Способ получения кристаллического гемоглобина

ОПИСАН ИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Рес и у блик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 17.XII.1962 (№ 808749/31-16) Кл. 301г, 2О1 с присоединением заявки №

Приоритет

Государственный комитет по делам изобретений м открытий СССР

МПК А 61k

3 ДК 612.111.11.615.45 (088.8) Опубликовано 27Х111.1965. Бюллетень № 17

Дата опубликования описания 8.Х.1965

Авторы изобретения

М. Ф. Гулый, П, Д. Дворникова и T. Н. Печенова

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ГЕМОГЛОБИНА

Предмет изобретения

Подггисная аругггга А3 189

Известные способы получения кристаллического гемоглобина из охлажденной гемолизированной крови сложны и не обеспечиваюг удовлетворительного качества гемоглобина.

С целью улучшения качества целевого продукта и упрощения процесса, предложено в гемолизированную кровь крупного рогатого скота добавлять насыщенный раствор сернокислого аммония и отделять балластные белки. Прозрачный раствор подкисляют до рН около 6,0 — 6,5, добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония, выделившиеся кристаллы гемоглобина отделяют, перекристаллизовывают, подвергают диализу и лиофилизации.

Для получения кристаллического гемоглобина цитратную или оксалатную кровь, полученную на бойне, оставляют в холодильнике на ночь, затем центрифугируют, плазму отбрасывают, а эритроциты 3 раза промывают

1О -ным раствором поваренной соли. На каждые 100 лл отмытых эритроцитов добавляют

20 гил дистиллированной воды и 10 лл эфира, смесь перемешивают и оставляют стоять до полного гемолиза (контролируют под микроскопом). К гемолизату добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония до концентрации последнего около 45%, быстро перемешивают и фильтруют в холодильнике через смоченный водой складчатый фильтр.

Осадок балластных белков отбрасывают, прозрачный фильтрат подкнсляют разбавленной уксусной кислотой до рН 6,0 — 6,5 (на

100 тг г фильтрата 9 — 10 лг г 0,1 хг уксусной кислоты) и постепенно при перемешивании добавляют 56 тгл,насыщенного раствора сульфата аммония (при этом появляется помутнение). При стоянии раствора в холодильнике при 0 — 5 С кристаллизация начинается через

10 4 — 5 час и заканчивается через 2 — 4 сут. Добавление затравки кристаллов ускоряет кристаллизацию. Отфильтрованные или отцентрифугированные кристаллы гемоглобина растворяют в небольшом количестве воды, подкис15 ляют уксусной кислотой до рН 6,0 — 6,5 и постепенно при интенсивном перемешизании добавляют насыщенный раствор или порошок сульфата аммония. Перекристаллизацию повторяют еще 3 — 4 раза, после чего гемоглобин

20 днализуют до полного удаления сульфата аммония против холодной (Π— 8 С),водопроводной воды. Отмытый гемоглобин отфильтровывают и высушивают лиофилизацией.

Способ получения кристаллического гемоглобина из охлажденной гемолизированной ч0 крови, от,гичаюгцийся тем, что, с целью улучi 74326

Составитель В. А. Таратута

Редактор А. И. Пименова Техред А. А. Камышникова Корректор Е. Д. Курдюмов»

Зака 2675/8 Тираж 450 Формат бум. 60;х,90 /8 Объем 0,07 изд. л. Цена 5 коп.

ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретений и открытий СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4. Типография, пр. Сапунова, 2 щения качества целевого продукта и упрощения процесса, в гемолизирозанную кровь крупного рогатого скота добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония, отделяют балластные белки, прозрачный раствор подкисляют до рН около 6,0 — 6,5, добавляют на. сыщенный раствор сернокислого аммония, выделившиеся .кристаллы гемоглобина отделяют, перекристаллизовывают, подвергают

5 диализу и лиофилизации.