"штамм бактерий сiтrовастеr freundii - продуцент антигена "фракция 1" чумного микроба"
Использование: медицинская микробиология , продуцент антигена фракция I чумного микроба. Сущность изобретения: штамм получен в результате передачи бактериями штамма citrobacter freuridii 19/,3808 fra-генов возбудителя чумы в составе рекомбинантной плазмиды pLS759. Штамм депонирован в государственном научно-исследовательском противочумном институте Микроб. Штамм citrobacter freundii KMI рекомендуется-использоватьЪ качестве стабильного продуцента антигена фракция I чумного микроба на искусственных питательных средах.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛ ИСТИ Ч Е С К ИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ (21) 5024172/13 (22) 03.07.91 (46) 30.08,93. Бюл. № 32 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт
Р (72) С.А. Лебедева, Л.С. Кузнецова и .Л.В.Коссе (73) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (56) Гребцова Н.Н„, Черняковская А.С. Лебедева С,А. и Иванова В.С. ЖМЭИ. ¹5, 1990, ° с. 7 — 10.
Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к продуцентам антигена чумного микроба, и представляет собой штамм Citrobacter freundii, способный к продукции внеклеточного белка чумного микроба.
Цель изобретения — новый штамм
Citrobacter freundii KMI, способный продуцировать капсульный антиген (фракция I) чумного микроба с повышенной иммунохимической и протективной активностью, авирулентный для лабораторнь .х жи вотн ых.
Штамм-продуцент был получен в результате передачи fra-генов чумного микроба в составе рекомбинантной плазмиды pLS
759 в штамм Citrobacter frevndii 19/3808.
Культурально-морфологические и -биохимические признаки. Клетки штамма-продуцента грамотрицательные, подвижные, Я2, 1838403 АЗ (51)5 С 12 N 1/20 (54) ШТАМ М БАКТЕРИЙ CITROBACTE R
FR E UND I I KMl — П РОДУЦЕ НТ АНТИ ГЕНА
"ФРАКЦИЯ Г ЧУМНОГО МИКРОБА (57) Использование: медицинская микробиология, продуцент антигена "фракция I" чумного микроба. Сущность изобретения; штамм получен в результате передачи бактериями штамма citrobacter freuridli
19/3808 fra-генов возбудителя чумы в составе рекомбинантной плазмиды pLS759. Штамм депонирован в государственном научно-Йсследовательском противочумном институте
"Микроб". Штамм citrobacter freundil KMI рекомендуется использовать Ъ качестве стабильного продуцента антигена "фракция I" чумного микроба на искусственных питательных средах. палочки с перитрихиальными жгутиками, некапсулированные. На поверхности агара
LB или Хоттингера (рН 7,2) формируют коло нии в R-форл1е, а в бульоне дают равнол1ерное помутнение среды. Глюкозу и другие углеводы сбраживают с образовэниел1 кис- д лоты и газа. Лактозу сбраживают с задержкой. Не лизируются чумным диагностическим Л-413 и псевдотуберкулезным фагами. Не агглютинируются чумной диагностической сывороткой производства Иркутского противочумного института в реакции агглютинации 1:10. Оп тимум температуры культивирования 37 С, Непатогенны для белых мышей при подкожном и внутрибрюшинном заражении в дозе
10 м кл., что сообщает ему большие преимущества перед штаммом чумного микроба в режимном отношении (отпадает необходимость в процедуре обезвреживания культу1838403
Формула изобретения
Штамм бактерий Citrobacter freundii
КМ! — продуцент антигена "фракция !" чумного микроба., Составитель С, Лебедева
Техред М, Моргентал Корректор Л. Филь
Редактор
Заказ 2905 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 с
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 ральных жидкостей и последующей довольно длительной проверке на стерильность, позволяет работать с большими обьемами жидкой культуры, пользоваться проточными растворами при центрифугировании).
Штамм содержит ДНК рекомбинантной плазмиды pLS 759 с fra-генами чумного микроба. Уровень продукции капсульного антигена "фракция !" у Citrobacter freundii
KMI òaêoé же, как и у родительского штамма
Y..pestls EV 76 при выращивании на плотных питательных средах. (1.В, ЛХАТ) при 37 С.
Капсульный антиген, полученный по методу
Baker te al. и изоэлектрической приципитацией, имеет сходные с препаратом из чумного микроба физико-химические свойства (подвижность при электрофорезе по Лэммли, изоэлектрическую точку), аналогичную серологическую специфичность в реакциях диффузионной преципитации, но повышенную на два порядка иммунохимическую активность в реакциях РПГА с поли- и моновалентным диагностикумом (производства Среднеазиатского противочумного института) и иммуноферментную активность с моноклональными антителами к препарату Fl, В количественном отношении выход капсульного антигена при выделении методом изозлектрического осаждения
Citrobacter freundiI KMI составил 1,2$ по сравнению с 0,5 Fl из Yersinia pestis TS.
Сконструированный штамм Citrobacter
freundil 19/3808-2 К депонирован в коллекции государственного научно-исследовательского противочумного института
"Микроб" МЩ СССР под номером KMI u может использоваться: для получения антигена "фракция !" в больших количествах и безопасным способом; для получения вакцинных препаратов Fl с целью создания специфической резистентности у макроорганизма; для выяснения роли хромосомы чумного микроба в биосинтезо Fl; для изучения механизмов регуляции Ira-генов, структуры и функции антигена Fl и характера его взаимодействия с другими биологически активными компонентау и клетки.

