Вакцина против вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок

 

Использование - биотехнология. Сущность изобретения: вакцина содержит культуральную суспензию штамма "Родники"1631 / вируса энтерита норок с биологической активностью 10^4,5-5,5ИД₅₀/см³, осажденный на гидрите окиси алюминия ботулинической анатоксин типа С N 59, смесь инактивированных культур штаммов Псевдомоноз аеругиноза N 40 381-П-06, N 63 1677-08 и N77 "Дн"-05 с концентрацией микробных клеток 10-13 млрд/см³ и раствор Хенкса. Для инактивации вируса ботулинической культуры и возбудителей псевдомоноза использован формалин. Способ профилактики вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок предусматривает внутримышечное введение эффективных доз ассоциированной вакцины щенкам в возрасте 50 - 55 сут и взрослым зверям в объеме 0,9-1,1 см³. Срок хранения вакцины при 2 - 6°С в течение 18 мес. Длительность иммунитета сохраняется в течение 9 - 12 мес. 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности касается ассоциированной вакцины, применяемой для специфической профилактики вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок.

Вирусный энтерит острое инфекционное заболевание норок, характеризующееся катарально-геморрагическим воспалением слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, поражениями мезентериальных лимфатических узлов, селезенки, тимуса, костного мозга, поражает зверей всех возрастов, но чаще всего молодняк, гибель среди которых может достигнуть более 50% Ботулизм острая токсикоинфекция норок, чаще всего вызываемая Клостридиум ботулинум типа С, приводит к 100%-ной гибели невакцинированных животных, что наносит большой экономический ущерб. Основная мера борьбы это специфическая профилактика с использованием вакцинных препаратов.

Псевдомоноз широко распространенное заболевание сельскохозяйственных животных, в том числе и пушных зверей, вызываемое синегнойной палочкой. Наиболее злокачественно протекает заболевание у норок. Проявляется энзоотически и сопровождается геморрагическим воспалением и отеком органов дыхания. Гибель норок от псевдомоноза в очаге инфекции достигает 50% и более. Возбудитель псевдомоноза обладает серотиповой вариабельностью. Превалирующими штаммами синегнойной палочки, выделенными от норок, являются 05, 06 и 98 серологические варианты по классификации Хабс.

Известны биопрепараты, используемые для профилактики каждой из этих инфекционных болезней норок. Так для профилактики вирусного энтерита норок применяют вакцинные препараты на основе штамма Virus enteritis lutreolarum "Родники-1631" (авт. св. СССР N 955576 и N 1221787). Животных прививают с 60-дневного возраста внутримышечно в объеме 1 см³, в неблагополучных хозяйствах препарат применяют дважды с интервалом 14-21 день.

Для профилактики ботулизма норок используют анатоксин-вакцину из штамма Cl.botulinerm типа С, которую вводят внутримышечно однократно в дозе 1,0-2,5 см³ щенкам в возрасте 40-45 дней (см.Бузинов И.А. Новикова Л.С. Кролиководство и звероводство, 1958, N 3, с.35-36).

Для профилактики псевдомоноза пушных зверей используют вакционные препараты на основе штаммов Ps. aeruginosa (авт.св. СССР N 575889 и N 1066074). Вакцины применяют зверям внутримышечно в объеме 1,0-3,0 см³ в возрасте 90 дней и старше.

Использование моновакцин против отдельных инфекционных болезней не обеспечивает высокого профилактического эффекта в кратчайшие сроки, так как все чаще встречается смешанное течение инфекционных заболеваний. Вирусный энтерит вследствие нарушения защитного барьера слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта часто осложняется псевдомонозом и ботулизмом. Во время энзоотии вирусного энтерита заболевание и гибель норок от ботулизма и псевдомоноза резко возрастает и достигает до 90 и более процентов. Кроме этого, применение моновакцин растягивает сроки иммунизации зверей от 40 до 90 дней и формирование иммунитета в сжатые сроки.

Для успешного решения задач по дальнейшему развитию клеточного пушного звероводства, снижения и ликвидации потерь от инфекционных заболеваний норок очень важное значение имеет разработка и применение ассоциированных вакцин, позволяющих проводить профилактические мероприятия одновременно против основных инфекционных заболеваний животных.

Из данных каталогов фирм "ASL", "Uneited" известна ассоциированная вакцина против вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок. Однако состав, способ изготовления и применения этого препарата не известны.

Целью изобретения является повышение иммуногенности вакцины и ее защитного эффекта.

Цель достигается тем, что используемая ассоциированная вакцина против вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок в качестве антигена возбудителя вирусного энтерита норок содержит культуральную суспензию инактивированного штамма virus enteritis lutreo larum "Родники-1631" с биологической активностью 10^4,5-5,5 ИД_50/см³, в качестве антигена ботулинического токсина типа С осажденный на гидрате окиси алюминия анатоксин штамма Cl. botulinum типа С N 59, в качестве антигенов возбудителя псевдомоноза норок смешанную суспензию инактивированных культур Ps aerusinosc N 40, N 63 и N 77, взятых в равном объеме с концентрацией 10-13 млрд микробных клеток в 1 см³, в качестве вспомогательного вещества раствор Хенкса при следующем соотношении компонентов в от/об. Культуральная суспензия инактивированного штам- ма virus enteritcs lutrеo la- rum "Родники-1631" с био- логической активностью 10^4,5-5,5 ИД_50/см³ 33,0-38,0 Осажденный на гидрате окиси алюминия ботули- нический анатоксин Cl.botulinum типа С N 59 25,0-28,0 Смесь инактивирован- ных культур штаммов Ps. aeruginosa N 40 381-П-06, N 63 1677-08 и N 77 "Дн"-05 с кон- центрацией микроб- ных клеток 10-13 млрд/см³ 21,0-27,0 Раствор Хенкса Остальное Ассоциированную вакцину против вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза вводят норкам подкожно или внутримышечно в возрасте 20-55 дней в объеме 0,9-1,1 см³.

Для изготовления вакцины используют следующие штаммы: штамм virus enteritis lutreo larum "Родники-1631" (см. а.с. СССР N 871321); штамм Cl. botulinum N 59 типа С (см.Бузинов И.А. Новикова Л.С. "Специфическая профилактика ботулизма норок", ж. "Кролиководство и звероводство", 1958, N 3, с.35-36); штаммы Ps, aereginosa N 40 381-П-06 (см.а.с. СССР N 1092946), N 63 1677-08 (см. а. с. СССР N 1092948) и N 77 "Дн"-05 (см.а.с. ССР N 1092945). Все штаммы депонированы в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов.

П р и м е р 1. Ассоциированную вакцину сначала готовят путем раздельного получения каждого антигена.

Вирусом энтерита норок штамм "Родники-1631" заражают монослой первично-трипсинизированной культуры клетки почки котенка, добавляют поддерживающую среду и выращивают при (37 0,5)^оС. Для полного распада клеток и выхода вируса из клеток вируссодержащий материал замораживают при минус 20-40^оС и размораживают при комнатной температуре. Полученный вирусный материал с биологической активностью 10^4,5-5,5 ИД_50/см³(гемагглютинирующая активность 1: 128-1: 512) инактируют добавлением формалина в количестве 0,15-0,20% от/об. (содержание активного формальдегида 36-38%).

Бактериальные культуры штаммов N 40, N 63 и N 77 выращивают раздельно в мясопептонном бульоне или бульоне Хоттингера при температуре (37 0,5)^оС до накопления в см³ 18-20 млрд микробных клеток. После выращивания концентрацию микробных клеток каждой культуры снижают до 10-13 млрд/см³. Культуры Ps.ouruginosa объединяют в равных объемах и смесь инактивируют путем введения формалина из расчета 0,3-0,4% от/об.

Ботулинический анатоксин готовят путем выращивания культуры Cl.botulinum N 59 на ростовой питательной среде Хоттингера с добавлением жидкого пептона Мартена и печеночного экстракта. После фильтрации культуральной жидкости определяют активность токсина и при активности равной 400-500 тысяч ЛД для белых мышей вносят формалин из расчета 0,55% от/об. После проверки на стерильность и полноту инактивации к формалинизированной культуре Cl. botulinum добавляют 3% -еый раствор гидрата окиси алюминия в количестве 12-15% от/об. при постоянном перемешивании и охлаждают до комнатной температуры. После полного осаждения ботулинического анатоксина отделяют надосадочную жидкость в количестве 72-75% от/об.

Полученные компоненты ассоциированной вакцины смешивают при работающей мешалке с раствором Хенкса в следующем соотношении в от/об: Готовая вакцина представляет собой гомогенную суспензию желтовато-розового, иногда серовато-малинового цвета. При отстаивании на дно флакона выпадает рыхлый осадок, легко разбивающийся при встряхивании в гомогенную взвесь.

П р и м е р 2. Проверяют устойчивость норок к контрольному заражению. Берут ассоциированную вакцину против вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок, содержащую, от/об: Культуральная суспен- зия инактивированно- го штамма virus enteri- tis lutreo larum "Родни- ки-1631" с биологической активностью 10^5,0 ИД_50/см³ 35,5 Осажденный на гидрате окиси алюминия ботулини- ческий анатоксин Cl.botuli- num N 59 26,5 Смесь инактивированных культур штаммов Ps. aeru- ginosa N 40 381-П-06, N 63 1677-08 и N 77 "Дн"-05 с концентраци- ей микробных клеток 11,5 млрд/см³ 24 Раствор Хенкса Осталь- ное и вводят щенкам в возрасте 50-55 дней внутримышечно в объеме 0,9-1,1 см³. Через 21 день после иммунизации животных заражают вируслентными штаммами соответствующего возбудителя.

Моновакцины против каждого возбудителя применяют аналогично. Контрольных животных не вакцинируют.

Результаты контрольного заражения норок представлены в табл.1.

Испытания показывают, что ассоциированная вакцина обеспечивает норкам надежную защиту от заражения.

П р и м е р 3. Изучают безвредность вакцины против вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок (состав по примеру 2). Вакцину испытывают на белых мышах, морских свинках, кроликах, хорьках и норках. Параллельно для сравнения испытывают соответствующие моновакцины.

Результаты изучения безвредности вакцин приведены в табл.2.

Из табл.2 видно, что при введении многократных доз ассоциированной вакцины все животные в течение 10-дневного наблюдения не проявили признаков угнетания и остались живыми.

П р и м е р 4. Изучают иммуногенную активность ассоциированной вакцины и моновакцины на разного срока хранения (3, 6, 9, 12, 15, 18 и 24 мес) при 2-4^оС на норках после их вакцинации и заражения на 21-е сутки соответствующими вирулентными штаммами. Контрольных животных не вакцинируют.

Результаты изучения длительности хранения вакцин на их иммуногенную активность приведены в табл.3.

Данные табл. 3 показывают, что ассоциированная вакцина против вирусного энтреита, ботулизма и псевдомоноза норок дольше сохраняет свою иммуногенную активность (18 мес), чем моновакцины (12-15 мес).

П р и м е р 5. Изучают длительность иммунитета, создаваемого ассоциированной вакциной и моновакцинами у норок. Иммунизируют норок вакцинами в возрасте 50-55 дней и заражают их соответствующими вирулентными штаммами через 3, 6, 9 и 12 месяцев.

Результаты изучения длительности иммунитета у животных приведены в табл. 4.

На основании данных табл. 4 можно заключить, что ассоциированная вакцина не дает прорыва иммунитета у норок против вирусного энтерита и ботулизма на протяжении 12 мес, а против псевдомоноза 6-9 мес в зависимости от вида возбудителя.

Моновакцины оказывают менее эффективное влияние.

Применение ассоциированной вакцины против вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок позволяет своевременно в сжатые сроки проводить специфическую профилактику этих инфекций, увеличить производительность труда зооветеринарных специалистов и обслуживающего персонала, сократить трудовые и материальные затраты в 2-3 раза.

Формула изобретения

ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА, БОТУЛИЗМА И ПСЕВДОМОНОЗА НОРОК, содержащая антигены энтерита, ботулизма, псевдомоноза и вспомогательные вещества, отличающаяся тем, что из антигенов энтерита вакцина содержит вирусную культуральную суспензию инактивированного штамма Virus enteritis lutreo larum "Родники-1631" с биологической активностью 10^4,5-5,5UD_50/см3 из ботулинического антигена-ботулинический анатоксин типа С Clostriclium botulinum N 59, осажденный на гидрате окиси алюминия, из антигена псевдомоноза суспензию инактивированных культур штаммов Pseudomonas aeruginosa 381-П-06 N 40, 1677-08 N 63 и "Дн"-05 N 77 с концентрацией микробных клеток 10 13 млрд/см³, а в качестве вспомогательного вещества раствор Хенкса при следующем соотношении компонентов, об.

Вирусная культуральная суспензия инактивированного штамма Virus enteritis lutreo larum "Родники-1631" с биологической активностью 10^4,5-5,5UD_50/см3 33 38 Ботулинический анатоксин типа С Clostridium botulinum N 59, осажденный на гидрате окиси алюминия 25 28 Суспензия инактивированных культур штаммов Pseudomonas aeruginosa 381-П-06 N 40, 1677-08 N 63 и "Дн"-05 N 77 с концентрацией микробных клеток 10 13 млрд/см³ 21 27
Раствор Хенкса Остальное

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3