Способ определения моносахаридов в сыворотке крови
Способ может быть использован в медицине, биологии для лабораторной диагностики. Для проведения газохроматографического анализа используют ацетилированные альдононитрилы моносахаридов сыворотки крови, анализ проводят на двухметровой колонке диаметром 3 мм, заполненной 3% Selicone ХЕ-60 на отмытом кислотой хроматоне при температуре 220°С в изотермическом режиме или режиме программирования температур от 210 до 245°С со скоростью 12°С в минуту. Способ увеличивает сроки хранения препаратов и упрощает условия их хранения.
Изобретение относится к медицине, биологии, в частности к лабораторной диагностике.
Известны методы определения моносахаридов о-тулоидиновым способом, методом тонкослойной хроматографии [1] на слоях кизельгурт-гипс, силикогель-гипс, с использованием ядерно-магнитного резонанса [2], с помощью масс-спектрометрии [3], методом хроматографии на бумаге [4]; однако перечисленные методы не обладают достаточной специфичностью для близких сахаров (например, глюкозы, сахарозы, манозы). Единственным рутинным методом идентификации и количественного анализа родственных моносахаридов в биологических объектах считается газожидкостная хроматография. Наиболее удобным для этого считается способ приготовления производных простого триметилсилилового эфира [5,6], осуществляющийся следующим образом: 0,1 мл сыворотки с помощью пипетки вводят в центрифужную пробирку; для осаждения сопутствующих компонентов добавляют 0,5 мл 2% ZnSO47H2O и 0,5 мл 1,8% Ba(ОН)2, 0,9 мл дистиллированной H2O; раствор перемешивают в смесителе Vortex, отстаивают в течение 5 минут; раствор надосадочной жидкости лиофилизируют; сухой материал переносят в пробирку с крышкой, добавляют 1 мл пиридина, 0,2 мл гексаметилдисилазана, 0,1 мл триметилхлорсилана, все это тщательно перемешивают, приблизительно через 20 минут смесь центрифугируют и хранят в пробирке с тефлоновым покрытием. Препарат стабилен в течение недели при температуре 4oC. Для газохроматографического анализа пробу объемом 1-5 мкл с помощью микрошприца вводят в стеклянную или металлическую колонку длиной 1,7 м и сечением 3 мм, наполненную 15% EGS или 3% SE-52 на промытом кислотой силализированном газ-хроме P. Температура колонки при этом должна составлять около 140oC при изотермическом режиме или программироваться от 110 до 195oC со скоростью 5oC в минуту. Цель изобретения - увеличение сроков хранения препаратов, упрощение условий их хранения. Предлагаемый метод отличается тем, что для проведения газохроматографического анализа используется приготовление ацетилированных альдононитрилов моносахаридов сыворотки крови следующим образом: 1 мл сыворотки крови с помощью пипетки вносится в центрифужную пробирку; для осаждения сопутствующих компонентов добавляют 2 мл 1,8% раствора Ba(ОН)2 и 2 мл Zn SO4 7H2O, перемешивают стеклянной палочкой в течение 1 минуты и 10 минут отстаивают при комнатной температуре; затем смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут, 2 мл надосадочной жидкости переносят в чистую сухую пробирку, использующуюся в дальнейшем как реакционный сосуд, и выпаривают на водяной бане досуха; к полученному остатку добавляют 2 мл пиридина, 100 мг гидроксиламина, запаивают в ампулу и нагревают на водяной бане в течение 1 часа; ампулу вскрывают, добавляют 2 мл уксусного ангидрида, вновь запаивают и нагревают на водяной бане 1 час; затем содержимое ампулы с помощью разделительной воронки дважды промывают хлороформом по 2 мл, хлороформы объединяют и выпаривают досуха в сухожаровом шкафу при температуре 60oC. Подготовленный данным способом препарат стабилен в течение 1 года при комнатной температуре, что позволяет создавать банки проб сыворотки крови, проводить повторные анализы в динамике лечебного процесса. Для газохроматографического анализа полученный после выпаривания хлороформа осадок разводят 20 микролитрами хлороформа, пробу объемом 0,5-1 микролитр вводят в металлическую колонку хроматографа длиной 2 м, сечением 3 мм, заполненную 3% Silicone XE-60 на отмытом кислотой хроматоне. Температура колонки составляет 220oC при изотермическом анализе или программируется от 210 до 245oC со скоростью 12oC в минуту.Формула изобретения
Способ определения моносахаридов в сыворотке крови путем осаждения сопутствующих компонентов исследуемой пробы, лиофилизирования надосадочной жидкости и газожидкостной хроматографии на металлической колонке сечением 3 мм, отличающийся тем, что при проведении анализа используют приготовление ацетилированных альдононитрилов моносахаридов сыворотки крови путем прибавления к исследуемой пробе уксусного ангидрида, перемешивания и выпаривания досуха при температуре 60oC, после чего полученный осадок разводят в хлороформе, пробу вводят в колонку хроматографа длиной 2 м, заполненную 3% Silicone XE-60 на отмытом кислотой хроматоне при температуре 220oC в изотермическом режиме или режиме программирования температур от 210 до 245oC со скоростью 12oC в минуту.РИСУНКИ
Рисунок 1
Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к инфектологии и неврологии
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии
Способ определения ацетилхолина // 2159433
Изобретение относится к области биологии и медицины, в частности, для определения ацетилхолина, что может найти применение для диагностики состояния холиноргических систем органов и тканей
Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии и касается способа изготовления микрочипов на основе олигонуклеотидов, иммобилизованных в органических полимерных гелях, получаемых полимеризацией непредельных мономеров
Изобретение относится к молекулярной биологии и биотехнологии, а точнее к способу иммобилизации олигонуклеотидов в органических полимерных гелях
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и к внутренним болезням
Способ диагностики микогенной сенсибилизации // 2156465
Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии и внутренним болезням, и может быть использовано для диагностики сенсибилизации при заболеваниях кожи и внутренних органов
Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к комбустиологии, и может быть использовано при диагностике генерализации инфекции у обожженных животных
Изобретение относится к пищевой промышленности, сельскому хозяйству, агрохимии и может быть использовано при диагностике питания растений в процессе выращивания, а также при контроле качества сельскохозяйственной продукции, то есть для количественного определения азота в природных и промышленных продуктах
Изобретение относится к офтальмологии, а именно к прогнозированию развития катаракты при первичной глаукоме
Изобретение относится к медицине в частности к кардиологии
Изобретение относится к ветеринарии, в частности, к методам исследования белков
Изобретение относится к области медицины, в частности к инфекционным болезням
Изобретение относится к способам оценки антиокислительной активности (АОА) биологически активных веществ (БАВ) и может найти применение в фармации и пищевой промышленности
Изобретение относится к медицине, в частности к наркологии
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии
Способ диагностики множественной миеломы // 2172489
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии
Способ определения концентрации кальция в сыворотке крови и других биологических жидкостях // 2172491
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике
Изобретение относится к медицине, в частности неонатологии, неврологии