Питательная среда для выращивания культуры ткани glycyrrhiza uralensis - продуцента сапонинов

 

Использование: биотехнология. Сущность изобретения: питательная среда для выращивания культуры ткани солодки уральской - продуцента сапонинов содержит макро - и микроэлементы по Линсмайеру и Скругу, тиамин 0,5 - 2,0 мг/л, мезоинозит 100 - 5100 мг/л, сахарозы 30000 - 50000 мг/л, нафтилуксусную кислоту 10 - 20 мг/л и 6-бензиламинопурин 1,0 - 2,0 мг/л и дополнительно 1,0 - 2,5 мг/л ниацина, 1,0 - 3,0 мг/л пиридоксина, 0,05 - 0,1 мг/л биотина, 0,5 - 1,0 мг/л фолиевой кислоты и 100 - 500 мг/л гидролизата казеина.

Изобретение относится к медицинской, пищевой промышленности.

Известна питательная среда для выращивания культуры тканей Polycsias Y. R.ET G. Forst - продуцента сапонинов, содержащая макросоли NH₄NO₃, MgSO₄7H₂O, KH₂PO₄, KNO₃, CaCl₂ и микросоли, сахар, агар-агар, гидролизат казеина, -нафтилуксусную кислоту (1). Однако, известная среда не обеспечивает быстрого роста культуры ткани и высокого выхода сапонинов.

Наиболее близким является образование соясопанинов в суспензионных культурах клеток солодки, культивированных на питательной среде Линсмайера - Скуга, содержащей НУК и 6-БАП.

Содержание соясопанинов 0,017 - 1,1% на сухой вес клеток (2). Недостатком прототипа является низкий выход соясопанинов.

Цель изобретения - ускорение роста культуры ткани и повышение выхода сапонинов.

Указанная цель достигается тем, что для культивирования каллусов солодки уральской Glyccyriza uralensis - продуцента сапонинов, содержащая макро- и микроэлементы.

Согласно изобретению дополнительно содержат витамины, гормоны, мезоинозит, гидролизат казеина, альфа-нафтилуксусную кислоту, 6-бензиламинопурин, сахарозу при следующем соотношении компонентов, мг/л: тиамин - 0,5 - 2 ниацин - 1 - 2,5 пиридоксин - 1 - 3 биотин - 0,05 - 0,1 фолиевая кислота - 0,5 - 1 мезоинозит - 100 - 5100 гидролизат казеина - 100 - 500 -нафтилуксусная кислота ( -НУК) - 10 - 20 6-бензиламинопурин (6-БАП) - 1 - 2
сахароза - 39000 - 50000
Отличительные признаки заявленного изобретения в решениях, известных в науке и технике, авторами не обнаружены.

Для экспериментальной проверки заявленного состава были подготовлены 3 состава питательной среды.

Пример 1. Приготовленная питательная среда содержит компоненты в следующем количественном соотношении, мг/л:
KNO₃ - 1900
NH₄NO₃ - 1650
MgSO₄7H₂O - 370
CaCl₂2H₂O - 440
KH₂PO₄ - 170
MnSO₄4H₂O - 845
KJ - 415
H₃BO₃ - 310
CoCl₂ - 12,50
ZnSO₄7H₂O - 430
Na₂MoO₄2H₂O - 125
CuSO₄5H₂O - 12
Na₂ЭДТА2H₂O - 7460
FeSO₄7H₂O - 5560
ниацин - 1
пиридоксин HCl - 1
тиамин HCl - 0,5
мезоинозит - 100
гидролизат казеина - 100
сахароза - 30000
-НУК - 20
6-БАП - 2
фолиевая кислота - 0,5
Прирост каллусной массы за 30 дней культивирования составил 94,30%. Содержание сапонинов в каллусной культуре солодки уральской составил 1,8168% от сухого веса.

Пример 2. Питательная среда содержит компоненты в следующем количественном соотношении, мг/л:
тиамин - 1
ниацин - 1,5
пиридоксин - 1,5
биотин - 0,075
фолиевая кислота - 0,75
мезоинозит - 2500
гидролизат казеина - 250
-НУК - 15
6-БАП - 1,5
сахароза - 40000
Микро- и макроэлементы как в примере 1.

Прирост каллусной массы за 30 дней культивирования составил 100%. Содержание сапонинов в каллусной культуре солодки составил 2,8057% от сухого веса.

Пример 3. Питательная среда содержит компоненты в следующем количественном соотношении, мг/л:
тиамин - 2
ниацин - 2,5
пиридоксин - 3
биотин - 0,1
фолиевая кислота - 1
мезоинозит - 5100
гидролизат казеина - 500
-НУК - 10
6-БАП - 1
сахароза - 50000
Микро- и макроэлементы как в примере 1.

Прирост каллусной массы за 30 дней культивирования составил 100%. Содержание сапонинов в каллусной культуре солодки составил 3,0022% от сухого веса.

При значении параметров ниже наименьших и выше наибольших наблюдается уменьшение накопления сапонинов.

Приведенные в примерах данные подтверждаются актом испытаний заявляемой питательной среды, прилагаемым к настоящей заявке.

Использование предлагаемого состава обеспечивает следующие преимущества:
- повышение выхода сапонинов;
- ускорение роста культуры.

Источники информации
1. А.С. N 765358, 1980. Питательная среда для выращивания культуры ткани Polyscias Y.R.ET.G. Forst - продуцента сапонинов.

2. Образование соясапонинов в суспензионных культурах клеток солодки. Р. Ж. Биотехнология, N 5, 1991.

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания культуры ткани Glycyrrhiza uralensis-продуцента сапонинов, содержащая макро- и микроэлементы по Линсмайеру и Скугу, тиамин, мезоинозит, сахарозу, нафтилуксусную кислоту и 6-бензиламинопурин, отличающаяся тем, что она содержит, мг/л: тиамин 0,5 - 2,0, мезоиноизит 100 - 5100, сахарозу 30000 - 50000, нафтилуксусную кислоту 10,0 - 20,0, 6-бензиламинопурин 1,0 - 2,0 и дополнительно содержит, мг/л: ниацин 1,0 - 2,5, пиридоксин 1,0 - 3,0, биотин 0,05 - 0,1, фолиевую кислоту 0,5 - 1,0, гидролизат казеина 100 - 500.