Способ получения ферментного препарата глюкозооксидазы

Союз Сокотскиз

Социалистическиз

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Заявлено 28.1.1967 (№ 1129913/28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 12.111.1968. Бюллетень № 10

Дата опубликования ои сан !я 12.3 .1968

Кл. 6а, 22/04

NI1K, С 12k

Комитет ло делаю изаоретений и открытий

3 ДК 663.11: 576.8.093. .33: 577.154.22 (088.8) ори Совете Министров

СССР

Автогы изобретения

Заявитель Всесоюзный

H. В. Покровская и О. В. Кисляковя научно-исследовательский институт пиво-безалкогольной и винодельческой промышленности

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА

ГЛ Ю КО 3 О О КС ИДАЗ Ь1

Предмет изобретения

Известен способ получения фермснтного препарата глюкозооксидазы путем подготовки посевного материала плесневого гриба Аспергиллюс нигер — продуцента этого препарата с последующим его культивированием в глубинных условиях на мелассе, отделения полученного мицелия гриба от культуральной жидкости и выделения глюкозооксидазы из мицелия сдним из известных способов, например экстрагированисм водой и осаждением из полученной водной вытяжки фермента изопропиловым спиртом.

Для упрощения процесса подготовки посевного материала и повышения активности полученного прспарата глюкозооксидазы предложено посевной материал выращивать на синтетической питательной среде, содер>каще!!

1и„, глюкозы или сахарозы с добавлением к ней кукурузного экстракта. Процесс культивирован;!я на мелассе вести при рН нс ниже 6,0.

Освобожденную от мицелия культуральную жидкость возвращают на стадию культивирования посевного материала.

Способ заключается в следующем.

Споры плесневого гриба Аспсргиллюс нигер штамма ¹ 8 проращивают глубинно в колбах на синтетической питательной среде, содержащей 1% глюкозы (или сахарозы), 0,5% кукурузного экстракта и минеральные соли.

Полученную культуру высевают на такую же среду в посевной ферментер в количестве 1,5—

2%, а спустя 18 — 20 час культуру в количестве

1,5 — 2>/с передают в основной фсрментер, содержащий мелассу, !разведенну!о водопровод5 ной водой до плотности 3 — 6 Блг с рН не ни ке 6,0 и свободную от минерального фосфора.

Культивирование гриба ведут в течение 20—

24 «ас при 27 С и непрерывно; продувании

3 объема воздуха на 1 объем среды в минуту:

10 После этого отделяют мицелий гриба от культуральной жидкости. Последнюю доводят до рН 6,0, стерилизуют и возвращают на стадшо культивирования посевного матсриала.

Мицслий гриба высушива!От и из него экст15 рагируют водой фермент. Экстракт осажда!От тремя объемами изопропилового спирта. Полу Icííüé фсрмснтныи препарат, кроме глюкозооксидязы, содс1зжпт знячитсльнос ко. (ячество каталазы и ипвертазы.

20 Активность препарата (!!Оз) составляет

4000. Гл!Окозооксидазная активность в перссчсте на 1 л среды составляет 480000 .!!кл

0?!,:0.

Способ получения ферментного препарата глюкозооксидазы путем глубинного выращи30 вания посевного матсриЯЛЯ гриба Аспсргпл212945

Составитель М. И. Андреева

Техред Л. Я. Бриккер Корректоры: Л. В. Наделяева и Н. В. Босняцкая

Редактор В. Ф. Чулкова

Заказ 1009j13 Тираж 530 Подписное

ЦНИИГ1И Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 люс нигер †продуцен этого препарата, глубинного культивирования полученной культуры посевного материала на мелассе, отделения полученного мицелия гриба от культуральной жидкости с последующим выделением из мицелия глюкозооксидазы одним из известных способов, например экстрагированием водой и осаждением из полученной водной вытяжки фермента изопропиловым спиртом, отличаюи ийся тем, что, с целью упрощения процесса подготовки посевного материала и повышения активности полученного препарата глюкозооксидазы, выращивают посевной материал на синтетической питательной среде, содержащей

1% глюкозы или сахарозы с добавлением к ней кукурузного экстракта, а культивирование на мелассе осуществляют при рН не ниже

6,0, при этом освобожденную от мицелпя культуральную жидкость возвращают на стадию

10 культивирования посевного материала.