Способ серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота

 

Использование: ветеринария, диагностические исследования сыворотки крови установление диагноза на бруцеллез. Сущность изобретения; для диагностики используют реакцию связывания комплемента . Однако в отличие от стандартной постановки к единому бруцеллезному антигену добавляют вытяжку из Mycobacterium bovls. При постановке реакции расчетное количество единого бруцеллезного антигена смешивают с вытяжкой из микобактерий в соотношении 1 0,5. После этого готовят рабочее разведение и добавляют полученную смесь антигенов в реакцию в объеме 0,2 мл. Способ позволяет повысить чувствительность реакции связывания комплемента . 2 табл.

„,5Q„„ 1750687 А1

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 39/10

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

: К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (54) СПОСОБ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНО-.

СТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТО:ГО СКОТА (57) Использование: ветеринария, диагноИзобретение отноСится к ветеринарии, - . крови судят rio степени гемолиза эритроци в частностй к диагностике инфекционных тов. Так, реакцию считают положительной болезней животных.: - - . при задержке гемолиза на 2-4 креста в одИзвестнонесколькоспособовсерологи- ном или 2-х разведениях (1:5, 1:10) и при Q1 ческой диагностики бруцеллеза крупного полном гемолизе эритроцитов в контроль- С) рогатого скота, Это такие как реакцйя агглю-.::ной пробирке (без антигена). 0с, тинации (РА), реакция связывания компле-: -: - Недостатком этого способа является (р мента (P СК), реакция длительного . нйзкая чувствительность, что обуславливает связывания комплемента (РДСК), реакцйя. необходимость многократного и комплекснепрямой гемагглягтинеции (ргн дт и дру- ноге исслЕдования животных для полного гие. : ... -: . .;: выявления всех заболевших.

Найболее близким техйическим реше-. Целью изобретения является повышением, выбранным в качестве прототипа, яв- ние чувствительйости РСК при диагностике .ляется РСК, при котором к инактиви- бруцеллеза крупного рогатого скота, . рованнойиспытуемойсывороткедобавляют .. Укаэанная цель достигается тем, что антиген и кОмплемент, а после выдержки при осуществлейии т.посхоба серологиче: при температуре 37-38 С s течение 20.мин ской диагностики бруцеллеза rio РСК, ripe— взвесь сенсибилизированных гемолизи-. - дуаматривающий титрование комплемента номэритроцитовбарана. Оналичииантител и гемолизина, инактивацию испытуемой и против бруцелл в испытуемой сыворотке контрольных(позитивной и негативной) сы1 (21) 4788478/13 (22) 01.02.90 (46) 30.07.92, Бюл. tk 28 (71) Прикаспийский зональный научно- исследовательский ветеринарный. инстйтут (72) P.À. Нуратинов, К,P. Ургуев, О.Ю. Юсупов и M.È. Нажалов (56) Лабораторные исследования-в ветеринарии. Бактериальные инфекции./Справочник под редакцией Б.И, Антонова, Агропромиздат, 1986, с. 60-89. я

2 стические исследоыванияд сыворотки крови, установление диагноза на бруцеллез. Сущность изобретения: для диагностики используют реакцию связывания комплемента. Однако в отличие от стандартной постановки к едйному бруцеллеэному антиге:ну добавляют вытяжку из Mycobacterium

bov/s. При постайовке реакции расчетное количеСтво единого бруцеллеэного антигена смешивают с вытяжкой иэ микобактерий в сгоотношении 1:0,5.,После этого готовят

:рабочее разведение и добавляют полученную смесь антигенов в реакцию в объеме 0,2 мл. Способ позволяет повысить чувствительность реакции связыванйя комплемента, 2 табл.

1750687 вороток путем прогревания при 60-61 С 30 мин, подготовку антигена (единый бруцеллезный антиген перед использованием смешйвается с вытяжкой из микобактерий бовис в соотношении 1,0,5), после чего готовят рабочее разведение и добавляется в реакцию в количестве 0,2 мл. Затем добавляют комплемент (в установленном титре) в объеме 0,2 мл и смесь выдерживают в водяйой бане при 37-38 С в течение 20 мин, После инкубации к смеси разведенной сыворотки

10 и комплемента добавляют гемолитическую систему и повторно выдерживают в водяной бане при 37 — 38 С в течение 20 мин. После выдержки при комнатной температуре 1618 ч йро водят учет и о цен ку р еа кции.

Опыты по отработке эффективного соотйошения бруцеллезного антйгена и вытяжки из микобактерйй бовис показали, что чувствительность реакции была наиболее высокой при их соотношении 1:0;5 и введе-. нйя в реакцию этой смеси (в титре единого бруцеллезного антигена — 1:75) в объеме 0,2 мл. Использование в предлагаемой смеси аительности реакции или же к ее перерасх оду, Предлагаемый способ отличается от

30 прототипа тем, что при постановке РСК используется смешанный с микобактериальной вытяжкой антиген, который готовится путем добавления к единому бруцеллезному антигену в установленном титре половинного объема вытяжки иэ макобактерий 35 бовис. Перед использованием расчетное количество единого бруцеллезного антигена смешивается с вытяжкой иэ микобактерий в соотношении 1:0,5. После этого готовят рабочее разведение и добавляют в реакцию в объеме 0,2 мл.

Пример 1. Сыворотки крови крупного рогатого скота больного бруцеллезом в количестве 40 проб исследовали в РСК. Для этого титровали комплемейт и гемолизин, 45 инактивировали испытуему1о сыворотку путем прогревания при 60-61 С 30 мин, расчетное количество единого бруцеллезного антигена перед использованием смешивали с вытяжкой иэ микобактерий бовис в со- 50 отношении 1:0,5, после чего готовили рабочее разведение и добавляли гемолитическую систему, повторно инкубировали в водяной бане при этих же режимах. Учет и оценку реакции проводили после 16 — 18-ча- 55 совой выдержки при комнатной температу- ре. При этом из исследованных 40 проб в 38 выявлены комплементсвязывающие антитела в диагностическом титре. Причем; предельные титры со смешанным антигеном в вытяжки из микобактерий бовйс "в иййх со- 25 от ношени ях при в одило к снй жению чувстпредлагаемом соотношении почти в 2 раза превышали аналогичные показатели с единым бруцеллезным антигеном.

Пример 2, Расчетное количество единого бруцеллезного антигена перед использованием смешивали с вытяжкой иэ микобэктерий туберкулеза в соотношении

1:0,25, после чего готовили рабочее разведение и добавили в реакцию в количестве 0,2 мл; Затем добавляли разведенный в установленном титре комплемент и выдерживали в водяной бане при 37 — 38 С в течение 20 мин. После этого добавляли гемолитическую систему и повторно инкубировали в водяной бане при тех >ке режимах. Учет и оценку реакции проводили после 16-18-часовой выдержки при комнатной темйературе. При этом, из исследованных 40 проб сывороток крови крупного рогатого скота больного бруцеллезом в 35 выявлены комплементсвязывающие антитела в диагностическом титре. В PCK с единым бруцеллезным антигеном были выявлены 32 пробы сывороток с диагностическим титром антител (контроль).

Пример 3. Сыворотки крови крупного рогатого скота больного бруцеллезом в количестве 40 проб исследовали в РСК, Для этого титровали комплемент и гемолизин, инактйвировали испытуемую сыворотку путам ее-прогревания при 60-61 С 30 мин, расчетное количество единого бруцеллезного антйгена перед использованием смешивали с вытяжкой из микобактерий бовис в соотношении 1:0,75, после чего готовили рабочее разведение и добавляли в реакцию в количестве 0,2 мл. Затем добавляли разведенный комплемент в установленном титре в объеме 0,2 мл и инкубйровали 20 мин при

37 С, после чего заливали гемолитическую систему и повторно инкубировали в водяной бане при тех же режимах. Учет и оценку реакции проводили после 16-18-часовой выдержки при комнатной температуре, При этом, из исследовайных 40 проб в 38 выявлены комплементсвязывающие антитела в диагностическом титре, тогда как с единым бруцеллезным антигеном — в 32 (контроль).

Реэ»льтаты опытов по отработке опти-. мального соотношения компонентов смешанного антигена, используемого в РСК по предлагаемому способу приводятся в табл.

1.

Диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота по предлагаемому способу (использование в РСК бруцеллезного антигена в смеси из микобактерий бовис в соотношении 1:0;5) позволяет выявлять на 13,3% больше больных животных по сравнению с прототипом (РСК в классическом варианте с

1750687 сыворотки, инактивэцию, добавление к ней комплемента, единого бруцеллезного анти гена в дозе 0,2 мл и гемолитической системы с последующими инкубацией и учетом ре5 зультатов, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, единый бруцеллезный антиген перед добавлением к сыворотке смешивают с вытяжкой из Mycobaterlum bovis в соотйо10 шении 1-:0,5 соответственно.

Таблица 1 единым бруцеллезным антигеном) и на

16,67ь больше обнаруживаются комплементсвязывающие антитела у вакцийированных против бруцеллеза животных (см. табл.

2).

Формула изобретения

Способ серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, предусматривающий разведение исследуемой

Результаты опытов iio отработке оптимального соотношения компонентов смешанного антигена йспользуемого в PCK na предлагаемому способу

Исследования сыворотки крови

Количество

- проб

Коров естественно больных бруцеллезом

1: 0,25.

1: 0;5

1: 0,75

1;1

38

38

Таблица 2

Исследованы сыворотки крови

Выявлены комплемейтсвязывающив антитела в диагностическом тит е и и иссле овании в РСК*

Количество проб

Примечания с единым бруцеллезным антигенОм (прототип) со смешанным антигеном (предлагаемый с п особ

40

18

120 з о овых

* сыворотки крови дополнительно параллельно исследованы в РСК, с КТА, с.антигеном

Сиб. НИВИ и получены отрицательные результаты, а в РА с единым бруцеллезным антигеном антитела установлены в 23 случаях.

Коров естественно больных бруцеллезом

Коров вакцинированных против бруцеллеза

Коров заведомо

Смешанный антиген (единый бруцеллезный антиген+вытяжка из микобактерий бовис) использован в РСК при соотношениях компонентов

Показатели зффектйвности предлагаемого способа в сравнении с прототипом с

Выявлены компонентсвязывающие антитела диагностическом титре в пробах

Предельные тит :.ры со смешанным антигеном в 2 раза превышали таковые с единым бруцеллезным антигеном