Способ разделения фрагментов бромцианового гидролиза стафилококкового энтеротоксина типа а

 

Изобретение относится к биохимии и эпидемиологии и может быть использовано при структурно-функциональном изучении стафилококкового энтеротоксина типа А и других белков. Целью изобретения является повышение эффективности способа. Поставленная цель достигается тем, что на колонку конусообразной формы высотой 40-80 см, верхним диаметром 3-4,5 см, нижним диаметром 1,4 см с биогелем П-30 наносят бромциановый гидролизат стафилококкового энтеротоксина типа А. Элюируют 0,1-0,5 М трис-НС буфером, содержащим 6-8 М мочевину и 0,2-0,5 М хлорид натрия, рН 7,5-8,0, со скоростью 60-90 мл/ч. Затем выделяют фракции по границам пиков оптгической плотности при 254 нм. Получают 3 фракции продуктов бромцианового гидролиза стафилококкового энтеротоксина типа А.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)л G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4708917/14 (22) 21.06.89 (46) 23,01.93. Бюл. N 3 (71) Институт региональных проблем питания AMH СССР (72) Т.Д,Талбаев, С.М.Медведский, - Ю.B.Åýåï÷óê и Л.А.Ильченко (56) J-Jih et al. "Complete amino acid

Sequence of Staphylococcal entегоtoxin А" J..

of Вiol. Chem. 1987, 262, N. 15, рр, 7006-7013. (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ФРАГМЕНТОВ

БРОМЦИАНОВОГО ГИДРОЛИЗА СТАФИ"ЛОКОККОВОГО ЭНТЕРОТОКСИНА ТИПА А (57) Изобретение отйосится к биохимии и эпидемиологии и может быть использовано при структурно-функциональном изучении

Изобретение относится к биохимии и эпидемйологий, в частности к способам разделения продуктов гидролиза в препаративных количествах, и может быть использовано при структурно-функциональном изучении стафилококкового энтеротоксина типа А и других белков.

Цель изобретения — повышение эффективности способа.

Способ осуществляется следующим образом. На колонку конусообразной формы высотой 40-80 см, верхним диаметром 3-4,5 см, нижним диаметром 1,4 см с биогелем и

П-30 наносят 1,0-1,5 мл бромцианового гидролизата стафилококкового энтеротоксина типа А (СЭА). Элюируют 0,1-0,5 M трис-HCI буфером, содержащим 6-8 М мочевину и 0,20,5 М хлорид натрия, рН 7,5-8,0, со скоростью 60-90 мл/ч. Затем выделяют фракции по границам пиков оптической плотности

„„5U„„1789925 А1 стафилококкового энтеротоксина типа А и других белков. Целью изобретения является повышение эффективности способа. Поставленная цель достигается тем, что на колонкуу конусообразной формы высотой 40-80 см, верхним диаметром 3-4,5 см, нижним диаметром 1,4 см с биогелем П-30 наносят, бромциановый гидролизат стафилококкового энтеротоксина типа А, Элюируют 0,1-0,5

M трис-HCI буфером. содержащим 6-8 М мочевину и 0,2-0,5 Мхлорид натрия,,рН 7,5-8,0, со скоростью 60-90 мл/ч. Затем выделяют фракции по границам пиков оптической плотности при 254 нм, Получают 3 фракции продуктов бромцианового гидролиза стафилококкового энтеротоксина типа А. при 254 нм, Получают 3 фракции продуктов бромцианового гидролиза СЭА.

Пример. В конусообразную колонку (перевернутый усеченный конус) с биогелем

П-30 вносят 1,0 мл раствора СЭА, предварительно подвергнутого бромциановому гидролизу, и элюируют 0,3 M трйс-НС! буфером рН 8,0 с 7,0 моль мочевины и 0,35 моль хлорида натрия со скоростью элюирования

80 мл/ч, Параметры колонки: h 60 см; диаметр верхний 4,0 см; диаметр нижний 1,4 см.

Выделение фракций осуществляют по границам пиков оптической плотности 254 нм.

В результате проведенного элюирования получают 3 фракции продуктов бромцианового гидролиза СЭА.

Предложенный способ позволяет по сравнению со способом-прототипом достигнуть более полного разделения фрагментов бромцианового гидролиза СЭА.

3, 178992

Ф ор мул а и зоб ре те йи я

Способ разделения фрагментов бром .цианорого гидролиза стафилококкового энтеротоксинр типа А путем внесейия пробы в циЛЙндричеуууо колонку с биогелем, элюироваиия буферным раствором с последую-щим сбором разделенных фрагментов, о тл и 4 а ю lij и и с я тем, что, с целью ф . юй gt. z 10 - -. 1

5 4 повышения эффективности способа за счет четкости разделения, используют колонку конусообразной формы высотой 40-80 см, верхним диаметром — 3-4,5 см, нижним диаметром — 1,4 см с биогелем П-30, элюируют

0,1-0,5 М трис-НО с 6-8 M мочевиной и 0,20,5М хлоридом натрия, рН 7.5-8,0, при скоростй элюирования 60-90 мл/ч.

Составитель ИЛ4ванова

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор А.Мотыль

Редактор

Производственйо-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 347 Тираж . Подписное

ВНИИПИ Государственного комйтета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5