Способ оценки морозоустойчивости гибридных сеянцев винограда

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (Я2ю А 01 Н 1j04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4737778/13 (22) 18.09.89 (46) 30.01.92. Бюл. hk 4 (71) Научно производственноа обьединвние

"Виноград" (72) P.Ò. Рябчун. С.А. Марутян и H.Î. Арестова (53) 634.836.762(088.8) (56) Методы определения морозоустойчивости винограда и плодовых. Под ред. М.Д.

Кушниренко. Кишинев, 1981, 7с.

Марутян, С.А. Биохимические аспекты формирования и диагностики мороэоустойчивости виногоадного растения. Ереван, 1978, с. 34-36.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции винограда на морозоустойчивость, для ранней диагностики потенциальной мороэоустойчивости, в исследованиях по физио логии и биохимии винограда.

Известен способ оценки морозоустойчивости методом прямого промораживания изолированных частей растений при различных температурах в специальных холодильных установках с последующим определением степени повреждения.

Недостатком этого способа является то, что он довольно трудоемок, требует большого количества побегов в одном образце, что может привести к гибели гибридного растения, представленного, как правило, в единственном числе, Поэтому использование Ж „1708204 Al (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ МОРОЗОУСТОЙЧИВОСТИ ГИБРИДНЫХ СЕЯНЦЕВ ВИНОГРАДА (57) Изобретение может быть использовано в виноградарстве, а именно в селекции винограда на мороэоустойчивость. Целью. изобретения является сохранение селекционного посадочного материала и ускорение способа. Пробы растений винограда, преимущественно листьев, отбирают на определенных узлах побегов в начале и в конце цветения, затем иэ них получают ферментный препарат. Активность полифенолоксидаэы определяют фотометрическим методом, и чем выше это значение. тем больше потенциальная мороэоустойчивость гибридного сеянца. 2 табл. указанного способа с гибридным материаавий лом затруднительно, Наиболее близким к изобретению является способ оценки мороэоустойчивости ви- О ноградного растения, включающий отбор Q0 проб в виде побегов, получение иэ них фер- Я ментного препарата, определение активно- © сти полифенолоксидазы и пероксидазы фотометрическим методом.

Недостатком э1ого способа является то, что он предусматривает использование в осенне-зимний период черенков винограда после их промораживания, заготовка которых на гибридных растениях, представленных, как правило, в единственном числе, приводит к их ослаблению или даже гибели, вследствие этого период оценки удлиняется. Кроме того, по способу-прототипу невозможно сохранить весь полученный се30

55 лекционный материал, который может погибнуть вследствие срезки побегов для промораживания.

Целью изобретения является ускорение способа и сохранение селекционного материала.

Способ заключается в том, что в листьях определяют активность полифенолоксидазы, отбор проб для определения ее активчости проводят в начале и в конце цветения винограда, и чем выше активность к концу цветения, тем больше потенциальная морозоустойчивость гибридного сеянца.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробы растений винограда, преимущественно листьев (в целях сохранения селекционного посадочного материала), отбирают в утренние часы на определенных узлах побегов, например девятом — двенадцатом, в начале и конце цветения. Отобранные пробы по возможности быстро доставляют с поля s лабораторию в полиэтиленовых пакетах. С поверхности листьев удаляют пыль мягкой кистью или ватой. Для определения используют части листовой пластинки, находящиеся между жилками, Тормозящее действие различных веществ листа на активность ферментов ликвидируют многократной обработкой охлажденным ацетоном до удаления пигментов, фенольных и других растворимых в ацетоне веществ, влияющих на точность результатов. Для этого ножницами измельчают 6 — 7 отобранных и очищенных листьев, помещают их в фарфоровую ступку и растирают (при использовании побегов берут ткань луба, снятую с трех-четырех побегов, мелко нарезанную среднюю пробу обрабатывают ацетоном, растирают и т.д.). Затем все заливают ацетоном, хорошо перемешивают, пестик снимают, ацетон осторожно сливают через бумажный фильтр, Обработку повторяют 5-6 раз до полного обесцвечивания осадка. Затем осадок высушивают при комнатной температуре до полного удаления следов ацетона. Полученный осадок служит в качестве.ферментного препарата и сохраняет свою активность в течение недели при хранении в холодильнике. Ча аналитических весах отвешивают три навески по 40 мг сухого препарата и помещают в мерные пробирки объемом 10 мл, Приливают к ним

2,4 мл смеси, содержащей 5/6 частей пирогаллола и 1/6 часть дистиллированной воды. Навеску и смесь в пробирке осторожно взбалтывают, оставляют в термостате при

25 С, Через 10 мин реакцию приостанавливают прибавлением 1 мл 20 -ной серной кислоты. Затем в пробирку до метки доливают охлажденный серный эфир, закрывают пробками и взбалтывают резкими движениями. Образовавшийся в результате реакции пурпурогаллин переходит в эфир. Пробирки ставят в воду (1-5"С) и фотометрируют эфирный раствор в кюветах толщиной 10 MM при длине волны 400-480 мм, Количество пурпурогаллина, образовавшегося в пробирке, является показателем активности полифенолоксидазы.

Многолетние определения активности полифенолоксидазы листьев у десяти сортов за весь период вегетации показали, что в период цветения ее активность низкая у всех изучаемых copms. 8 конце цветения или сразу после окончания цветения постоAHHQ отмечалось увеличение ее активности в различной мере в зависимости от степени мсрозоустойчивости сорта (см. табл. 1). При этом повышение активности полифенолоксидазы связывают с распадом ауксинов, способствующих росту побего.-

Таким образом, степень повышения активности полифенолоксидазы к концу цветения дает возможность оценить потенциальную морозоустойчивость гибридного материала уже на 2-3-й год развития без затрат времени на дальнейшее выращивание, промораживание и изучение большого количества гибридных растений по признаку морозоустойчивости, Параллельными исследованиями у гибридных сеянцев двух семей (Восторг х Шамбурсен и Восторг х Сейв Виллар) выявлены достоверные различия между сеянцами внутри каждой семьи как по морозаустойчивости, так и по увеличению активности полифенолоксидазы в начале и в конце цветения.

Результаты промораживания на 3-й год вегетации подтвердили выводы о более высокой морозоустойчивости сеянцев, выделенных по данным активности полифенолоксидазы (см, табл. 2).

Формула изобретения

Способ оценки морозоустойчивости гибридных сеянцев винограда, включающий определение активности полифенолоксидазы, по значению которой ведут оценку, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа и сохранения селекционного материала, активность полифенолоксидазы определяют в листьях дважды, в начале и в конце. цветения, рассчитывают степень увеличения активности в конце цветения, и чем выше это значение, тем больше потенциальная морозоустойчивость гибридного сеянца. i708204

Таблица 1

Активность полифенолоксидазы листьев (в миллиграммах пурпурогаллина на 1 г ацетонового препарата за 10 мин) в зависимости от различной морозоустойчивости сортов

Сорт

Морозоустойчивость по дан ным энциклопедии виноградарства, С

Степеньувеличения активности в конце цветения

Активность полифенолоксиазы

В начале цве- В конце или тения сразу после цветения (-27) - (-гЬ) (-26) — -27):

7,2 +0,33

3,1 0,09 в 2-3. раза

3,0 и 0,08 5,7 0,22

1,9

69 (-24) — (-25) (-22) — (-23)

f-18) — -19)

До,-12

1,3

1,2

1,1

1,0

17

* аименьшая существенная разность для 95 -ного уровня вероятности.

"* Относительная ошибка (точность опыта).

Таблица 2

Изменение активности полифенолоксидазы листьев в период вегетации и сохранность глазков после действия температуры -25 у гибридных сеянцев семьи CB 12-375хВосторг с различной морозоустойчивостью

1984-1986 rr

Саперави веверный

Фиолетовый ранний

Подвой Кобер

5ББ

Заладенде

Молдова

Тайги белый

НСР05

p ) **

3,0 +0,09

3,0 + 0,08

2,9 + 0,07

2,9+ 0,07

0,3

2,6

3,9+ 0,20

3,7 0,10

3,3 008

3,0 й0,09

0,6

2,7

Сохранность центральных почек после воздействия температурой

-25"С. в районе Северного

Кавказа, 8

1708204

Продолжение табл. 2

Составитель И,Решетникова

Техред М.Моргентал Корректор Т.Палий

Редактор H.Øâûäêàÿ

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул,Гагарина. 101

Заказ 371 Тираж Подвисное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям ори ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., 4/б