Штамм "вл-94" парвовируса свиней для изготовления вакцинных препаратов
C12N7C12N7 -
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарной вирусологии. Новый вакцинный штамм "Вл-94" парвовируса свиней (ПВС) обладает высокой иммуногенной активностью. Штамм хорошо размножается в перевиваемой культуре клеток почки поросенка (ППК) и накапливается в титре 8,0 Ig ТЦД50/см3 через 18-24 ч культивирования. Полученный штамм обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и может быть использован для изготовления эффективных вакцинных препаратов. 1 ил., 6 табл.
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении вакцинных препаратов для профилактики парвовирусной инфекции свиней (ПВИС).
ПВИС - контагиозная вирусная болезнь, проявляющаяся клинически только у супоросных свиноматок и характеризующаяся прохолостами, малочисленными пометами, рождением мумифицированных плодов, мертвых и слабых поросят и ранними (в I половине супоросности) абортами. Связь парвовируса свиней (ПВС) с нарушением воспроизводительной функции свиноматок в естественных условиях впервые была установлена в 1967 г. в Великобритании, однако экспериментально болезнь была воспроизведена через 10 лет. Болезнь у свиноматок протекает, как правило, без видимых симптомов. Наблюдается лишь нарушение репродуктивной функции. Вирус проникает через плаценту, поражает плоды в I половине супоросности, вызывая их мумификацию и гибель. Клинически болезнь проявляется прохолостами, ранними, в I половине супоросности, абортами и преждевременнми родами. При возникновении болезни в ранее благополучных хозяйствах рождение живых поросят на одну свиноматку в год снижается на 50-60%, в стационарно-неблагополучных хозяйствах - на 10-20%. Для специфической профилактики ПВИС применяются как инактивированные, так и живые вакцины. В настоящее время основным средством борьбы с ПВИС являются инактивированные вакцины, которыми иммунизируют молодых свиноматок не позже 30-го дня до первого осеменения. Вакцинация создает у свиноматок выраженный иммунитет и предупреждает передачу вируса эмбрионам и плодам (1). Известно, что все известные изоляты ПВС оказались в антигенном отношении похожими, если не полностью идентичными (2). При изготовлении инактивированной вакцины против ПВИС единственным требованием к исходному штамму ПВС является хорошее накопление вируса в чувствительной биологической системе, используемой для его культивирования. В связи с этим задача отбора и изучения эпизоотических изолятов данного возбудителя в целях получения новых высокопродуктивных производственных штаммов ПВС для изготовления вакцинных препаратов остается актуальной. Известен штамм NADL-2 (коллекция АТСС VR-742) ПВС, используемый для изготовления инактивированной вакцины (3). Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм И-82 ПВС, используемый для изготовления инактивированной вакцины (4). Общим недостатком известных штаммов является их низкая продуктивность в известных биологических системах культивирования. В задачу создания настоящего изобретения входило расширение арсенала штаммов ПВС, обладающих высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и пригодных для изготовления эффективных вакцинных препаратов, создающих напряженный и продолжительный иммунитет у привитых животных. Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала новых высокопродуктивных вакцинных штаммов ПВС, обладающих высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и пригодных для изготовления эффективных вакцинных препаратов. Указанный технический результат достигнут получением штамма "Вл-94" ПВС. Штамм "Вл-94" является новым, ранее неизвестным. Исходный вирус для получения штамма "Вл-94" выделен во ВНИИ защиты животных в 1994 году при вирусологическом исследовании внутренних органов абортированных (до 15 см длиной) плодов свиноматок, привезенных из свинокомплекса "Владимирский" Владимирской области. Производственный штамм "Вл-94" ПВС получен последовательными пассажами на перевиваемой культуре клеток почки поросенка "Казанская" (ППК). Полученный штамм депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов МСХ РФ (ВГНКИ) 1 июля 1996 года под регистрационным шифром "Вл-94-ДЕП". Штамм "Вл-94" ПВС обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и отличается высокой продуктивностью в чувствительных биологических системах культивирования. Экспериментально подтверждена возможность его использования для приготовления инактивированной эмульсионной вакцины против ПВИС, создающей напряженный и продолжительный иммунитет у вакцинированных животных. Сущность изобретения пояснена на чертеже, на котором изображена микропанель с результатами исследования гемагглютинирующей активности (ГА-активности) штамма "Вл-94" в реакции гемагглютинации (РГА). Штамм "Вл-94" ПВС характеризуется следующими признаками и свойствами. Морфологические свойства Штамм "Вл-94" ПВС относится к семейству Parvoviridae, роду Parvovirus. Зрелый вирион имеет кубическую симметрию, включает 32 капсомера, 2 или 3 капсидных белка, диаметр вириона около 20 нм, не содержит оболочки и липиды, мол. м. составляет 5,3![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/8226.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
1) при использовании Монтанида ИЗА 70 - гомогенизация в течение 4-5 мин при скорости вращения винта 3000 об/мин и температуре 10oС, при этом получают однородную эмульсию белого цвета типа "вода-масло";
2) при использовании Монтанида ИЗА 206 - гомогенизация в течение 3-4 мин при скорости вращения винта 600 об/мин и температуре 30oС. Тип получаемой эмульсии "вода-масло-вода". При изготовлении вакцин антиген соединяют с масляным адъвантом в следующем соотношении: с адъювантом Монтанид ИЗА 70 по меньшей мере 1:2, а с адъювантом Монтанид ИЗА 206 по меньшей мере 1:1 соответственно. Готовую эмульсионную вакцину собирают в одну стерильную емкость, фасуют в стеклянные флаконы и контролируют в соответствии с техническими условиями. Для оценки антигенной активности препарата используют количественный метод контроля, с помощью которого определяют количество антигена парвовируса в прививной дозе вакцины (1 см3). Метод заключается в следующем: готовую вакцину деэмульгируют хлороформом в соотношении 1:1, центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин. Надосадок исследуют в РГА. Вакцина считается иммуногенной, если ГА-титр выделенного из вакцинного препарата парвовирусного антигена не ниже 1: 256 в прививной дозе 1 см3. В большинстве серий количество антигена равняется 512 ГАЕ, 1024 ГАЕ и 2048 ГАЕ. Вакцина представляет собой эмульсию белого или белого с розовым оттенком цвета, слегка вязкой консистенции. При хранении вакцины допускается незначительное отслоение минерального масла на поверхности эмульсии. При встряхивании вакцина приобретает однородную гомогенную структуру. Полученная вакцина имеет оптимальный компонентный состав, мас. %:
Антигенсодержащий материал из штамма "Вл-94" ПВС с инфекционной активностью не меньше 7,5 lg ТЦД50/см3 - 40,0-60,0
АЭЭИ - 0,05
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
Масляный адъювант - До 100,0
Вакцину применяют для профилактической иммунизации свиней против ПВИС. Вакцина способствует образованию активного иммунитета против ПВИС через 21 сут после 2-кратного применения препарата длительностью не менее 6 мес. Свиноматок, ремонтных свинок и хряков-производителей прививают двукратно с интервалом 20-30 дней за три недели до осеменения. Поросят прививают в 2-2,5-месячном возрасте 2-кратно с интервалом 20-30 дней. Вакцину вводят свиньям внутримышечно за ухом в дозе 1 см3 независимо от возраста животных. Вакцина пригодна для применения в течение 12 мес после изготовления при условии ее хранения в темном помещении при температуре (1-8)oС. Пример 3. Проведены исследования по проверке стерильности производственного штамма "Вл-94" ПВС (4 пассаж). Для этого из 3 флаконов нативного вируса готовили среднюю пробу и вносили по 1 см3 в три пробирки, содержащие тиогликолевую среду. Одну засеянную пробирку выдерживали в термостате в течение 14 сут при (37
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
- контроль специфического парвовирусного антигена с заведомо известным титром;
- контроль эритроцитов морской свинки (в 50 мкл физраствора вносили по 50 мкл 0,6% взвеси эритроцитов). Результаты испытаний представлены на чертеже микропанели. Таким образом, испытания показали, что гемагглютинирующий титр штамма "Вл-94" 5 пассажа в трех повторностях составил 1:2048. Пример 6. Проведены исследования по проверке специфичности производственного штамма "Вл-94" ПВС. Исследования проводились двумя методами: молекулярным и серологическим. При помощи ПЦР в штамме "Вл-94" выявлен только геном ПВС. Определение специфичности штамма серологическим методом заключалось в постановке РТГА со специфической свиной сывороткой, полученной на 28 сут после введения штамма "Вл-94" 5 пассажа. Результаты РТГА показали, что специфическая свиная сыворотка подавляла гемагглютинирующие свойства (8 ГАЕ) вируса в титре 1:1024. Задержка гемагглютинации указывает на соответствие типа вируса и взятой (заведомо известной) специфической сыворотки крови. Таким образом, результаты ПЦР и РТГА свидетельствуют о специфичности штамма "Вл-94" ПВС. Пример 7. Проведены исследования по проверке иммуногенной активности производственного штамма "Вл-94" ПВС. Для этого из 3 флаконов штамма "Вл-94" (5 пассаж) составляли среднюю пробу и готовили разведение от 10-3 до 10-10 на среде ПСП. Для оценки антигенной активности штамма использовали 5 подсвинков массой 25-30 кг, из них двух подсвинков для контроля, а трем ввели вирус с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 в дозе 1 см3 каждому (внутримышечно в область шеи за ухом). За зараженными и контрольными животными вели ежедневное клиническое наблюдение, проводили термометрию. В течение 12 сут как контрольные, так и инфицированные животные оставались клинически здоровыми, температура тела была в пределах нормы. Через 14, 21 и 28 сут после заражения у всех животных отбирали пробы крови. Сыворотки исследовали в РТГА. Результаты исследования сывороток крови представлены в табл. 3. Таким образом, специфические к штамму "Вл-94" антитела выявляли как у зараженных, так и контрольных (на контакте) подсвинков. Пример 8. Эффективность инактивированной эмульсионной вакцины против ПВИС из штамма "Вл-94", изготовленной так, как описано в примере 2, проверена в спецхозе АО "Тихий Дон" Острогожского района Воронежской области на ремонтных свинках в количестве 22 голов, привитых упомянутой вакциной двукратно с интервалом 20 дней в дозе 1 см3. Результаты исследования в РТГА сывороток крови от ремонтных свиноматок, иммунизированных этой вакциной, приведены в табл. 4. Опорос ремонтных свинок прошел в установленные физиологические сроки на 114
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/247.gif)
- штамм "Вл-94" ПВС, воплощающий предлагаемое изобретение, предназначен для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
- штамм "Вл-94" ПВС, полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, расширяет арсенал новых высокопродуктивных штаммов гомологичного вируса, обладающих высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и пригодных для изготовления эффективных вакцинных препаратов. Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость". Источники информации
1. Сюрин В.Н. и др. Вирусные болезни животных. М., ВНИТИБП, 1998, 573-584. 2. Ruckenbauer G.M. et al. Can. J. Соmp. Med., 1978, 42, 278. 3. Заявка Франции 2781159, А 61 К 39/23, 21.03.2000 г. 4. Пат. России 1538305, А 61 К 39/295, 15.12.94 г. (прототип).
Формула изобретения
РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4
Похожие патенты:
Изобретение относится к генетической инженерии
Штамм escherichia coli - продуцент аминокислоты (варианты) и способ получения аминокислот (варианты) // 2212447
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения аминокислот методом ферментации с использованием бактерий-продуцентов аминокислот, принадлежащих к роду E.coli
Изобретение относится к биотехнологии
Изобретение относится к биотехнологии и касается микробиологического синтеза ликопина
Штамм бактерий bacillus subtilis - продуцент термо- и биостойких поверхностно-активных веществ // 2211861
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения биогенных поверхностно-активных веществ, применяемых в нефтяной промышленности при извлечении тяжелых нефтей из битуминозных песчаников, очистке емкостей от остатков нефти, очистке почвы, загрязненной углеводородами, для стабилизации и дестабилизации эмульсий
Изобретение относится к технологии производства растениеводческой продукции, используемому в ней средству для обработки растений и технологии получения последнего
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии
Изобретение относится к области ветеринарной биотехнологии, вирусологии и микробиологии
Штамм кр 95 № 114 вируса синдрома гидроперикардита кур для изготовления вакцинных препаратов // 2193062
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии
Изобретение относится к ветеринарии
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к птицеводству, а именно к вакцинным препаратам против инфекционных заболеваний, а именно вируса "Синдрома снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76)", и способам вакцинации
Изобретение относится к средствам специфической профилактики чумы, инфекционного гепатита и парвовирусного энтерита собак
Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной вирусологии и касается средств специфической профилактики и лечения болезней плотоядных, в частности, к средствам специфической профилактики чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита
Способ изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против синдрома гидроперикардита кур // 2213576
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии