образованием 225 мг 698, 1Н ЯМР (500 МГц, СD3ОD) δ 2,4(m, 1H), 2,6(m, 1H), 3,9(m, 1H), 4,2(m, 1H), 4,3-4,7(m, 4H), 5,l(m, 1H), 7,3-7,5(m, 4H), 7,6-7,8(m, 2H), 7,8(m, 2H), 8,2(d, 1H), 8,5(d, 1H), 9,0(d, 1H).
(699a) синтезируют по способу, использующемуся для получения соединения 655, с образованием 820 мг 699a, в виде рыжевато-коричневого твердого вещества, 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 2,60(ddd, 1H), 2,90(ddd, 1H), 3,20(s, 3Н), 3,25(s, 3Н), 3,70(t, 1H), 3,90(m, 2H), 4,20(dd, 1H), 4,60(m, 2H), 4,70-5,00(m, 5H), 5,55(d, 1H), 7,00(d, 1H), 7,20-7,50(m, 7H), 8,45(dd, 1H), 9,0(dd, 1H) и 9,35 ppm (dd, 1H).
(688b-l) синтезируют по способу, использующемуся для получения соединения 655, с образованием 600 мг 688b-l, 1Н ЯМР (CDCl3, смесь диастереомеров) δ 2,21(s, 3Н), 2,28(s, 3Н), 2,42-2,50(m, 0,5Н), 2,58-2,65(m, 0,5Н), 2,83-2,91(m, 0,5Н), 2,98-3,1(m, 0,5Н), 3,18(s, 1,5H), 3,22(s, 1,5H), 3,72-3,78(d, 1H), 3,78-3,9(m, 2H), 4,08-4,15(d, 1H), 4,5-4,69(m, 3Н), 4,7-4,85(m, 1H), 4,88-5,1(m, 2H), 5,45(s, 0,5H), 5,55-5,65(d, 0,5Н), 6,85-6,92(m, 1H), 7,02-7,13(m, 2H), 7,24-7,55(m, 9Н).
(689b-l) синтезируют по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001, с образованием 689b-l, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,18 (s, 6H), 2,36-2,47 (m, 1H), 2,6-2,72 (m, 1H), 3,34 (s, 3Н), 3,66-3,88 (m, 2H), 3,95-4,05 (m, 1H), 4,2-4,78 (m, 5H), 4,9 (m, 1H), 7,3-7,41 (m, 2H), 7,48 (s, 2H), 7,5-7,63 (m, 1H).
(699) синтезируют по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001, с образованием 699 в виде твердого вещества белого цвета, 1H ЯМР (500 МГц, СD3ОD) δ 2,50 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,25 (s, 3Н), 3,80 (bd, 1H), 3,90 (bd, 1H), 4,00 (bd, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,50-4,70 (m, 3Н), 4,80-4,85 (bt, 1H), 5,00 (bm, 1H), 7,40-7,55 (m, 5H), 7,70 (bm, 1H), 7,85 (bm, 1H), 8,00 (bm, 1H), 8,55 (bd, 1H) и 9,05 ppm (bd, 1H).
(696a-l) синтезируют по способу, использующемуся для получения 656, с образованием 800 в виде твердого вещества желтого цвета, 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 2,55 (ddd, 1H), 2,85 (ddd, 1H), 3,70-3,80 (m, 2H), 3,95 (bm, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,30 (d, 1H), 4,40-4,60 (m, 4H), 4,70-5,05 (m, 4H), 5,55(d, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,20-7,35 (m, 3H), 7,40-7,50 (m, 1H), 7,60-7,85 (m, 3H), 8,40 (dd, 1H), 9,10 (m, 1Н), и 9,30 рр(m, 1Н).
(696а-2) синтезируют по способу, использующемуся для получения 677, с образованием 204 мг 696а-2 в виде белого твердого вещества, за исключением того, что восстановление нитро-группы проводят следующим образом: к раствору нитро-соединения (7,2 г, 20 ммолей) в МеОН добавляют NH4Cl (2,1 г, 39 ммолей) и Zn (17 г, 260 ммолей). Полученную смесь нагревают в течение 1 часа при температуре флегмы, затем охлаждают и фильтруют через целлит. Фильтрат концентрируют в вакууме, затем обрабатывают холодной IN HCl, получая 3,6 г бледно-красного твердого вещества. 1Н ЯМР (CDCl3) δ 1,85(s, 1H), 2,45(d, 0,5H), 2,50-2,65(m, 0,5H), 2,80-2,90(m, 0,5H), 2,90-3,00(m, 0,5H), 3,45(s, 0,5H), 3,55-3,75(m, 1H), 3,85-4,15(m, 2H), 4,25(d, 1H), 4,40-4,65(m, 2H), 4,70-4,80(m, 0,5H), 4,85-5,15(m, 3H), 5,40 (s, 0,5H), 5,60(d, 0,5H), 7,00(d, 0,5H), 7,15-7,90 (m, 12,5H), 8,35-8,45(m, 1H), 9,00-9,10(m, 1H), 9,25-9,40(m, 1H).
(696-1) синтезируют по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001, с образованием 140 мг 696-1 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (500 МГц, СD3ОD) δ 2,50 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,85 (d, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,10 (d, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,50-4,60 (m, 2H), 4,80 (bm, 1H), 5,00 (m, 1H), 7,40-7,48 (m, 3H), 7,65 (m, 1H), 7,75 (t, 1H), 7,85 (t, 1H), 8,00(d, 1H), 8,55(d, 1H) и 9,05 ppm (d, 1H).
(696-2) синтезируют по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001, с образованием 250 мг 696-2 в виде твердого вещества белого цвета, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,40-2,55(m, 1H), 2,60-2,75(m, 1H), 3,80-4,00(m, 2H), 4,05(d, 1H), 4,20-4,35(m, 1H), 4,45-4,65 (m, 3H), 4,80-5,10(m, 2H).
(699a-l) синтезируют по способу, использующемуся для получения 655, с образованием 699a-l, 1H ЯМР (500 МГц; CDСl3) δ 2,55 (ddd, 1H), 2,90 (ddd, 1H), 3,25 (s, 3H), 3,28 (s, 3H), 3,80 (bt, 2H), 3,95 (bm, 2H), 4,25 (dd, 1H), 4,45-4,90 (m, 3H), 5,60 (d, 1H), 7,05-7,40 (m, 8H), 7,50 (bm, 1H), 7,65-7,85 (m, 2H), 8,45 (d, 1H), 9,1 (m, 1H) и 9,35 ppm (m, 1H).
(699а-2) синтезируют по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001, с образованием 699а-2, 1Н ЯМР (500 МГц, СD3ОD) δ 2,51 (m, 1H), 2,70 (dt, 1H), 3,31 (bs, 3H), 3,90 (bdt, 1H), 3,95 (bm, 1H), 4,05 (d, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,50 (d, 1H), 4,60 (dd, 1H), 4,65 (dt, 1H), 4,80 (m, 1H), 5,05 (m, 1H), 7,35-7,48 (m, 3H), 7,65 (bm, 1H), 7,75 (t, 1H), 7,82 (t, 1H), 8,05 (d, 1H), 8,55 (d, 1H) и 9,05 ppm (d, 1H).
(688с) синтезируют по способу, использующемуся для получения 308d, с образованием 800, 1Н ЯМР (CD3OD) δ 2,2 (s, 6H), 2,58-2,83 (m, 2H), 3,28 (s, 3H), 3,29-3,34 (m, 1H), 3,68-3,80 (m, 2H), 3,95-4,05 (dd, 1H), 4,38-4,48 (dd, 1H), 4,82-5,00 (m, 2H), 5,26-5,36 (m, 2H), 7,22-7,65 (m, 10H).
(800) синтезируют по способу, использующемуся для получения 696а-l, с образованием 204 мг 800 в виде твердого вещества желтого цвета, 1Н ЯМР (CDCl3) (смесь диастереомеров) δ 1,70(s, 1H), 2,40-2,80(m, 7H), 2,80-2,90(m, (СDСl3) (смесь диастереомеров) δ 1,70(s, 1H), 2,40-2,80(m, 7H), 2,80-2,90(m, 0,5Н), 2,95-3,05(m, 0,5Н), 3,30-3,35(m, 0,5Н), 3,45-3,55(m, 0,5Н), 3,55-3,65(m, 1H), 3,80-4,05(m, 2Н), 4,30-4,50(m, 2Н), 4,55-4,65(m, 1H), 4,75-4,95(m, 3Н), 5,45(s, 0,5Н), 5,55(d, 0,5H), 6,70(d, 0,5H), 6,90(d, 0,5H), 7,15-7,80(m, 10H).
(801) синтезируют по способу, использующемуся для получения 2002 из 2001, с образованием 801.
Пример 34
Соединения 720-73 получают по способам, подобным способам, использующимся для получения соединений 619-635 (см. Пример 13). Физические характеристики соединений 720-73 перечислены в таблице 29.
Пример 35
Соединения 736-767 получают по способам, подобным способам, использующимся для получения соединений 619-635 (см. Пример 13). Физические характеристики соединений 736-767 перечислены в таблице 30.
Таблица 30![]() | ||
Соединение | R4 | R3 |
736 | ![]() | ![]() |
737 | ![]() | ![]() |
738 | ![]() | ![]() |
739 | ![]() | ![]() |
740 | ![]() | ![]() |
741 | ![]() | ![]() |
Соединение | R4 | R3 |
742 | ![]() | ![]() |
743 | ![]() | ![]() |
744 | ![]() | ![]() |
745 | ![]() | ![]() |
746 | ![]() | ![]() |
747 | ![]() | ![]() |
748 | ![]() | ![]() |
749 | ![]() | ![]() |
750 | ![]() | ![]() |
751 | ![]() | ![]() |
752 | ![]() | ![]() |
Соединение | R4 | R3 |
753 | ![]() | ![]() |
754 | ![]() | ![]() |
755 | ![]() | ![]() |
756 | ![]() | ![]() |
757 | ![]() | ![]() |
758 | ![]() | ![]() |
759 | ![]() | ![]() |
760 | ![]() | ![]() |
761 | ![]() | ![]() |
762 | ![]() | ![]() |
763 | ![]() | ![]() |
Соединение | R4 | R3 |
764 | ![]() | ![]() |
765 | ![]() | ![]() |
766 | ![]() | ![]() |
767 | ![]() | ![]() |
Данные приведенных выше примеров демонстрируют, что соединения настоящего изобретения проявляют ингибиторную активность в отношении фермента, конвертирующего IL-1β .
Постольку, поскольку соединения настоящего изобретения способны ингибировать ICE in vitro и, более того, могут применяться перорально к млекопитающим, они обладают очевидным клиническим применением при лечении IL-1-, апоптоз-, IGIF- и IFN-γ -опосредованных заболеваний. На основании этих тестов можно предсказать способность соединений к ингибированию ICE in vivo.
Так как заявителем описано множество воплощений данного изобретения, является очевидным, что основные структуры могут быть изменены для обеспечения других воплощений, в которых используются продукты и способы данного изобретения. Таким образом, следует понимать, что объем данного изобретения, определяемый в прилагаемой формуле изобретения, не ограничен отдельными воплощениями, представленными в примерах.
1. Соединение, представленное формулой (VI)
где R1 представляет собой
или
С представляет собой цикл, выбранный из ряда, состоящего из бензо-, необязательно один или несколько раз замещенного -Q1, и пиридо-;
R2 представляет собой:
(а)
или
(b)
m равно 1 или 2;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9, -C(O)-N(R9)(R10), -S(O)2-R9, -S(O)2-NH-R10, -C(O)C(O)-R10, -R9;
X5 представляет собой CH или N;
Y2 представляет собой H2 или О;
R6 представляет собой -H;
R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9, -S(O)2-R9, -C(O)-CH2-OR10, -C(O)C(O)-R10, -C(O)-CH2-O-C(O)R9, -H и -C(O)-C(O)-OR10;
каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из -Ar3 и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенной -Ar3, где -С1-6 алкильная группа необязательно является ненасыщенной;
каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -H, -Ar3 и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенной -Ar3, где -С1-6 алкильная группа необязательно является ненасыщенной;
R13 выбран из группы, состоящей из -H и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы;
каждый R51 независимо выбран из группы, состоящей из R9, -C(O)-R9, -C(O)-N(H)-R9 и -С3-6-циклоалкильной группы;
каждый R21 представляет -H;
каждый Ar3 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильной группы, содержащей 6 или 10 атомов углерода и 1 или 2 кольца, и ароматической гетероциклической группы, содержащей от 5 до 10 атомов в кольце и 1 или 2 кольца, причем указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, =N- и -NH-, и такая гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей и указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, а также указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -CO2H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -CN, =О, -ОН, -перфтор С1-3 алкила, -R5, -OR5, -NHR5, -OR9, -N(R9)(R10), -R9, -C(O)-R10 и ,
при условии, что когда -Ar3 замещен группой Q1, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Ar3, указанные дополнительные -Ar3 группы не замещены другим -Ar3;
и при условии, когда R2 представляет
R21 представляет Н и
Y представляет О, тогда R5 не может представлять -С(О)R10, где R10 представляет –СН2СН2Ar3 и Ar3 означает незамещенный фенил; или -S(O)2R9, где R9 представляет метил; и когда Y представляет Н2, тогда R5 не может представлять -С(О)R10, где R10 представляет –СН2СН2Ar3 и Ar3 означает незамещенный фенил.
2. Соединение по п. 1, выбранное из группы, состоящей из
213е
304a
813e
904a
2001
2100a
2100b
2100c
2100d
2100e
677
680
213C
213f
213g
213h
213i
213j
213l
213mm
213o
213p
213q
213r
213s
213t
213u
213v
213w
213x
245
245b
256
303a
550f
550g
550h
550i
550j
550l
500n
550o
550p
2100f
2100g
2100h
2100k
2100l
2100m
2100n
2100o
3. Соединение по п. 1, где m равно 1; С представляет собой цикл, выбранный из ряда, состоящего из бензо-, необязательно один или несколько раз замещенного -Cl, -F, -Br, -I, -NH2, -OH, NH-R5, -OR5, где R5 является прямой или разветвленной С1-4 алкильной группой, или -R5, где R5 является прямой или разветвленной С1-4 алкильной группой, и пиридо; R6 представляет собой H; R13 представляет собой H или прямую или разветвленную С1-4 алкильную группу; R21 представляет собой -H; R51 представляет собой прямую или разветвленную С1-6 алкильную группу, необязательно замещенную -Ar3, где Ar3 является фенилом, необязательно замещенным Q1; каждую циклическую группу Ar3 независимо выбирают из ряда, включающего фенил, нафтил, тиенил, хинолинил, изохинолинил, пиразолил, тиазолил, изоксазолил, бензотриазолил, бензимидазолил, тиенотиенил, имидазолил, тиадиазолил, бензо[b]тиофенил, пиридил, бензофуранил и индолил, и указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1; каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -Cl, -F, -Br, -ОН, -R5, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, и
где каждый R9 и R10 независимо представляет собой прямую или разветвленную -С1-6 алкильную группу, необязательно замещенную -Ar3, где Ar3 является фенилом; при условии, что когда -Ar3 замещен группой Q1, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Ar3, указанные дополнительные -Ar3 группы не замещены другим -Ar3.
4. Соединение по п. 3, где R1 представляет собой группу (w2).
5. Соединение по п. 4, где R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9 и -C(O)-CH2-ОR10.
6. Соединение по п. 5, где R8 представляет собой -C(O)-CH2-OR10, a R10 является -H или -CH3.
7. Соединение по п. 3, где R1 представляет группу (e10), a X5 является CH.
8. Соединение по п. 3, где R1 представляет группу (e10), a X5 является N.
9. Соединение по любому из пп. 1, 3-4 или 5-8, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -C(O)-C(O)-R10.
10. Соединение по п. 9, где R10 представляет собой Ar3.
11. Соединение по п. 10, где R5 представляет собой -C(O)-R10, a R10 является Ar3, где циклическая группа Ar3 представляет собой фенил, необязательно один или несколько раз замещенный следующими группами: -R5, где R5 представляет собой прямую или разветвленную С1-4 алкильную группу; -F; -Cl; -NH2; -N(H)-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 представляет собой прямую или разветвленную -C1-6 алкильную группу, необязательно замещенную -Ar3, где Ar3 является фенилом; -N(R9)(R10), где R9 и R10 независимо представляют собой прямую или разветвленную -C1-4 алкильную группу, или
-О-R5, где R5 представляет собой H или прямую или разветвленную -С1-4 алкильную группу.
12. Соединение по п. 11, выбранное из группы, состоящей из
682
690b
693
695a
695b
13. Соединение по п. 11, где Ar3 является фенилом, замещенным один или несколько раз по 3-му или 5-му положению -Cl или по 4-му положению -NH-R5, -N(R9)(R10) или -О-R5; или Ar3 является фенилом, замещенным один или несколько раз по 3-му или 5-му положению группой -R5, где R5 представляет собой прямую или разветвленную С1-4 алкильную группу; и по положению 4 группой -О-R5.
14. Соединение по п. 13, выбранное из группы, состоящей из
655
688а
692а
692b
213k
213m
550k
550m
670
688b
690a
695с
214w-1
214w-2
214w-3
214w-4
214w-5
214w-6
214w-7
15. Соединение по п. 10, где R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 является Ar3, а циклическая группа Ar3 выбрана из группы, состоящей из индолила, бензимидазолила, тиснила, хинолила, изохинолила и бензо[b]тиофенила, и указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1.
16. Соединение по п. 15, где циклическая группа Ar3 является изохинолилом и указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1.
17. Соединение по п. 16, выбранное из группы, состоящей из
696а
696а-1
696b
696с
696d
696е
699а
699a-1
213y
412a
412b
412с
412d
412e
412g
412h
550q
18. Соединение по п. 16, представляющее собой
412f
19. Соединение по п. 11, где R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 является Ar3, а циклическая группа Ar3 является фенилом, замещенным группой .
20. Соединение по п. 19, выбранное из группы, состоящей из
213n
415a
415b
415c
21. Соединение, представленное формулой
(VII)
в которой m равно 1 или 2; R1 выбран из группы, состоящей из соединений следующей формулы:
С представляет собой цикл, выбранный из ряда, состоящего из бензо-, необязательно один или несколько раз замещенного -Q1, и пиридо; R3 выбран из группы, состоящей из -CN; -C(O)-H; -C(O)-CH2-T1-R11; -C=N-O-R9 и -CO-Ar2; каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10; -C(O)O-R9; -C(O)-N(R10)(R10); -S(O)2-R9; -C(O)-CH2-O-R9; -C(O)C(O)-R10; -C(O)C(O)-N(R9)(R10) и -R9;
каждый T1 представляет -О-; R6 представляет -H; R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9, -C(O)-NH-R10, -S(O)2-R9, -C(O)-CH2-OR10, -C(O)C(O)-R10, -C(O)-CH2-N(R10)(R10), -H и -C(O)-C(O)-OR10; каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из -Ar3 и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенной -Ar3; каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -H, -Ar3, -С3-6 циклоалкильной группы и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенной -Ar3, где -C1-6 алкильная группа необязательно является ненасыщенной; каждый R11 представляет -C(O)-Ar4; R15 представляет -ОН или -O(C1-6 прямой или разветвленный алкил); Ar2 представляет
каждый Ar3 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильной группы, которая содержит 6 или 10 атомов углерода и 1 или 2 кольца, и ароматической гетероциклической группы, содержащей от 5 до 10 кольцевых атомов и 1 или 2 кольца, причем указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, SO2, =N-и -NH-, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец и указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1; каждый Ar4 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильной группы, содержащей 6 атомов углерода, причем указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1; каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -CO2H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -ОН, -NHR5, -OR9, -R9, перфтор С1-3 алкила, -N(R9)(R10), и
при условии, что когда -Ar3 замещен группой Q1, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Ar3, указанные дополнительные -Ar3 группы не замещены другим -Ar3; и при условии, что, когда R6 представляет Н, кольцо С является бензокольцом, которое не замещено группой -Q1, а R5 представляет -С(О)-R10, где R10 представляет -СН2СН2Ar3, где Ar3 является незамещенным фенилом, тогда R8 не является Н или -С(О)-R10, где R10 представляет -СН2СН2Ar3, где Ar3 является незамещенным фенилом.
22. Соединение по п. 21, выбранное из группы, состоящей из
605а
605b
605с
605d
605e
605f
605g
605h
605i
605j
605m
605n
605o
605p
605q
605s
605t
605v
609a
609b
619
620
621
622
623
624
625
626
627
628
629
630
631
632
633
634
635
653
678
681
701
702
703
704
705
706
709
710
711
921
23. Соединение по п. 21, где m равно 1; С представляет собой цикл, выбранный из ряда, состоящего из бензо, необязательно замещенного один или несколько раз -Q1, и пиридо; Т1 представляет собой О; R6 представляет собой H; R11 представляет -C(O)-Ar4; Ar2 представляет
Y представляет собой О; каждая циклическая группа Ar3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, тиазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, тиадиазолила, бензотриазолила, бензо[b]тиофенила, бензофуранила и индолила, причем указанная циклическая группа необязательно замещена один или несколько раз -Q1; каждая циклическая группа Ar4 представляет фенил, причем указанная фенильная группа необязательно замещена один или несколько раз -Q1; каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -Cl, -F, -Br, -ОН, -R9, -OR9, -NHR9, -NH-R5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или
-S(O)2-R9, и ,
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой прямую или разветвленную -C1-6 алкильную группу, необязательно замещенную -Ar3, где Ar3 является фенилом; при условии, что когда -Ar3 замещен группой Q1, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Ar3, указанные дополнительные -Ar3 группы не должны быть замещены другим -Ar3.
24. Соединение по п. 23, где R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9, и -C(O)-CH2-OR10.
25. Соединение по п. 24, где R8 представляет собой -C(O)-CH2-OR10 иR10 является -H или -CH3.
26. Соединение по п. 23, где R3 представляет собой -C(O)-Ar2, -C(O)-CH2-T1-R11 или -C(O)-H.
27. Соединение по п. 26, где R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9 и-C(O)-CH2-OR10.
28. Соединение по п. 27, где R8 представляет собой -C(O)-CH2-OR10, a R10 является -H или -CH3.
29. Соединение, представленное формулой (IV)
где m равно 1 или 2; R1 выбран из группы, состоящей из соединений следующей формулы:
R3 выбран из группы, состоящей из -CN, -C(O)-H, -C(O)-CH2-T1-R11 и -C(O)-CH2-F; каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9, -C(O)-N(R10)(R10), -S(O)2-R9, -C(O)C(O)-R10 и -C(O)C(O)-N(R10)(R10); Y2 представляет собой О; каждый T1 независимо выбран из группы, состоящей из -О- и -S-; каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из -Ar3 и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенной -Ar3, где -С1-6 алкильная группа необязательно является ненасыщенной; каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -H, -Ar3, -С3-6 циклоалкильной группы и прямой или разветвленной -С1-6 алкильной группы, необязательно замещенной -Ar3, где -C1-6 алкильная группа необязательно является ненасыщенной; каждый R11 представляет -(СН2)1-3-Аr4; R15 представляет -ОН или -O(C1-6 прямой или разветвленный алкил); каждый R21 представляет -H; каждый Ar3 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильной группы, которая содержит 6 или 10 атомов углерода и 1 или 2 кольца, и ароматической гетероциклической группы, содержащей от 5 до 10 кольцевых атомов и 1 или 2 кольца, причем указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, =N- и -NH-, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец и указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1; каждый Ar4 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильной группы, содержащей 6 или 10 атомов углерода и 1 или 2 кольца, и гетероциклической группы, содержащей от 5 до 10 кольцевых атомов и 1 или 2 кольца, где указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, =N-, -NH-, где эта гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, и указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец, и где указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1; каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -Cl, -F, -Br, -I, -ОН, -OR9, -N(R9)(R10), -NHR5, -R9 и
при условии, что когда -Ar3 замещен группой Q1, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Ar3, указанные дополнительные -Ar3 группы не замещены другим -Ar3.
30. Соединение, представленное формулой (V)
где m равно 1 или 2; R1 представляет собой
(е10-В)
R3 выбран из группы, состоящей из -CN, -C(O)-H, -C(O)-CH2-T1-R11, -C(O)-CH2-F, -C=N-O-R9 и -CO-Ar2; каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9, -C(O)-N(R10)(R10), -S(O)2-R9, -C(O)C(O)-R10, -H, -C(O)C(O)-OR10 и -C(O)C(O)-N(R9)(R10); Y2 представляет собой H2 или О; каждый T1 независимо выбран из группы, состоящей из -О- и -S-; каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из -Ar3 и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенной -Ar3, где -C1-6 алкильная группа необязательно является ненасыщенной; каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -H, -Ar3, -С3-6 циклоалкильной группы и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенной -Ar3, где -C1-6 алкильная группа необязательно является ненасыщенной; каждый R11 независимо выбран из группы, состоящей из -Ar4, -(CH2)1-3-Ar4 и -C(O)-Ar4; R15 независимо выбран из группы, состоящей из -ОН и -О(С1-6 прямой или разветвленный алкил); каждый R21 независимо выбран из группы, состоящей из -H или прямой или разветвленной -С1-6 алкильной группы; Ar2 независимо выбран из следующих групп, в которых любой цикл может быть необязательно один или несколько раз замещен -Q1 или фенилом, необязательно замещенным -Q1:
(hh)
и
(ii)
где каждый Y независимо выбран из группы, состоящей из О и S; каждый Ar3 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильной группы, содержащей 6 или 10 атомов углерода и 1 или 2 кольца и из ароматической гетероциклической группы, содержащей от 5 до 10 кольцевых атомов, и 1 или 2 кольца, и где указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, =N- и -NH-, причем эта гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец и указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1; каждый Ar4 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильной группы, содержащей 6 или 10 атомов углерода и 1 или 2 кольца, и из гетероциклической группы, содержащих от 5 до 10 кольцевых атомов и 1 или 2 кольца, где указанная гетероциклическая группа содержит, по крайней мере, одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, =N- и -NH-, и эта гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, где указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец и указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1; каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -Cl, -F, -Br, -I, -ОН, -перфтор C1-3 алкила, R5, -OR5, -NHR5, -OR9, -N(R9)(R10), -R9, -C(O)-R10 и
при условии, что когда -Ar3 замещен группой Q1, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Ar3, то указанные дополнительные -Ar3 группы не замещены другим -Ar3; и при условии, что, когда m равно 1; R15 является -ОН; R21 является -H и R3 является -C(O)-H, то R5 не может быть -S(O)2-R9, где R9 представляет метил; или -C(O)-R10, где R10 является -СН2СН2Ar3, где Ar3 представляет собой фенил; и при условии, когда m равно 1; R15 является -ОН или -ОС(СН3)3; R21 является -H и R3 представляет собой -CO-Ar2, где Ar2 представляет
или
то R5 не может быть -S(O)2-R9, где R9 является метилом; или -C(O)-R10, где R10 является -СН2СН2Ar3, где Ar3 является незамещенным фенилом; и, при условии, когда m равно 1; R15 является -ОН или -ОС(СН3)3; R21 является -H и R3 представляет собой -C(O)-CH2-T1-R11, где T1 является S и R11 представляет собой -(CH2)-Ar4, где Ar4 представляет собой 2-дихлорфенил, или -C(O)-CH2-T1-R11, где T1 является О и R11 представляет собой -(СО)-Ar4, где Ar4 представляет собой 2,6-дихлорфенил, то R5 не может быть -S(O)2-R9, где R9 является метилом; или -C(O)-R10, где R10 является -СН2СН2Ar3, где Ar3 является незамещенным фенилом.
31. Соединение по пп. 21, 29 или 30, выбранное из группы, состоящей из
2002
2201
220b
223b
223e
226e
227e
307a
307b
429
820b
823b
826е
827е
214с
217с
217e
246
257
265
280
281
282
283
284
285
286
287
404
405
406
407
408
409
410
411
413
416
417
418
419
420
422
423
424
425
426
430
431
432
433
434
435
436
437
438
439
440
441
442
443
444
445
446
447
448
449
450
451
452
453
454
455
456
457
458
459
460
462
463
464
465
466
467
468
469
470
471
472
473
474
475
476
477
478
479
480
481
481s
482
482s
483
484
485
486
487
488
489
490
491
493
494
495
497
498
499
814с
880
881
882
883
1004
1005
1006
1007
1008
1009
1010
1011
1012
1013
1015
1016
1017
1018
1019
1020
1022
1023
1024
1025
1026
1030
1031
1032
1033
1034
1035
1036
1037
1038
1039
1040
1041
1042
1043
1044
1045
1046
1047
1048
1049
1050
1051
1052
1053
1054
1055
1056
1057
1058
1059
1060
1061
1062
1063
1064
1065
1066
1067
1068
1069
1070
1071
1072
1073
1074
1075
1076
1077
1078
1079
1080
1081
1081s
1082
1083
1082s
1084
1085
1086
1087
1088
1089
1090
1091
1093
1094
1095
1096
1097
1098
1099
421
427
428
1021
1027
1028
32. Соединение по пункту 30, где
m равно 1;
Т1 является О или S;
R21 является -H или -CH3;
Ar2 представляет собой группу (hh);
Y является О; каждая циклическая группа Ar3 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, нафтила, тиенила, хинолинила, изохинолинила, пиразолила, тиазолила, изоксазолила, бензотриазолила, бензимидазолила, тиенотиенила, имидазолила, тиадиазолила, бензо[b]тиофенила, пиридила, бензофуранила и индолила, причем указанная циклическая группа один или несколько раз замещена -Q1; каждая циклическая группа Ar4 независимо выбрана из ряда, состоящего из фенила, тетразолила, пиридинила, оксазолила, нафтила, пиримидинила и тиенила, причем упомянутая циклическая группа один или несколько раз замещена -Q1; каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -Cl, -F, -Br, -ОН, -R9, -NHR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -S(O)2-R9, -OR5, где R5 представляет собой -C(O)-R10, -OR9, -NH(R9), и
где каждый R9 и R10 независимо представляют собой прямую или разветвленную -C1-6 алкильную группу, необязательно замещенную Ar3, где Ar3 является фенилом; при условии, что когда -Ar3 замещен группой Q1, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Ar3, указанные дополнительные -Ar3 группы не замещены другими -Ar3;
33. Соединение по п. 32, где R3 представляет собой -C(O)-Ar2, -C(O)-CH2-T1-R11 или -C(O)-H.
34. Соединение по любому из пп. 21, 23-30 или 32-33, где R5 представляет собой -C(O)-R10 или -C(O)C(O)-R10.
35. Соединение по п. 34, где R10 представляет собой Ar3.
36. Соединение по п. 35, где R5 представляет собой -C(O)-R10, a R10 является Ar3, где циклическая группа Ar3 является фенилом, необязательно замещенным один или несколько раз следующими группами: -R9, где R9 представляет собой прямую или разветвленную -С1-4 алкильную группу; -F, -Cl, -N(H)-R5, где -R5 представляет собой -H или -C(O)-R10, где R10 является прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группой, необязательно замещенной -Ar3, где Ar3 является фенилом, -N(R9)(R10), где R9 и R10 независимо представляют собой прямую или разветвленную -C1-4 алкильную группу, или -О-R5, где -R5 представляет собой -H или прямую или разветвленную -С1-4 алкильную группу.
37. Соединение по п. 36, выбранное из группы, состоящей из
668
691b
911
912
913
и
916
38. Соединение по п. 36, где Ar3 является фенилом, замещенным один или несколько раз по 3-му или 5-му положению -Cl или по 4-му положению группами -N(H)-R5, -N(R9)(R10) или -Q-R5, или где Ar3 является фенилом, замещенным один или несколько раз по 3-му или 5-му положению -R9, где R9 представляет собой прямую или разветвленную C1-4 алкильную группу, а в 4-ом положении замещенным группой -О-R5.
39. Соединение по п. 38, выбранное из группы, состоящей из
656
662
669
686
689а
914
915
918
214k
214m
671
684
689b
691a
694
917
922
214w
40. Соединение по п. 35, где R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 является -Аr3, а циклическая группа Ar3 выбрана из группы, состоящей из индолила, бензимидазолила, тиенила, хинолила, изохинолила и бензо[b]тиофенила, и причем указанная циклическая группа необязательно один или несколько замещена -Q1.
41. Соединение по п. 40, выбранное из группы, состоящей из
919
и
920
42. Соединение по п. 40, где циклическая группа Ar3 является изохинолилом, причем указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1.
43. Соединение по п. 42, представляющее собой соединение
696
696-1
и
699
44. Соединение по п. 42, представляющее собой
412
45. Соединение по п. 35, где R5 представляет собой -C(O)-R10, где R10 является Ar3, а циклическая группа Ar3 является фенилом, замещенным
46. Соединение по п. 45, где указанным соединением является
910
или
415
47. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать продуцирование IL-1β, содержащая соединение по любому из пп. 1-46 и фармацевтически приемлемый носитель.
48. Способ лечения или профилактики заболевания, выбранного из следующего ряда: остеоартрит, острый панкреатит, хронический панкреатит, астма, респираторный дистресс-синдром у взрослых, инфекционный гепатит, гломерулонефрит, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, склеродермия, хронический тиреоидид, болезнь Грейва, аутоиммунный гастрит, инсулин-зависимый сахарный диабет (тип I), аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунная нейтропения, тромбоцитопения, хронический активный гепатит, миастенический отек, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, язвенный колит, множественный склероз, псориаз, реакция “трансплантат против хозяина”, острый дерматоз, экзема, первичный церроз, увеит, болезнь Бехчета, острая аплазия, апластическая анемия, боковой амиотрофический склероз, нефротический синдром, остеопороз, нарушения костной ткани, вызываемые множественной миеломой, хроническая и острая миелогенная лейкемия, метастатическая меланома, саркома Капоши, множественная миелома, сепсис, септический шок, шигеллез, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, церебральная ишемия или ишемия миокарда, у субъекта, включающий введение указанному субъекту соединения по любому из пп. 1-46.
49. Способ по п. 48, где заболевание выбрано из следующего ряда: остеоартрит, острый панкреатит, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, гепатит, респираторный дистресс-синдром у взрослых, гломерулонефрит, инсулин-зависимый сахарный диабет (Тип I), ювенильный диабет, псориаз, реакция “трансплантат против хозяина”, гепатит или болезнь Альцгеймера.
50. Способ лечения или профилактики заболевания, выбранного из следующего ряда: болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, церебральная ишемия, ишемия миокарда, атрофия мышц спины, множественный склероз, СПИД-ассоциированный энцефалит, ВИЧ-ассоциированный энцефалит, старение, алопеция или неврологические нарушения в результате удара, у субъекта, включающий введение указанному субъекту соединения по любому из пп. 1-46.
51. Способ по п. 50, где заболеванием является болезнь Альцгеймера.
52. Способ получения N-ациламиносоединения, представленного формулой (VII):
(VII)
где R1 выбран из группы, состоящей из следующих формул:
(е10)
(e11)
(е12)
(y1)
(y2)
(z)
С представляет собой цикл, выбранный из ряда, состоящего из бензо, пиридо, тиено, пирроло, фурано, тиазоло, изотиазоло, оксазоло, изоксазоло, пиримидо, имидазоло, циклопентила и циклогексила; этот цикл необязательно один или несколько раз замещен Q1;
R2 представляет собой
(а)
(b)
(с)
d)
m равно 1 или 2;
R3 выбран из группы, состоящей из -CN, -C(O)-H, -C(O)-CH2-T1-R11, -C(O)-CH2-F, -C=N-OR9 и -СОAr2;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9, -C(O)-N(R10)(R10), -S(O)2-R9, -S(O)2-NH-R10, -C(O)-CH2-O-R9, -C(O)C(O)-R10, -R9, -H, -C(O)C(O)-OR10 и -C(O)C(O)-N(R9)(R10);
X5 представляет собой CH или N;
Y2 представляет собой H2 или О;
X7 представляет собой -N(R8)- или -О-;
каждый Т1 независимо выбран из группы, состоящей из: -О-, -S-, -S(O)- и -S(O)2-;
R6 выбран из группы, состоящей из -H и -СН3;
R8 выбран из группы, состоящей из -C(O)-R10, -C(O)O-R9, -C(O)-N(H)-R10, -S(O)2-R9, -S(O)2-NH-R10, -C(O)-CH2-OR10, -C(O)C(O)-R10, -C(O)-CH2N(R10)(R10), -C(O)-CH2C(O)-O-R9, -C(O)-CH2C(O)-R9, -H и -C(O)-C(O)-OR10; каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из -Ar3 и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенных -Ar3, где -C1-6 алкильная группа необязательно является ненасыщенной;
каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из -H, -Ar3, -С3-6 циклоалкильной группы и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенных -Ar3, где -C1-6 алкильная группа необязательно является ненасыщенной;
каждый R11 независимо выбран из группы, состоящей из -Ar4, -(CH2)1-3-Ar4, -H и -С(О)-Ar4;
R13 выбран из группы, состоящей из -H, -Ar3 и прямой или разветвленной -C1-6 алкильной группы, необязательно замещенных -Ar3, -CONH2, -OR5, -ОН, -OR9 или -CO2H;
-ОR13 необязательно является -N(H)-OH;
каждый R51 независимо выбран из группы, состоящей из R9, -C(O)-R9 и -C(O)-N(H)-R9, или любые R51, взятые вместе, образуют насыщенный 4-8-членный карбоцикл, или гетероцикл, содержащий -О-, -S- или -NH-;
каждый R21 независимо выбран из группы, состоящей из -H или прямой или разветвленной -С1-6 алкильной группы;
Ar2 независимо выбран из следующих групп, в которых любое кольцо может быть необязательно один или несколько раз замещено группой -Q1:
(hh)
(ii)
где каждый Y независимо выбран из группы, состоящей из О и S;
каждый Ar3 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильных групп, содержащих 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 колец, и ароматических гетероциклических групп, содержащих от 5 до 15 атомов в кольце и от 1 до 3 колец, где указанная гетероциклическая группа содержит по крайней мере одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, SO2, =N-, и -NH-, -N(R5)- и -N(R9)-, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец и указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1;
каждый Ar4 представляет собой циклическую группу, независимо выбранную из ряда, состоящего из арильных групп, содержащих 6, 10, 12 или 14 атомов углерода и от 1 до 3 колец, и гетероциклических групп, содержащих от 5 до 15 атомов в кольце и от 1 до 3 колец, где указанная гетероциклическая группа содержит по крайней мере одну гетероатомную группу, выбранную из -О-, -S-, -SO-, SO2, =N-, и -NH-, -N(R5)- и -N(R9)-, причем указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одну или несколько двойных связей, указанная гетероциклическая группа необязательно содержит одно или несколько ароматических колец и указанная циклическая группа необязательно один или несколько раз замещена -Q1;
каждый Q1 независимо выбран из группы, состоящей из -NH2, -CO2H, -Cl, -F, -Br, -I, -NO2, -CN, =О, -ОН, -перфтор C1-3 алкила, R5, -OR5, -NHR5, -OR9, -N(R9)(R10), -R9, -C(O)-R10, и
при условии, что когда -Ar3 замещен группой Q1, которая содержит одну или несколько дополнительных групп -Ar3, указанные дополнительные -Ar3 группы не замещены другими -Ar3,
включающий стадии a) смешивание карбоновой кислоты с N-alloc-защищенным амином в присутствии инертного растворителя, трифенилфосфина, нуклеофильного акцептора и тетракистрифенилфосфинпалладия (0) при температуре окружающей среды в инертной атмосфере и b) добавление к смеси стадии a) гидрата 1-гидроксибензотриазола и гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида для образования N-ациламино связи; и необязательно включающий следующую стадию c) гидролиз смеси стадии b) в присутствии раствора, содержащего кислоту и H2O, причем смесь стадии b) необязательно концентрируется.
53. Способ по п. 52, где N-ациламиносоединение представляет собой следующее:
где R представляет
где R13 представляет –СН3, -СН2СН3, -СН2СН2СН3, -СН(СН3)(СН3), -СН2СН2 СН2СН3, -СН2-СН(СН3)СН3, -С(СН3)3, -СН2Ph или
где R13 представляет -СН3, -СН2СН3, -СН2СН2СН3, -СН(СН3)(СН3), -СН2СН2СН2СН3, -СН2-СН(СН3)СН3, -С(СН3)3, -СН2Ph или
и каждый R51 представляет -СН3, -СН2СН3, -СН2СН2СН3, -СН(СН3)(СН3), -СН2СН2СН2СН3, -СН2-СН(СН3)СН3, -С(СН3)3, -СН2Ph или, взятые вместе, образуют этилендиоксиацеталь или пропилендиоксиацеталь; или
где R51 представляет -СН3, -СН2СН3, -СН2СН2СН3, -СН(СН3)(СН3), -СН2СН2СН2СН3, -СН2-СН(СН3)СН3, -С(СН3)3, -СН2Ph, -С(О)-СН3 или -С(О)-Ph.
54. Способ по п. 52 или 53, где нуклеофильным акцептором является димедон, морфолин, триметилсилилдиметиламин или диметилбарбитуровая кислота.
55. Способ по п. 54, где нуклеофильным акцептором является триметилсилилдиметиламин или диметилбарбитуровая кислота.
56. Способ по п. 55, где нуклеофильным акцептором является диметилбарбитуровая кислота.
57. Способ по любому из пп. 52-56, где инертным растворителем являются CH2Cl2, диметилформамид или смесь CH2Cl2 и диметилформамида.
58. Способ по п. 57, где раствор содержит трифторуксусную кислоту в количестве приблизительно от 1 до 90% по весу.
59. Способ по п. 58, где раствор включает трифторуксусную кислоту в количестве приблизительно 20-50% по весу.
60. Способ по п. 57, где раствор содержит хлористоводородную кислоту в количестве приблизительно 0,1-30% по весу.
61. Способ по п. 60, где раствор содержит хлористоводородную кислоту в количестве приблизительно 5-15% по весу.
62. Способ по п. 52 или 53, где N-ациламиносоединение выбирают из группы, состоящей из
213y
412a
412b
412c
412d
412e
412g
412h
и
550q
63. Способ по п. 52 или 53, где N-ациламиносоединение представляет
412f
64. Способ по п. 52 или 53, где N-ациламиносоединение представляет
412
Разноска приоритетов:
от 20.12.1995, заявка №08/575641, пп.1-51;
от 26.11.1996, заявка №60/031495, пп. 52-64.