Способ прогнозирования течения язвенной болезни

 

Использование в медицине, в частности в гастроэнтерологии для определения тяжести течения язвенной болезни Сущность к отдельным г.робам взвеси лейкоцитов добавляют .антигены, полученные из различных органов определяют индекс миграции лейкоците и при значении его менее 0 8 и более 1 2 с двумя или более антигенами прогнозируют тяжелое течение заболевания 3 табл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1У)

I Cå (21) 4821594/14 (22) 29.04,90 (46) 23.06.92, Бюл,%23 (71) 1-й Московский медицинский институт им. И,M.Ñå÷åíîâà (72) М.В.Неверова и Д.B.Белокриницкий (53) 615,375 (088.8) (56) Тер,архив, 1985, ¹ 3, с.95 — 98, (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

1 этап. Выделение антигенного материала слизистой оболочки 12-перстной кишки.

Кишечник недоношенного эмбриона отмывают от крови, осторожнс отделяют слизистую оболочку и гомогенизируют в гомогенизаторе Поттера с физиологическим раствором в соотнои ении 1:1. Измельченную ткань подвергают дообному центрифугированию. Супернатант центрифугируют в течение 1 ч при 105000 об/мин. Перевод антигена в растворимое состояние из клеточных мембран осуществляют с помощью папина, добавляемого из расчета 0,1 мг на 1 мл супернатанта, Смесь выдерживают в термостате при 37 С в течение 1 ч. После центрифугирования при 88700 об/мин супернатант разгоняют на колонке с сефадексом G 200 и отбирают фракции с максимальным содержанием белка (определяют по методу Лоури). После диализной очистки и лиофилизации фракций антиген используется в концентрации 250 raM/мл.

„„. Ж „„1742725 А1 (57) Использование; в медицине, в частности в гастроэнтерологии для определения тяжести течения язвенной болезни. Сущность: к отдельны ",.робам взвеси лейкоцитов добавляют антигены. полученные из различных органов. определяют индекс миграции лейкоци ов и при значении его менее 0,8 и более 1.2 с двумя или более антигенами прогнозируют тяжелое течение заболевания, 3 табл, В реакции также используются антигены клеточных мембран кардиомиоцитов (кардиальный антиген) в концентрации

100 гам/мл и ба= àëüíûe мембраны по-Гечных клубо IKOB (почечный антиген) в концы. трации 300 гамlмл.

ll этап. Подготовка агара.

Заранее готовят 30/ь-ный агар "Дифко" на физиологическом растворе с 0,05 М трисНС! буфером (рН 7.3) и хранят при 4"С. =" день опыта к 5 мл расплавленного агара. ос тывшего до 50 — 54 "... прибавляют 10 мл смеси, состоящей из 9 мл среды 199,1 мл сыворотки крупного рогатого скота, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. нагретой qo 37 C. Пластиковые чашки Петри одноразового испо ьзования диаметром

100 мм заливаю1 приготовленной смесью.

Чашки устанавливают строго горизонтально и наливают равные количества геля, чтобы толщина его составляла 2 мм. В затвердевшем геле пробойником выбивают лунки диаметром 2.5 лм.

1II этап. Выделение лейкоцитов, В пластиковую пробирку поме:„ают

10 мл гепаринизированной крови (26 ед.;епарина на 1 мл крови) обследуемого. Кров . забирают из локтевой вены натощак. В те i 742725 чение 1 ч пробирку выдерживают в термостате при 37 С, После отстаивания плазму осторожно переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют.

Примесь эритроцитов в клеточном осадке лизируют в гипотоническом растворе хлористого натрия, для чего к клеточному осадку добавляют 5,0 мл 0,35 g ного раствора NaCI и осторожно пастеровской пипеткой ресуспендируют клетки, не допуская образования пены, в течение 35 — 40 с. После экспозиции к суспензии клеток немедленно добавляют 0,6 мл 5 j-ного раствора хлористого натрия и тщательно перемешивают. В результате раствор становится изотоническим. Полученную взвесь лейкоцитов трижды отмывают средой 199.

iV этап. Постановка реакции торможения миграции лейкоцитов, Контрольные и опытные исследования проводят в четырех параллельных лунках, внося в каждую из них по 5 мкл ресуспензированной лейковзвеси (1,5 млн клеток) и

5 мкл раствора антигена или среды 199 (контроль). После инкубации чашек при 37 С в течение 24 ч агаровые блоки с целью фиксации клеток заливают 10 -ным раствором формалина. Через 4 ч слой агара осторожно удаляют, чашки промывают дистиллированой водой и высушивают. Результаты учитывают путем отбрасывания изображения полей миграции на бумагу с помощью проекционного аппарата "Микрофот" типа

5ПО-1. Индекс миграции (NM) определяют по отношению средних величин площадей миграции в опыте и контроле по формуле

2 2

01 — d1

D2 d2 где D1 — средний диаметр четырех зон миграции в опыте;

D2 — средний диаметр четырех зон миграции в контроле;

d> — средний диаметр четырех центральных лунок в опыте; б — средний диаметр четырех центральных лунок в контроле.

Отработанные на 20 здоровых донорах нормы ИМ находятся в пределах 0,8 — 1,2, Результаты РТМЛ у больных язвенной болезнью желудка (ЯБЖ) с различным течением заболевания до и после лечения представлены в табл.1.

Результаты РТМЛ у больных язвенной болезнью 12-перстной кишки (ЯБДК) с различным течением заболевания до и после лечения представлены в табл. 2.

Результаты РТМЛ у больных хроническим гастритом (ХГ) до и после лечения представлены в табл,3.

Таким образом, видно, что положительные результаты РТМЛ с двумя и более антигенами характерны для тяжелого течения

ЯБ.

При значении ИМ в РТМЛ с двумя и более тканевыми антигенами (помимо кишечного) менее 0,8 и более 1,2, полученном у больных ЯБ в стадии обострения до начала лечения, можно прогнозировать тяжелое течение заболевания.

П р и ме р 1. Больной Г.,46лет. Диагноз при поступлении: язвенная болезнь желудка в стадии обострения, Объективно: состояние удовлетворительное, кожные покровы и слизистые обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидная железа не увеличены. Над легкими дыхание везикулярное. Хрипов нет. ЧД 16/мин. Тоны сердца приглушены, ритм правильный. АД

135/75 мм рт.ст., ЧСС 72 уд/мин. Живот мягкий. болезненный при попытке пальпации в эпигастрии. Печень и селезенка не пальпируются. перкугорно — не увеличены, Стул ежедневный, оформленный, обычной окраски. При эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС) выявлена язва угла желудка диаметром 0,7 см, умеренная гиперемия в указанной зоне. Остается неясным дальнейший прогноз течения заболевания. При посгановке РТМЛ исходные, до начал- лечения, величины ИМ составили с кишечным антигеном 0,47, с кардиальным 0,76, с почечным

1,12. Таким образом, РТМЛ положительна с двумя антигенами, один из которых кишечный. У данного больного прогнозируется тяжелое течен;е ЯБ. Действительно, у больного отмечается тяжелое течение заболевания (язвенный анамнез 15 лет) с ежегодными (2 — 3 раза в год) обострениями.

Пример 2. Больной К., 45 лет, Диагноз; язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки s стадии обострения. Жалобы: боли в эпигастрии сжимающего и сосущего характера, возникающие натощак, часто ночью.

Из истории заболевания: язва выявлена впервые в амбулаторных условиях при

ЭГДС две недели назад — язва на задней стенке луксвицы 12-перстной кишки диаметром 0,5 см с периульцерозным отеком.

ONективно: состояние удовлетворительное, кожные покровы и слизистые обычной окраски. Над легкими дыхание везикулярное. Тоны сердца звучные, ритм правильный, АД 130/70 мм рт.ст., ЧСС 74 уд/мин, Живот мягкий, болезненный при ггальпации в эпигастрии, Печень у нижнего края реберHoI дуги, селезенка не увеличена. Хотя у

1742725

Таблица 1 г—

Группа больных

Анти ген

Стимуляция !

ЯБЖ легкого и средней тяжести; течения (12) Кишечный

0.78«-0,07

0 85+0.08

0,88 «-О, 04

1,06«-0,05

1,10 «-0,07

i.10"-О.О-;

Кардиальный

Почечный

Я БЖ тяжелого .! течения (18) ! (Кишечный !

16

0,41 0,06

0.42+ 0,06

0,65 -0.03

0,71 -0,08

0.78 ««-0.0.

0,80 «-0.07

Кардиальный

5 1 г

Почечный данного больного язва выявлена впервые, однако данные клинико-инструментального обследования не позволяют с уверенностью говорить о дальнейшем течении ЯБДК, Результаты РТМЛ: ИМ с кишечным антигеном 0,76, с кардиальным 1,00, с почечным 1,12. РТМЛ положительна только с кишечным антигеном. У данного больного прогнозируется благоприятное течение заболевания. Действительно, в дальнейшем

ЯБДК протекала достаточно благоприятно, обострения возникали 1 раз в 2 — 3 года, язвенный дефект успешно рубцевался под действием антацидов, холинолитиков, обволакивающих, Пример 3, Больной Ф., 37 лет, Диагноз: язвенная болезнь 12-перстной кишки в стадии обострения, Объективно: состояние удовлетворительное, кожные покровы и слизистые бледные, чистые. Язык обложен густым белым налетом, Живот резко болезненный при попытке пальпации в эпигастрии справа. Печень и селезенка не пал ьпируются, ЭГДС: язва на передней стенке луковицы 12-перстной кишки диаметром 0,5 см и на верхне-задней 0,4 с,.

Результаты PTMfl: ИМ с кишечным антигеном 0,58, с кардиальным 0,92, с почечным 1,21. До начала r,å÷åíèÿ РТМЛ положительна с двумя тканевыми антигенами, что позволило прогнозировать тяжелое течение ЯБДК. Действительно, у данного больного язвенный анамнез 16 лет, с ежегодными осенне-весенними обострениями.

После окончания лечения РТМЛ также была положительна с двумя антигенами—

5 кишечным (ИМ 0,59) и почечным (ИМ 1,21).

Дальнейший прогноз ЯБДК неблагоприятен, необходима коррекция терапии либо хирургическое лечение.

Таким образом, использование данного

10 способа прогнозирования течения ЯБ позволяет уже при исходной — до начала лечения — постановке РТМЛ с несколькими, помимо кишечного, антигенами прогнозировать характер дальнейшего течения забо15 левания, индивидуально подбирать адекватную противоязвенную терапию и корректировать дальнейшее лечение. Указанные положения имеют принципиальное значение в лечении ЯБ. Точность указаннс20 го способа 67%, Формула изобретения

Способ прогнозирования течения язвенной болезни путем добавления к взвеси лейкоцитов больного тканевого антигена, 25 проведение миграции лейкоцитов с последующей оценкой реакции, о т л и ч а ю— щ и и я тем, что, с целью повышенил точнэст;. способа, к отдельным пробам взвеси лейкоцитов добавляют антигены, 30 полученные из различных органов, определ"-,þò индекс мйгра„ии лейкоцитов и при значении его менее 0,8 и более 1,2 с двумя или более антигенами прогнозируют тяжелое течение заболевания.

35 — — — тмиграции Количество положительнь х реакций

1742725

Таблица 2

Таблица 3 лет) язвенным анамнезом, обострениями заболевания чаще 2 раз в год, чередованием обострений и неполных ремиссий, Составитель Г. Крюкова

Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор Т, Палий

Редактор В. Петраш

Заказ 2281 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород. ул.Гагарина, 101