Способ прогнозирования течения эпидермоидного рака легкого

 

Использование: медицина, способы прогнозирования течения эпидермоидного рака легкого. Сущность изобретения: во время хирургического удаления опухоли берут опухолевую ткань и радиохимически определяют в ней активность фермента - фосфодиэстеразы циклического аденозин-3¹:5¹-монофосфата с высокой константой Михаэлиса, по полученным результатам вычисляют показатель прогнозирования и при значении этого показателя менее 1 прогнозируют благоприятное течение заболевания, а при значении более 1 - неблагоприятное течение заболевания.

Изобретение относится к медицине и касается прогнозирования агрессивности клинического течения эпидермоидного рака легкого.

Известен способ прогнозирования агрессивности клинического течения эпидермоидного рака легкого путем определения раково-эмбрионального антигена в плазме крови. (Вопросы онкологии, 1983, N 4, с.57-59). Недостатком этого метода является невысокая точность прогноза, особенно при оценке одногодичной выживаемости больных, т. е. при определении случаев заболевания с наиболее агрессивным клиническим течением.

Задача изобретения повысить точность прогнозирования агрессивности клинического течения эпидермоидного рака легкого.

Поставленная задача достигается путем определения активности фосфодиэстеразы циклического аденозин 3':5' монофосфата с высокой константой Михаэлиса в опухолевой ткани.

Способ осуществляется следующим образом. Опухолевую ткань легкого, взятую во время операции, помещают в жидкий азот и хранят до проведения исследования. Навеску ткани растирают в порошок в жидком азоте, гомогенизируют в буфере следующего состава: 40 мМ трис-HCl, 5 мМ MgCl₂, 1 мМ дитиотреитол (рН 8,0). На 100 мг ткани берется 2 мл буфера. Активность фосфодиэстеразы циклического аденозин-3':5'-монофосфата с высокой константой Михаэлиса определяют по (2) в два этапа. Буфер для инкубации содержит 0,01%-ный бычий сыворотки альбумин в дополнение к тем компонентам, которые содержат буфер для гомогенизации. Буфер с ферментсодержащим гомогенатом (290 и 10 мкл соответственно) предынкубируют 5 мин при 30^oC в силиконированных пробирках. Реакцию начинают добавлением циклического /³H/-аденозин-3': 5'-монофосфата (конечная концентрация 100 мкМ, активность 10⁶ распадов в минуту), растворенного в 100 мкл буфера. Инкубируют 10 мин, реакцию прекращают погружением пробирок в кипящую водяную баню на 2 мин. Затем пробирки ставят в лед, добавляют 100 мкл змеиного яда (1 мг/мл в 0,01%-ном растворе бычьего сывороточного альбумина) в качестве источника 5-нуклеотидазы и в дальнейшем инкубируют 20 мин при 30^oC. Пробирки помещают в лед и добавляют 1 мл этанольной суспензии ионообменной смолы Дауэкс 2х10 (200-400 меш), фторированная форма (100 мл этанола на 25 г смолы). Перемешивают 10 мин, отделяют смолу центрифугированием, 0,5 мл супернатанта берут во флаконы с 10 мл толуольного сцинтиллятора. На общий счет 100 мкл раствора циклического /³H/-аденозин-3':5'-монофосфата и 0,4 мл этанола. Активность фермента рассчитывают по формуле: пмоль цАМФ мг^-1 белка мин^-1 где 0 количество распадов в 1 мин в опыте; K количество распадов в 1 мин в контроле; T/3 общий счет (из общего объема в 1,5 и берется 0,5); Р содержание белка в пробе, мг; м время инкубации, мин; H количество циклического аденозин-3':5'-монофосфата в пробе (40 000 пмоль).

Прогноз агрессивности клинического течения эпидермоидного рака легкого осуществляется по показателю A/500, где А активность фермента в опухолевой ткани. При А/5001 дается заключение об относительно высокой агрессивности клинического течения (больные живут менее 1 года), а при A/500<1 об относительно невысокой агрессивности клинического течения (продолжительность жизни больных более 1 года).

Примеры осуществления способа Пример 1.

Больной, 56 лет. Клинический диагноз: рак левого верхнедолевого бронха с переходом на главный бронх. Смешанный рост, прорастание в перикард, ателектаз верхней доли, стадия III, ТЗN2МО. Сопутствующие заболевания: атеросклеротический коронарнокардиосклероз. Из анемнеза: курил в течение 40 лет по 10 сигарет в день. Лечение: 11-15.08.86 г. лучевая терапия в режиме крупного фракционирования, всего 5 фракций по 4 Гр, суммарная доза 20 Гр, 18.08.86 комбинированная пульмонэктомия слева. Гистологическое заключение N 29857-75 плоскоклеточный рак со слабо выраженным ороговением, врастание в перикард. Послетерапевтические изменения I-II степени. Анализ крови до лечения (07.08.86):ЭЦ 3,9х10¹²/л, гемоглобин 128 г/л, ЛЦ 9,2х10⁹/л, СОЭ 45 мм/ч. После лечения (05.09.86): ЭЦ 4,3х10¹²/л, гемоглобин 130 г/л, ЛЦ 6,5х10⁹/л, СОЭ 55 мм/ч. Уровень раково-эмбрионального антигена 7,6 мкг/л. Показатель A/500 0,549. Продолжительность жизни больного более 1 года.

Комментарий: в данном случае большая распространенность опухолевого процесса, невысокая выраженность послетерапевтических изменений по данным гистологического исследования, высокая СОЭ является неблагоприятными признаками, однако показатель A/500 < 1 и больной прожил более 1 года. Уровень РЭА менее 10 мкг/л, что ретроспективно подтверждает прогноз.

Пример 2. Больной, 51 год. Клинический диагноз: рак правого верхнедолевого бронха с нарушением вентиляции верхней доли, стадия Ia, Т2NОМО. Сопутствующих заболеваний не выявлено. Из анамнеза: курит в течение 25 лет по 6-7 сигарет в день. Лечение: 27-31.01.86 г. лучевая терапия в режиме крупного фракционирования, всего 5 фракций по 4 Гр, суммарная доза 20 Гр. 03.02.86 верхняя лобэктомия справа с клиновидной резекцией бронха. Гистологическое заключение N 4412-27: плоскоклеточный неороговевающий рак, перибронхиальный рост. Послетерапевтические изменения II степени. Анализ крови до лечения (22.01.86): ЭЦ 4,9х10¹²/л, гемоглобин 149 г/л, ЛЦ 9,6х10⁹/л, СОЭ 12 мм/ч. После лечения (17.02.86): ЭЦ 4,6х10¹²/л, гемоглобин 115 г/л, ЛЦ 6,9х10⁹/л, СОЭ 18 мм/ч, РЭА 14,0 мкг/л. Показатель A/500 0,310. Продолжительность жизни больного более 1 года.

Комментарий: в данном случае низкая степень дифференцировки опухолевых клеток и уровень РЭА 10 мкг/л является неблагоприятными факторами, однако показатель A/500 < 1 и больной прожил более 1 года.

Пример 3.

Больной, 45 лет. Клинический диагноз: рак правого верхнедолевого бронха с атеросклерозом и нагноением в нем, стадия I, Т2NOМО. Сопутствующие заболевания: сочетанный митрально-аортальный порок (стеноз устья аорты, недостаточность митрального клапана). Из анемнеза: курит в течение 25 лет по 20 сигарет в день. Лечение: 16-20.06.86 г. лучевая терапия в режиме крупного фракционирования дозы, всего 5 фракций по 4 Гр, суммарно 20 Гр. 24.06.86 - пульмонэктомия справа. Гистологическое заключение N 23780-91: плоскоклеточный рак со слабо выраженным ороговением (смешанная форма роста). Послетерапевтические изменения I степени. Анализ крови лечения (16.06.86): ЭЦ 4,9х10¹²/л, гемоглобин 107 г/л, ЛЦ 5,9х10⁹/л, СОЭ 23 мм/ч. После лечения (22.07.86): ЭЦ 4,3х10¹²/л, гемоглобин 129 г/л, ЛЦ 5,9х10⁹/л, СОЭ 48 мм/ч, РЭА 77,7 мкг/л. Показатель А/500 0,191. Продолжительность жизни больного после лечения более 1 года.

Комментарий: в данном случае невысокая выраженность послетерапевтических изменений, высокий уровень РЭА (10 мкг/л), повышенная СОЭ, значительная интенсивность курения в анамнезе являются неблагоприятными признаками, однако показатель А/500 1 и больной прожил более 1 года.

Пример 4. Больной, 60 лет. Клинический диагноз: рак левого нижнедолевого бронха, II стадия, Т2NIMO. Сопутствующих заболеваний не выявлено. Из анамнеза: курит в течение 50 лет по 20 сигарет в день. Лечение: 14-18.07.86 г. лучевая терапия, 5 фракций по 4 Гр, суммарно 20 Гр, 22.07.86 пульмонэктомия слева. Гистологическое заключение N 27174-83: плоскоклеточный неороговевающий рак узловатой формы. Послетерапевтические изменения II степени. Анализ крови до лечения (09.07.86): ЭЦ 4,2х10¹²/л, гемоглобин 124 г/л, ЛЦ 6,8х10⁹/л, СОЭ 30 мм/ч. После лечения (30.09.86): ЭЦ 4,1х10¹²/л, гемоглобин 162 г/л, ЛЦ 6,6х10⁹/л, СОЭ 37 мм/ч, РЭА 65,4 мкг/л. Показатель A/500 0,119. Продолжительность жизни больного после лечения более 1 года.

Комментарий: в данном случае низкая степень дифференцировки опухоли, высокий уровень РЭА и значительная интенсивность курения в анемнезе являются неблагоприятными признаками, однако показатель A/500 1 и больной прожил более 1 года.

Предлагаемый способ прогнозирования применен у 22-х больных с верифицированным диагнозом эпидермоидного рака легкого. Точность метода составила 64% В то же время точность по способу-прототипу (прогностически неблагоприятный уровень раково-эмбрионального антигена более 10 мкг/л) при анализе одногодичной выживаемости составила 49% В подтверждение отличительного признака "при A/500>1" приводится клинический пример осуществления предлагаемого нами способа.

Больной Е. А. Ф. 49 лет. Клинический диагноз: рак левого нижнедолевого бронха (Б6,Б10), ателектаз S6,S10, стадия Ia, Т2NОМО. Сопутствующих заболеваний нет. Из анемнеза: курит 25 лет, Лечение: 24-28.03.86г. - предоперационная лучевая терапия в режиме крупного фракционирования дозы, 5 фракций по 4 Гр до суммарной очаговой дозы 20 Гр. 31.03.86 пульмонэктомия слева. Послеоперационный период протекал без осложнений. Гистологическое заключение N 12274-85/86: плоскоклеточный неороговевающий рак бронха (перибронхиальная форма роста), Т2NОМО. Анализ крови до лечения (20.03.86): ЭЦ 4х10¹²/л, гемоглобин 123 г/л, ЛЦ 10,8х10⁹/л, СОЭ 44 мм/ч, уровень раково-эмбрионального антигена (РЭА) в плазме крови 76,4 мкг/л. Анализ крови после лечения (21.04.86): ЭЦ 4,2х10¹²/л, гемоглобин 130 г/л, ЛЦ 4,7х10⁹/л, СОЭ 30 мм/ч, уровень РЭА в плазме крови 22,5 мкг/л. Показатель A/500 1,611. Продолжительность жизни больного менее 1 года.

Комментарий: авторы способа-прототипа (Добровольский Н.М. с соавт. Вопр. онкологии, 1983, N 4, с.57-59) предлагают следующие критерии, по которым прогнозируется продолжительность жизни больных раком легкого после лечения:
прогностически неблагоприятным в отношении продолжительности жизни больных является уровень РЭА более 10 мкг/л как до, так и после лечения;
cнижение уровня РЭА в результате лечения не менее, чем в 10 раз, улучшает прогноз, несмотря на высокий исходный уровень.

Уровень РЭА в плазме крови больного Е.А.Ф. до и после лечения более 10 мкг/л, что является неблагоприятным прогностическим показателем. После лечения уровень РЭА снизился менее чем в 10 раз, что по второму критерию способа-прототипа также неблагоприятный прогностический показатель. Предлагаемый нами показатель A/500>1 неблагоприятный в прогностическом отношении и больной прожил менее 1 года.

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения эпидермоидного рака легкого путем исследования биологического материала больного, отличающийся тем, что в опухолевой ткани определяют активность фосфодиэстеразы циклического аденозин 3¹-5¹ монофосфата, по результатам рассчитывают показатель прогноза и при значении этого показателя менее 1 прогнозируют благоприятное течение, а при значении более 1 неблагоприятное.