Производные n-ацилпролилдипептидов

 

Использование: в медицине как соединения, обладающие антиамнестическим, антигипоксическим и анорексигенным действием, проявляющие низкую токсичность, способствующие улучшению способности к обучению и памяти. Сущность изобретения: производные N-ацил-пролилдипептидов общей формулы I где R¹ = (C¹ - C⁴)алкил, циклоалкил, аралкил или арил; R² = Н, (C⁴ - C⁵)алкил, карбамидоалкил или карбалкоксиалкил; R³ = гидрокси, алкокси, амино, алкиламино или диалкиламино; n = 0 - 3, при этом а) когда R¹ = фенил, R² = водород или изопропил, а n = 0, R³ = не метокси; б) когда R¹ = третбутил, R² = водород, а n = 0 или 1, R³ = не метиламино; в) когда R¹ = трет-бутил, R² = изобутил, метил, бензил или карбамидометил, а n = 0, R³ = не метиламино, г) когда R¹ = трет-бутил, R² = карбометоксиметил, n = 0, R³ = не изопропиламино. Соединения малотоксичны. Описываемые соединения получают путем конденсации требуемых кислот в гомогенной фазе при блокировании не вступающих в реакцию функциональных групп с использованием конденсирующих агентов, таких как, например, карбодиимид. 10 з.п. ф-лы, 14 табл.

Ноотропные соединения (усилители умственных возможностей) представляют собой перспективную группу лекарственных веществ. Известные ноотропные соединения включают пирацетам (N-карбамидо-метилпирролидон-2), который был широко введен в медицинскую практику в начале 80-х годов. В дальнейшем были синтезированы N-замещенные-2-пирролидоны (например, этирацетам, оксирацетам, анирацетам, прамирацетам, ролцирацетам и др.).

В патенте США N 4743616 Танаки и др. описаны N-ацилпирролидиновые соединения, имеющие эндопептидазную ингибиторную активность и оказывающие антиамнестическое действие. В отличие от производных пирацетама, соединения, описанные Танакой и др., содержат пролиновую группу.

Т. Гудашева и Р. Островская описали (Chem.Pharmac. J., 1985, N 11, pp. 1322-1329) биологически активные N-концевые производные пироглутаминовой кислоты, имеющие формулу В другом источнике (Т.А.Гудашева и др. Chem.Pharmac. J., 1988, N 3, pp. 271-2759) описано биологически активное соединения N-ацилпролина, имеющее формулу Необходимость в высокоактивных нетоксичных ноотропных препаратах, которые могут быть использованы для лечения ухудшений умственных способностей, вызванных различными деструктивными факторами, существует до сих пор. Настоящее изобретение направлено на удовлетворение этой потребности.

Настоящее изобретение относится к новой группе соединений, которые обладают различными типами психотропной активности, в частности антиамнестическим, антигипоксическим и анорексигенным действием.

Согласно настоящему изобретению предложены производные N-ацилпролилдипептидов общей формулы I где R¹=(C₄-C₅)алкил, циклоалкил, аралкил или арил;
R² = H, (C₁-C₄)алкил, карбамидоалкил или карбалкоксиалкил;
R³ = гидрокси, алкокси, амино, алкиламино или диалкиламино;
n = 0-2;
при этом
а) когда R¹=фенил, R²=водород или изопропил, а n=0, R³ не метокси,
б) когда R¹=трет-бутил, R²=водород, а n=0 или 1, R³ = не метиламино,
в) когда R¹=трет-бутил, R²= изобутил, метил, бензил или карбамидобутил, а n=0, R³ не метиламино,
г) когда R¹= трет-бутил, R²= карбометоксиметил, n=0, R³ не изопропиламино.

Производные N-ацилпролилдипептидов могут представлять собой

где
R¹ = изобутил, пентил, 1-адамантил, фенил, фенилметил или фенилпропил
R³ = OH, OC₂H₅, NH₂, NHCH₃, N(CH₃)₂; или

где
R¹ = фенилметил или фенил;
R³ = OC₂H₅ или NH₂; или же

где
R¹ = фенилметил или фенил.

Производное N-ацилпролилдипептида согласно изобретению может быть выбрано из следующих соединений:







Соединения формулы I отличаются от известных ноотропных препаратов тем, что они содержат в своей структуре остаток природной аминокислоты L-пролина (вместо пирролидона), совместно с остатком второй природной аминокислоты. Эти N-ацил-L-пролиновые дипептиды имеют предельно низкую токсичность и высокоактивны.

Примерами осуществления изобретения могут служить следующие соединения:
I N-фенацетил-L-пролилглицинэтиловый эфир
II N-фенацетил-L-пролилглицинамид
III N-фенацетил-L-пролил -- аланинэтиловый эфир
IV N-фенилацетил-L-пролил -- аланинамид
V N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагиновой кислоты диэтиловый эфир
VI N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагинамид
VII N-бензоил-L-пролилглицинэтиловый эфир
VIII N-изовалерил-L-пролилглицинэтиловый эфир
IX N-фенилацетил-L-пролил-L-валинэтиловый эфир
X N-бензоил-L-пролил-L-валинэтиловый эфир
XI N-бензоил-L-пролил -- аланинэтиловый эфир
XII N-бензоил-L-пролил -- аланинамид
XIII N-бензоил-L-пролилглицинамид
XIV N-фенилацетил-L-пролилглицин-N-метиламид
XV N-фенилацетил-L-пролилглициндиметиламид
XVI N-фенилацетил-L-пролил-L-глутаминовой кислоты диэтиловый эфир
XVII N-фенилацетил-L-пролил-L-лейцинамид
XVIII N-фенилацетил-L-пролилглицин
XIX N-фенилацетил-L-пролил-ГАМК-метиловый эфир
XX N-фенилацетил-L-пролил-L-аланинэтиловый эфир
XXI N-капроил-L-пролилглицинэтиловый эфир
XXII N-(1-адамантоил)-L-пролилглицинэтиловый эфир
XXIII N-фенилбутирил-L-пролилглициновый эфир
Настоящее изобретение направлено также на получение фармацевтических составов и способы лечения, которые предусматривают использование в качестве активного вещества фармацевтически эффективных количеств N-ацилпролилдипептида формулы 1, как определено выше, предпочтительно соединение общей формулы

где
R¹ выбирают предпочтительно из группы, состоящей из изобутила, пентила, L-адамантила, фенила, фенилметила и фенилпропила; R³ выбирают предпочтительно из группы, состоящей из NH₂, NH CH₃, N(CH₃)₂, OH и OC₂H₅. Более предпочтительно в фармацевтический состав и методы лечения включать согласно изобретению эффективную дозу соединения формулы

Здесь "фармацевтически эффективное количество" или "эффективное количество" обозначает количество, способное обеспечить эффективное лечение синдрома, из-за которого пациент страдает.

Соединения согласно изобретению обладают психотропной активностью, включая и антиамнестическую активность, и улучшают умственные функции, нарушенные вследствие мозговой травмы, интоксикации, старения и гипоксии. Эти соединения также проявляют анорексигенный эффект, антиалкогольную активность и уменьшают психические расстройства пренатально алкоголизированного потомства.

Настоящее изобретение относится также к различным способам лечения больных людей путем введения эффективной дозы соединения согласно изобретению. Такие способы предусматривают лечение людей, страдающих снижением умственных способностей вызванных мозговой травмой, старением, старческим слабоумием, и умственно отсталых детей; ожирения; нарушения центральной нервной системы (ЦНС) в результате химической интоксикации, преимущественно вызванной сатурнизмом; серповидной клеточной анемии; синдрома отмены бензодиазепина, который проявляется в виде агрессивности, тревожности и припадков; а также алкогольной зависимости.

Подробное описание изобретения
Приведенные выше соединения формулы 1 были получены хорошо известными способами синтеза пептидов. Обычный процесс получения рассматриваемых соединений состоит в смешивании и конденсации требуемых аминокислот, как правило, в гомогенной фазе.

Конденсация в гомогенной фазе может быть выполнена следующим образом:
а) конденсация аминокислоты, имеющей свободную карбоксильную группу и защищенную другую реакционноспособную группу, с аминокислотой, которая имеет свободную аминогруппу и защищенные другие реакционноспособные группы, в присутствии конденсирующего агента, такого как карбодиимид;
б) конденсация аминокислоты, имеющей активированную карбоксильную группу и защищенную другую реакционноспособную группу, с аминокислотой, которая имеет свободную аминогруппу и защищенные другие реакционноспособные группы;
в) конденсация аминокислоты, имеющей свободную карбоксильную группу и защищенную другую реакционноспособную группу, с аминокислотой, имеющей активированную аминогруппу и защищенные другие реакционноспособные группы.

Карбоксильная группа может быть активирована превращением ее в хлорангидридную, азидную, ангидридную группу или активированный эфир, такой как N-оксисукцинимидный, N-ок-сибензтриазольный, пентахлорфениловый или паранитрофениловый эфир. Аминогруппа может быть активирована превращением ее в фосфитамид или "фосфоразным" методом.

Наиболее общими для рассмотренных выше реакций конденсации являются: карбодиимидный метод; азидный метод; метод смешанных ангидридов; метод активированных эфиров. Эти методы описаны в "The Peptides". Vol.1. 1965 (Academic Press), E. Schroeder, K.Lubke, или в "The Peptides", Vol.1, 1979 (Academic Press) E.Cross, L.Meinhofen.

Предпочтительными методами конденсации при получении пептидов формулы 1 являются метод смешанных ангидридов или карбодиимидный метод. Реакцию конденсации, осуществляемую по методу смешанных ангидридов, предпочтительно проводят с соблюдением "Андерсоновских" условий (G.W.Anderson et al. J.Am. Chem. Soc, 89, 50-12-5017 (1967)). Карбоксильную составляющую (для образования смешанного ангидрида N-ацилпролина предпочтительно активируют изобутилхлорформиатом. Могут быть использованы также этилхлороформиат и метилхлороформиат.

Лучшими растворителями являются смесь этилацетата с диметилформамидом, чистый диметилформамид и хлороформ. Лучшими третичными основаниями являются N-метилфорфолин, N-этилморфолин и триэтиламин.

Реакцию конденсации, осуществляемую карбодиимидным методом, предпочтительно проводят в присутствии оксибензотриазола (W.Konig, R.Geiger, Chem. Ber., 103, 788-789 (1979)). Конденсация по карбодиимидному методу может быть также проведена в присутствии других добавок, таких как паранитрофенол, пентахлорфенол или N-оксисукцинимид.

Реакционноспособные группы, которые не должны участвовать в конденсации, могут быть защищены группами, которые легко удаляются, например, гидролизом или восстановлением. Так, карбоксильная группа может быть защищена этерфикацией этанолом, метанолом, трет-бутанолом, бензиловым спиртом.

Аминогруппу обычно эффективно защищают кислотными группами, например остатками алифатических, ароматических, гетероциклических карбоновых кислот, такими как ацетил, бензоил, пиридинкарбоксил, кислотными группами, производными от угольной кислоты, такими как этоксикарбонил, бензилоксикарбонил, третбутилоксикарбонил; или кислотными группами, производными от сульфокислоты, такой как пара-толуосульфониловая.

Термином "функциональные производные пептидов формулы 1" обозначены:
1) N-ацильные производные алифатической или ароматической кислот;
2) эфиры, производные от низших алифатических спиртов;
3) амиды, или моноалкил-, или диалкилзамещенные амиды, в которых алкильные группы имеют один или два C-атомов.

При синтезе заявляемых пролилдипептидов N-ацильные производные предпочтительно получали, используя пролин, который предварительно ацетилировали подходящей ацильной группой. Эта ацильная группа функционировала также в качестве защитной группы в дальнейшем ходе синтеза. Можно также ввести желательную аминогруппу после синтеза пептидов, ацилируя дипептиды обычными способами. Предпочтительными N-ацильными группами являются N-фенилацетил и N-бензоил.

Эфиры пептидов согласно формуле 1 получают предпочтительно путем использования аминокислоты в форме желаемого эфира. Они могут быть получены также соответствующей этерификацией полученного пептида. Предпочтительно, чтобы эфиры были производными метанола или этанола.

Амиды пептидов формулы 1 получают аммонолизом (т.е. реакцией с NH₃) алкилэфира соответствующего дипептида или реакцией с аминокислотой в виде желательного амида. Амиды дипептидов также могут быть получены введением амидной группы в соответствующий дипептид каким-либо подходящим способом, например обработкой амином в присутствии конденсирующего агента. Более предпочтительны незамещенные амиды, монометил- и диметиламиды.

Была изучена способность соединений согласно изобретению препятствовать нарушению памяти, вызываемому максимальным электрошоком или приемом скополамина. В отличие от N-ацилпирролидиновых соединений, ранее описанных Танака и др. , соединения согласно изобретению не рассчитаны на подавлением активности пролилэндопептидазы. Как описано в примерах, испытанные соединения проявляют антиамнестическую активность (пример 12). Было показано, что предпочтительное соединение, имеющее формулу 1 (см. табл. 1), способно облегчить разные фазы формирования памяти: получение информации, сохранение и восстановление ее в памяти в различных процедурах пассивного и активного избегания (примеры 12, 13). Показано, что это соединение способно повышать скорость адаптации (пример 14). Соединение 1 предотвращает снижение умственных способностей, вызванное фронтальной лобэктомией (пример 15), пренатальной алкоголизацией и пренатальной гипоксией (пример 16), старением (пример 17). Оно проявляет также антигипоксическую активность (пример 18).

При наблюдении за тем, как пирацетам взывал некоторые из вышеописанных эффектов, установлено, что уровень активной дозы для него составляет 200-800 мг/кг. В отличие от этого заявляемого соединения вызывает такие же эффекты при дозах приблизительно 0,1-0,5 мг/кг.

Описанное здесь соединение 1 имеет дополнительное полезное свойство - анорексигенное действие. В отличие от известных анорексигенных лекарств соединение 1 не вызывает адренергической стимуляции (возбуждения, увеличения кровяного давления и др.). Соединение 1, кроме того, нетоксично (пример 20) и действует при пероральном приеме (пример 12). Показано, что соединение 1 способно ослаблять абстинентный синдром при отмене бензодиазепина, уменьшая тревожность, агрессивность и выраженность пентилентетразолового киндлинга (пример 21).

Вещества согласно изобретению могут быть использованы в любой форме, которая пригодна для перорального приема, такой как пилюли, таблетки, драже. Описанные здесь вещества могут быть также использованы парентерально путем инъекций или вливаний в форме фармацевтических препаратов, содержащих активный ингредиент в сочетании с фармацевтически допустимым носителем. Вещества согласно изобретению могут быть использованы для лечения больных со снижением умственных способностей, вызванным мозговой травмой, интоксикациями, процессами старения, синдром Корсакова, болезнью Альцгеймера, органическим мозговым синдромом, алкоголизмом, включая пренатальные алкогольные повреждения, гипоксией , задержкой умственного развития детей, ожирением, инсультом, мозговыми нарушениями вследствие врожденных дисфункций или генетических отклонений, нарушением ЦНС в результате химической интоксикации, включая сатурнизм для лечения от токсикомании, включая поддержание абстиненции и отмены, и некоторыми гематологическими отклонениями, включая серповидноклеточную анемию. Предпочтительно эти вещества могут быть использованы в дозах 0,5-5,0 мг в день.

Далее изобретение подробно описано с учетом различных специфических и предпочтительных применений и в дальнейшем будет описываться со ссылками на последующие примеры. Очевидно, однако, что имеется множество вариантов расширения, вариаций и модификаций, выходящих за рамки приведенных примеров и подробного описания, но соответствующих общему изобретательскому замыслу и объему притязаний.

Примеры.

В дальнейшем используются следующие сокращения:
Pro - пролил
Asp - аспартил
Аsn - аспарагинил
Val - валил
Ala - аланил
-Ala --аланил
Leu - лейцил
Gly - глицил
Glu - глутамил
EtOH - этанол
MeOH - метанол
DMF - диметилформамид
DCC - дициклогексилкарбодимид
DCU - дициклогексилмочевина
EtAC - этилацетат
BZ - бензоил
Ad - 1-адамантил
OHBt - 1-оксибензтриазол
Et₃N - триэтиламин
Phac - фенилацетил
TLC - тонкослойная хроматография
В примерах была использована следующая аппаратура:
точки плавления определяли по серно-кислотному прибору в открытых капиллярах без корректировки;
удельное вращение плоскости поляризации света регистрировали на автоматическом поляриметре Perkin-Elmer-241;
спектры ядерного магнитного резонанса (ЯМР) были получены на спектрометре Bruker AC-250;
Химические сдвиги выражали в млн^-1 относительно Me₄Si.

Для обозначения резонансных сигналов использовали следующие сокращения: s - синглет, d - дуплет, t - триплет, g - квадруплет, m - мультиплет.

Константы спин-спинового взаимодействия даны в Гц.

Тонкослойную хроматографию (TLC) выполняли на силикагелевых пластинах 60F254 Merck с проявлением в иодной камере или ультрафиолетовых лучах.

В экспериментах на живых организмах использовали самцов беспородных крыс-альбиносов массой приблизительно 180-220 г и/или самцов беспородных мышей-альбиносов массой около 18-22 г.

В алкогольных тестах на живых организмах использовали потомство алкоголизированных матерей подобного вида. Самцов крыс-альбиносов линии Вистар в возрасте 24-26 месяцев использовали в экспериментах, связанных со старением.

Пример 1.

Синтез этилового эфира из N-фенилацетил-L-пропил-глицина
N-Phac-L-Pro-Gly-O Et (1)
a) N-фенилацетил-L-пропил, N-Phac-L-Pro-OH
К 5,75 г (0,05 моль) L-пролина в 25 мл 2N NaOH добавляли по каплям с перемешиванием при температуре ниже 10^oC 12,5 мл 4N NaOH и 6,6 мл (0,05 моль) N-фенилацетилхлорида (t_кип 89 - 90^oC/10 Torr). Реакционную смесь перемешивали 15 мин, экстрагировали EtAc для удаления хлорида, затем подкисляли 2N HCl до pH 3, экстрагировали хлороформом, высушивали сульфатом натрия и выпаривали. Получали 6,2 г N-Phac-L-Pro-OH в виде белых кристаллов c: t_пл 150 - 152^oC, []²_D⁰ = -60,5^o (c = 0,4, DMF), R_f = 0,66 (силикагель, диоксан-вода 9:1).

¹H-ЯМР-спектр в CDCl₁ / (млн^-1): 1,77 - 2,29 (m, CH₂-CH₂ , Pro, 4H); 3,40 - 3,63 (m, CH₂ , Pro, 2H); 3,63 и 3,73 (каждый s, CH₂-C₆H₅, 2H); 4,56 и 4,38 (каждый dd, CH Pro, 1H); 7,18 - 7,39 (m, CH₂C₆H₅, 5H); 11,38 (ушир. s, COOH, 1H).

Рассчитано для C₁₃H₁₅NO₃ : C = 66,93; H = 6,49; N = 6,00.

Найдено: C = 66,65; H = 6,40; N = 5,86.

б) Этиловый эфир N-фенилацетил-L-пролилглицина
В раствор 2,33 г (0,01 моль) N-Phac-L-Pro-OH (t_пл 150 - 151^oC) в 50 мл DMF добавляли с перемешиванием при -10^oC 1,39 мл (0,01 моль) Et₃N и затем 1,34 мл (0,01 моль) изобутилхлорформиата. Через 2 мин к реакционной смеси добавляли по каплям в течение 25 мин, 1,4 г (0,01 моль) гидрохлорида глицинэтилового эфира (t_пл 140 - 142^oC) и раствор 1,39 мл (0,01 моль) Et₃N в 25 мл DMF, чтобы избежать повышения температуры. Затем перемешивание продолжали при охлаждении в течение 30 мин и при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Осадок отфильтровывали и фильтрат выпаривали в вакууме, осадок растворяли в CHCl₃, раствор промывали 5% NaHCO₃, водой, 1N HCl и вновь водой, высушивали сульфатом натрия и выпаривали. Образованные 1,66 г (54%) масла смешивали с эфиром до получения белых кристаллов: t_пл 96 - 97^oC; []²_D⁰ = -120, c = 0,4 CHCl₃), R_f = 0,80 (силикагель, диоксан-вода 9:1).

¹H-ЯМР спектр в (CD₃)₂SO, (млн^-1): 1,18 (t, CH₃CH₂O, 55% 5H); 1,17 (t, CH₃CH₂O, 45% 3H); 1,65 - 2,35 (m, CH₂-CH₂Pro , 4H); 3,2 - 3,4 (m, CH₂ , Pro, 2H); 3,40 (s, CH₂-С₆H₅, 45% H); 3,67 (s, CH₂-C₆H₅, 55% 2H); 3,80 (d, CH₂Gly , J = 5,9, 55% 2H); 3,86 (d, J = 5,9, CH₂Gly , 45% 2H); 4,08 (q, CH₃CH₂-O, 55% 2H); 4,09 (q, CH₃CH₂-O, 45% 2H); 4,32 (dd, CH , Pro, 55% 1H); 4,48 (dd, CH , Pro, 45% 1H); 7,1 - 7,6 (m, CH₂C₆H₅, 5H); 8,29 (t, J = 5,9, NH Gly, 55% 1H); 8,63 (t, J = 5,9 NH Gly, 45% 1H).

Рассчитано для C₁₇H₂₂N₄O₄: C = 64,15; H=6,92; N=8,80.

Найдено: C=63,93; H=6,81; N=9,07.

Пример 2.

Синтез N-фенилацетил-L-пролилглицинамида Phac-L-Pro-Gly- NH₂ (II)
N-Phac-L-Pro-Gly-OEt (0,53 г; t_пл 96 - 97^oC []²_D⁰-122,0 в CHCL₃, см. пример 1/б/) растворяли в 25 мл насыщенного NH₃, см. пример 1/б/) растворяли в 25 мл насыщенного NH₃ этанола. Реакционную смесь обрабатывали в течение 12 - 16 ч при комнатной температуре. Этанол затем выпаривали, а остаток промывали эфиром. Выход амида II, который был получен в виде масла, составил 0,5 г : R_f = 0,36 (силикагель, CHCl₃-MeOH 9:1); []²_D⁰ = 58,5 (C = 0,2, CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр в CHCl₃, (млн^-1) : 1,8 - 2,3 (m, CH₂-CH₂ , Pro, 4H); 3,3 - 3,5 (m, CH₂ , Pro, 2H); 3,55 - 3,75 (m, AB-часть ABX-системы, CH₂Gly , 2H); 3,66 (s, CH₂C₆H₅, 2H): 4,07 (dd, CH , Pro, 1H); 4,37 (t, NHGly, 1H); 5,63 и 7,86 (каждый s, NH₂); 7,2 - 7,4 (m, C₆H₅, 5H).

Рассчитано для C₁₅H₁₉N₃O₃ : C=62,53; H=6,48; N=14,61.

Найдено: C=62,28; H=6,54; N=14,53.

Пример 3.

Синтез этилового эфира N-фенил-L-пролил -- аланина
N-Phac-L-Pro -- Ala-OEt (III)
К раствору 0,61 г (2,6 ммоль) N-фенилацетил-L-пролина (t_пл 151^oC, []²_D⁰ = -60,5 в DMF) в 25 мл CHCl₃ при -10^oC добавили 0,29 мл (2,6 ммоль) N-метилморфолина и затем дополнительно 0,35 мл (2,6 ммоль) изобутилхлорформиата. Через 2 мин в реакционную смесь добавили 0,4 г (2,6 ммоль) гидрохлорида этилового эфира - аланина (t_пл 69-71^oC) и 0,29 мл метилморфолина в 4 мл CHCl₃. Перемешивание продолжали при охлаждении 40 мин и затем при комнатной температуре 2 ч. Остаток фильтровали, а растворитель выпаривали на вращающемся испарителе. Осадок растворяли в CHCl₃ и промывали 5%-ным раствором NaHCO₃, водой, 1N HCl, водой и затем сушили над сульфатом натрия и выпаривали. Выход составил 0,58 г или 98% N-Phac-L-Pro -- Ala-OEt, который получили в виде прозрачного масла: R_f=0,52 (силикагель, CHCl₃-MeOH, 9:1); R_f= 0,53 (силикагель, диоксан-вода, 9:1); []²_D⁰ = 92,25^o (C=0,3, CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр с (CD₃)₂SO, (млн^-1): 1,17 (t, CH₃CH₂-O, 68% 3H); 1,13 (t, CH₃CH₂O, 32% 3H); 1,7-2,2 (m, CH₂-CH₂, Pro, 4H); 2,42 (m, CH₂-Ala, 2H); 3,2-3,3 (m, CH₂, Pro, 2H); -3,40 (s, CH₂-C₆H₅, 32% 2H) при HDO-сигнале; 3,66 (m, CH₂-C₆H₅, 68% 2H); 4,01 (q, CH₃CH₂O, 32% 2H); 4,04 (q, CH₃-CH₂O, 68% 2H); 4,41 (m, CH₂-Ala, 2H); 4,21 (dd, CH, Pro, 1H); 7,1-7,36 (m, CH₂-C₆H₅, 5H); 7,93 (t, NH, 1H).

Рассчитано для C₁₈H₂₄N₂O₄: C=65,03; H=7,29; N=8,42.

Найдено: C=65,37; H=7,77; N=8,38.

Пример 4.

Синтез N-фенилацетил-L-пролил - аланинового амида N-Phac-L-Pro -- Ala-NH₂ (IV)
Для сатурации этанольного раствора (15 мл) 0,36 г N-фенилацетил-L-пролил -- аланин-этилового эфира, полученного в примере 3, барботировали газообразный аммиак. Отстоявшийся в течение ночи раствор выпаривали, а остаток очищали в хроматографической колонке (силикагель), используя CHCl₃ в качестве элюента. Амид IV был получен в виде масла: выход 0,22 г (61%); R_f= 0,28 (силикагель, CHCl₃ - метанол, 9:1); []²_D⁰ = 22,8 (C=0,33; CHCl₃).

¹H-ЯМР (Me₂SO-d₆), / (млн^-1); 1,69-2,2 (m, CH₂-CH₂ Pro, 4H); 2,16-2,31 (m, CH₂-Ala 2H); 3,1-3,3 (m, CH₂ , -Ala , 2H); 3,3-3,45 (m, CH₂ Pro, 2H); 3,66 (s, CH₂-C₆H₅, 2H); 4,22 и 4,41 (каждый dd, CH Pro, 1H); 6,84, 7,36 и 6,86, 7,38 (каждый шир. s, NH₂, 2H); 7,12-7,35 (m, CH₂C₆H₅, 5H); 7,89 и 8,22 (каждый t, NH -Ala , 1H).

Рассчитано для C₁₆H₂₁N₃O₃: C=63,34; H=6,99; N=13,85.

Найдено: C=63,81; H=7,03; N=14,01.

Пример 5.

Синтез диэтилового эфира N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагиновой кислоты N-Phac-L-Pro-L-Asp (OEt)₂, (V)
К хорошо перемешанному раствору 1 г (4,3 ммоль) N-фенилацетил-L-пролина в 40 мл абсолютного EtAc добавили 0,48 мл (4,3 ммоль) N-метилморфолина при -10^oC. После этого последовательно добавляли 0,57 мл (4,3 ммоль) изо-BuOC(O)Cl, через 2-3 мин - смесь 0,91 г (4,3 ммоль) L-Asp(OEt)₂HCl; 0,48 мл (4,3 ммол) N-метилморфолина и 15 мл EtAc. Перемешивание продолжали в течение 1 ч при -10^oC. После того как смесь отстоялась в течение 1 часа, остаток отфильтровывали, раствор выпаривали и осадок растворяли в смеси этанола и эфира. Полученный в результате твердый остаток отделяли, маточный раствор выпаривали и осадок (1,65 г) очищали в хроматографический колонке (силикагель) с использованием CHCl₃ и смеси CHCl₃-EtOH в качестве элюентов. Диэтилэфир N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагиновой кислоты был получен в виде масла: R_f=0,87 (силикагель, CHCl₃-EtOH, 9:3); []²_D⁰ = -38,0 (C=2,2; CHCl₃).

¹H-ЯМР (Me₂SO-d₆), (млн^-1): 1,23 (t, J=7,16 Hz, CH₃CH₂O, 90% 3H); 1,24 (t, J=7,16, CH₃CH₂O, 10% 3H); 4,10 (q, CH₃CH₂-O, 90% 2H); 4,12 (q, CH₃CH₂-O, 10% 2H); 1,25 (t, J=7,14, CH₃CH₂O, 90% 3H); 1,26 (t, J=7,14, CH₃CH₂O, 10% 3H); 4,19 (q, CH₃CH₂-O, 90% 2H); 4,21 (q, CH₃CH₂O, 10% 2H); 1,75-2,40 (m, CH₂-CH₂ Pro, 4H); 3,45-3,65 (m, CH₂ , Pro, 2H); 4,58 (dd, J=8,00; J=2,59; CH Pro, 1H); 2,78; 2,95 (dd, AB-часть ABX-системы, J_AB=17,04; J_AX=4,88; J_BX = 4,88 CH₂ Asp, 90% 2H); 2,80; 3,00 (dd CH₂ Asp, 10% 2H); 4,81 (dt, J=CH, NH 8,50; CH Asp 1H); 7,5 (d, J=8,50; NH Asp, 90% 1H); 7,03 (d, J=8,40; NHAsp, 10% 1H); 3,70 (s, CH₂C₆H₅, 2H); 7,20-7,36 (m, C₆H₅, 5H).

Рассчитано для C₂₁H₂₈N₂O₆: C=62,35; H=6,99; N=6,92.

Найдено: C=62,63; H=7,01; N=6,74.

Пример 6.

Синтез амида N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагина
N-Phac-L-Pro-L-Asn-NH₂ (VI)
Для сатурации метанольного раствора (25 мл) 0,5 г N-Phac-L-Pro-L-Asp(OEt)₂, полученного так же, как в примере 5, через него барботировали газообразный аммиак при 0^oC. После отстаивания в течение ночи раствор выпаривали, осадок растворяли в нагретой смеси этанола с хлороформом и к остатку добавляли пентан. Полученный в результате остаток собирали и высушивали; выход составлял 0,45 г амида N-фенилацетил-L-пролил- L-аспарагина: t_пл 170 - 172^oC; R_f = 0,24 (силикагель, CHCl₃-EtOH, 9:3), []²_D⁰ = -55,7 (C = 1,4 DMSO).

¹H-ЯМР (Мe₂SO-d₆), (млн-1): 1,60 - 2,30 (m, CH₂-CH₂ , Pro, 4H); 2,35 - 2,50 (m, CH₂ , Asn, 2H) при сигнале растворителя; 3,63 (s, CH₂=C₆H₅, 2H), 4,36 (m, CH Pro, 1H); 4,4 - 4,6 (m, CH Asn, 1H); 6,80 - 7,60 (m, C₆H₅, 5H); 6,8 - 7,1 (s, NH₂, 4H); 8,15; 8,25; 8,35 (каждый d, NH Asn, 1H).

Рассчитано для C₁₇H₂₂N₄O₄: C = 58,94; H = 6,41; N = 16,16.

Найдено: C = 59,23; H = 6,66; N = 6,04.

Пример 7.

Синтез этилового эфира N-бензоил-L-пролилглицина, N-BZ-L-Pro-Gly-OEt (VII)
а) N-бензоил-L-пролин
К хорошо перемешиваемому раствору L-пролина (5,75 г, 0,05 моль) в 2N NaOH (25 мл) добавляли капельно из разных капельных воронок 4N NaOH (12,5 мл) и бензоилхлорид (5,8 мл, 0,05 моль), поддерживая температуру около 0 - 4^oC. Смесь через 15 мин подкисляли 1N HCl. Выделившееся масло экстрагировали CHCl₃, смешанный органический экстракт высушивали (MgSO₄) и растворитель удаляли. К осадку добавляли эфир и смесь отстаивали в течение ночи при 0^oC. Отделяли кристаллы N-бензоил-L-пролина. Выход составлял 3,42 г (60%), t_кип 152 - 154^oC, []²_D⁰ = -68,5 , (C = 0,4; CHCl₃); R_f = 0,13 (силикагель, CHCl₃-CH₃OH; 9:1).

Рассчитано для C₁₂H₁₃NO₃: C = 65,73; H = 5,99; N = 6,39.

Найдено: C = 65,64; H = 6,03; N 6,54.

б) Этиловый эфир N-бензоил-L-пролилглицина
К хорошо перемешиваемому раствору N-бензоил-L-пролина (2,19 г, 0,01 моль) в смеси абсолютного EtAc (50 мл) и DMF (10 мл) добавляли капельно при -10^oC N-метилморфин (1,12 мл, 0,01 моль) и изо-BuOC(O)Cl (1,34 мл, 0,01 моль). Через 2 мин добавляли смесь NH₂CH₂COOEt HCl (1,4 г, 0,01 моль), N-метилморфолина (1,12 мл, 0,01 моль), и DMF (20 мл). После 30-минутного перемешивания с охлаждением и полуторачасового при комнатной температуре растворитель удаляли в вакууме. Остаток растворяли в хлороформе, промывали 5%-ным водным раствором NaHCO₃, 1N HCl, водой и затем высушивали с помощью Na₂SO₄. После фильтрации растворитель выпаривали, к осадку добавляли эфир и отделяли полученные кристаллы эфира VII. Выход 1,67 г (76%); t_кип 63 - 65^oC []²_D⁰ = 148,0 (C = 0,4; CHCl₃); R_f = 0,71 (силикагель, CHCl₃-CH₃OH; 9:1).

¹H-ЯМР (Me₂SO-d₆) (млн^-1): 1,18 (t, J = 7,04, CH₃CH₂O, 75% 3H); 1,09 (t, J = 7,04, CH₃CH₂O, 25% 3H); 1,73 - 2,28 (m, CH₂-CH₂ , Pro, 4H); 3,3 - 3,4 (m, CH₂ Pro, 2H); 3,60 и 3,74 (dd, J = 5,87 и J = 8,22; CH₂Gly , 25% 2H); 3,85 (d, J = 5,87, CH₂Gly , 75%, 2H); 4,10 (q, CH₃ CH₂O), 75 % 2H); 4,13 (q, CH₃CH₂O, 25% 2H); 4,47 (dd, CH Pro, 25% 1H); 4,48 (dd, CH Pro, 75% 1H), 7,33 - 7,62 (m, C₆H₅, 5H); 8,36 (t, J = 5,87; NH, 75% 1H); 8,40 (t, J = 5,87; NH, 25% 1H).

Рассчитано для C₁₆H₂₀N₂O₄: C = 63,14; H = 6,16; N = 9,20.

Найдено: C = 63,56; H = 6,87; N = 9,48.

Пример 8.

Синтез этилового эфира N-изовалерил-L-пролилглицина
Изо-C₄H₉C(O)-LPro-Gly-OЕt (VIII)
а) N-изовалерил-L-пролин
К хорошо перемешиваемому раствору L-пролина (1,15 г; 0,01 моль) в 2N- водн. NaOH (5 мл) добавляли одновременно по каналам при температуре около 0 - 4^oC 4N-водн. NaOH (2,5 мл) и изовалерил хлорид (1,4 мл; 0,012 моль). Через 15 мин смесь подкисляли (pH 2 - 3) 1N HCl и экстрагировали с помощью CHCl₃. Смешанный органический экстракт высушивали, используя MgSO₄ и растворитель удаляли. N-изовалерил-L-пролин был получен в виде масла. Выход составил 0,85 г; R_f = 0,66 (силикагель, n-C₄H₉OH-AcOH-H₂O, 5:1:2); []²_D⁰ = -129,3 (C = 0,6; CHCl₃).

¹H-ЯМР (CDCl₃), / (млн^-1): 0,99 (d, -CH(CH₃)₂, 6H); 2,25 (m, CH(CH₃)₂, 1H); 2,3 (m, CH₂CH(CH₃)₂, 2H); 1,9 - 2,65 (m, CH₂-CH₂, 4H); 3,45 - 3,70 (m, CH₂ Pro, 2H); 8,85 (шир. s, COOH, 1H).

Рассчитано для C₁₀H₁₇NO₃: C = 60,27; H = 8,62; N = 7,02.

Найдено: C = 60,34; H = 8,74; N = 7,23.

б) Этиловый эфир N-изовалерил-L-пролилглицина (VIII)
К хорошо перемешиваемому раствору N-изовалерил-L-пролина (0,74 г; 0,0037 моль) в abs.EtAc (15 мл) добавляли N-этилморфолин (0,45 мл; 0,0037 моль) и изо-BuOC(O)Cl (0,5 мл; 0,0037 моль). Через 2 - 3 мин капельно добавляли при температуре от -10 до -5^oC смесь NH₂CH₂COOEt HCl (0,52 г; 0,0037 моль), N-этилморфолина (0,47 мл, 0,0037 моль) и DMF (10 мл). Перемешивание продолжали в течение 30 мин с охлаждением и 1,5 ч при комнатной температуре. Остаток отделяли фильтрацией и маточную жидкость выпаривали. Осадок растворяли в хлороформе, промываемом 5%-ным водным раствором NaHCO₃, водой, IN водным раствором HCl, водой и затем высушивают посредством MgSO₄. После фильтрации растворитель выпаривают, а остаток (0,6 г) очищают в хроматографической колонке (силикагель), используя CHCl₃ в качестве элюента. Получают 0,49 г (49%) эфира VIII в виде прозрачного масла, R_f = 0,55 (силикагель, CHCl₃-MeOH 9:1), []²_D⁰ - 113,4^o (C 0,3; CHCl₃), ПМР-спектр в CDCl₃, (м.д. ): 0,99 (д, J=5,97, CH(CH₃)₂, 6H): 2,22 (м, CH(CH₃)₂, 1H), 1,27 (т, J=7,16, OCH₂CH₃, 3H), 4,18 (кв, OCH₂CH₃, 2H), 1,75-2,60 (м,CH₂-CH₂Pro,4H), 3,35-3,70 (м, CH₂Pro 2H), 3,96 и 4,02 (каждый дд, CH₂Gly,2H), 3,85-4,10 (м, CH₂CH(CH₃)₂), 6,50 и 7,59 (каждый т, NHGly 1H).

Найдено, % : C 58,78; H 8,74; N 9,87 C₁₄H₂₄H₂O₄
Вычислено, % : C 59,12; H 8,52; N 9,85.

Пример 9.

Этиловый эфир N-фенилацетил - L - пролил- L -валина,
N - Phac - L - Pro - L - Val - OC₂H₅ (IX)
Получен в условиях примера 1 из 2,33 г (0,01 м) N - фенилацетил- L -пролина и 1,8 г (0,01 моль) хлоргидрата этилового эфира L -валина с выходом 72% в виде масла, R_f = 0,64 (силикагель, диоксан-вода 9:1), []²_D⁰ = -99,3^o (C = 0,35; CHCl₃).

ПМР спектры CDCl₃, м.д.): 0,83 и 0,86 (каждый д, J = 6,9, CH(CH₃)₂Val 90% 6H); 0,89 и 0,95 (каждый д, J=6,9, CH(CH₃)₂ Val, 10% 6H); 1,27 (т, CH₃-CH₂-O, 90% 3H), 1,28 (т, CH₃-CH₂-O, 10% 3H); 1,7-2,5 (м,CH₂-CH₂Pro,4H) 2,25 (м,CH Val,1H); 3,4-3,7 (м,CH₂Pro,2H); 3,7 (с, CH₂Ar, 2H); 4,18 (кв, CH₃CH₂-O, 2H); 4,38 (д.д.,CHVal,J=8,4, J= 4,9, 90% 1H); 4,54 (д.д., CH Val,10% 1H);4,68(д.д.CHPro1H); 7,28 (м, C₆H₅, 5H); 7,44 (д., J=8,4; NH 90% 1H); 6,48 (д, NH, 10% 1H).

Найдено, %: C 66,58; H 7,74; N 7,85 C₂₀H₂₈N₂O₄
Вычислено, %: C 66,63; H 7,84; N 7,76.

Пример 10.

Этиловый эфир N-бензоил- L -пролил- L -валина,
N-Bz-L-Pro-L-Val-OEt (X)
Получен в условиях примера 1 из 2,2 г (0,01 моль) N-бензоил-L-пролина и 1,8 г (0,01 моль) хлоргидрата этилового эфира L-валина. Выход 2,6 г (72,3%), т. пл. 96-97^oC (из эфира); Rf=0,61 (силикагель, диоксан-вода 9:1), R_f 0,86 (силикагель, CHCl₃-C₂H₅OH 3:1); []²_D⁰ = -103,1^o (C = 0,4; CHCl₃).

ПМР-спектр в CDCl₃, (м. д. ) : 0,92 и 0,96 (каждый д, J=6,9 Гц, CH(CH₃)₂Val6H); 1,28 (т, CH₃CH₂O, 3H); 1,75-2,7 (м,CH₂-CH₂Pro4H), 2,21 (м,CH Val,1H), 3,36-3,70 (м, C H₂ Pro, 2H), 4,21 (кв, CH₂-CH₂-O, 2H), 4,51 (д. д. J=8,6, J = 6,7CHVal, 1H), 4,82 (д.д.,CHPro,1H), 6,40 (уш.с., NE 5% 1H), 7,3-7,6 (м, C₆H₅ и NH 5H + 95% 1H).

Найдено, %: C 65,54; H 7,47; N 8,21, C₁₉H₂₆N₂O₄
Вычислено,% : C 65,86; H 7,58; N 8,08.

Пример 11.

N-бензоил- L -пропил -- аланинэтилового эфира.

N-BZ-L-PrO--Ala-Ot (XI)
К раствору в ДМФА (25 мл), 0,9 г (6 ммоль) -Ala-OtHCl, 1,3 г (6 ммоль) N-BZ-L-Pro-OH и 0,87 г (6,4 ммоль) N-гидроксибензтриазола добавляли 0,83 мл (6,01 ммоль) триэтиламина. Смесь была охлаждена до 3^oC, и в нее добавили 1,54 г (7,5 ммоль) DCC. Смесь отстаивалась при 3^oC всю ночь и при комнатной температуре 1,5 часа, а затем ее охладили до -15^oC. Полученный DCU удалили фильтрацией. Для фильтрации добавили водный калий бикарбонат и получили остаток. Он был профильтрован, промыт водой и выкристаллизован из смеси этанола с водой. Твердая часть профильтрована, промыта и высушена. Получено 1,5 г (78,9%) продукта: t_пл 88-98^oC, []²_D⁰ = -114,0, (C = 0,5; CHCl₃); R_f = 0,86 (силикагель, CHCl₃ - C₂H₅OH, 9:1).

H-ЯМР спектры DMSO-d₆, (млн^-1 : 1,03 и 1,07 (каждый t, CH₃-CH₂O, 3H); 1,6-2,3 (м,CH₂-CH₂Pro4H); 2,45 (t,CH₂-Ala,2H); 4,04 (g, CH₃CHO, 2H); 3,14 и 3,40 (каждый m, C H₂Ala, 2H); 3,3-3,6 (m, C H₂ Pro, 2H); 4,37 и 4,14 (каждый dd CH Pro, 1H); 7,33-7,62 (m, C₆H₅, 5H); 8,02 и 8,00 (каждый, t, NH, 1H).

Рассчитано для C₁₇H₂₂N₂O₆ : C = 64,15; H = 6,92; N 8,80
Найдено: C=64,23; H=7,03; N=8,91
Пример 12.

Амид N-бензоил-L-пролил -- аланина,
N-BZ-L-Pro -- Ala-Nh₂ (XII).

получен в условиях примера 2 из этилового эфира N-бензоил-L-пролил --/ аланина с выходом 72%, т. пл. 135-137^oC (из эфира); Rf=0,21 (силикагель, CHCl₃-C₂H₅OH 9:1); []²_D⁰ = 41,6^o (c = 0,45, CHCl₃). ПМР спектр в (CD₃)₂ SO (м. д. ) : 1,68 - 2,20 (м,CH₂-CH₂Pro,4H); 2,24(т, CH₂--Ala, 2H); 3,21 (д. т. , J NH = 5,4 Гц, CH₂--Ala, 70% 2H), 3,10 (д.т., CH₂Ala30%2H), 3,3-3,68 (м,CH₂Pro,2H), 4,39 (д.д., CHPro,70% 1H), 4,11 (д.д., CHPro , 30% 1H), 6,86-7,22 (м,C₆H₅ и NH₂, 7H), 7,98 (т, NH, 70%, 1H), 7,87 (т, NH, 30%, 1H).

Найдено, %: C 62,31; H 6,70; N 14,58 C₁₅H₁₉N₃O₃
Вычислено, %: C 62,28, H 6,57, N 14,53.

Пример 13.

Амид N-бензоил-Т-пропилилицина, N-Bz-L-Pro-Gly-NH₂(XIII)
Получен в условиях примера 4 из этилового эфира N-бензоил-L-пролилицина с выходом 75%, т.пл. 64-74^oC (гигр.), Rf=0,54 (силикагель, CHCl₃-C₂H₅OH, 3: 1), R_f=0,3 (силикагель, CHCl₃-C₂H₅OH, 9:1), R_f=-17,9^o (с = 0,45, CHCl₃).

ПМР спектр в (CD₃)₂SO, (м.д.): 1,68-2,0 и 2,05-2,30 (м,CH₂-CH₂Pro,4H), 3,3-3,45 (м, CH₂ под НДО, 2H), 3,53-3,75 (м,CH₂-Gly,2H), 4,20 и 4,40 (каждый, м CHPro 1H и 90% 1H), 6,95-7,65 (м, C₆H₅ и NH₂, 7H), 8,05 и 8,41 (каждый т, NH, 10% 1H + 90% 1H),
Найдено, %: C 61,32, H 6,31, N15,21
C₁₄H₁₇N₃O₃
Вычислено,%: C 61,09 H 6,20, N 15,27
Пример 14.

N-фенилацетил-L-пролилглицинметиламида
N-Phac-L-Pro-Gly-NHMe (XIV)
Раствор 1,6 г (5 моль) N-Phac-L-Pro-Gly-OEt в 50 мл этанола охладили до 0^oC, затем в течение 30 мин через раствор барботировали монометиламином (высушенным пропусканием через колонку с NaOH). Раствор оставили на 5 ч при комнатной температуре. Этанол выпаривали в вакууме. К осадку был добавлен эфир, и твердая часть была отфильтрована и высушена в вакууме при 25^oC. Получены 1,6 г (99%) продукта: t_пл 185-186,5^oC []²_D⁰ = -36,00 (C = 0,5; CHCl₃); R_f = 0,66 (силикагель, диоксан-вода, 9:1).

¹H-ЯМР спектр в DMSO-d₆, (млн^-1): 1,66-2,24 (м,CH₂CH₂Pro,4H); 2,49 (d, NHCH₃, 85% 3H); 2,60 (d, NHCH₃, 15% 3H); 3,61 и 3,63 (каждый m, C H₂Gly, 85% 2H); 3,52 и 3,62 (каждый м,CH₂Gly 15% 2H); 3,40 - 3,60 (м,CH₂Pro,2H); 3,70 (s, CH₇Ar, 85% 2H); 3,68 (s, CH₂Ar, 15% 2H); 4,23 (dd, CHPro, 85% 1H); 4,44 (dd,CHPro 15% 1H); 7,16-7,36 (m, C₆H₅, 5H); 7,58 (q, NH-CH₃, 85% 1H); 7,84 (q, NHCH₃, 15% 1H); 8,38 (t, NHGly, 85% 1H); 8,36 (t, NHGly, 15% 1H).

Найдено: C 63,61; H 6,75; N 14,01.

C₁₆H₂₁N₃O₃.

Вычислено: 63,34; 6,93; N 13,86.

Последующие продукты были приготовлены способом, соответствующим примеру 1.

Пример 15.

Диметиламид N-фенилацетил-L-пролилглицина
Дипептид формулы N-Phac-L-Pro-Gly-NMe₂ (XV), выход 78%; масло; R_f = 0,68; силикагель, диоксан: вода 9:1);
[]²_D⁰ = -147,1^o (C=0,1; CHCl₃).

H-ЯМР спектр в DMSO-d₆(млн^-1):1,71-2,06(m,CH₂-CH₂Pro,4H) 2,83, 2,93 и 2,84 2,96 (каждый s, N(CH₃)₂, 6H); 3,3-3,6 (m, C H₂Pro, 2H); 3,67 (s, CH₂C₆H₅ 2H); 3,89 и 3,95 (каждый d, C H₂Gly 2H); 4,37 и 4,52 (dd, каждый C H Pro, 1Н); 7,15-7,34 (m, C₆H₅, 5H); 7,88 и 8,24 (каждый t , NH, 1H).

Найдено: C = 64,53; H = 7,48; N = 13,01.

С₁₇H₂₃H₃O₃
Вычислено: C = 64,32; H = 7,32; N = 13,23.

Пример 16.

Диэтиловый эфир N-фенилацетил-L-пролил-L-глутаминовой кислоты.

Дипептид формулы: N-Phac-L-Pro-L-Glu-(OEt)₂ (XVI) выход 69%, масло; Rf = 0,9 (силикагель, диоксан: вода, 9:1); Rf = 0,7 (силикагель, CHCl₃ : EtOH, 3: 1); []²_D⁰ = -45,9^o, C = 0,3; CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр в CDCl₃ (млн^-1; 1,25 и 1,27 (каждый t, 2 CH₃-CH₂-O, 6H); 1,76-2,49 (m, CH₂CH₂,Pro,CH₂-CH₂ Gly, 8H); 3,39-3,92 (m,CH₂Pro,2H); 3,71 (s, CH₂-C₆H₅, 2H); 4,13 и 4,19 (каждый q, 2 CH₃-CH₂-O, 4H); 4,35 и 4,49 (каждый m, C HGly, 1H); 4,49 и 4,61 (каждый dd, HPro, 1H); 7,15-7,38 (m, C₆H₅, 5H); 7,30 и 7,43 (каждый d, NH Clu 1H);
Найдено: C=63,24; H=7,11; N=6,81.

C₂₂H₃₀N₂O₆
Вычислено: C=63,13; H= 7,24; N=6,69.

Пример 17.

N-фенилацетил-L-пролил-L-лейциламид
Дипептид формулы N-Phac-L-Pro-L-Leu-NH₂ (XVII), выход 83%; t_пл 174-175^oC, R_f = 0,5 (силикагель, CHCl₃: EtOH, 9:1); []²_D⁰ = -101,4^o (C=0,4; CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр в DMSO-d₆, (млн^-1; 0,82 и 0,88 (каждый d, C H (CH₃)₂Leu, 6H); 1,50 (m, C H Leu, 1H); 1,31-1,93 и 1,7-2,40 (каждый m, CH₂-CH₂Pro 4H); 3,43-3,67 (m, CH₂Pro 2H); 3,69 (s, CH₂-C₆H₅, 2H); 4,17 и 4,34 (каждый m, CH Leu 1H); 4,28 и 4,58 (каждый dd CHPro, 1H), 7,0 и 7,13 (каждый s, NH₂); 7,15-7,35 (m, C₆H₅, 5H); 7,10-7,45 (m, два s, C₆H₅ и NH₂); 7,86 и 8,27 (каждый d, NHLeu, 1H).

C₁₉H₂₇H₃O₃0,5H₂O
Вычислено: C=64,37; H=7,98; N=11,85.

Найдено: C=64,13; H=7,70; N=11,95.

Пример 18.

N-фенилацетил-L-пролилглицина
N-Phac-L-Pro-Gly-OH (XVIII)
Суспензию 1,06 г (3,5 ммоль) этилового эфира N-фенилацетил-L-пролоиглицин (пример 1) в 5 мл 1N NaOH перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч до получения раствора. Затем его подкислили 2N HCl до pH 3. Раствор был выпарен в вакууме до получения масла, которое растворили в 15 мл хлороформа. Нерастворившуюся часть отфильтровали, фильтрат испарили. К осадку добавили эфир, твердую часть отфильтровали и высушили в вакууме при комнатной температуре: получили, 0,9 г (89,9%) продукта: t_пл 159-160^oC (субл.); R_f = 0,54 (силикагель, диоксан-вода, 9:1); []²_D⁰ = -85,8^o (C=0,5; CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр в DMSO-d₆, (млн^-1): 1,80-2,25 (m, CH₂CH₂, Pro, 4H); 3,36-3,63 (m, C H₂ Pro, 2H); 3,64 и 3,68 (каждый s, CH₂-C₆H₅, 2H); 3,86; 4,00 и 3,83; 4,02 (каждый dd, CH₂ Gly, 2H); 4,57 и 4,44 (каждый dd CH Pro, H); 7,11-7,38 (m, C₆H₅, 5H); 7,52 и 7,32 (каждый t, NH, 1H) 12,06 (шир. s, COOH, 1H).

Найдено: C=62,11; H=6,26; N=10,09.

C₁₅H₁₈N₂O₄
Вычислено: C=62,04; H=6,22; N= 9,64.

Пример 19.

Метиловый эфир N-фенилацетил-L-пролил-j-аминомасляной кислоты
N-Phac-L-Pro-GABA-OMe (XIX)
Получен в условиях, приведенных в примере 1. Выход 86%, масло, R_f 0,65 (силикагель, CHCl₃ - EtOH 9:1), []²_D⁰ -93,6^o (c 0,4; CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр в DMSO - d₆ (млн^-1); 1,63 (m, C H GABA 2H); 1,65-2,15 (m, CH₂-CH₂ Pro 4H); 2,29 (m, C H₂ GABA, 2H), 3,05 (m, CH₂ GABA, 2H), 3,2-3,4 (m, CH₂ Pro при HDO 2H); 3,58 (s, OCH₃ 3H); 3,66 (s, CH₂-C₆H₅, 2H); 4,20 и 4,40 (каждый dd, C H Pro, 1H); 7,02-7,37 (m, C₆H₅ 5H); 7,85 и 8,20 (каждый t, NH, 1H).

Найдено: C=65,37; H=7,41; N=8,28.

C₁₈H₂₄N₂O₄
Вычислено: C=65,03; H=7,29; N=8,42.

Пример 20.

Этиловый эфир N-фенилацетил-L-пролил-L-аланина
N-Phac-L-Pro-L-Ala-OEt (XX)
Получен в условиях, приведенных в примере 1, выход 78%, т.пл. 58-51^oC, R_f 0,75 (силикагель, диоксан-вода 10:1) []²_D⁰ - 99,2^o (c 0,6 CHCl₃),
¹H-ЯМР спектр в DMSO-d₆, (млн^-1): 1,16 (t, CH₃-CH₂-O, 3H) 1,27 и 1,31 (каждый d, CH₃ Alа, 3H); 1,68-2,27 (m, CH₂-CH₂ Pro, 4H); 3,46-3,61 (m, C H₂ Pro, 2H); 3,65 (s, CH₂-C₆H₅, 2H); 3,98-4,14 (q, CH₃-CH₂-O, 2H); 4,19 и 4,29 (каждый dq, C H Ala, 1H); 4,34 и 4,48 (каждый dd, CHPro, 1H); 7,12-7,36 (m, C₆H₅, 5H); 8,28 и 8,60 (каждый d, NH Ala, 1H).

Найдено: C=65,07; H=7,32; N=8,45.

C₁₈H₂₄N₂O₄
Вычислено: C=65,03; H=7,29; N=8,42.

Пример 21.

Этиловый эфир N-капроил-L-пролилглицина

Получен в условиях, приведенных в примере 1. Выход 54%, масло, Rf 0,8 (силикагель, диоксан-вода 9:1), []²_D⁰ - -216^o (c 0,2, CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр в DMSO-d₆, (млн^-1): 0,90 и 0,91 (каждый CH₃-(CH₂)₄, 3H); 1,19 (t, CH₃-CH₂-O, 3H); 1,27, 1,50 и 2,25 ( два m и t, CH₃-(CH₂)₄, 8 H), 1,70 - 2,20 (m, CH₂-CH₂ Pro, 4H); 3,35 - 3,50 (m, C H₂ Pro, 2H); 3,78 и 3,82 (каждый d, CH_2/ Gly, 2H); 4,08 (I, CH₃-CH₂-O, 2H); 4,30 и 4,36 (каждый dd, CH Pro, 1H); 8,15 и 8,36 (каждый t, NH Gly, 1H).

C₁₅H₂₆N₂O₄
Найдено: C = 60,35; H = 8,84; N 9,31.

Вычислено: C = 60,39; H = 8,78; N = 9,38.

Пример 22.

Этиловый эфир N-(1-адамантоил)-L-пролил-глицина
N-Ad-C(O)-L-Pro-Gly-OEt (XXII), выход 81%, t_пл 177 - 179^oC, R_f = 0,93 (силикагель, CHCl₃ EtOH, 2:3); []²_D⁰ = = -66,2^o (C = 0,6 CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр в DMSO-d₆ (млн^-1): 1,18 (t, CH₃-CH₂-O, 3H); 1,66, 1,88 и 1,96 (m, Ad); 1,6 - 2,0 (m, CH₂-CH₂ Pro при Ad); 2,23 - 3,37 (m, C H₂ Pro, 2H); 3,72 и 3,84 (каждый dd, CH₂, Gly, J = 16,5, 2H); 4,08 (q, CH₃CH₂-O, 2H); 4,39 (m_{расшир.} CH Pro, 1Р); 8,07 (t_{расшир.} NH Gly, 1H).

Найдено: C = 66,49; H = 8,36; N = 8,13.

C₂₀H₃₀N₂O₄
Вычислено: C = 66,28; H = 8,33; N = 7,73.

Пример 23.

Этиловый эфир N-фенилбутирил-L-пролилглицина N-C₂H₅(CH₂)₃C(O)-t-Pro-Gly-OEt (XXIII), получен в условиях примера 1, выход 84%, масло; R_f = 0,87 (силикагель, диоксан: вода, 9:1); R_f = 0,75 (силикагель, CHCl₃; EtOH, 9:1) []²_D⁰ = -90,1^o (C = 0,8, CHCl₃);
¹H-ЯМР-спектр в DMSO-d₆, (млн^-1): 1,18 (t, CH₃-CH₂-O-, 3H); 1,64 - 2,23 (m, CH₂-CH₂ Pro, 4H); 1,79, 2,28 и 2,59 (m, два t, -(CH₃)₃, 6H); 3,2 - 3,6 (m, CH₂ Pro, 2H); 3,78 и 3,81 (каждый d, CH₂ Gly, 2H); 4,07 и 4,09 (каждый q, CH₃-CH₂ - O, 2H); 4,33 и 4,36 (каждый dd, CH Pro, 1 H); 7,04 - 7,35 (m, C₆H₅, 5H); 8,18 и 8,47 (каждый t, NH Gly, 1H).

Рассчитано для C₁₉H₂₆N₂O₃: C = 69,05; H = 7,95; N = 8,47
Найдено: C = 69,21; H = 7,99; N = 8,52.

Пример 24.

У заявляемых соединений, включая вещества, описанные в примерах 1 - 23, была оценена способность предотвращать нарушение памяти, вызываемые максимальным электрошоком (МЭШ) или скополамином в тесте условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) с помощью примера (установка Laffaette Co, США). Эксперименты, описываемые здесь (примеры 12, 13, 15 и 19) были проведены на самцах беспородных крыс-альбиносов массой 180 - 220 г. Каждое вещество вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг за 15 мин до выработки УРПИ. Амнезию вызывали транскорнеальным МЭШ сразу же после обучения или скополамином (1 мг/кг, подкожно), вводимым за 30 мин до обучения. Сохранность рефлекса определяли через 24 ч путем измерения латентного периода перехода в темную камеру.

Степень антиамнестической активности оценивали по модифицированной формуле Баттлера:

Чем выше этот показатель, тем больше антиамнестическая активность.

В контрольной группе животных МЭШ так же, как и скополамин, вызывал амнезию: значительное уменьшение латентного периода при переходе в темную камеру.

Заявляемые соединения вызывали значительный антиамнестический эффект: увеличение латентного периода и индекса антиамнестической активности (АА) (табл. 1,2).

Учитывая прекрасное антиамнестическое действие соединения 1 в обоих видах амнезии, его и выбрали для дальнейшего исследования.

Было показано, что его эффективность сохраняется после перорального введения; в экспериментах с максимальной электрошоковой амнезией была продемонстрирована перевернутая U-образная зависимость реакции от дозы (табл. 3).

Положительный амнестический эффект был выявлен также в условиях снижения интенсивности тренировки на выработку рефлекса пассивного избегания. Облегчающий эффект соединения 1 был продемонстрирован в случае его введения за 15 мин. до испытания, сразу же после него или за 15 мин до испытания восстановления памяти (табл. 4).

Соединение I может облегчить все основные фазы формирования памяти:
введение информации, закрепление и восстановление.

Пирацетам не облегчал восстановление в этих экспериментах.

Пример 25.

Влияние соединения I на обучение активному избеганию было исследовано в челночной испытательной камере (Уго Базиль, Италия). Условный рефлекс активного избегания (УРАИ) вырабатывали в течение 5 дней с 50 ежедневными пробами для каждой крысы. Учебное задание заключалось в том, чтобы крысы избегали электрошока, вызываемого через пол клетки, непосредственно после звукового сигнала. Крысы могли избежать шока, перемещаясь в другой отсек клетки, но только в то время, когда звучит сигнал (3c).

Соединение I (0,1 мг/кг, ежедневно, внутрибрюшинно), вводимое в течение 14 дней до обучения и ежедневно во время обучения, продемонстрировало свою способность повысить обучаемость (табл. 5).

В других экспериментах реакция стабильного активного избегания была нарушена одновременным включением звукового сигнала и электрошока (в конечностях) в пяти опытах. Соединение I предотвращало ухудшение избегания (табл. 6).

Пример 26.

Влияние соединения I на острое угасание локомоторной активности было оценено по уменьшению передвижений в течение 30 мин. Эксперименты выполнены на самцах беспородных мышей-альбиносов (18 - 22 г), которых помещали группами по 10 животных в регистрационную клетку (Optovarimex, Colomb., США).

Введение за 15 мин до начала регистрации дозами размером от 0,05 до 5,0 мг/кг соединения 1 продемонстрировало увеличение степени привыкания ("усвоение негативного навыка") без изменения начальной локомоторной активности (табл. 7).

Пример 27.

Ухудшение обучения и памяти достигали также фронтальной лобэктомией, которую выполняли после обучения пассивному или активному избеганию. Введение соединения I начинали с первого послеоперационного дня и заканчивали на 9-й лень. Тестирование проводили на 4-й и 9-й день. В контрольной группе (ложная операция) обученность пассивному и активному избеганию не изменялась. Следствием фронтальной лобэктомии явилось сокращение латентного периода перехода в темный отсек; соединение I восстановило реакцию пассивного избегания (табл. 8).

Лобэктомированные крысы проявляли полное отсутствие рефлекса активного избегания на 4-й день и слабую тенденцию к его восстановлению на 9-й день. Введение соединения I увеличило процент животных, проявляющих активную реакцию избегания и коэффициент сохранения (табл. 8).

Пример 28.

Ухудшение обучаемости потомства крыс вызывали пренатальной алкоголизацией или пренатальной гипоксией. Пренатальная алкоголизация достигалась пероральным введением 5 г/кг день (25%-ный раствор) этанола поросным самкам крыс в течение всего периода поросности. Для достижения пренатальной гипоксии крыс на 15-й день поросности крыс помещали в барометрическую камеру с большим разрежением ("подъем" на высоту 8500 м; выдержка 2 ч).

Лечение молодняка производили 8-го по 20-й день. Соединение I вводили подкожно в дозе 0,1 мг/кг/день. Тестирование выполняли на двухмесячных крысах.

Установлено, что обе разновидности поражения (алкоголизация, гипоксия) вызывали нарушение обучаемости в тесте активного избегания (УРАИ). Ранее постнатальное введение соединения I восстанавливало способность к обучению (таблица 9).

Было показано, что пренатальная алкоголизация уменьшает степень привыкания в открытом пространстве. Постоянное постнатальное введение соединения I восстанавливало нормальный ход привыкания (таблица 10).

Пример 29.

Влияние соединения 1 на старческое снижение умственных способностей изучали в экспериментах на 24-месячных крысах линии Вистар. Вещество вводили постоянно в дозе 0,1 мг/кг/день в течение 24 дней внутрибрюшинно перед опытом и 14 дней в течение опыта.

Регистрация локомоторной активности в многоканальном анализаторе Optovarimex показала, что соединение 1 повышало, при постоянном введении, начальную горизонтальную активность. Тестирование активности в течение 5 мин выявило снижение подвижности вследствие острого привыкания ("усвоения негативного навыка"). Это испытание пригодно для изучения ноотропов. В контрольной группе коэффициент привыкания составлял 0,29. У животных, предварительно получивших соединение 1, выявлено более выраженное привыкание с коэффициентом 0,03 (табл. 11).

Постоянное введение соединения 1 облегчало сохранение памяти по истечении 24 ч и особенно 14 дней после участия в тесте пассивного избегания (табл. 11). Из этих экспериментов очевидно, что соединение 1 способно улучшать мнестическую функцию у старых крыс.

Пример 30.

Противогипоксическое действие соединения 1 оценивали с использованием барометрической камеры посредством "подъема" беспородистых мышей-альбиносов (18-22 г) на высоту 11000 м со скоростью 1000 м/мин. Через час выдержки количество предварительно обработанных 0,9%-ным физ. р-ром выживших мышей составило 15%. Введение соединения 1 (0,5 мг/кг за 15 мин перед гипоксией) увеличило это значение до 43,7%.

Пример 31.

Влияние соединения 1 на вес и потребление пищи изучали в экспериментах на беспородистых крысах. Вещество, вводимое внутрибрюшинно в течение 3 недель в дозе от 0,1 мг/кг/день, замедляло динамику увеличения веса по сравнению с контролем: увеличение массы (в % к начальному) составляло в обработанной группе 12% и в контрольной 24%. Количество потребляемой еды, проверенное между 19-м и 21-м днями, было меньше у обработанных животных (39,5 г/день/животное), чем у контрольных (68,6 г/день/животное). Подученные данные подтверждают анорексигенное действие соединения 1.

Пример 32.

Были изучены влияние соединения 1 на общее (свободное) поведение и его острая токсичность. В опытах на беспородных самцах мышей-альбиносов (18-22 г) соединение 1 при дозировке в пределах 1 - 10 мг/кг (внутрибрюшинно) не увеличивало и не уменьшало спонтанной двигательной активности, а также не усиливало стимулирующий эффект амфитамина на нее. В этих дозах соединение 1 также не изменяло ректальную температуру. При дозе 25 мг/кг соединение 1 снижало стимулирующий эффект амфитамина.

Увеличение дозы до 500 мг/кг не изменяло двигательной координации (тест вращающегося стержня) и не разрушало общего состояния (свободного поведения) животных.

При дозе 500 - 3000 мг/кг (внутрибрюшинно) соединение 1 не вызывало смерти животных в течение 24 ч. При дозе 100 мг/кг оно вызывало возбуждение у 50% животных. При дозе 5000 мг/кг (внутрибрюшинно) соединение вызывало смерть 50% животных. Соединения по изобретению могут быть отнесены к малотоксичным.

Пример 33.

Влияние соединения 1 на синдром отмены, вызванный прекращением постоянного введения бензодиазепинового транквилизатора феназепама (Т.А. Воронина и др. , Феназепам; А.В.Богатский, издательство "Наукова думка", Киев, 1982; с. 67-169) было изучено в экспериментах на самцах крыс-альбиносов массой 190 - 200 г в начале эксперимента и 300 - 350 г в конце эксперимента.

Феназепам (2 мг/кг внутрибрюшинно) или физ. р-р (контрольная группа крыс) вводили животным ежедневно в течение 57 дней. Синдром проявлялся на 24-72 ч после последней инъекции. Основными проявлениями синдрома отмены были: "анксиогенно-подобное" состояние, агрессивность и ускоренное развитие киндлинга, вызванного пентилэнтетразолом. Соединение 1 вводили крысам, у которых была произведена отмена, в дозах 0,5 мг/кг внутрибрюшинно за 15 мин до тестирования.

Для оценки уровня "тревожности" крыс использовали тест конфликтной ситуации (JR. Vogel et.al., Psychopharmаcologia, 21 1-7. (1971)). Этот эксперимент заключался в предварительной дрессировке крыс, которые были ограничены в приеме жидкости, пить воду из поилки. На следующий день через поилку пропускали электрический ток 0,5 мА. Конфликтную ситуацию создавали путем столкновения двух различных рефлексов (питьевого и самозащиты).

Через 24 ч после прекращения постоянного испытания крыс, которым отменили феназепам, у них отмечено уменьшение частоты питья по сравнению с контрольной группой. Такое поведение в тесте конфликтной ситуации можно рассматривать как "анксиогенно-подобное". Соединение 1 противодействовало "анксиогенно-подобной" реакции на отмену бензодиазепина и увеличивало частоту питья в конфликтной ситуации (табл. 12).

В эксперименте на крысах определяли порог агрессивности поведения (R. Tedeshi et. al. J. pharmacol. Exp. Ther. 125 28 - 34 (1959)). Пару крыс помещали на настил, подключенный к электрической цепи; регистрировали силу тока, которая провоцировала драку.

У крыс с отмененным феназепамом наблюдалось уменьшение этого порока. Соединение 1 при введении через 2 ч после отмены феназепама увеличивало порог агрессивной реакции (табл. 13).

Исследовали судорожные реакции крыс с использованием химического киндлинга (Mason C. R. et. al Epilepsia, 13, 663-674 (1972); R.M.Post et.al., Handbook of Biological Psychiatry, Part IV, N 7, Mapcel -Dekker (1981), p.p. 609-651), вызываемого малыми дозами пентилен-тетразола (35 мг/кг, внутрибрюшинно), вводимого через 24, 48 и 72 ч после отмены феназепама. Уровень судорог оценивали по 4-бальной системе: дрожание (1 балл); конвульсии (2 балла); клонические судороги (3 балла); тонические припадки и смерть (4 балла).

Наши эксперименты выявили, что судороги, вызываемы пентиден-тетразолом, были более выраженными у крыс, которым отменили феназепам, чем у контрольных. Соединение 1 уменьшает степень киндлинга, вызываемого пентилен-тетразолом (табл. 14).

Из этих экспериментов очевидно, что соединение 1 способно уменьшить синдром отмены бензодиазепина: оно снижает тревожность, агрессивность и киндлинг, вызываемый пентилентетразолом.

Формула изобретения

1. Производные N-ацилпролилдипептидов общей формулы I

где R₁ = (C₄-C₅)алкил, циклоалкил, аралкил или арил;
R₂ = H, (C₁-C₄)алкил, карбамидоалкил или карбалкоксиалкил;
R₃ = гидрокси, алкокси, амино, алкиламино или диалкиламино;
n = 0-3,
при этом:
а) когда R₁ = фенил, R₂ = водород или изопропил, а n = 0, R₃ = не метокси;
б) когда R₁ = трет-бутил, R₂ = водород, а n = 0 или 1, R₃ = не метиламино;
в) когда R₁ = трет-бутил, R₂ = изобутил, метил, бензил или карбамидометил, а n = 0, R₃ не метиламино;
г) когда R₁ = трет-бутил, R₂ = карбометоксиметил, n = 0, R₃ не изопропиламино.

2. Производные N-ацилпролилдипептидов формулы I по п.1, представляющие собой

где R₁ = изобутил, пентил, 1-адамантил, фенил, фенилметил или фенилпропил;
R₃ = OH или OC₂H₅, NH₂, NHCH₃, N(CH₃)₂
3. Производные N-ацилпролилдипептидов общей формулы I по п.1, представляющие собой

где R₁ = фенилметил или фенил, R₃ = OC₂H₅ или NH₂.

4. Производные N-ацилпролилдипептидов по п.1, представляющие собой:

где R₁ = фенилметил или фенил.

5. Производное N-ацилпролилдипептидов по п.1, представляющее собой

6. Производное N-ацилпролилдипептидов по п.1, представляющее собой

7. Производное N-ацилпролилдипептидов по п.1, представляющее собой

8. Производное N-ацилпролилдипептида по п.1, представляющее собой

9. Производное N-ацилпролилдипептида по п.1, представляющее собой

10. Производное N-ацилпролилдипептида по п.1, представляющее собой

11. Производное N-ацилпролилдипептида по п.1, представляющее собой

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5

QB4A Регистрация лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): ЗАО "Мастерклон"

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): ФГУП "Центр по химии лекарственных средств"

Договор № 19594 зарегистрирован 28.07.2004

Извещение опубликовано: 27.08.2004        БИ: 24/2004

* ИЛ - исключительная лицензия        НИЛ - неисключительная лицензия

QB4A Регистрация лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): ЗАО "Мастерклон"

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): ОАО "Щелковский витаминный завод"

Договор № 19596 зарегистрирован 28.07.2004

Извещение опубликовано: 27.08.2004        БИ: 24/2004

* ИЛ - исключительная лицензия        НИЛ - неисключительная лицензия

QZ4A - Регистрация изменений (дополнений) лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Государственное учреждение Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова Российской академии медицинских наук

Вид лицензии*: ИЛ

Лицензиат(ы): Закрытое акционерное общество "Мастерклон"

Характер внесенных изменений (дополнений):
Внесены изменения

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения:
12.05.2004 № 19112

Извещение опубликовано: 27.09.2006        БИ: 27/2006

* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия

QZ4A - Регистрация изменений (дополнений) лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Закрытое акционерное общество "Мастерклон"

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): Закрытое акционерное общество "МАСТЕРЛЕК"

Характер внесенных изменений (дополнений):
Внесены изменения в п. 1.3 договора. Лицензиат имеет право предоставлять сублицензии третьим лицам при условии получения предварительного письменного согласия Лицензиара.

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения:
28.07.2004 № 19595

Извещение опубликовано: 20.03.2007        БИ: 08/2007

* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия

QB4A Регистрация лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Закрытое акционерное общество "Мастерклон"

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): Закрытое акционерное общество "Мастерфарм"

Договор № РД0025579 зарегистрирован 17.08.2007

Извещение опубликовано: 27.09.2007        БИ: 27/2007

* ИЛ - исключительная лицензия        НИЛ - неисключительная лицензия

QZ4A - Регистрация изменений (дополнений) лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Закрытое акционерное общество "Мастерклон"

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): Закрытое акционерное общество "МАСТЕРЛЕК"

Характер внесенных изменений (дополнений):
Взаимное согласие.

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения:
28.07.2004 № 19595

Извещение опубликовано: 20.10.2007        БИ: 29/2007

* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия

PD4A Изменение наименования, фамилии, имени, отчества патентообладателя

(73) Патентообладатель(и):
Учреждение Российской академии медицинских наук научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова РАМН (RU)

Дата публикации: 20.10.2011

QZ4A Государственная регистрация изменений в зарегистрированный договор

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения:
17.08.2007 № РД0025579

Вид договора: сублицензионный

Лицо(а), передающее(ие) исключительное право:
Закрытое акционерное общество "Мастерклон" (RU)

Лицо, которому предоставлено право использования:
Закрытое акционерное общество "Фармацевтическая фирма "Лекко" (RU)

Дата и номер государственной регистрации изменений, внесенных в зарегистрированный договор:
18.10.2011 РД0088770

Изменения:
Изменена сторона договора. Сублицензиат: Закрытое акционерное общество "Фармацевтическая фирма "Лекко".

Дата публикации: 27.11.2011