Способ получения вакцины против бешенства и чумы плотоядных

 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно профилактической иммунизации собак против бешенства и чумы плотоядных. Вакцина приготовлена из авирулентного штамма Рокборн вируса чумки и авирулентного штамма Внуково-32 вируса бешенства. Вакцину выпускают в заполненных инертным газом герметически закрытых флаконах (ампулах). В отличие от всех существующих, указанная вакцина - это смесь двух культуральных вакцин: живой аттенуированной вакцины против чумы плотоядных, выращенной в первичных клетках почечной ткани зеленых мартышек или клетках перевиваемой линии почек обезьян (4647) и инактивированной антирабической вакцины, выращенной в первичной клеточной культуре клеток сирийского хомяка или в клетках 4647. Вакцина выпускается в удобной для применения форме.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к способам получения вакцин для иммунизации собак.

В настоящее время существует ряд инактивированных вакцин против бешенства собак, выпускаемых в разных странах. Наиболее иммуногенными являются культуральные вакцины фирмы "Мерье" (Франция) [1] и культуральная вакцина из штамма "Внуково-32" (ИПВЭ РАМН) [2] Известны также высококачественные культуральные живые аттенуированные вакцины против чумы плотоядных. Одной из лучших считается вакцина "Вакчум", разработанная в ИПВЭ РАМН [3] В настоящее время наблюдается тенденция перехода от одновалентных вакцин к поливалентным, так как при этом меньше травмируется животное и обеспечивается лучшая возможность соблюдать правила антисептики. Ассоциированной вакцины против бешенства и чумы плотоядных в литературе не описано.

В основу изобретения положена задача создания вакцины, вырабатывающей иммунитет у собак как к вирусу бешенства, так и к вирусу чумки (чумы плотоядных).

Задача решена предлагаемой вакциной "Дивак", представляющей собой смесь двух вакцин на стадии жидкого полуфабриката: против чумы плотоядных - 1^oC1,1 часть, против бешенства 1,9^oC2 части. Антирабическая вакцина представляет собой вакционный вирус бешенства, штамм "Внуково-32", выращенный в первичной клеточной культуре клеток сирийского хомяка или в клетках перевиваемой линии 4647 и инактивированный ультрафиолетовыми лучами (УФ-лучами). Вакцина против чумы плотоядных "Вакчум" это живой аттенуированный вирус штамм "Рокборн", аттенуированный в культуре первичных клеток почечной ткани зеленых мартышек или в клетках 4647.

Авторам удалось, впервые в вирусологической практике, ассоциировать живую и убитую вакцины. Это стало возможным благодаря тому, что инактивация антирабической вакцины осуществляется УФ-лучами и вакцина не содержит формалина или других инактиваторов, убивающих вирус второго компонента.

Предлагаемая вакцина находит широкое применение в связи с большим количеством служебных и домашних собак ценных пород. Она разрешена к применению Главветупром Министерства сельского хозяйства.

Утверждены также Технические условия ТУ-08064-19-22-95 и инструкции по изготовлению и контролю.

Способ осуществляют следующим образом.

Получение антирабической вакцины.

Адаптацию аттенуированного штамма "Внуково-32" проводят в культуре первичных клеток почки сирийского хомяка. Монослой клеток почки сирийского хомяка, выращенный при температуре 371^oC, отмывают два раза рабочим раствором Эрла и инфицируют вируссодержащей культуральной жидкостью (штамм "Внуково-32") в дозе 0,001 LD₅₀ на одну клетку. Аналогично поступают в случае с клетками 4647. Сорбция вируса проходит при 37^o1^oC в течение 1 ч. В качестве поддерживающей среды используют среду Игла, содержащую 0,2^oC0,22% ростовых протеинов. Зараженные клетки инкубируют при 32^o1^oC, через 3 сут проводят смену поддерживающей среды и еще через 3 сут собирают урожай вируса. Вируссодержащий материал сохраняют при -201^oC и после соответствующих контрольных исследований на бактериальную и микологическую стерильность производят фильтрацию вируса, затем инактивацию его ультрафиолетовыми лучами, на аппарате иррадиаторе ультрафиолетовых лучей со скоростью 20 21 об/мин, на расстоянии 18 20 см, в слое 1 1,1 мм.

Получение вакцины против чумы плотоядных "Вакчум".

Адаптацию аттенуированного штамма "Рокборн" вируса чумы плотоядных к культуре почечной ткани зеленых мартышек проводят в течение 8 10 пассажей при температуре 34 0,2^oC, доводя инкубационный период развития вируса до 4 5 дн. На основе адаптированного вируса готовят посевной вирус.

Система посевного вируса предусматривает приготовление в большом объеме вакционного вируса, отвечающего всем требованиям аттенуированного штамма, сохранение его в жидком азоте и использование по мере необходимости для изготовления вакцины.

Для производства вакцины используют культуру клеток почечной ткани зеленых мартышек или перевиваемой линии 4647.

Выращивание вакционного вируса в указанных культурах ведут при температуре 34 0,2^oC на средах с добавлением 50,2% сыворотки крупного рогатого скота. Вируссодержащую жидкость удаляют 3 5 раз, заменяя ее свежей питательной средой, причем первое удаление производят после появления цитопатологических изменений в 30 40% клеток, и повторяют эту операцию до полной дегенерации клеток. Сборы вируссодержащей жидкости объединяют и освобождают от детрита.

Получение ассоциированной вакцины против бешенства и чумы плотоядных.

Полуфабрикаты вакцины против чумы плотоядных и антирабической вакцины смешивают в соотношении 1 ^oC 1,1 часть вакцины против чумы плотоядных + 1,9 ^oC 2 части антирабической вакцины, добавляют 10%-ный раствор желатозы до конечной концентрации 1 0,1% и 40%-ный раствор сорбита до конечной концентрации 50,1% Затем разливают вакцину по (3,00,1) мл и лиофилизируют. Все этапы процесса изготовления вакцины (Дивак) проводят в стерильных условиях.

Препарат, полученный после лиофилизации, подвергают биологическим испытаниям, и при получении благоприятных результатов препарат считают вакциной, готовой к использованию.

Высокая иммуногенность и низкая реактогенность обоих компонентов вакцины, выращенных в культуре клеток, а также применяемый способ инактивации вируса бешенства ультрафиолетом, дающий возможность соединения его с живым вирусом чумы плотоядных, позволяют впервые в мире создать высокоэффективную ассоциированную вакцину этих двух вирусов вакцину нового поколения.

Эта вакцина уже сейчас применяется в ветеринарной практике (в 1992 94 гг использовано 25 000 доз вакцины) и найдет широкое применение в дальнейшем, как в России, так и в странах СНГ и дальнем зарубежье.

Вся технологическая документация и инструкция по применению утверждены соответствующими инстанциями. Серийное производство вакцины осуществляется на экспериментально-производственном предприятии Института полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН.

Формула изобретения

Способ получения вакцины против бешенства и чумы плотоядных, отличающийся тем, что антирабическую вакцину "Внуково 91", инактивированную УФ-лучами, и вакцину против чумы плотоядных "Вакчум" смешивают в соотношении 1:1,9 - 1,1: 2,0, после чего добавляют раствор желатозы до конечной концентрации 100,1% и 40%-ный раствор сорбита до конечной концентрации 50,1% и лиофилизируют.