Способ получения ферментного препарата кислойпротеиназы
2I0788
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 02.XI.1966 (№ 1110528/28-13) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 08.II 1968. Бюллетень № 7
Дата опубликования описания 5.IV.1968
Кл. 6а, 14
6а, 22/04
МПК С 12k
С 12k
УДК 663.11:576.8.093.1 (088,8) Комитет ло делам иаобретеиий и открытий
-лри Совете Министров
СССР
Авторы .,изобретения
В. В. Дорохов и С. А. Коновалов
;Заявитель
Всесоюзный научно-исследовательский институт ферментной и спиртовой промышленности
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА КИСЛОЙ
ПРОТЕИHA3bl
Известен способ получения ферментного препарата кислой протеиназы путем культивирования продуцирующих ее плесневых грибов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и необходимые для роста минеральные соли.
Для повышения активности чистой протеиназы и сокращения .продолжительности процесса выращивания предложено в качестве источника углерода использовать глюкозу, а в качестве источника азота и стимулятора биосинтеза кислой протеиназы-пептон. В среду вводить стабилизатор кислой протеиназы в виде ионов Zn++, процесс вести при двухступенчатом температурном режиме, поддерживая на первой ступени. более низкую температуру, чем на второй.
По предлагаемому способу используют предпочтительно штаммы Aspergillus awamori № 200 и Aspergillus oryzae № 79. При этом в питательную среду следует вводить дополнительный стимулятор — казеин, температуру,первой ступени поддерживать 27 — 28 С, второй ступени — 30 — 31 С. Для Aspergillus
awamori № 200 рН среды целесообразно поддерживать на уровне 1,8 — 2,2, а для Aspergillus oryza е № 79 3,0 — 3,5.
Способ заключается в следующем.
Плесневые грибы, например Aspergillus
awamori № 200 или Aspergillus aryzae № 79, культивируют на питательной среде следующего состава (в г/л): глюкоза 50 — 60; пентон
Q,5; казеин 0,1 — 0,2; КН Р04 0,5; MgSO< 0,15;
MnSO4 0,02; ZnSO4 0,02; FeSO4 0,02.
В этой среде в качестве источника углерода используют глюкозу, источника азота и стимулятора биосинтеза кислой протеиназы— пептон, стабилизатора кислой протеиназы ионы Zn++ и дополнительного стимулятора биосинтеза кислой протеиназы — казеин.
Показатель рН среды в начале процесса культивирования микроорганизмов поддерживают на уровне 5 0 — 5,5, затем спустя 12 час для Aspergillus oryzae на уровне 3,0 — 3,5, а для Aspergillus awamori 1,8 — 2,2.
Процесс культивирования ведут при двухступенчатом температурном режиме, причем температура на первой ступени, длительность которой 20 — 24 час, 27 — 28 С, а температура на второй ступени 30 — 31 С, длительность которой 20 час. При таком температурном режиме создаются оптимальные условия для роста микроорганизмов и повышения биосинтеза кислой протеиназы, максимальная активность фермента проявляется после 36 — 40 час с начала процесса роста культуры.
При соблюдении указанных выше условий обеспечивается наибольший выход кислой протетсназы.
30 Способностью продуцировать кислую про210788
Предмет изобретения
Составитель М. И, Андреева
Техред Л. К. Малова Корректоры: Н. И. Быстрова и В. К. Крылова
Редактор В. Ф. Чулкова
Заказ 576/4 Тираж 530 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, 2 теиназу на среде с глюкозой и пептоном, молочным казеином и ионами цинка при соблюдении рН и температурного режима в указанных выше пределах обладают плесневые грибы различных видов. Так, из 270 исследуемых культур грибов рода Aspergillus и Penicillium 220 оказались продуцентами кислой протеиназы. Однако наиболее активными штаммами являются Aspergillus awamori № 200, проявляющий оптимум действия при рН 1,8 — 2,2, и Aspergillus oryzae № 79 — при рН 3,0 — 3,5.
1. Способ получения ферментного препарата кислой протеиназы путем культивирования продуцирующих ее плесневых грибов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и необходимые для роста минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью, повышения активности кислой протеиназы и сокращения продолжительности процесса выращивания, в качестве источника углерода используют глюкозу, а в качестве источника азота и стимулятора биосинтеза кислой протеиназы — пептон,,при этом в среду вводят стабилизатор кислой протеиназы в виде ионов Хп++, а процесс культивирования ведут при двухступенчатом температурном режиме, поддерживая на первой ступени процесса более низкую температуру, чем на второй.
2. Способ по .п. 1, отличающийся тем, что в питательную среду вводят до1полнитель|ный стимулятор биосинтеза кислой протеиназы— казеин.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве продуцентов кислой протеиназы используют предпочтительно штаммы
Aspergillus awamori М 200, Aspergillus oryzae № 79.
4. Способ по пп. 1 — 3, отличающийся тем, что на первой ступени процесса культивирования поддерживают температуру, 27 — 28 С, на второй 30 — ЗlоС, а рН для Aspergillus
awamori № 200 1,8 — 2,2, а для Aspergillus
oryzae № 79 — 30 — 3 5.
