Способ получения полиакриламидной основы плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов

 

Изобретение относится к получению полмакриламидной основы плотной питательной среды дня культивирования микроорганизмов . Изобретение позволяет повысить производительность способа получения основы при упрощении технологии процесса, а также расширить функциональные и эксплуатационные возможности основы за счет сополимеризации акриламида и N,N1- метиленбисзкриламида под роздействием ускоренных электронов поглощенной дозой 15,9-19 2 кГр при токе пучка электронов 0,4-0,6 мА и массовом соотношении акриламида и N,N -метиленбисакриламида (4,0- 20,0):(0,10-0,32) 3 табл

СОВХОЗ СОВЕ ГСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВ Е ННЫ Й КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4382663/05 (22) 18.02.88 (46) 07.12.91. Бюл, ¹ 45 (71) Институт физической химии им. Л. В.

Писаржевского и Киевский медицинский институт им, А. А, Богомольца (72) Н. Е. Краснюк, B. В. Шлапацкая, Н. А.

Высоцкая, Т. И. Крайнюкова, В. В. Гашинский и Л, Г. Шевчук (53) 678.745(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 977466, кл. С 08 F 220/56, 1979, Патент США

N 3488268, кл, С 08 g 41/02, опублик. 1970.

Авторское свидетельство СССР

N1654332,,кл,,С 12 N 1/20, 30.01.81.

Изобретение относится к химии полимеров, в частности к технологии получения полиакриламидного геля, применяемого в микробиологии в качестве плотной основы питательных сред для культивирования микроорганизмов, Целью изобретения является упрощение технологии получения плотной питательной среды, повышение производительности процесса при расширении функциональных и эксплуатационных возможностей основы.

Пример 1. Для получения основы готовят реакционную смесь. Для этого 2,1 r

N,N -метиленбисакриламида растворяют в

500 мл дистиллированной воды, подогревают до 60 С, добавляют 80 г акриламида.

„„SU „„1696436 А1 (ч) С 08 F 2/46, 220/56, С 12 N 1/00 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИАКРИЛАМИДНОЙ ОСНОВЫ ПЛОТНОЙ ПИТАТЕЛЬH0Yi СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

МИКРООРГАНИЗМОВ (57) Изобретение относится к получению полиакриламидной основы плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов. Изобретение позволяет повысить производительность способа получения основы при упрощенил технологии процесса, а также расширить функциональные и эксплуатационные возможности основы за счет сополимеризации акриламида и N,N1 метиленбисакриламида под воздействием ускоренных электронов поглощенной дозой

15,9 — 19,2 кГр при токе пучка электронов

0,4 — 0,6 мА и массовом соотношении ахрила1 мида и N,N -метиленбисакриламида (4,020,0):(0,10 — 0,32). 3 табл. размешивают до полного растворения и доводят раствор дистиллированной водой до

1000 мл. Реакционная смесь содержит мономеры в массовом соотношении акриламида к метиленбисакриламиду равным

8,0;0,21. Смесью заполняют чашки Петри в количестве, обеспечивающем толщину диска 3 мм. Чашки с реакционной смесью помещают в герметичные пакеты-контейнеры из полиэтиленовой пленки и размещаю1 на поддон. Поддоны с партией чашек Петри в упаковке устанавливают на конвейер, который перемещает партию со скоростью 10 см/с в зону облучения под раструб ускорителя электронов ЭлТ-1,5 А, где партия непрерывно облучается поглощенной дозой

15.9 кГц при энергии электронов 1,3 М: В и токе пучка электронов 0,5 мА.

1696436 аналогично примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 15,9 кГр и токе пучка электронов 0,4 мА. Полученный гель используют в качестве основы для приготовления плотной питательной среды аналогично примеру 1 за исключением того, что гель пропитывают жидким суслом, тесткультурой служит Candida albicaus. Среда обладает теми же свойствами, что и в примере 1, Культура вырастает в типичной форме.

Пример 8, Для приготовления реак1 ционного раствора используют 3,3 г N,N— метиленбисакриламида и 30 г акриламида.

Реакционная смесь содержит акриламид и

- N,N -метиленбисакриламид в соотношении ,3,0;0,33. Образцы основы готовят по примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 19,2 кГр при токе пучка электронов 0,5 мА. Полученный гель вязкий, не пригоден для работы.

R р и м е р 9. Для приготовления реакционного раствора используют 1,3 г N,N-метиленбисакриламид и 220 г акриламида.

Реакционная смесь содержит акриламид и

N,N-метиленбисакриламид в соотношении

22,0:0,13. Далее образцы основы готовят по примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 18,6 кГр при токе пучка электронов 0,5 мА, Полученный гель используют в качестве основы для приготовления плотной питательной среды по примеру 1 за исключением того, что гель пропитывают бульоном Хоттингера и в качестве тест-культуры используют Staureus, Е. (Ь соИ. Полученные среды не пригодны для работы, Тест-культуры вырастают в виде не характерных точечных сухих колоний.

Пример 10. Приготовление реакционной смеси и образцов основы и роизводят аналогично примеру 1 за исключением того, что облучение проводят поглощенной дозой

19,5 кГр. Полученный гель хрупкий, к работе не пригоден.

Пример 11. Приготовление реакци. онной смеси и образцов основы производят аналогично примеру 1 за исключением того, что облучение проводят поглощенной дозой

15,6 кГр. Полученный гель тянется за бакте5

45 риологической петлей, что усложняет посев микроорганизмов. Основа к работе не пригодна.

Пример 12. Реакционную смесь и образцы основы готовят аналогично примеру 1 за исключением того, что облучение проводят при токе пучка электронов 0,8 мА, Полученный гель неоднороден, не пригоден для использования в качестве основы, Возможность получения предлагаемым способом полиакриламидной основы заданной плотности, способной сохранить свои свойства в течение длительного времени, подтверждают данные по определению условно-мгновенного модуля упругости, приведенные в табл. 1 для примеров 1 — 7.

Данные, позволяющие количественно охарактеризовать адгезионные свойства основы по результатам испытаний на сдвиг полиакриламидного геля, полученного предлагаемым и известным способами, приведены в табл. 2.

Испытания по определению предела прочности при сдвиге проводят на разрывной машине PM-30-1 при скорости движения зажима 200 мм/мин и толщине образца (д) 3,3 мм по известной методике.

Образец-гель полимера помещают между пластинами из материала чашки Петри (полистирол).

B табл. 3 приведены физические и биологические показатели качества полиакриламидной основы питательной среды.

Формула изобретения

Способ получения полиакриламидной основы плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов путем

I сополимеризации акриламида и N,N -метиленбисакриламида, отличающийся тем, что, с целью повышения производительности при упрощении технологии процесса и расширения функциональных и эксплуатационных возможностей основы, сополимеризацию проводят под воздействием ускоренных электронов поглощенной дозой

15,9-19,2 кГр при токе пучка электронов

0,4 — 0,6 мА и массовом соотношении акриламида и N,N -метиленбисакриламида (4,01

20,0):(0,10 — 0,32).

1696436

Модуль упругости, I О Па (нагрузка 1 г,радиус индептора 1 мм) Режим облучения (при энергии электронов

1,3 МэВ) Соотношение акриламида и

N, М ;метиленбисакриламида в основе

Пример

Ток пучка,. мА

После 2 дней После 1,5 года хранения хранения

Поглощающая доза, кГр

2,6

2,7

2 5

3 4

4,9

5,1

7,0: 0,28

8,0: 0,21 !

5,0:0,12

2 ь

2,8

4,8

3,5

4,0

Режим облучения при энергии 1 3 мЭВ cg сдвигc3 г/см (0 = 3,3 мм) Соотношение акриламида и метиленбисакПример

Примечание

Поглощаю- Ток пучка, щая доза, мА кГр риламида

3

5

7

8к

18,6

19,5

15,6

15,9

54,5

46,5

34,2

50,2

:0,13

0,21

0,21

0,21

0,5

Q,5

0,5

«I I»

0,28

0,21

:0i12 I1 2

14,8

20,3

7,0;

8,0:

15„0! 8i0:У,21

2 5,0:0,30

3 7,0:0,28

4 4,0:0,32

5 12,0:9,10

6 15„0:0,11

7 20Ä0:0,13

10к 8,0;0,21

9к 22, О:0,13

Известный способ

2

8,0:0,21

5,0:0,30

7,0:0,28

4,0:0,32

12,0:0,10

15ло Ол!!

20,0:0,13

3,0:0,33

9к 22,0

10к 8,0:

11к 8,6:

12к 8,0:

Известный способ !

15,9

18,1

11,6

19ь2

18,6

17,0

15 9

19ь5

1,8,6

15,9

18,1

17,6

19,2

18,6

17ь 0

15,9

19,2

0,5 о,6

0,4

0,5 о, 4

9 5

0„4

Ол5

Оь5 о,б

0,4

0,5

0,4

0 5

0,4

0,5

0,5

2,8

2 5

2 ь

2,3

3 3

4„8

4 9

6,3 б,б

39 3

35 3

36,1

35,1

"4,3

45,4

48,3

18,4

Таблица1

Та бли ца2

Не-пригоден в качестве основы

То же

« I I

1аблица3

Биологические показатели оценки питательных сред

C cq. сдви t а, г/см

Полиакриламидная основа по способу

Соотношение акриламида и

N,N -метилен" бисакриламида (!одуль упругости

10 Пв

Эффективность (выход биомассы в млрд. микробных клеток) Чувствительность (количество микробных клеток в аз. вед.10 6, 1 . ) 94/4 14,8

92/2 15,0

92/3 14,2

97/8

96/4

97/6

7,0:0,28

8,0;0,2 1

15,0:0,11

36,1

39,3

45,4

2>7

2,8

4,8

12,5

13,0

12,1

95/8

98/6

96/5

80/4

85/2

84/1

7,0:0,28

8,0:0,21

15,0:0,12

14,2

15>3

15,4

2,7

2,8

4,8

11,2

14,0

20,3

10,7

11,2

lI,7

Редактор И,Дербак

Заказ 4275 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНГ ССС

113035. Москва. Ж-35. Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Уж!ород. ул.Гагарина. 101

Предлагаемый

2

Известный

2

Составитель Г.Русских

Техред М.Моргентал Корректор Э.Лончакова