Способ разделения гемоглобина крови на гем и глобин

 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской промышленности, и касается разделения крови на гем и глобин. Целью изобретения является повышение концентрации тема и глобина. Способ осуществляется посредством диссоциации гемоглобина эритроцитов на гем и глобин и их разделения, при этом диссоциацию проводят в интервале рН 1,4-3,0, а разделение - осаждением водным раствором карбоксиметилцеллюлозы при соотношении осадителя и белка 1:75- 1:10. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 3728547/14 (86) РСТ FT 83/00022 от, 11.03.83 (22) 11.04.84 (31) 830589 (32) 22.02,83 (33) Fl (46) 07;05.92. Бюл. ¹ 1? (71) Валтион Текниллинен Туткимускескус (FI) (72) Карин Аутио, Мартти Киесваара и Ирье

Мялкки (FI) (53) 615.361.018,51/55(088,8) (56) J.Food Technol, 1981, У. 16, р. 81-91.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской промышленности, и касается способа разделения гемоглобина крови на гем и глобин.

Цель изобретения — повышение концентрации гема и глобина.

Способ осуществляется путем суспендирования клеток зритроцитов, отделенных от плазмы, в растворе кислоты, где гемоглобин диссоциируют на гем и глобин, иэ этого раствора гем осаждают водным раствором карбоксиметиллцеллюлозы, а глобин остается в растворе, Пример1. 100 r фракции эритроцитов, отделенных от плазмы, содержащей гемоглобин, причем общее содержание белка составляет 350 мг/г веса, разбавляют в 200 г воды и рН раствора доводят до 1,5 путем добавления 1,0 соляной кислоты. К данному раствору прибавляют 1,5%-ный раствор карбоксиметилцеллюлозы в воде в количестве, дающем массовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку, равное Ы 1732806 АЗ (я)5 А 61 К 37/14, 35/14,,35/18, 31/40 (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНА КРОВИ НА ГЕМ И ГЛОБИН (57) Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской промышленности; и касается разделения крови на гем и глобин.

Целью изобретения является повышение концентрации гема и глобина. Способ осуществляется посредством диссоциации гемоглобина эритроцитов на гем и глобин и их разделения, при этом диссоциацию проводят в интервале рН 1,4 — 3,0, а разделение— осаждением водным раствором карбоксиметилцеллюлозы при соотношении осадителя и белка 1:75 — 1:10. 2 табл. около 1:10. Прибавление карбоксиметилцеллюлозы повышает величину рН. и путем прибавления гидроокиси натрия рН доводят до 2,4, Центрифугирование с силой, соответствую(цей 8000 g, в течение 15 мин приводит к получению 70% общего белка в растворе, который имеет концентрацию белка 4,0%. Используя силу центрифугирования, соответствующую 10000 g, в течение.

30 мин выход Релка можно повысить до QO

85%, При использовании силы центрифуги- С) рования 1.0000 g содержание железа осадка (), составляет 1,8 и содержание белка осадка составляет 75%.

Первоначальное количество белка и железа 35 и 0,158 г соответственно. На сухой основе общее количество белка и железа в геме состаляет 5,25 и 0,126 r соответственно. Общее количеоство карбоксиметилцеллюлозы составляет 3,5 г главным образом в фракции гема.

Пример 2. 100 r эритроцитов (300 мг белка/г), отделенных от плазмы, раэбавля1732806

20

45

Таблица 1

Выхо, Кон ент а ия белка.

Ф ак ия белка

0,40

Во влажном состоянии ют 500 rводы,,рН раствора доводят до 1,4 с помощью IM водного раствора соляной кислоты и добавляют 2,010 г 0,2%-ного водного раствора карбоксиметил целлюлозы (класс замещения по крайней мере 1 1, весовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку составляет около 1:75), рН доводят до 2,4 и смеси позволяют отстояться в течение 15 мин. Осажденный комплекс гем-карбоксиметилцеллюлоза отделяют от белкового раствора центрифугированием (2x1 ч, 15000g).

Результаты опытов приведены в табл.1 и 2.

Первоначальное количество белка и железа составляет ЗО и 0,135 соответственно, Количество белка и железа после второго центрифугирования в фракции гема составляет 1,5 и 0,110 г соответственно.

Пример 3, 100 г фракции эритроцитов, отделенной от плазмы, причем общее содержание белка составляет 360 мг/г мокрой массы, разбавляют 200 г воды и рН раствора доводят до 1,8 путем добавления 1 М соляной кислоты. К этому раствору прибавляют

1%-H ûé раствор карбоксиметилцеллюлозы в воде, что дает весовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку, равное 1;20.

После прибавления раствора карбоксиметилцеллюлозы рН доводят до 3,0 прибавлением 1М гидроокиси натрия. После центрифугирования с силой 10000g в течение 30 мин получают 70 общего белка в растворе, который имеет содержание белка

4,7%. Содержание железа и белка осадка составляет 0,8 и 84 соответственно.

Первоначальное количество белка и железа составляет 36 и 0,158 r соответственно. Количество белка и железа в фракции гема на сухой основе составляет 10,8 и 0,123 г соответственна.

П. р и м е.р 4.. 10C г.кровяных телец (300 40 мг белка/г), отделенных от плазмы, разбавляют 500 г воды. рН раствора доводят с помощью 1М водного раствора соляной кислоты до 1,4 и добавляют 2010 r 0,02%-ного водного раствора КМЦ. Смесь оставляют стоять в течение 15 мин и осажденный гемКМЦ-комплекс отделяют от белкового раствор центрифугированием.

Пример 5. 100 r фракции гемоцитов, отделенной от плазмы и содержащей гемоглобин, общее содержание белка в котором составляет 350 мг/г влажного веса, разбавляют 200 r воды и показатель рН этого раствора доводят до 1,4.-1,5 посредством

55 добавления 1,0 M раствора хлористоводородной кислоты, к этому раствору добавляют 1,5 М раствор карбоксиметилцеллюлозы (СМС) в воде в количестве, позволяющем достичь весового соотношения карбоксиметилцеллюлозы и белка, равное примерно

1:10. Добавление раствора карбоксиметилцеллюлозы увеличиваеет значение рН, и в результате добавления хлористоводородной кислоты или гидроокиси натрия гарантируется сохрнность показателя рН в интервале от 2,4 до 3,0. Обрзовавшийся осадок отделяют от раствора, центрифугируют с приложением силы, соответствующей .

8000 g, в течение 15 мин. 70% общего содержания белка получают в растворе, концентрация белка в котором равнялась 4,0 с использованием центробежной силы, соответствующей 10000 g в течение 30 мин, при этом выход белка можно увеличить до 85.

Осадок можно использовать в качестве препарата гема либо гем можно выделить из этого осадка. При использовании центробежной силы, равной l0000 g, содержание железа в осадке равнялось 1,8%, а содержаwe белка 75, П р, и м е р 6. 100 г гемоглобинсодержащей фракции эритроцитов, (350 мг белка/г) отделенной от плазмы, разбавляют с помощью 200 г воды и рН полученного раствора доводят соляной кислотой до столь низкого значения, что рН этого раствора при добавлении 230 г 1,5%-водного раствора карбоксиметил целлюлозы оставался ниже 3.

Полученный осадок отделяют от раствора центрифугированием (8000 g, 15 мин). Перед центрифугированием рН должен быть в интервале 2,2 — 3,0, чтобы обеспечить осаждение карбоксиметилцеллюлозой..

По известному способу окончательная концентрация белка равна 0,038%, выход

67, раствор гема получен разбавлением и требует дополнительной концентрации.

Формула изобретения

Способ разделения гемоглобина крови на гем и глобин путем диссоциации гемоглобина эритроцитов и разделения гема и гло.. бина,отл ича ющийся тем,что, с целью повышения концентрации гема и глобина, диссоциацию проводят в интервале рН 1.,43,0, а разделение — осаждением водным раствором карбоксиметилцеллюлозы при соотношении осадителя к белку 1:75 — 1:10.

1732906

Та.блица 2

Фракция гема

Концентрация железа, Концентрация белка, На с хой основе

3,50

Составитель С. Мельникова

Техред М.Моргентал Корректор -Т. Палий

Редактор Н. Яцола

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 г

Заказ 1592 Тираж Подписное. ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5