Способ определения иода-125 в меченых белках

 

Изобретение относится к способам определения йода-125 в меченых белках и позволяет повысить селективность осаждения йода-125, ковалентно связанного с белком. Способ заключается в том, что исходный раствор при перемешивании последовательно добавляют 1,0 М водные растворы хлорида кальция и фторида щелочного металла. Полученный раствор центрифугируют в течение 2 - 3 мин при 7000 об/мин, жидкость деконтируют, осадок радиометрируют и вычисляют процент меченого белка. Способ позволяет исключить осаждение йода-125, который ковалентно не связан с белком с 54,45 до 6,53%. 5 табл.

Изобретение относится к области радиохимии, конкретно к способу определения йода-125 в растворах препаратов радиоактивномеченых белков.

Количественное определение изотопа в меченом белке необходимо для правильной оценки степени включения метки (выхода реакции мечения) и расчета удельной радиоактивности, а также для контроля за эффективностью очистки меченого белка от непрореагировавших радиоактивномеченых агентов.

Целью изобретения является повышение селективности осаждения йода-125, ковалентно связанного с белком.

В соответствии с поставленной целью заявляемый способ определения йода-125 в меченых белках заключается в последовательной обработке предварительно радиометрированного раствора [¹²⁵I]-меченого белка водными растворами хлористого кальция и фторида щелочного металла, центрифугировании смеси, отделении и радиометрировании осадка, вычислении процента осаждения по формуле: % осаждения = 100% П р и м е р 1. Проведение анализа. В пробирку, содержащую 1,0 мл 50 мМ трис-HCl буфера (рН 7,4) с 0,2 М NaCl добавляют 2-20 мкл раствора радиоактивномеченого препарата белка. Раствор радиометрируют и далее при перемешивании последовательно добавляют 1,0 М водные растворы CaCl₂ и NaF, соответственно, 100 и 200 мкл. Полученный раствор цетрифугируют в течение 2-3 мин при 7000 об/мин. Надосадочную жидкость декантируют, а осадок радиометрируют. Вычисление процента осаждения меченого белка проводят по формуле: % осаждения = 100% В табл. 1 приведены сравнительные данные по осаждению иодида-125 радиоактивномеченого агента, используемого в реакциях прямого окислительного радиоиодирования белков.

В табл. 2 приведены сравнительные данные по осаждению реагента Болтона-Хантера (N-гидроксисукцинимидный эфир-3(4-гидроксифенил) пропионовой кислоты, меченый йодом-125) - радиоактивномеченого агента, используемого в реакциях опосредованного радиойодирования белков.

В табл. 3 даны сравнительные данные по осаждению аликвот реакционных смесей, содержащих белки, меченные различными способами прямого окислительного радиойодирования.

В табл. 4 даны сравнительные данные по осаждению аликвот реакционных смесей, содержащих белки, меченные реагентом Болтона-Хантера.

В табл.5 даны сравнительные данные по осаждению раствора препаратов радиоактивномеченых белков, полученных из различных реакционных смесей путем выделения и очистки методом гельхроматографии.

Приведенные в таблицах данные свидетельствуют, что осаждение радиоактивномеченого белка при помощи CaCl₂/NaF растворов является точным физико-химическим индикатором качества меченого белка и позволяет селективно удалять из растворов препаратов радиойодированный белок. Продолжительность анализа составляет 3-5 мин, что в 3-6 раз быстрее по сравнению с осаждением 10% ТХУ. Заявляемый способ универсален и может быть использован для анализа растворов [¹²⁵I]-меченых белков, полученных как прямым окислительным, так и опосредованным радиойодированием. Отсутствие БСА (белок раствора сывороточного альбумина) в анализируемой пробе повышает точность определения осаждения меченого белка. Как видно из данных табл.1 и 2, предлагаемая система осаждения характеризуется низким неспецифическим связыванием радиоактивномеченых агентов по сравнению с известным способом. Так для Na [¹²⁵I] оно составляет 1,3%, в то время как в известном более 10%. В случае реагента Болтона-Xантера неспецифическое осаждение для ТХУ составляет 14,6-54,45% , тогда как в заявляемом способе 4-6%. Преимуществом заявляемого способа является и то, что CaCl₂/NaF - система осаждения эффективна и для анализа реакционных смесей без стадии ингибирования реакций мечения.

Поэтому способ может найти применение и для контроля за временным ходом реакции мечения белков с целью оптимизации условий проведения реакции радиойодирования. Использование мягких условий осаждения, обеспечиваемых применением CaCl₂/NaF-системы, не приводит к деструкции меченого белка, что также повышает точность анализа. Способ приемлем и для контроля качества очищенных препаратов радиойодирования белков.

Предлагаемый способ может найти широкое применение в производстве при получении радиоактивномеченых белков, технология приготовления которых требует рутинного анализа реакционных смесей с целью определения выхода реакции и удельной радиоактивности продукта, а также контроля качества очищенного препарата меченого белка.

Формула изобретения

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИОДА-125 В МЕЧЕНЫХ БЕЛКАХ, включающий их осаждение, отделение осадка, радиометрирование и расчет, отличающийся тем, что, с целью повышения селективности осаждения иода-125, ковалентно связанного с белком, осаждение осуществляют последовательно растворами хлорида кальция и фторида щелочного металла.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3