Штамм соматических структур макроскопического гриба рlеurотus оsтrеатus (jаsт. f @ )кuммеr

 

Использование: сельское хозяйство и биотехнология. Сущность изобретения: штамм получают на субстрате с зерновой основой и пересевают в твердый субстрат для культивирования до получения плодовых тел гриба. Использование штамма позволяет повысить урожай плодовых тел и исключить операцию охлаждения субстрата с выращиваемым грибом для стимуляции плодообразования, что упрощает технологию . Штамм обладает устойчивостью к посторонней микрофлоре. 4 табл.

союз соВ тских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5l>5 А 01 6 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4734366/13 (22) 04.07.89 (46) 23.08.92. Бюл. М 31 (71) Донецкий государственный университет (72) ll.À, Сычев, С.Ф. Негруцкий, Ю.И. Казокин. А.Н. Кипень, H.Á. Шалашова, Л,В.Цофина и Е.Н. Демкович (56) Авторское свидетельство СССР

Я 1287307, кл. А 01 G 1/04, 1987. (54) ШТАММ СОМАТИЧЕСКИХ СТРУКТУР

МАКРОСКОПИЧЕСКОГО ГРИБА PLE. UROTUS OSTREATUS (LAST. FR) KUMMER

Изобретение относится к микологии и биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве, в подсобных хозяйствах предприятий ткацкой, горнодобываю- . щей, металлургической и других отраслей промышленности.

Штамм Pleurotus 0streatus -4818 HP BT (1975) (Ветеринарный университет, ВНР, Будапешт). Плодовое тело — 6 — 11 см высотой,. 3 — 6 см шириной, шляпка яйцевидная.

Ножка 3-9 см длиной, 2-3 см толщиной, округлая. беловатая. Споры 18-20х10-12 мкм, цилиндрические, гладкие, одноклеточные. рН близок к нейтральному, оптимальная температура — 24-26 С, Недостатками штамма являются: необходимость холодового стресса, высокая светочувствительность. Оба эти недостатки влекут за собой повышенную энергоемкость технологии производства. Для осуществления холодового цикла в культивационном сооружении необходимо устанавливать перманентно включающиеся холодильные

„„!Ж,, 1755735 А1 (57) Использование: сельское хозяйство и биотехнология. Сущность изобретения: штамм получают на субстрате с зерновой основой и пересевают в твердый субстрат для культивирования до получения плодовых тел гриба. Использование штамма позволяет повысить урожай плодовых тел и исключить операцию охлаждения субстрата с выращиваемым грибом для стимуляции плодообразования, что упрощает технологию. Штамм обладает устойчивостью к посторонней микрофлоре. 4 табл. агрегаты большой мощности, что технически трудно выполнимо и экономически нецелесообразно. Для инициации плодоношения требуется освещенность в пределах 7 — 8 тыс. люкс, то есть светолюбие штамма сопоставимо со ".ветолюбием овощных растений закрытого грунта, в то время, как штамм КВ f41017 способен формировать плодовые тела при освещенности 400 люкс/час, то есть требования к свету у этого (Л штамма в 20 раз ниже, чем у известных, Наиболее близким по технической сущ- (,ц) ности к заявляемому изобретению является (Я штамм макромицета Pleurotus ostreatus (Fr)

Kummer BKMF-2465Д вЂ” продуцент плодовых тел съедобных грибов на отходах лесной и лесоперерабатывающей промышленности.

Штамм BKMf-2465Д в интенсивном производстве не используется. Не способен плодоносить без холодового шока. Чувствителен к недостатку освещения. В качестве субстрата штамм ВКМГ-2465Д использует древесину — ценное сырье.

1755735.

Целью изобретения явилось получение нового высокоурожайного штамма соматических структур макроскопического гриба

Pleurotus ostreetus (Jasg: Fr) Kummer, отличающегося от прототипа повышенной стойкостью к неблагоприятным факторам, способностью плодоносить без холодового стресса.

Штамм вешенки обыкновенной

PIevrotus ostreatus (Jason; Fr) Kummer КВ

% 1017 выделен из естественной популяции методом отбора с учетом показателей урожайности на отходах производства при интенсивном выращивании, габитуса плодовых тел и вкусовых качеств гриба.

Штамм депонирован в коллекции Института ботаники AH УССР им. Н.Г. Холодного под номером 1017.

Культурально морфологические признаки, .От места внесения инокулюма в чашки

Петри мицелий начинает распространяться равномерно, причем вначале развиваются субстратные, а затем воздушные гифы. Край колонии при рассмотрении сверху — бахромчатый, Окраска колонии семиднейной культуры на картофельно-глюкозном агаре снежно-белая, текстура ее ватная, шерстистая, высота воздушного мицелия до 3 мм, колония обладает грибным ароматом, По мере появления многочисленных пряжек и тяжей начинают формироваться примордии, обнаруживающие положительную фототропическую реакцию. Микроскопические исследования показывают, что гифы бесцветны, их апексы характеризуются гомогенной структурой протоплазмы. С возрастом в клетках мицелил появляются вакуоли и жировые включения. Ветвление гиф вначале дихотомическое, впоследствии с дифференцировкой клеток возникают многочисленные пряжки. Формирование примордиев сопровождается появлением желто-оранжевой окраски. Ширина гиф варьирует в пределах

3-8 мкм, длина клеток 16-80 и более мкм соответственно. Перегородки закладываются как в местах появления пряжек, так и между клетками, не имеющими пряжки.

Бесполое плодоношение представлено хламидоспорэми и анаморфэми. Наличие многочисленных анэморф является характерной особенностью микроморфологического строения колоний штамм КАВ 1017.

Физиолого-биохимические признаки.

На агаризованных средах рост мицелия отмечен в интервале температур 3...5...40 С.

Интенсивный рост мицелия отмечен при температуре 24 и 25 С. При температуре

27 С прирост мицелия штамма на картофельно-глюкозном агаре составил 11,4ч-0,1 мм/сутки. Скорость роста мицелия в чашках

Петри на сусло агаре при оптимальной температуре составляет 11,80+0,2 мм/сутки, 5 Отношение к углеводам. Наибольшее накопление биомассы штаммом УВ 1017 имело место нэ среде, содержащей лактозу, мальтозу, маннит и галактозу.

Отношение к источникам азота. На сре10 де с мочевиной, нитратом аммония, сульфатом и нитратом развивается достаточно интенсивно. flo результатам накопления биомассы лучшими для культуры штамма оказались глютаминовая и аспарагиновая

15 кислоты. . Отношение к спиртам. Хорошо усваивает маннит.

Оптимум рН для накопления биомассы штаммом КА 1017 находится в области 6,55

20 единиц, Цветные реакции на тирозиназу, ликтазу, пероксилазу положительны.

Примеры конкретного выполнения. Интенсивная технология выращивания пред25 полагает воэможность использования недорогостоящих субстратов, высокопродуктивных, устойчивых к неблагоприятным факторам штаммов, наиболее качественно посевного мицелия.

30 Солому подвергают увлажнению и последующей термической обработке паром от котельной в течение одного часа. Температура пара 160-180 С. Процесс стерилиза ции может быть заменен пастеризацией.

35 При этом субстрат заливают кипящей водой е сварных металлических ваннах и выдерживают при этой температуре в течение

3-4 часов. После охлаждения воды субстрат извлекают из ванны и укладывают в

40 цилиндрические контейнеры, выполненные из проволоки сечение 6-8 мм. Контейнеры покрывают перфорированной полиэтиленовой оболечкой. После охлаждения субстрата до 23-.250С его инокулируют зерновым по45 севным материалом через отверстия в полиэтиленовой оболочке. Норму высева рассчитывают с учетом габаритов контейнера. 8 контейнер диаметром 33 см и высотой

100 см помещается около 30 кг субстрата, 50 Для инокуляции субстрата в таком контейнере расходуется 650 r зернового мицелия.

Разрастание мицелия в субстрате при температуре помещения 21 — 22 С продолжается около 20 дней. Температура внутри при этом на 4-6 С выше, что соответствует температурному оптимуму вегетативной фазы развития гриба. С появлением зачатков тел (шляпок и ножек) гриба полиэтиленовые оболочки с контейнеров снимают, а темпе1755735 ратуру в помещении снижают до 12 — 15 С, Условия увлажнения регулируются таким образом. Первые 5-6 дней следят за тем, чтобы кэпельная вода не попадала на блоки.

В последующие дни все блоки довольно часто поливают водой из шланга с распылителем, но так, чтобы на полу не образовывались лужи. При 12 — 15 C для поддержания относительной влажности около 95 число поливов увеличивается до 4-5 раз. Относительную влажность можно поддерживать автоматически; используя для увлажнения воздуха конусные распылители, В период плодоношения помещение проветривается в целью удаления избыточного количества углекислого газа. В первые

5-6 дней освещение не обязательно. С момента массового появления плодовых тел создают оптимальную силу света

700-800nк/ч. При использовании остекленных и пленочных теплиц освещение не обязательноо.

Габитус плодовых тел штаммов BKMF2465Д и КВ 1017 приведен в табл. 1.

Производственные испытания по урожайности штамма КВ N 1017 проводились на базе совхоза Красносельский Артемовского района.

Посевной мицелий прототипа и заявляемого штамма получен на зерновой основе в одних и тех же условиях. Субстрат (свежесобранная, не зараженная посторонней микрофлорой, пастеризованная солома) с влажностью 68 — 70 от полной влагоемкости, рН вЂ” 6,6, инокулировался мицелием 21дневного возраста.

Блоки, заросшие мицелием прототипа

BKMF 2465Д подвергались холодовому шоку. При отсутствии холодового шока штамм-прототип не плодоносит, поэтому сравнить урожайность прототипа и заявляемого штамма без холодового шока не представляется возможным.

Блоки, заявляемого. штамма КВ

М 1017, начали плодоносить без холодового шока на 12 дней раньше, чем блокй с прототипом, Выращивание грибов проводилось в . одинаковых условиях согласно техноло-: гии.

Учет урожайности осуществлялся по трем волнам сбора продукции, с учетом габитусов (диаметра шляпки и длины ножки).

Товарными плодовыми телами считали вешенку штамма КВ M 1017 с размером шляпки не менее 4 см и с ножкой подрезанной на длину не более 4 см.

Результаты урожайности заявляемого штамма и прототипа на субстрате из соломы в кг на 2 кг сухой соломы приведены в табл.

2.

Результаты сравнения урожайности заявляемого штамма и прототипа по критерию 5 Стьюдекта приведены в табл. 3.

Результаты проведенных испытаний показали следующее; на субстрате из пшеничной соломы в расчете на 100 кг воздушно-сухой массы урожайкости заявля10 емого штамма КВ 1017 составила 74,9 кг грибов, а урожайность прототипа KBMF2465Д вЂ” 50,6 кг грибов, что дает основание сделать вывод о более высокой урожайности заявляемого штамма.

Сильный антагонизм по отношению к вешенке обыкновенной проявляют представители родов Asperglllus, Penlclllurn, Trichoderma. Изучалось взаимодействие в смешанной культуре на чашки Петри на КГА

20 заявляемого штамма, прототипа и микромицетов.

Условия опыта: отсутствие освещения, температура 25 С.

Сравнивали скорость роста ксилотро25 фов B чистой культуре M s присутствии микромицета, Для математической обработки использовали однофакторный дисперсионный анализ и критерий Даннета.

Результатй влияния микромицетов на

З0 скорость роста ксилотрофов в смешанной культуре приведены в табл. 4, Из числа изучаемых ксилотрофов наибольшей устойчивостью и конкуренткой - -способностью обладает штамм КВ 11017, З5 который резко отличается от прототипа своей активностью.

Полезным свойством штамма КВ М

1017 является способность утилизировать хлопковые отходы ткацкого производства, 40 стержни кукурузных початков., солому зла-. ковых культур и др. Использование штамма в подсобных хозяйствах предприятий ткацкой промышленности обеспечивает создание безотходной технологии производства.

Преимуществом является также и то, что блоки, оставшиеся от плодоносившего субстрата могут использоваться для добавления к органическим удобрениям или в качестве белково-витаминных добавок к кормам крупного рогатого скота. Таким образом, каряду с возможностью получения достаточно высоких урожаев вешенки обыкновенной штамма KB hh 1017 одновременно решается проблема окружающей среды от загрязнения путем ее биологической трансформации.

Штамм КВ hb 1017 пригоден для подачи в свежем виде, консервировании и сушки с целью приготовления грибного порошка.

1755735

7 8

Формула изобретения (Last. Fr) Kummer KB l4 1017 — продуцент

Штамм соматических структур макро- плодовыхтел. скопического гриба Р(еиготоз ostreetus

Таблица 1

Таблица 2

Урожайность КВ

1017

Урожайность

BKMF 2465

Варианты

1.

3

6

7, 8

11

12

13

14

16

17

18

19

21

22

23

24

26

27

28

29

31

32

33

34

36

37

1,5

1,41

1,34

1,60

1,56

1,5

1.43

1,5

1,54

1,36

1,54

1,48

1,5

1,42

1,27

1,67

1,48

1,64

1,5

1,5

1,57

1.32

1,37

1,62

1,45

1,54

1,28

1,61

1.39

1,47

1,5

1,5

1,5

1,45

1,64

1,67

1,49

1,35

2,25

1,99

1,80

2,56

2,43

2,25

2,04

2,25

2,37

1,85

2,37

2,19

2,25

2,02

1,61

2,79

2,19

2,69

2,25

2,25

2,46

1,74

1,88

2,62

2,10

2,37

1,64

2,59

1,93

2,16

2,25

2,25

2,25

2,1

2,69

2,79

2,22

1,82

1,3

1,12

1,1

1,0

1,3

0,93

1,0

0,83

0,72

1,0

1,1

1,0

0,84

1,4

1,22

1,15

0,79

1,0

0,73

1,32

0,92

1,0

0,97

0,9

1,18

1,35

0,72

1,0

1,0

0,96

0,83

1,32

1,18

1,1

1,0

0,79

0,84

1,69

1,25

1,21 .

1,0

1,69

0,86

1,0

0,69

0,52

1,0

1,21

1,0

0,71

1,96

1,49

1,32

0,62

1,0

0,52

1,74. 0,82

1,0

1,69

0,94

0,81

1,39

1,82

0,52

1,0

1,0

0,92

0,69

1,74

1,39

1,21

1,0

0,62

0,71

1755735

Продолжение таблицы:2

Таблица 3

Составитель А.Кипень

Техред М,Моргентал

Корректор С.Пекарь

Редактор Т,Козлова

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Заказ 3031 Тираж Подписное

Б НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5