Штамм бактерий brucella авоrтus, используемый для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота

 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к получению биологических препаратов, и может быть использовано для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота. Целью изобретения является штамм бруцелла абортус, обладающий стабильными свойствами, безвредностью и высокой иммуногенностью. Штамм бактерий Brucella abortus Ns 75/79A (35) депонирован в коллекции Всесоюзного государственного научноисследовательского института ветеринарных препаратов. Использование штамма Brucella abortus 75/79A(35) в качестве противобруцеллезной вакцины позволяет использовать ее в комплексе мер по профилактике бруцеллеза крупного рогатого скота любого возраста, без учета периода стельности. СП с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s С 12 N 1/20. А 61 К 39/10

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4603578/13 (22) 20.09,88 (46) 30.12,91. Бюл. М 48 (71) Алтайская научно-исследовательская ветеринарная станция (72) И.П.Никифоров (53) 619.616.24-002,5.6.36.22/28(088.8) (56) Сборник научных трудов. Алма-Ата, изд.

Восточного отделения ВАСХНИЛ, 1986, с,105 — 106.

Ветеринария, 1975. N7,,с,43-45, Ветеринария, 1975.М 11, с,32-33. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BRUCELLA

ABORTUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к биологическим препаратам, и может быть использовано для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Одним из средств для успешной профилактики бруцеллезной инфекции является применение в комплексе противобруцеллезных мер средств специфической профилактики бруцеллеза.

В настоящее время для изготовления противобруцеллезной вакцины применяются штаммы бруцелла абортус hh 19 и шт. М

82.

Штамм М 19 по культуральным призна-. кам является, стойким вариантом Bfucella

abortus, хорошо растет на обычных пита„„5U ÄÄ 1701743 А1 (57) Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к получению биологических препаратов, и может быть использовано для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Целью изобретения является штамм бруцелла абортус, обладающий стабильными свойствами, безвредностью и высокой иммуногенностью. Штамм бактерий ВгосеИа

abortus М 75/79А (35) депонирован в коллекции Всесоюзного государственного научноисследовательского института ветеринарных препаратов. Использование штамма Brucella

abortus 75/79А(35) в качестве противобруцеллеэной вакцины позволяет испольэовать ее в комплексе мер по профилактике бруцеллеза крупного рогатого скота любого возраста, без учета периода стел ьности. тельных средах, умеренно продуцирует сероводород, растет на средах с основным фуксином 1:50000 и 1:100000 и не растет на средах в тех же разведениях, но с добавлением тионина, проявляет высокую чувствительность к пенициллину. Обладает сравнительно высокой иммуногенностью (75 — 80%).. .При окраске колоний по У-Вилсону шт.N 19 и полевых штаммов колонии в 3-6суточном возрасте имеют фиолетовый ободок и светло-желтый центр. а колонии

R-штаммов — синий цвет.

К недостаткам известного штамма следует отнести то. что штамм 1Ф 19 ВгисеИа аЬогмз высокоагглютиногенен. обладает длительной приживаемостью в организме

1701743 иммунизированных животных (5 — 8 лет), обладаетостаточнойвирулентностью, абортогенностью, Отсутствие способа дифференциации не позволяет применять его на взрослом поголовье скота в очагах инфекции и в угрожаемых по бруцеллезу стадах, Вакцина из шт-, N. 82 Bruceita abortus— живая, слабоагглютиногеннэя, обладет иммуногенностью 75-100% на морских свинках, зараженных через 5 мес после их

,иммунизации.

У шт. N. 82 при окраске по У-Вилсону на 3-и сутки роста колонии мелкие и имеют фиолетовый ободок и светло-желтый центр, на 4-й день у них появляется исчерченность и включения в центре, к 5 — 6-му дню колонии при окраске становятся синими, При высеве на среду с агаром в чашках

:Петри образует колонии SR-формы, круглые, гладкие, прозрачные с голубов òûì оттенком.

Агглютинирует е растворах S- u R-специфических бруцеллезных сывороток, дает слабую пробу в трипафлавине, термоагглютинация слабая или не агглютинирует, Растет на средах с фуксином 1:50000 и не растет с тионином (1;25000). При росте на агаре образует сероводород, Обладает слабыми.агголютиногенными и вирулентными свойствами, Однако штамм N 82 ВгосеИа

abortus в SR-форме не стабилен, абортогенен (10 — 20/ абортов у стельных коров и нетелей). Культура шт. М 82 в образцах производственных серий вакцины характеризу ется неоднородностью формы колоний, антигенные свойства субкультур генетически не закреплены, субкультуры в Я-, SR- u

R-формах имеют различную вирулентность.

У 0,4 — 0,8% вакцинированных животных сохраняются поствакцинальные реакции на длительный период, Целью изобретения является получение штамма бруцелла абортус, обладающего стабильными свойствами, безвредностью и высокой иммуногенностью.

В результате отбора и исследований был селекционирован штамм бруцелла абортус 75/79-А, отвечающий основнь1м требованиям вакцинного штамма бруцеллеза крупного рогатого скота. Штамм l3rucella

ebortus 75/79-А депонирован в коллекции

Всесоюзного Государственного научно-исследовательскогоо института ветеринарных препаратов под номером 75/79-А(35).

Штамм 75/79-А бруцелла абортус — диссоциированный штамм в SR-форме, выделен из высева надвымянного лимфоузла реагирующей на бруцеллез коровы в виде колоний бруцелла абортус в аназробных условиях на 7-е сутки инкубации в термостате.

Полученной из заявляемо о штамма вакциной прививают крупный рогатый скот (например, стельных телок) в дозе 100 млрд. микробных клеток, Селекционированный штамм бруцелла абортус 75/79-А имеет следующие морфологические, культурально-биохимические характеристики, Морфологические признаки, Штамм бруцелла абортус 75/79-А — зто очень мелкие микроорганизмы, в микроскопических препаратах встречаются одновременно в кокковидных и пэлочковидных формах, при окраске по Козловскому окрашиваются в красный цвет, хорошо растет на твердых питательных средах: мясопептонном печеночном глюкоза-глицериновом агаре, печеночном глюкоза-глицериновом агаре как с добавлением перевара Хоттингера. так и без него.

Культурально-биохимические признаки, Штамм 75/79-А полностью (75-100%) агглютинируется S- u R-бруцеллезными сыворотками, не агглютинируется с физраствором, дает положительную реакцию (++++) в пробе с акрифлавином. положительную или слабоположительную реакцию термоагглютинации. На агаре в чашках популяция однородная, колонии ровные, гладкие, выпуклые, блестящие. При окраске по Уайт-Вилсону 3 — 4-суточные колонии культуры исходного штамма и 5-го пассажа через организм морской свинки, выращенные на косяках агара Щелковского биокомбината, ВГНКИ и Алтайской НИВС, окрашиваются однородно в основном (до

80;ь) как SR-форма (по сине-фиолетовому фону желтая исчерненность по диагонали, середине, иногда по периметру колоний ближе к краю), 5-200/, колоний — как RS-форма. R- u S-формы колоний в популяции не наблюдались, Штамм и его субкультура хорошо растет на средах с тионином и фуксином 1;50 тыс. (++), не чувствителен к эритритолу и натриевой соли бензилпенициллина в концентрации до 50 ЕД в 1 мл среды. Продуцирует НгЯ (1-29 мм).

По морфологическим, культуральным. агглютинабельным свойствам, реакции термоагглютинации и пробе с акрилфлавином штамм 75/79-А представляет собой диссоциант бруцелл, аналогичный штамму

Bruceiia abortus!Ф 82. Отличием изучаемого штамма от последнего является относительная однороднсть популяции и отсутствие в ней микробных клеток, образующих на 3 — 4 — е сутки инкубирования колоний e S-или Я-форме.

1701743

40 робных клеток по оптическому стандарту 45

Пример 1. Приживаемость и возможность миграции штамма 75/79-А (5-й пассаж) изучены в опыте на 50 морских свинках, 25 из которых были иммунизированы в дозе 1 млрд. микробных клеток и содержались вместе с непривитыми в течение 4 мес. Морских свинок по 5 голов иэ каждой группы убивали через 15, 30, 60, 90, 120 дней и проводили бактериологическое и серологическое исследования материала на бруцеллез, В результате проведенных исследований установлено, что штамм 75/79-A приживается в организме иммунизированных морских свинок в генерализованной форме в течение 60 дней.

При серологическом исследовании в

РБП, РА, РСКс биофабричными антигенами и в РСК с R-антигеном КВИ сывороток крови от иммунизированных морских свинок положительная реакция с биофабричным антигеном была получена только у одного животного через 60 дней в Р БП и СК в титре

1:20. В PCK c R-антигеном КВИ все морские свинки положительно реагировали с 15 дня до 60 в титрах 1:5 — 1:80. Через 90 дней отмечена положительная РСК в титре 1 5 у двух морских свинок из пяти, через 120 дней все животные утратили серопозитивность к Rантигену. При совместном содержании в течение 120 дней иммунизированных морских свинок и животных контрольной группы не установлено явление миграции изучаемого штамма, что подтверждается результатами бактериологического и серологического исследований.

Пример 2, Остаточная вирулентность и агглютинабельные свойства штамма

75/79-А (5 пассаж) изучали в опыте с ВГНКИ на 90 морских свинках в сравнении со штаммами М 82 и вирулентным шт. Вгисе!!а

abortua 54. Животных иммунизировали взвесью двухсуточных агаровых культур в дозах 10, 100, 1 тыс., 10 тыс. и 1 млрд. микмутности. Морских свинок убивали через 20 и 40 дней, проводя бактериологическое и серологическое исследования на бруццелеэ, отмечая в эти сроки видимые патолого-анатомические изменения в лимфоузлах и органах животных, вычисляя индекс селезенки.

В результате проведенных исследований установлено, что штамм 75/79-А обладает низкими вирулентными свойствами, так как в указанные строки генерализовано расселяется в организме морских свинок. привитых только в дозе 1 млрд.м.клеток,-а приживается в дозе от 1 тыс.м.клеток, в то время как шт. N. 82 — от 10 микробных клеток.

При серологическом исследовании в

РБП, PA u PCK на бруцеллез в сыворотке крови морских свинок, привитых разными дозами культуры штамма Bruceila abortus

75/79-А, отсутствовали антитела, выявляемые антигенами биофабричного производства. В PCKc R-антигеном в первый срок убоя выявлены специфические антитела у всех морских свинок, иммунизированных в дозе 1 млрд.м,клеток (титр 1:10-1;20), через

40 дней в аналогичной группе положительно реагировали все животные в высоком титре (1:40), в остальных группах — по 1-3 м.свинки в титре 1:5.

Пример 3, Безвередность (абортогенность) штамма 75/79-А изучена на 8 бере-. менных морских свинках, привитых 1, 2, 7.

5, 10 млрд.м,клеток суспензией двухсуточной агаровой культуры исходного штамма и его пассажей. За период наблюдения в сроки 15, 20, 30, 60 сут перечисленные дозы штамма аборта не вызывали, а при послеубойном вскрытии из полостей маток 8 беременных морских свинок извлечено 26 сформировавшихся плодов.

Пример 4. Абортогенность и агглютиноггеность штаммов 75/79-А и шт. N 82 изучены на 9 (2 — 3 мес. стельности) телках. иммунизированных в дозе 100 млрд. микробных клеток каждого штамма.

За 7 мес. опыта установили следующее.

В группе телок (4 головы), иммунизированных 100 млрд. микробных клеток двухсуточной суспензии штамма 75/79-А, аборта не отмечалось, Все телки, иммунизированные суспензией штамма 75/79-А, благополучно растелились, а из 5 телок, иммунизированных штаммом N 82 в дозе

100 млрд.м.к. биофабричной вакцины, через

2 мес после иммунизации одна телка абортлровала.

Результатами серологических исследований сывороток крови животных обоих групп в сроки 12 дней, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 мес после иммунизации установлено, что у телок опытной группы sce реакции с биофабричными антигенами дали отрицательные результаты исследований на бруцеллез через 2 мес после иммунизации, à PCK c R-антигеном 16/4 ИЭВСиДВ через 3 мес, тогда как из 5 телок, иммунизированных шт. М 82, у одной сохранились реакции в РСК со стандартным антигеном (в титре 1:10++++ и РСК с R-16/4 антигеном ИЭВСиДВ 1:40++++), Пример 5. Иммуногенность штамма

75/79-А на морских свинках высокая и колеблется от 66,6 до 100;, при заражении через 3,5 мес. после их иммунизации. В опытах при апробации штамма совместно с

ВГНКИ на 94 морских свинках иммуноген1701743

Составитель И.Никифоров

Редактор Т.Лаэоренко Техред M,Moðãåíòàtl Корректор С.Черни

Заказ 4512 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 ность штамма 75/79-А (5 пассаж на морских свинках) в дозе 2 млрд. микробных клеток составила 88,8 при индексе инфицированности (ИИ) 8,3, у штамма hL 82 в той же дозе иммунитет составил 65ф> (ИИ 20,0), у шт, N

19 в дозе 1 млрд.м,к. иммуногенность составила 84,2 при ИИ 11,5.

Использование штамма 75/79-А(35)

Brucella abortus в качестве противобруцеллезной вакцины позволит применить ee e комплексе мер по профилактике бруцеллеза крупного рогатого скота лк>бого возраста и без учета стель ности, 5 Формула изобретения

Штамм бактерий Brucella abortus

ВГНКИ М 75/79A(35), ипользуемый для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота.