Способ определения 4-аминоантипирина в биологических жидкостях

 

Иэобретение относится к медицине , в частности к биохимии. Целью изобретения является повышение специфичности пероксидазного метода определения А-аминоантипирина в биологических жидкостях. К исследуемым пробам прибавляют раствор цнстеина до конечной концентрации 40-50 мкг/мл, Чувствительность метЬда 2,0 мкг/нп, точность 4,5%. 1 табл„

союз соеетсних социллистичесних

РЕСПУБЛИК

А1 (51)5 (01 ((33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ пО изоБРетениям и ОтнРытиям (21) 4760330/14 (22) 20.11.89 (46) 15.01.92. Бюл. 1(- 2 (71) Винницкий медицинский институт им. Н.И.Пирогова (72) А.А.Пентюк, В.М.Истов(ин, P.À.ÌóñèH, Г.А.Лычик, Н.Б.Луцюк и В.Г.Илика (53) 612. 111. 1:612.460. 176 (088.8) (56) Рес8 . et al. Cl in Chem 1983, v . .29, Р 10, р . 1798-1802.

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии, и может быть использовано для определения 4-аминоантипирина (4-AMI> в присутствии амидопирина в биологических жидкостях.

1(елью изобретения является поныл(ение специфичности метода определения

4-аминоантипирина.

В таблице показано влияние цистеина на оптическую плотность 4-ААП и амидопирина.

Из таблицы видно, что прибавление цистеина практически полностью устраняет окраску продуктов окисления амидопирина, но не влияет на интен1 сивность окраиивания продуктов окисления 4-ААП, что дает возможность определять 4-ААП н присутствии амидопирина, при этом оптимальная концентрация в конечном объеме находи гся в диапазоне 40-50 мкг/мл.

Пример выполнения.

Реактины: раствор пероксидаэы иэ хрена в 0,1 И ацетатном буфере рН 4,7

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ 4-АМИН(:АНТИПИРИНА В БИОЛ(ЙОГИЧЕСКИХ ИЦ К()СТИХ (57) Изобретение относится к медицине, н частности к биохимии. !(елью изобретения является повы(чение специфичности пероксидазного метода определения 4-аминоантипирина в биологических жидкостях. К исследуемым пробам прибавляют раствор цистеина до конечной концентрации 40-50 мкг/мл. Чувствительность метода 2,0 мкг/ю, точность

4,5Х. 1 табл. с концентрацией 10 ЕД/мл р перекись водорода концентрации 4 мкмоль/мл; хлороформ; раствор цистеина 5 мг/мл.

Ход определения.

К 2 частям мочи (2 мл) прибавляли

5 частейхлороформа (5 мл) и экстрагиронали 10 мин в колбе с притертой пробкой, затем центрифугиронали

10 минут и отбирали хлороформный экстракт, который затем уларинали на водяной бане при 40-60 (:.

К сухому экстракту добавляли 2 части воды (2 мл) и встряхивали 5 мин для его растворения.

В чистую пробирку вносили 0,1 часть раствора перексидазы н 0,1 М ацетатном GyAepe с рН 4,7 (0,1 мл), прибавляли 0 1 часть раствора перекиси водорода (0,1 мл), 1 часть пробы (1 MJ1). С одновременным включением секундомера через 30 с прибав:(нли

0,02 части раствора цистеин» (0,02 ип) и измеряли оптическую плотность через 2 мин после прибавле! 7(15745 формулаизобретения пил пробы. Фотометрирование проводили лри длине волны 530 нм и кювете с длиной светового пути 1 см, объемом

0,4 мл.

Количество 4-AAII определяли по

5 градуироночному графику.

Пример определения 4-аминоантипирина в крови.

Реактивы аналогичны при определении в моче °

Ход определения, К 1 мл плазмы крови прибавляли

5 мл хлороформа и экстрагиронали !

0 мин и колбе с притерной пробкой, после чего центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин, отбирали хлороформный экстракт и упаривали на водяной бане при 40-60 (;. К сухому остатку о, добавляли 0,5 мл 0,1 M ацетатного буфера с рН 4,7, встряхивали и прибавляли 0,1 мл раствора пероксидазы хрена и 0, 1 мл раствора перекиси водорода с. одновременным включением секундомера, через 30 с прибавляли

0,02 мл раствора цистеина и измеряли оптическую плотность через 90 с, после прибавления раствора цистеина, фотометрирование проводили при длине волны = 530 нм в кювете с длиной сне30 тового пути 1 см, объемом 0,4 мл.

Количество 4-аминоантипирина определяли по градуировочному графику.

Чувствительность и точность способа составляет 2,0 мкг/мл и 4,5/ соответственно.

Способ определения 4-аминоантипирина н биологических жидкостях путем его экстракции, добавления окислителя н присутствии пероксидазы хрена и спектрофотометрирования окрашенных продуктов, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения специфичности, н реакционную смесь добавляют раствор цистеина при

его конечной концентрации 40-50 мкг/мл.

0,380

0,139

О, 136

0,079

0,013

0,002

0,029

0 340

0,351

0,376

0,365

О, 328

0,331

0,345

II р им еч а ни е. В пробе coaepma лось 50 мкг

4-AAII или амидопирина,Цистеин прибавляли через

30 с после добавления всех компонентов.

Гостанитель В.1(атюшин

Редактор 1(.Горват Техред M.Moðãåíòàë Корректор Т.Палий

Заказ 19(1 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР !

13(135, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент", г.укгород, ул. Гагарина, 101