Питательная среда для регенерации растений яблони из семядолей

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и биотехнологии и предназначено для размножения посадочного материала семечковых культур из семядолей. Предлагаемая питательная среда, составленная по прописи среды Мурасиге-Скуга (1962), содержит в качестве стимулятора роста настойку стеркулии 30-75 мл/л. Использование настойки стеркулии позволяет значительно сократить сроки получения полноценных регенерантов, в несколько раз повысить коэффициент размножения и существенно снизить себестоимость среды. 2 табл.

Использование: в сельском хозяйстве и биотехнологии, в частности, для микроклонального размножения яблоневых деревьев.

Сущность изобретения: питательная среда на основе среды Мурасиге-Скуга содержит дополнительно в качестве стимулятора роста настойку стеркулии 30-75 мл/л.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для ускоренного размножения посадочного материала семечковых культур на основе культуры ткани семядолей.

Известны питательные среды для получения большого числа стандартных сеянцев /Бурдасов В. М. Элементы физиологии эмбриогенеза и культуры in vitro незрелых зародышей яблони. -Авторефер.канд. дис., Иркутск, 1972, Ious O.P. Effect of benzyl adenine on apple shoots, Nature (1967), 215, 1514-1515.

Недостатком этих сред является длительный период выращивания культур и дороговизна добавляемых в питательные среды стимуляторов роста.

Наиболее близкой по сущности к изобретению является среда Мурасиге-Скуга /1962/, используемая в работе. Callus formation and plant regeneration capacity of apple embryonic axes and cotyledons in relatien to seed dormancy= I.Sinska, Pl. Sci (1088), 54, 147-152.

Состав среды прототипа следующий, мг/л: NH₄NO₃ - 1650 KNO₃ - 1900 CaCl₂ 2H₂O - 440 MgSO₄ 7H₂O - 370 KH₂PO₄ - 170 H₃BO₃ - 6,2 MnSO₄ 4H₂O - 22,3 CoCl₂ 6H₂O - 0,025 CuSO₄ 5H₂O - 0,025
ZnSO₄ 7H₂O - 8,6
Na₂MoO₄ 2H₂O - 0,25
KI - 0,83
FeSO₄ 7H₂O - 27,8
Na₂ЭДТА 2H₂O - 37,3
Тиамин хлорид - 0,2
Пиридоксин хлорид - 0,5
Миоинозитол - 100
Никотиновая кислота - 0,5
Глицин - 0,2
ИУК - 1,5 мг/л
6-БАП - 2 мг/л
Агар - 10 г/л
pH - 5,6
Недостатками данной среды являются длительность процесса размножения, т. к. на ней возможно получение лишь каллусов, а для регенерации побегов нужен перенос на питательные среды другого состава, что намного усложняет и увеличивает длительность процесса получения сеянцев нормальных параметров.

Целью изобретения является сокращение сроков размножения и уменьшение себестоимости питательной среды.

Цель достигается тем, что предлагаемая питательная среда для микроклонального размножения, содержащая макро- и микроэлементы по рецепту среды Мурасиге-Скуга /1962/, в качестве стимулятора роста содержит настойку стеркулии /Tinctura Sterculiae/ 30-75 мл/л, выпускаемую медицинской промышленностью для лечебных целей. Благодаря новой совокупности компонентов достигается положительный эффект, а именно значительно сокращаются сроки размножения побегов, а также повышается эффективность выхода стандартных черенков для следующего этапа - укоренения.

Пример. Проводили исследования развития семядолей сорта Джонатан. В ламинарном боксе извлекали семядоли и высаживали на питательные среды составов, приведенных в табл. 1. Маточные растворы макро- и микроэлементов, витаминов готовили на бидистиллированной воде. Питательные среды готовили общепринятыми методами. Автоклавирование проводили при 1 атм в течение 30 минут. Пробирки с семядолями ставили для дальнейшего роста в термокамеру со следующими параметрами: температура 25 2^o, длительность светового периода 16 часов, освещенность 2000 лк, влажность 70%. Через 3-4 недели каждый эксплант образовывал до 27 нормально развивающихся побегов длиной 20-30 мм. При переносе побегов на свежую питательную среду, содержащую половинную концентрацию всех солей, витаминов и стимуляторов роста побеги через 10-15 дней образовывали корни.

В табл. 2 представлены основные параметры развития регенерантов при выращивании на испытуемых питательных средах с различным соотношением компонентов. Из данных табл. 2 следует, что питательная среда предлагаемого состава обеспечивает значительное по сравнению с прототипом сокращение сроков размножения до 20,3 0,7 дней вместо 90-120 и увеличение коэффициента размножения до 1:45-50, а также повышение эффективности выхода стандартных черенков для высадки в грунт.

Использование изобретения позволяет сократить сроки размножения побегов, повысить эффективность выхода стандартных черенков при коэффициенте размножения 1: 45-50, повысить эффективность процесса дифференциации эксплантов независимо от генотипа, увеличить общую производительность селекционного процесса от высадки семядолей на питательную среду до ускорения и высадки растений в грунт, значительно снизить себестоимость питательной среды.

Формула изобретения

Питательная среда для регенерации растений яблони из семядолей, содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций хлористый двухводный, магний сернокислый семиводный, калий фосфорнокислый однозамещенный, борную кислоту, марганец сернокислый четырехводный, цинк сернокислый семиводный, натрий молибденовокислый двухводный, калий йодистый, медь сернокислую пятиводную, кобальт хлористый шестиводный, железо сернокислое семиводное, мезоинозит, стимулятор роста, никотиновую кислоту, сахарозу, тиамин хлорид, пиридоксин хлорид, агар и воду бидистиллированную, отличающаяся тем, что в качестве стимулятора роста она содержит настойку стеркулии при следующем соотношении компонентов, мг/л:
Аммоний азотнокислый - 1640 - 1660
Калий азотнокислый - 1800 - 2000
Кальций хлористый двухводный - 430 - 460
Магний сернокислый семиводный - 360 - 385
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 160 - 190
Борная кислота - 6,0 - 7,6
Марганец сернокислый четырехводный - 22,0 - 23,0
Цинк сернокислый семиводный - 8,0 - 9,3
Натрий молибденовокислый двухводный - 0,2 - 0,4
Калий йодистый - 0,75 - 0,95
Медь сернокислая пятиводная - 0,02 - 0,035
Кобальт хлористый шестиводный - 0,02 - 0,035
Железо сернокислое семиводное - 27,0 - 33,0
Мезоинозит - 100
Настойка стеркулии - 30,0 - 75,0
Никотиновая кислота - 0,5
Сахароза - 30000
Тиамин хлорид - 0,5
Пиридоксин хлорид - 0,5
Агар - 10000
Вода бидистиллированная - Остальное

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2