Питательная среда для культивирования клещей dermatophagoides farinae при получении аллергена

 

Использование: питательная среда, культивирование клещей, получение аллергена. Сущность изобретения: среда содержит в качестве основы смесь аминокислот гидролизатную из крови животных, фенилаланин, аспарагин, агар, сахарозу, крахмал, смесь солей, триптофан, дополнительно содержит дрожжевой экстракт и сухие пивные дрожжи. Среда обеспечивает достаточно высокий выход биомассы клещей Dermatophagoides tarinac для изготовления аллергена, обладающего специфической активностью. 1 ил.

Изобретение относится к медицине, преимущественно к медицинской аллергологии, и может быть использовано при получении биомассы клещей Dermatophagoides farinae для изготовления аллергенов, используемых для диагностики и лечения аллергических заболеваний.

Известна среда для культивирования клещей D. farinae с целью получения их биомассы, используемой для приготовления аллергенов. Она представляет собой бытовую пыль.

Однако несмотря на получение 13-15 тыс. особей на 1 г среды, она является нестандартной, что осложняет получение стандартных аллергенов. Использование такой среды трудоемко и нерентабельно в производстве.

Известны искусственные питательные среды для получения клещей D. farinae [1, 2] содержащие полный набор аминокислот, витаминов, солей, однако при этом они характеризуются низким выходом биомассы. Кроме того, такие среды для нас недоступны и не воспроизводимы из-за отсутствия дефицитных импортных реактивов.

Цель изобретения создать доступную питательную среду, обеспечивающую достаточно высокий выход биомассы.

Цель достигается тем, что в качестве основы среды использована смесь аминокислот гидролизатная (САГ) по ТУ 10.16 УССР 40-88, среда содержит агар микробиологический, крахмал, сахарозу, солевую смесь, фенилаланин, триптофан, аспарагин, отличается тем, что дополнительно содержит сухие пивные дрожжи и дрожжевой экстракт при следующем соотношении компонентов, г: САГ 59,0 Фенилаланин 1,16 Триптофан 0,175 Аспарагин 0,6 Крахмал 5,0 Сахароза 15,5 Агар 15,0 Дрожжевой экстракт 0,5 Солевая смесь 3,0
Сухие пивные дрожжи 10,0
Способ приготовления питательной среды включает несколько этапов. Готовят солевую смесь путем растирания в ступке следующих компонентов:
NaCl 50,12 г5,0
CaCO₃ 58,58 г5,0
Fe(C₆H₅O₇)6H₂O 1,246 г0,08
CuSO₄ 0,312 г0,01
MgSO₄ 19,96 г1,0
KJ 0,001 г0,0005
MnSO₄ 0,242 г0,01 Следующим этапом приготовления среды является смешивание в фарфоровой ступке компонентов среды при следующем соотношении, г:
САГ 59,0
Агар 15,0
Сахароза 15,5
Дрожжевой экстракт 0,5
Крахмал 5,0
Солевая смесь 3,0
Фенилаланин 1,2
Триптофан 0,175
Аспарагин 0,6
Сухие пивные дрожжи 10,0
Пример использования новой питательной среды. Среда помещается в контейнеры для культивирования клещей. Культивирование клещей проводится в термостате при температуре 25^оС и 75% влажности в течение 10 недель, при этом исходная численность популяций составляла 150 особей на 1 г, контроль чистоты культуры проводили по определительным таблицам, используя при этом микропрепараты. В качестве сред использовали: Вариант I домашняя пыль, собранная с постелей больных с аллергическими заболеваниями. Вариант II (N) 11) аминокислотно-пептидный комплекс, полученный путем ферментативного гидролиза крови крупного рогатого скота, 5 мг дрожжевого экстракта, сухие пивные дрожжи, агар, сахароза, солевая смесь, крахмал. Вариант III (N 16) сухая смесь аминокислот из крови животных, 5 мг дрожжевого экстракта, сухие пивные дрожжи, агар, сахароза, солевая смесь, крахмал Вариант IV (N 17) сухая смесь аминокислот из крови животных, 50 мг дрожжевого экстракта, сухие пивные дрожжи, агар, сахароза, солевая смесь, крахмал.

На чертеже представлена средняя численность клещей на искусственных средах и домашней пыли. В качестве патентуемого выбран вариант III, средняя численность клещей, на котором приближается к таковой на домашней пыли, при этом разница статистически не значима.

Аллергены, полученные при культивировании клещей на предложенной питательной среде, обладали специфической активностью, что подтверждено методом ингибиции RAST.

Сравнительная характеристика аллергенов, приготовленных с использованием искусственных питательных сред и домашней пыли, представлена в таблице.

Таким образом, предложенная питательная среда позволяет получить достаточно высокий выход биомассы и обеспечить стандартность среды для культивирования клещей D. farinae, что, в свою очередь, обеспечивает стандартность сырья для приготовления стандартных специфически активных клещевых аллергенов.

Формула изобретения

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕЩЕЙ DERMATOPHAGOIDES FARINAE ПРИ ПОЛУЧЕНИИ АЛЛЕРГЕНА, содержащая питательную основу, агар, крахмал, сахарозу, смесь солей, фенилаланин, триптофан, аспарагин, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы она содержит смесь аминокислот гидролизатную из крови животных и дополнительно содержит сухие пивные дрожжи и дрожжевой экстракт при следующем соотношении компонентов, г):
Смесь аминокислот гидролизатная из крови животных - 58,0 - 60,0
Дрожжевой экстракт - 0,4 - 0,6
Фенилаланин - 1,1 - 1,3
Триптофан - 0,105-0,20
Аспарагин - 0,55 - 0,65
Крахмал - 4,5 - 5,5
Сахароза - 15,0 - 16,0
Агар - 14,0 - 16,0
Смесь солей - 2,5 - 3,5
Сухие пивные дрожжи - 9,0 - 11,0

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2