Использование мср-1 для индукции готовности к раскрытию шейки матки

 

Изобретение относится к медицине. Предложен способ индуцирования созревания шейки матки, включающий введение эффективного количества пептида МСР-1, МСР-2 или МСР-3, а также фармацевтическая композиция, содержащая эти пептиды. Изобретение позволяет оказать локализованное действие без сокращений миометрия и повреждения плода. 2 с. и 8 з.п.ф-лы, 6 табл.

Предпосылки изобретения 1. Область техники, к которой относится изобретение Данное изобретение относится к способам обработки для индукции готовности к раскрытию шейки матки, в частности, при индукции родов в качестве вспомогательного пособия при родах у млекопитающих.

2. Описание уровня техники Родовая деятельность (выталкивание плода из матки) требует как сокращений миометрия, гладкой мускулатуры матки, так и размягчения высоко специализированной соединительной ткани шейки матки с тем, чтобы обеспечить достаточное удлинение и расширение шейки для обеспечения возможности выталкивания плода. Это размягчение известно как "готовность к раскрытию".

Современным предпочтительным способом обеспечения готовности к раскрытию шейки матки является применение простагландина Е2 (PGE2). Он используется в виде влагалищного геля или таблетки, или в виде геля, помещаемого в шейку матки. Одним из недостатков применения (PGE2) является возможность гиперстимуляции матки, приводящая к сокращениям миометрия перед наступлением готовности шейки матки к раскрытию и поэтому перед тем, как возможно проведение комфортных или безопасных родов. Идеальная подготовка должна размягчить и сгладить шейку матки, не вызывая сокращений миометрия. Она должна обеспечить возможность последующих сокращений (вызываемых в случае необходимости с помощью небольшой дозы простагландина) для рождения младенца при минимальном сопротивлении.

Имеются убедительные доказательства, по данным экспериментов на животных, что антипрогестины, как например, RU486, отвечают этим требованиям, но при использовании этого препарата возникает проблема того, что он обладает сопутствующей антиглюкокортикоидной активностью, ведущей к повышению уровней картизола и AKTT [X.Bertagna et al. J.Clin Endocrinol. Metab., 1994, Vol.78, pp.375-380] и может также оказать повреждающее действие на плод.

Применение интерлейкина-8 (1L-8) также было ранее предложено в качестве агента, вызывающего подготовку шейки матки к раскрытию (WO 93/09796). Известно, что выработка 1L-8 подавляется прогестероном [R.W.Kelly et al., The Lancet 1992, Vol.339, pp.776-777; P.W.Kelly et al., Human reproduction, 1994, Vol.9, pp.253-258].

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ Неожиданно, недавно было установлено, что выработка моноцитарного хемотактического пептида-1 (МСР-1) хориодецидуальной тканью подавляется прогестероном. Хориодецидуальной тканью является ткань, обнаруживаемая на наружной поверхности плодного мешка и поэтому контактирующая с маткой в области шейки. Из этого следует, что МСР-1, другие -хемокины и его фрагменты и аналоги могут использоваться для обеспечения готовности к раскрытию шейки матки.

Соответственно, изобретение относится к способу индуцирования созревания шейки матки у самки млекопитающего, которая нуждается в этом, при этом способ включает введение самке млекопитающего эффективного количества пептида, который представляет собой МСР-1, МСР-2 или МСР-3. Самкой млекопитающего может быть человек или животное. Обычно это женщина. Полипептид по изобретению может, таким образом, использоваться в качестве вспомогательного пособия при родах у млекопитающих или при удалении плода.

Полипептиды по изобретению могут оказывать локализованное действие и не вызывать избыточную сократимость миометрия, иногда связанную с использованием простагландина. Поэтому они не оказывают повреждающего действия на плод. Обычно во время родов шейка раскрывается без помощи извне. Однако, соединения по данному изобретению могут помочь во время нормального раскрытия шейки матки и во время всех возникающих при родах ситуациях, при которых готовность шейки матки к раскрытию недостаточна. Кроме того, они помогут нормальному раскрытию для облегчения процесса родов у женщин. Поэтому можно достичь уменьшения или избежать боли во время родов, аборта и хирургического или диагностического вмешательства.

ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОЙ РЕАЛИЗАЦИИ МСР-1, известный также как моноцитарный хемотактический и активирующий фактор (MCAF), может быть получен из фибробластов или моноцитов [T.Yoshimura et al. , FEBS Letters, Vol.244, pp.487-493; T.Yoshimura et al., J.Immunol., 1990, Vol.144, pp.2377-2383; M.W.Rolfe et al., Am.J.Physiol., 1992, Vol.263, L536-L545] . МСР-1 может быть получен с помощью синтеза рекомбинантной ДНК или с помощью пептидного синтеза с использованием модификации процедуры синтеза 1L-8 [I. Clark-Lewis, Biochemistry, 1991, Vol.30, pp.3128-3135]. МСР-1 может быть также получен из биологических источников, как например, поли 1/поли С стимулированные фибробласты в культуре. Вследствие различных углеводородных замещений, существуют естественные варианты МСР. Пептид имеет концевой остаток сиаловой кислоты и степень О-гликозилирования, которая обеспечивает появление видов с различным молекулярным весом T.Yoshimura, in: Baggiolinin M. and Sorg С. "Interleukin-8 (NAP-1) and related cyto kines" Karger, Basel; 1992, pp.132-152).

-хемокины, отличающиеся от МСР-1, и указанные фрагменты и аналоги МСР-1 или другие -хемокины также способны вызвать готовность шейки матки к раскрытию. Его можно определить с помощью тестирования. "Фрагмент" МСР-1 является укороченной формой МСР-1. Обычно фрагмент может содержать от 6 до n - 1 остатков, где n является количеством аминокислотных остатков нативной молекулы. Поэтому фрагмент может состоять из 6-50, например, от 10 до 40 или от 15 до 25 остатков.

Дальнейшие примеры полипептидов по изобретению включают полученные из опухоли варианты, названные МСР-2 и МСР-3 (J. van Dammue et al., J. Exp. Med., 1992, vol.176, pp. 59-65).

"Аналогом" МСР-1 является неприродная молекула, по существу, аналогичная либо МСР-1, либо ее фрагменту. Молекулу называют "по существу аналогичной" другой молекуле, если последовательность аминокислот в обеих молекулах, по существу, аналогична и если обе молекулы обладают одинаковой биологической активностью.

МСР-1 является -хемокином или С-С хемокином. Любой -хемокин может использоваться в данном изобретении. Обычно, человеческий -хемокин используется при лечении женщин. -хемокин животных может использоваться для лечения женщин при их совместимости. Это можно определить путем тестирования. Предпочтительными -хемокинами, которые могут использоваться по данному изобретению, являются следующие: человеческий МСР-1, человеческий МСР-2, человеческий МСР-3; человеческий RANTES; человеческий MIP-1, человеческий MIP-1 и I-309; Эти -хемокины подробно описаны в книге R.Callard и А.Gearing "The Cytokine Facts Book", London, Academic Press, 1994. Их аминокислотные последовательности представлены ниже в табл. 1. Все -хемокины являются хемотактическими для моноцитов. Биологические функции in vitro МСР-1, МСР-2, МСР-3, РANTES, M1P-1, M1P-1 и 1-309 представлены ниже в табл. 2. 1-309 является человеческим гомологом мышиного гена ТСА-3 [S.D. Wilson et al., J. Immunol. , 1990, vol. 145, pp. 2744-2745; М.D. Мiller et al., J. Immunol, 1989, vol. 143, pp. 2907-2916; P.P. Burd et al., J. Immunol, 1987, vol.139, pp. 3126-31317].

Фрагмент -хемокинов может использоваться по настоящему изобретению. Фрагмент должен быть способен вызвать готовность шейки матки к раскрытию. Это можно определить с помощью тестирования. Фрагменты могут содержать от 6 до n - 1 аминокислотных остатков, где n является числом аминокислотных остатков -хемокина. Поэтому фрагмент может состоять из 6-50 остатков, например, от 10 до 40 или от 15 до 25 остатков.

Аналог -хемокина, который способен вызвать готовность шейки матки к раскрытию, может альтернативно использоваться по настоящему изобретению. Способность аналога вызвать готовность шейки матки к раскрытию можно определить с помощью тестирования. Аналог может быть получен путем модификации аминокислотной последовательности -хемокина, например, одной из аминокислотных последовательностей, представленных в табл. 1, или фрагмента -хемокина.

Аминокислотная последовательность -хемокина, или его фрагмента, может модифицироваться путем замещений одной или более аминокислот и/или путем удлинения одного или всех окончаний. Между аминокислотной последовательностью немодифицированного -хемокина или фрагмента -хемокина и аминокислотной последовательностью их аналога, степень гемологии составляет 75%. Степень гомологии может составлять 85% или более или 95% или более.

В нативных последовательностях -хемокина или фрагмента -хемокина могут производиться сохраняющие аминокислоту заместители. Может производиться до 15 подобных замещений, например, от 1 до 10 или от 2 до 6. Могут быть включены одно, два, три, четыре или пять сохраняющих заместителей.

Сохраняющие аминокислоту заместители показаны ниже в табл. 3. Обозначения и сокращения, использованные в табл. 3, рекомендованы Объединенной комиссией lUPAC-1UВ по биохимической номенклатуре "Nomenclature and Symbolism for Amino Acids and Peptides, Recommendations 1983", J. Biol. Chem. 1985, vol. 260, pp. 14-42. Другие использованные сокращения следующие:
Nle: норлейцин,
Aib аминоизобутановая кислота,
AdaA: -адамантилаланин,
AdaG: -адамантилглицин,
hоmо-Аrg: L-гомоаргинин,
D-homo-Arg: D-гомоаргинин,
Аср: аминокапроновая кислота,
Chg: L--циклогексилглицин,
allo-Thr: L-аллотреонин,
Cha: -циклогексилаланин,
Оrn: орнитин,
руrо-Glu: пироглютамил,
Met (О) и D-Met(О): сульфоксиды, производные из L- и D-метионина, соответственно;
-Ala: -аланин,
Acm: ацетамидометил,
L-Doра: 3-(3,4-дигидроксифенил)-L-аланин и
Вра: 4-бензоил-фенилаланин.

Таким образом, может быть сохранен физико-химический характер первоначальной последовательности, т. е. в плане плотности заряда, гидрофобности/гидрофильности, размера и конфигурации. Таким образом, может образоваться молекула, практически аналогичная нативному -хемикину или фрагменту -хемокина. Тождество можно определить с помощью тестирования, например, на хемотаксис в отношении моноцитов. В случае аналогов указанных выше предпочтительных аналогов -хемокинов, можно провести тестирование аналогов на биологические функции in vitro, показанные в табл. 2.

Аналоги могут быть также получены путем вставки в аминокислотную последовательность -хемокина или фрагмента -хемокина до 10 аминокислотных остатков, например, от 1 до 5 остатков. Аналоги могут быть получены путем обеспечения удлинения С-окончания или N-окончания -хемокина. Такие удлинения могут быть длиной до 10 аминокислотных остатков, например, длиной от 1 до 5 остатков. Остатки для вставки и/или добавления в качестве удлинений отбираются таким образом, чтобы полученный в результате аналог имел активность, практически одинаковую с -хемокином или, соответственно, с фрагментом -хемокина, из которого он получен.

Изобретение применимо к людям и к любому другому виду млекопитающих, у которых основной механизм родов аналогичен таковому у людей, при котором требуется готовность шейки матки к раскрытию.

Введение может осуществляться любым путем, при котором, прямо или косвенно, оно достигнет шейки матки. Таким образом, активное соединение может для удобства применяться внутривлагалищно или непосредственно наноситься на шейку матки, например, в виде геля или крема. Оно может также вводиться в шейку в виде инъекции. Его можно также применять экстраамниотически, например, через катетер, введенный между стенкой матки и амниотическим мешком.

Вводится безопасное и эффективное количество полипептидов по настоящему изобретению. Вводимое количество будет зависеть от ряда факторов, как например, субъект, способ и цель введения. Обычно дозировка составит от 0,001 до 20 мг, как например, от 0,01 до 20 мг, на шейку матки. Введение может проводиться одномоментно, раздельными дозами или в форме препарата пролонгированного действия.

Время введения будет зависеть от ряда факторов, включая цель, с которой вводятся полипептиды по настоящему изобретению. Если введение производится в связи с родами, время будет зависеть от течения родов. При родах желательно обеспечить готовность шейки матки к раскрытию перед тем, как начались или собираются начаться сокращения миометрия.

Полипептиды по настоящему изобретению могут применяться в связи с родами или абортом. В ситуации беременности происходит предварительная обработка шейки матки. Во время беременности гормоны вызывают изменения в шейке матки, которая затем склонна к эффективной реакции на другие стимуляторы. Полипептиды по настоящему изобретению могут также использоваться в связи с хирургической процедурой или диагностической процедурой. Таким образом, они могут использоваться по следующим показаниям:
A) индукция срочных родов (время обычных родов, иногда в сочетании с последующим лечением окситоцином или аналогичными агентами),
B) индукция родов в связи с патологической беременностью (например, при уродствах плода) (предпочтительный аборт во втором триместре беременности),
С) индукция родов в связи с внутриутробной гибелью плода,
D) индукция выкидыша (предпочтительный аборт во втором триместре беременности),
Е) индукция преждевременных родов,
F) индукция готовности шейки матки небеременной женщины или беременной женщины к раскрытию для облегчения проведения хирургической или диагностической процедуры и
G) индукция готовности к раскрытию шейки матки у женщин.

Поэтому полипептиды по настоящему изобретению могут использоваться при содействии родовой деятельности либо при естественном ее течении, либо при проведении хирургического пособия. Кроме того, полипептиды по настоящему изобретению пригодны для удаления нежелательного плода, например, при проведении аборта, который также может быть естественным или проводиться хирургическим путем.

Кроме того, полипептиды по настоящему изобретению могут использоваться для размягчения шейки матки для облегчения проведения других операций, как, например, процедуры искусственного оплодотворения и эндоскопического исследования. Обеспечение размягчения шейки может дать возможность проведения этих и других процедур без анестезии.

Обычно полипептиды по настоящему изобретению представлены в виде фармацевтической композиции, содержащей также фармацевтически приемлемый носитель или растворитель. Некоторые композиции образуют часть настоящего изобретения, в частности, составы в виде геля или крема, содержащие полипептид по изобретению, и, соответственно, основу, образующую гель или крем. Гели и кремы могут содержать в качестве основы любое подходящее водное маслянистое вещество. Альтернативно, полипептид по настоящему изобретению может входить в состав мягких капсул, липосом, суппозиториев, составов замедленного или задержанного действия или водного раствора, например, солевого или содержащего белок раствора.

Гели обычно изготовлены из гидрофильных полимеров, как например, поперечно-связанный полиэтиленгликоль, поперечно-связанный крахмал или поливинилпирролидон. Гель может быть таким, чтобы его можно было набирать в шприц. Капсулы могут быть изготовлены из полимера, который размягчается от температуры тела, как, например, желатин или полимер, который медленно растворяется в жидкостях организма. Хорошо известны многие виды составов пролонгированного действия, например, матриксного типа (см., например, патент US-А-3851648) или мембранного типа.

Полипептиды по настоящему изобретению могут совместно вводиться с соединением, которое вызывает сокращения миометрия, например, простагландином, в частности, простагландином Е₂ или соединением, повышающим тонус матки. Такое совместное введение может использоваться в связи с родами или абортом. Соединения, повышающие тонус матки, описаны в патентах ЕР-А-0 214 924 и ЕР-А-0 184 471. Предпочтительным соединением, повышающим тонус матки, является окситоцин. Таким образом, изобретение также представляет:
- продукт, содержащий i) соединение, которое вызывает сокращения миометрия, и ii) полипептид по настоящему изобретению, в виде объединенного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для обеспечения готовности к раскрытию шейки матки у самки млекопитающего; и
- продукт, содержащий i) соединение, которое повышает тонус матки, и ii) полипептид по настоящему изобретению, в виде объединенного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для обеспечения готовности к раскрытию шейки матки у самки млекопитающего.

Вещество, которое вызывает сокращения миометрия, или соединение, повышающее тонус матки, с одной стороны, и полипептид по настоящему изобретению, с другой стороны, могут вводиться различными путями (например, в виде геля и инъекции) и в различное время (например, сначала полипептид по настоящему изобретению, а через 6-48 ч - окситоцин).

Вещество, которое вызывает сокращения миометрия, или соединение, повышающее тонус матки, с одной стороны, и полипептид по настоящему изобретению, с другой стороны, могут быть представлены отдельно упакованными внутри набора. Однако данное изобретение также относится к фармацевтической композиции, которая содержит (1) полипептиды по настоящему изобретению; (2) вещество, которое вызывает сокращения миометрия, как например, простанландин, в частности, простагландин E₂; и (3) фармацевтически приемлемый растворитель или носитель. Такая композиция может быть в любой из упомянутых выше и ниже форм. Она может также включать 1L-8 в любой из форм, описанных в патенте WO 93/07976.

Следующие примеры иллюстрируют изобретение.

Пример 1
Ткань эндометрия
Эндометрий получен с согласия больной, у которой выполнялась полная абоминальная гистерэктомия по поводу незлокачественного заболевания. Мелкие (размером приблизительно 2 х 2 x 1 мм) кусочки ткани помещали на стерилизованное полипропиленовое капиллярное матовое покрытие на границе раздела жидкость/воздух. Используемой средой была Среда RРМ1 1640 (Hyclone), содержащая 10% сыворотки плода ягненка (Gibco), пенициллин (50 мкг/мл), стрептомицин (50 ед. /мл) и гентамицин (5 мкг/мл). В пределах 30 мин после взятия ткань помещали в культуру в атмосфере с содержанием 5% СО₂ в воздухе. Использовали шесть репликационных отсеков на каждую обработку. Содержание белка в ткани определяли путем переваривания ткани в гидроокиси натрия с последующим колориметрическим определением.

Хориодецидуальные клетки
Плодные оболочки с прикрепленной децидульной оболочкой матки получали во время планового кесарева сечения при доношенной беременности; участок оболочки, покрывающей плаценту, не использовали. Хорион отделяли от амниона, измельчали на кусочки размером 3-4 мм и помещали во флакон переваривания, содержащий 300 мл RPMl с трипсином (0,5% веса по объему) и ДНКазу (20 мг/л). Ткань переваривалась в течение 40 мин и фильтровалась через сетчатый нейлоновый фильтр размером 0,16 мм. Жизнеспособность (исключение трипанового синего) всех клеток превышала 90%. Клетки помещали в отсеки диаметром 1,7 см при концентрации 200000 клеток на отсек и инкубировались в атмосфере с содержанием 5% СО₂ в воздухе. Использовали шесть репликационных отсеков на каждую обработку. Обработку стероидами начинали через семь дней пребывания в культуре. Представленные данные получены из сред, собранных между 24 и 72 ч после обработки форболовым эфиром (форбоп миристоил ацетат).

Прогестерон и медрокси прогестерон ацетат (МРА; 6-метил-17-ацетокси прегн-4-ин-3,20-дион) приобретали у компании "Sigma". Стероидные запасы содержали в этаноле при концентрации 2 мг/мл и растворяли в укомплектованной среде для получения 10-кратно концентрированного раствора. 10% этого рабочего раствора добавляли в инкубационные отсеки. Конечная концентрация этанола составила 0,02%, и этанол в этой концентрации добавлялся в контрольные отсеки. Стероиды в отсеках использовались в концентрации 10⁶ М.

Определение МСР-1
МСР-1, выработанный в отсеках, определяли с помощью специфической радиоиммунной пробы. Антисыворотки (козьи) против МСР-1 были получены от компании "R&D Systems" Оксфорд и использовали при разведении приблизительно 1: 12500. Метку готовили путем иодирования (хлорамин-Т) человеческого рекомбинантного МСР-1 ("R& D Systems", Оксфорд) с последующей хроматографией на колонке из карбоксиметил кремнезема. В отношении ткани эндометрия, где использовали различные по весу образцы цельной ткани, результаты выражались в наннограммах (нг) МСР-1 на 1 мг ткани на 1 мл раствора. Результаты представлены в табл. 4, 5.

Результаты, которые сравнимы только для одной и той же ткани, показывают, что МСР-1 продуцировался в эндометрии (слизистой оболочки на внутренней поверхности матки), а также в хориодецидуальной ткани. Продукция подавлялась прогестероном, гормоном, который поддерживает беременность. Близость хориодецидуальной ткани к шейке матки свидетельствует о том, что МСР-1 будет доступен для шейки матки. Как объяснялось выше, можно предположить на основании этой информации, что МСР-1 пригоден при подготовке шейки к раскрытию, и поэтому такая готовность к раскрытию может быть вызвана или усилена введением МСР-1 в область шейки матки.

Пример 2
Двадцать четыре крольчихи были разделены на 4 равные группы. Каждая группа состояла из 6 крольчих, 3 из которых не были беременными, а 3 были беременны. Всем животным внутривлагалищно вводили свечи, содержащие либо плацебо (контроль), либо 100 нг МСР-1. МСР-1 был приготовлен из человеческих фибробластов, стимулированных поли 1/поли С и очищенных. МСР-1 поставлялся компанией "Toray Industries Inc." Камакара, Япония, и имеет хемотактическую активность для макрофагов при концентрации от 0,1 до 1 нг на мл и вызывает кальциевые потоки в клетках ТНР-1 при концентрации 1 нг на мл. Каждой крольчихе ежедневно вводили одну свечу в течение 1, 2 или 3 дней. Животных забивали через 24 ч после введения последней дозы. Иссеченные шейки матки исследовали для определения степени плотности и расширения с помощью расширителей Гегара.

Для исследования патологических изменений готовили гистологические срезы и окрашивали их гематоксилином и эозином (Н&Е).

Иммуногистологическое окрашивание для выявления поверхности антигена RT-2, обнаруженного в лейкоцитах кролика, проводилось с помощью моноклонального антитела против кроличьего антигена RT-2 (Cederlane Laboratories Limited, Канада). Подсчитывали общее количество лейкоцитов в 5 случайно выбранных полях соединительной ткани каждого образца биопсии (увеличение х 20).

Относительную концентрацию коллагена оценивали путем окрашивания пикросириусом красным (Sirius red F3BA Chroma-Gesellschaft Schmid Gmbh, Германия) с обоснованием его пригодности в качестве гистологического способа определения концентрации полимеризованного коллагена в тканях, включая ткань шейки матки.

Гистологический анализ выполнялся путем измерения оптической плотности (% передачи поляризованного света) из 5 случайно выбранных полей соединительной ткани из каждой биопсии, и рассчитывалась средняя оптическая плотность. Для всех гистологических измерений использовался анализатор изображения (микроскоп: Olympus IMT-2, видеокамера SIT С2400-80 и система компьютерного анализатора с фотоникой AGRUS-100 Hamamatsu). При окрашивании пикросириусом красным, чем выше концентрация коллагена, тем больше двойное лучепреломление, а следовательно, больше процент передачи света.

В каждой шейке матки отсекали 100 мг соединительной ткани, гомогенизировали ее солевым раствором с фосфатным буфером и центрифугировали. До использования супернатантную жидкость собирали и хранили при -80^oС. Активность коллагеназы в этой жидкости из шейки матки измеряли с помощью высоко специфичных наборов (измерение активности коллагеназы типа 1, "Yagai", Япония). Тогда как активность эластазы измерялась специфическим хромогенным субстратом для эластазы гранулоцитов S-2484 (L-пироглютамил-L-пролил-I-валин-Р-нитранилид, КАВI Diagnostic, Швеция). Уровни эластазы показаны в табл. 3 и отражают освобождение ферментов нейтрофилов.

Размягчение и расширение наблюдалось в шейках матки, обработанных МСР-1. Эффект МСР-1 усиливался со временем. Исследование гистологических срезов выявило заметное уменьшение содержания коллагена после применения МСР-1. Коллагеновые волокна становились ненатянутыми и широко разделенными основным матриксом. В то же самое время, кровеносные сосуды были расширены и заполнены лейкоцитами. Лейкоциты были также распределены в соединительной ткани вокруг кровеносных сосудов и ниже железистого эпителия. Наблюдалось значительное увеличение количества лейкоцитов, проникших в соединительную ткань.

Измерение оптической плотности показало значительное уменьшение относительного содержания коллагена в тканях шеек матки, обработанных МСР-1 (табл. 6). Активность коллагеназы была значительно повышена в обследованных шейках матки небеременных и беременных крольчих, по сравнению с контрольной группой. Активность эластазы (показатель освобождения ферментов нейтрофилов) была повышена в шеечной жидкости в группах, получавших МСР-1, по сравнению с контрольными группами (табл. 6).

Пример 3
Моноцитарный хемотактический пептид-1 (0,5 мг) в водном растворе добавляется в 0,1 г перекрестно связанного крахмала, и полимеру дают возможность абсорбировать раствор. Затем препарат подвергают лиофильной сушке и хранят в сухом виде. Перед применением врачом в полимер добавляется физиологический раствор для получения геля требуемой консистенции для набора в шприц. Затем с помощью шприца гель вводится в шейку матки.

Формула изобретения

1. Способ индуцирования созревания шейки матки у самки млекопитающего, которая в этом нуждается, включающий введение самке млекопитающего эффективного количества пептида, который представляет собой МСР-1, МСР-2 или МСР-3.

2. Способ по п.1, при котором у указанного млекопитающего имеется беременность.

3. Способ по п.2, при котором указанный пептид вводят, чтобы индуцировать созревание шейки матки для родов или аборта.

4. Способ по п.1, при котором указанный пептид вводят, чтобы индуцировать созревание шейки матки для оперативного вмешательства или диагностической процедуры.

5. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором указанный пептид вводят вместе с веществом, вызывающим сокращение миометрия, или с эффективным соединением, стимулирующим сокращение матки.

6. Способ по п.5, при котором вещество, вызывающее сокращение миометрия, или эффективное соединение, стимулирующее сокращение матки, вводят спустя 6-48 ч после введения указанного пептида.

7. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором указанный пептид вводят интравагинально, или наносят непосредственно на шейку матки в форме геля или крема, или инъецируют в шейку матки, или наносят на амнион.

8. Фармацевтическая композиция, содержащая (1) эффективное количество пептида по п.1, (2) эффективное количество вещества, вызывающего сокращение миометрия, и (3) фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

9. Композиция по п.8, в которой веществом (2) является простагландин-Е.

10. Композиция по п.8 или 9 в форме геля, крема, микрокапсул, препарата с медленным или отсроченным высвобождением активного агента или стерильного раствора для инъекций или суспензии.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11