Способ определения активности системы пероксидаза- эндогенная перекись водорода в крови на мазках

 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Целью является более полное выявление активности за счет лучшей сохранности гранулоцитов. Цель достигается тем, что фиксацию мазков в спирт-формалине осуществляют в течение 15 - 20 мин. При этом среда для инкубации дополнительно содержит трис-буфер и 0,1 н. соляную кислоту, что позволяет выявить систему пероксидаза-эндогенная перекись водорода в эозинофилах крови. Способ избирательно выявляет активность в этих клетках.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам анализа крови, и может быть использовано в лабораторной диагностике.

Целью изобретения является более полное выявление активности и возможности определения активности в гранулоцитах.

Способ осуществляют следующим образом. Мазки крови сушат, затем фиксируют в растворе спирта и формалина 9:1, инкубируют в среде, содержащей субстрат. Окрашивают ядерным красителем и исследуют под микроскопом. При этом фиксацию в спирт-формалине проводят в течение 15-20 мин, а инкубирование осуществляют в среде, содержащей 3 мг 3,3-диаминобензидина гидрохлорида 0,25-0,3 на 10 мл 0,05 М трис-буфера и 0,1 н.раствора соляной кислоты.

П р и м е р 1. Мазки крови высушивают на воздухе. Затем фиксируют в спирт - формалине (9: 1) в течение 15 мин. Промывают в дистиллированной воде. Инкубируют в течение 1 ч 15 мин при 37^оС в среде, содержащей 3 мг 3,3-диаминобензидина тетрагидрохлорида на 10 мл 0,05 М трис-буфера при рН 7,7 и 0,1 н.раствор соляной кислоты. Промывают дистиллированной водой. Подкрашивают ядра 5%-ным водным раствором метилового зеленого 1 мин и определяют активность по Кеплоу.

Крупные клетки с ядром, состоящим из двух сегментов, содержат многочисленные крупные овальные пероксидазосомы, иногда лежащие на ядре. Фон, на котором лежат пероксидазосомы, бесцветный.

П р и м е р 2. Мазки крови обрабатывают также. Определяют активность системы в эозинофилах. при этом фиксацию в спирт-формалине (9:1) осуществляют в течение 20 мин. Активность по Кеплоу не меняется. Эозинофилы содержат много гранул.

П р и м е р 3. Высушенные на воздухе мазки крови фиксируют в спирт - формалине (9: 1) в течение 15 мин. Промывают в дистиллированной воде. Инкубируют в течение 1 ч 15 мин при 37^оС в среде, содержащей 3 мг бензидина на 10 мл 0,05 М трис-буфера при рН 7,7 и 0,1 н.раствор соляной кислоты. Мазки промывают дистиллированной водой. Ядра докрашивают 5% -ным водным раствором метилового зеленого в течение 1 мин и определяют активность по Кеплоу. Эозинофилы содержат много гранул.

Способ позволяет определять активность системы пероксидаза - эндогенная перекись водорода в эозинофилах крови человека и животных. Кроме того, позволяет полностью сохранить структуру исследуемой клетки и обеспечивает полное выявление активности системы, исключает диффузность окраски.

Формула изобретения

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СИСТЕМЫ ПЕРОКСИДАЗА-ЭНДОГЕННАЯ ПЕРЕКИСЬ ВОДОРОДА В КРОВИ НА МАЗКАХ путем фиксации мазков в спирт-формалине, инкубирования в среде, содержащей 3,3¹-диаминобензидин гидрохлорид, и окрашивания ядерным красителем, отличающийся тем, что, с целью более полного выявления активности за счет лучшей сохранности гранулоцитов, фиксацию проводят в течение 15-20 мин, а среда для инкубации дополнительно содержит трис-буфер и 0,1 N соляную кислоту при следующем соотношения компонентов, мас.%: 3,3¹-диаминобензидин гидрохлорид 0,025 - 0,030 Трис-буфер 0,556 - 0,606 0,1 N соляная килота 36,5 - 37,5 Вода Остальное