Способ дифференциальной диагностики эпидемического кератоконъюнктивита и аденовирусного конъюнктивита

 

Использование: медицина. Сущность изобретения: из крови отделяют лейкоцитарную суспензию и инкубируют ее в термостате с антигенами вирусов эпидемического и неэпидемического типов в двух емкостях При значениях бпасттрансформации более 4,5% властных клеток ставится диагноз эпидемического кератоконъюнктивита, при показателях менее 1,3%-аденовирусный конъюнктивит.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К ПАТЕНТУ

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (2 Ц 4782998/13 (22) О9.10.89 (46) 15.1193 Бюп. Ма 41-42 (75) Мальханов В.Б„ Казакбаев АГ. (73) Уфимский научно-исследовательский институт глазных бопезней (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО КЕРАТОКОНЬЮНКТИВИТА И АДЕНОВИРУСНОГО КОНЪ(19) RU (11) 2ОО28О4 С1 (51)5 СИМ7 ОО

ЮНКТИВ ИТА (57) Использование: медицина. Сущность изобретения: из крови отделяют пейкоцитарную суспензию и инкубируют ее в термостате с антигенами вирусов эпидемического и неэпидемического типов в двух емкостях При значениях бпасттрансформации более 4,5% бластных клеток ставится диагноз эпидемического кератоконьюнктивита, при показатспях менее 1 3%-аденовирусный коньюнктивит.

2002804

Изобретение относится к медицине, а именно. к вирусологии. Известен способ диагностики эпидемического кератоконьюнктивита (ЭКК) и аденовирусного коньюнктивита (АВК) путем иммунофлюоресцентного исследования соскобов коньюнктивы, Однако метод не точен, так как не дает возможность определить тип аденовируса и не.позволяет различить эти два заболевания, Известен также метод диагностики ЭКК и АВК путем исследования парных сывороток в различных серологических реакциях, Эти методы дают возможность установить этиологию заболевания лишь только через

2 — 3 недели от начала болезни.

Наиболее близким к обьекту {прототипу) является изоляция вируса в клеточных культурах с последующей постановкой реакции нейтрализации с выделенными вирусами, Таким способом устанавливают этиологию заболевания через 3-4 недели.

Метод является трудоемким, требует специальной вирусологической лаборатории.

Целью изобретения является сокращение времени, упрощение способа диагности ки.

Способ осуществляют следующим образом. Кровь у больных берется из локтевой вены в количестве 15 мл в 2 стерильные емкости (пробирки), предварительно промытые гепарином. Для осаждения эритроцитов кровь помещают в термостат. при

37"С на 1 ч. Кровь в результате седиментации разделяется на 2 слоя: верхний — лейкоцитарный концентрат, нижний эритроциты. Светлый слой плазмы стерильный Пастеровской пипеткой переносится в, другую пробирку. 0,1 мл плазмы смешивается с 0,9 мл 1 / уксусной кислоты, слегка подкрашивают метиленовой синью. B камере Горяева подсчитывается число лейкоцитов, С помощью градуированной пипетки замеряется количество полученной плазмы и затем плазма разводится средой 199 из такого расчета, чтобы s 1 мл смеси концентрация лимфоцитов составляла 1х10 кле6

ТоК. Сюда же добавляется аутологичная плазма, полученная путем центрифугирования крови больного в течение 15 — 20 мин при

1000-1500 об/мин. Все компоненты культуральной среды; плазму, полученную путем седиментации, среду 199 и плазму, полученную центрифугированием, помещают в плоские флаконы емкостью 50 мл.

Приготовленные таким образом культуры помещают в термостат при 37 С. На 6-й день инкубации культура лимфоцитов извлекается из термостата, В культуру добавляют равный обьем подогретого до 37 С

0,02% раствора Версена, пептируют и поме10 щают в термостат на 10 мин. В дальнейшем проводят пептирование, культуру переносят в центрифужные пробирки с узким дном и производится центрифугирование в течение 10 мин при 1000 об/мин, Надосадочную

15 жидкость сливают, осадок перемешивают и готовят мазки на предметных стеклах, Мазки высушивают на воздухе и фиксируются . метанолом в течение 5 — 6 мин. Затем мазки окрашивают водным раствором азур-зози20 на, Мазки исследуются при иммерсионной микроскопии от 500 до 1000 мононуклеаров.

Оценка результатов проводится условно до

5-бальной шкале интенсивности бластообразования, П р и M е р 1. Больной, 1935 г.р., поступил в отделение инфекционной патологии

45 органа зрения с нераспознанным коньюнктивитом на3-й день болезни. На культуре клеток из соскобов коньюнктивы на Ill пассаже (27 день культивирования) удалось изолировать вирус, в реакции нейтрализации был определен как вирус эпидемического кератоконъюнктивита.

Пример 2, Больной, 1947 г,р„поступил в отделение инфекционной патологии с нераспознанным коньюнктивитом на 3-й день болезни. В реакции бласттрансформации лимфоцитов на 6-й день инкубации культур по вышеуказанной методике был поставлен диагноз эпидемически.о кератоконьюн ктивита.

Таким образом, видна очевидность преимущества этого метода, а именно сокращение времени и упрощение способа диагностики. Этим способом диагностирован эпидемический кератоконьюнктивит у

27 из 32 больных (64%). (56) Анджелов В,О. Заболевание глаз (этиология. клинико-эпидемические особенности, лечение и профилактика)//Автореферат дисс.доктора мед. наук — M., 1971.

2002804

Составитель И. Тареева

Редактор В. Трубченко . Техред М.Моргентал Корректор Л.Ливринц

Тираж Подписное

Н ПО "Поиск" Роспатента

113035. Москва, Ж-35. Раушская наб.. 4/5

Заказ 3216

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул, Гагарина. 101

Формула изобретения

СПОСОб ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО КЕРАТОКОНЪЮНКТИВИТА И

АДЕНОВИРУСНОГО КОНЪЮНКТИВИТА, включающий забор периферической крови больного с йоследующим ее анализом. отличающийся тем, что забор крови осуществляют на 6 - 21 день болезни, проводят выделение лейкоцитов параллельно в двух пробах, после чего в одну из них добавляют аденовирус эпидемического типа, а в другую - вирус неэпидемического типа, анализируют количество бласттрансформированных.клеток и при значении бласттt рансформации в пробе с аденовирусом, эпидемического типа более 4,5 диагносцируют эпидемический кератоконъюнктивит, а при значении бласттрансформации в

10 пробе с аденовирусом неэпидемического типа менее 1,3 -диагносцируют аденовирусный конъюнктивит.