Способ определения активности фагоцитоза лейкоцитов в сосудистом русле

 

Изобретение относится к медицине и физиологии и может быть использовано в клинической и экспериментальной работе для определения активности фагоцитоза лейкоцитов в различных отделах сосудистого русла и преимущественного воздействия лечебных факторов на один из отделов этого русла. Цель изобретения - повышение точности определения фагоцитоза лейкоцитов в различных отделах сосудистого русла. Новым в предлагаемом решении является исследование комплекса показателей фагоцитоза в мазке и литре крови, определение их абсолютных величин и величины знака (+, -),разницы каждого показателя в сравниваемых отделах и суммы знаков разниц . По совокупности предложенных показателей обследуемого и контрольной группы определяют изменение активности фагоцитоза лейкоцитов в том или другом отделе сосудистого русла. s Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ отделе сосудистого русла.

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4446317/14 (22) 21.06.88

46) 30.09.91.Бюл. М 36

1) Ужгородский государственный университет (72) M.È.Ëàçîðèê (53) 615.375 (088,8) (56) Справочник по лабораторным клиническим методам исследования/ Под ред.

E.À. Кост, Ь!., 1975, с. 57 57. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОЗА ЛЕЙКОЦИТОВ В СОСУДИСТОМ РУСЛЕ (57) Изобретение относится к медицине и физиологии и может быть использовано в клинической и экспериментальной работе для определения активности фагоцитоза

Изобретение относится к медицине и физиологии, в частности к иммунологии, и может быть использовано в клинической и экспериментальной работе для определения преимущественного воздействия лечебными факторами на один из отделов сосудистого русла.

Цель изобретения — повышение точности определения активности фагоцитоэа лейкоцитов в различных отделах сосудистого русла, Способ осуществляется следующим образом, У обследуемого забирают субстрат из двух различных отделов сосудистого русла, один из которых условно называют первым,, а другой — вторым. Например, при заборе крови иэ артерии и вены первым называют артериальный отдел, а вторым — веноэный.,, Ы„, 1681257 А1 лейкоцитов в различных отделах сосудистого русла и преимущественного воздействия лечебных факторов на один иэ отделов этого русла. Цель изобретения — повышение точности определения фагоцитоза лейкоцитов в различных отделах сосудистого русла. Новым в предлагаемом решении является исследование комплекса показателей фагоцитоэа в мазке и литре крови, определение их абсолютных величин и величины знака (+, -),разницы каждого показателя в сравниваемых отделах и суммы знаков разниц. По совокупности предложенных показателей обследуемого и контрольной группы определяют изменение активности фагоцитоэа лейкоцитов в том или другом

При заборе венозной крови и содержимого грудного лимфатического протока первым будет венозный отдел, а вторым — грудной лимфатический проток.

При изучении капиллярного отдела кровь забирают из мякоти пальца (капиллярная кровь КК), при исследовании венозного отдела, например, из локтевой вены (венозная кровь ВК). При изучении артериального отдела берут кровь или из артерии. или по методике акад. Казначеева В.П. Палец разогревают 30 с в водяной бане при

40 С и прокалывают кожу копьем.

8о взятых образцах крови определяет количество лейкоцитов и их отдельных форм в автоматизированных системах или пробирочным методом с подсчетом лейкоцитар- . ной формулы. Фагоцитоз ставят по Кост и

Станко. К одному капилляру Панченко све1681257 жеприготовленнаго 4 -ного раствора цитрата натрия добавляют 2 капилляра крови и

1 капилляр живой суточной культуры золотистого стафилококка, штамм 20 g, содержащих миллиард микробных тел в 1 мл.

Смешивают, выдерживают в термостате 1 ч при 37 С, готовят мазки, фиксируют и красят яде рн ы ми красителями. M икроскоп ируют и под иммерсией подсчитывают

100 нейтрофилов. При этом считают количество лейкоцитов, фагоцитировавших кокки, и определяют фагоцитарный индекс ФИ вЂ” процент фагоцитирующих лейкоцитов.

Подсчитывают количество кокков, поглощенных фагоцитирующими клетками. Путем деления количества поглощенных кокков на все подсчитанные клетки определяют фагоцитарное число ФЧ вЂ” количество поглощенных кокков одним нейтрофилом, Путем деления количества поглощенных кокков на количество фагоцитирующих клеток определяют число микробов фагоцита

ЧМФ. Количество активных фагоцитов литра КАФ определяют по формуле

КАФ = КЛ ПФ ФИ

100 100 где КЛ вЂ” количество лейкоцитов в 1 л в виде а х10 /л;

ПФ вЂ” процент фагоцитов из лейкоцитарной формулы;

ФИ вЂ” фагоцитарный индекс, Результаты записывают в виде числа, умноженного на 10 /л. Например: КАФ = 3,5 10 /л. Этот показатель определяет абсолютное количество лейкоцитов в 1 л, участвующих в фагоцитозе.

Процент активных лейкоцитов ПАЛ 1 л определяют по формуле

ПАЛ = — 100.

Kfl

Показа гель определяет ту часть лейкоцитов

1 л, которая реально участвует в фагоцитозе.

По формуле МЧ = КАФ ЧМФ определяют то количество кокков, которые поглощаются лейкоцитами 1 л. Показатель называют микробным числом и выражают в виде числа, умноженного на 10 /л, напри9 мер, 35 10 /л, При анализе полученных данных нецелесообразно использование показателя

ФИ, так как он весьма относителен и используется в определении КАФ. Если его учитывать, то им пользуются 2 раза. Поэтому при анализе ФИ самостоятельно не учитывают.

10

Полученные показатели фагоцитоэа в обоих исследуемых образцах исследуемого сравнивают с контролем и определяют снижение или повышение каждого показателя по сравнению с контролем. Затем сравнивают показатели обследуемого в обоих отделах. С этой целью из абсолютной величины показателя первого отдела вычитают абсолютную величину показателя второго отдела и определяют величину и алгебраический знак (+, -) разницы. Эта разница называется по сравниваемым отделам. При этом первый отдел указывается первым, а второй — после него, например, 15 капиллярно-венозная разница (КВР), артериовенозная разница (АВ Р), артериокапиллярная разница (АКР).Разница каждого показателя имеет величину или равна нулю (отсутствует). Значение разницы по алгебра20 ическому знаку называют плюсовым (+) или минусовым (-). Затем значение разниц ñóìмируют и получают алгебраическую сумму, например: три плюсовых значения, одно минусовое и одно нулевое в сумме дают плюс

25 2. По сумме значений разниц определяют снижение или повышение активности фагоцитоза в первом или втором отделе сосудистого русла. 8 тех же случаях, когда имеются затруднения, следует учитывать величину

30 разниц, в первую очередь такого наиболее обобщающего показателя как МЧ. . При повышении показателей фагоцитоза у обследуемого по сравнению с.контролем и плюсовой сумме знаков определяют

35 повышение активности фагоцитоэа лейкоцитов в первом отделе, а при минусовой сумме знаков — повышение активности во втором отделе.

При снижении показателей фагоцитоэа

40 у обследуемого по сравнению с контролем и плюсовой сумме знаков определяют снижение активности во втором отделе, а при минусовой сумме знаков — снижение активности фагоцитоэа лейкоцитов в первом от45 деле.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1, Больная X.Е,М., 48 лет.

Клинический диагноз: первичный деформи50 рующий полиостеоартроз с преимущественным поражением лучезапястных суставов; хронический спастический колит; миокардиодистрофия ХНКо. Дата исследования 17.02.1983.

55 Артериальный отдел (контрольная группа в скобках) ФЧ 9,03: (3,64 0,51); ЧМФ

18,43 (5,15 + 0,33); КАФ 1,9404 ° 10 /л (3,64 + 0,49 10 /л); МЧ 35,762 ° 10 /л

1681257 (18,3672 + 3,1824 10 /л); ПАЛ 32,3 (48,1 + дистого русла. Показатели разницы капил 2,25). лярного и венозного отделов (КАР) равны;

Капиллярный отдел: ФЧ 13,49 (3,71 - ФЧ 6,9, ЧМФ 4,47, КАФ вЂ” 0,622 10 /л, МЧ

+ 0,51); ЧМФ 22,1 (5,06 ": 0,33); КАФ 2 52" 0,345.10 /л, ПАЛ вЂ” 16,2, Сумма разниц ВКР

«10 /л (3,65 + 0,49.10 / ); МЧ 55,919 10 /л 5 равна +1 (плюс 1), что свидетельствует о (19,1922 + 3,563 10 /л); ПАЛ 37,2 (53,3 высокой активности фагоцитоза лейкоцитов

+ 3,45). в первом (капиллярном) отделе сосудистого

Анализ результатов артериального и ка- рус пиллярного отделов, В артериальном и ка- Заключение. У больной Х.Е.М.>48 лет, пиллярном отделах три показателя 10 страдающей первичным деформирующим фагоцитоза: МЧ, ФЧ, ЧМФ вЂ” достоверно полиостеоартрозом с преимущественным выше, чем в контроле, а КАФ и ПАЛ вЂ” ниже, поражением лучезапястных суставов, хроЭто дает основание заключить, что актив- ническим спастическим колитом, миокардиность фагоцитоза лейкоцитов в обоих отде- одистрофией, при исследовании лах у обследованной больной выше, чем в 15 капиллярного и венозного отделов сосудиконтроле. стого русла определено повышение активИз показателя 1-го отдела вычитаем со- ности фагоцитоза лейкоцитов в ответствующий показатель 2-го отдела и капиллярном отделе. получаем следующие величины артериока- . Пример 3. Больная К.А.А., 28 лет. пиллярной разницы (АКР): ФЧ вЂ” 4,43, ЧМФ 20 Клинический диагноз: ревматизм, н/ф; — 3,67, КАФ вЂ” 0,5796 10 /л, МЧ вЂ” 30,147 сложный митральный порок ХНКг . Дата

»10 /л, ПАЛ вЂ” 4,9. Все показатели разницы обследования 5.11.1981, имеют минусовое значение (знак "-"), сумма Артериальный отдел, ФЧ 1,94 (3,64 ++ . их равна минус 5(— 5). Следовательно, актив- +0,51); ЧМФ 3,96 5,15 0,33); КАФ 1,691 10 /n

9 ность фагоцитоэа лейкоцитов выше во вто- 25 (3,64 + 0,49 10 /л), МЧ 6,694 10 /л (18,3672+ ром отделе сосудистого русла. + 3,1824 10 /л); ПАЛ 33,8 (48,1 +. 2,25).

Заключение. У больной Х.Е.М,,48 лет, Веноэный отдел: ФЧ t,6 (3,97 +. 0,49); страдающей первичным деформирующим ЧМФ 3,33 (5,59 ": 0,49); КАФ 1.,579 ° 10 /л полиостеоартрозом с преимущественным (3,92 + 0,49 10 /л); МЧ 2,258 10 /л (22,2582 поражением лучезапястных суставов, хро- 30 - 3,393-10 /л); ПАЛ 33,6(55,3 +. 3,83). ническим спастическим колитам, миокарди- Аналиэ результатов артериального и веодистрофией, при исследовании ноэнога отделов. артериального и капиллярного отделов со- Абсолютные величины всех показателей судистого русла определено повышение ак- фагоцитоза в артериальном и веноэном отдетивности фагоцитоэа лейкоцитов в 35 лах "îñóäèñòîãî русла ниже,,чем в контроле. капиллярном (втором) отделе сосудистого Артериовенозная разница (АВР) равна: ФЧ русла. 0,34; ЧМФ 0,63: КАФ 0,112 10 /л; МЧ 1,433»

Пример 2. Больная Х.Е.M., 48 лет. »10"/л; ПАЛ 0,2. Все результаты разницы покаКлинический диагноз: первичный деформи- зателей плюсовые, сумма знаков разниц равна . рующий полиостеоартроз с преимущест- 40 плюс 5 (+5). Следовательно, у обследованной венным поражением лучезапястных больной активность фагоцитоза лейкоцитов суставов; хронический спастический колит; снижена во втором(венозном) отделе. миокардиодистрофия ХНКо. Дата исследо- Заключение: у больной К.А,А,,28 лет, вания 17.02.1983. страдающей ревматизмом со сложным митКапиллярный отдел: ФЧ 13,49 (3,71 + 45 ральным пороком с выраженной декомпен+ 0,51); ЧМФ 22,1 (5,06 +. 0,33); КАФ 2,52» сацией сердца. при исследовании к10 /л;(3,65 +. 0,49 ° 10 /л); МЧ 55,919 10 артериального и венозного отделов сосуди(19,1922 ч- 3,56810 /л}; ПАЛ37,2(53,3 3,45). стого русла определено снижение активноВенозный отдел: ФЧ 6,59(3,97 + 0,49); сти фагоцитоза лейкоцитов во втором

ЧМФ 17,63 (5,59 +. 0,48); КАФ 3 142 10 /л -50 (венозном) отделе. (3,92 = - 0,49 10 /л); МЧ 55,574 10 /л (22,454+ Пример 4. Больной П.В.А„41 год.

3,392 10 /л); ПАЛ 53,4 (55,3 - 3,83). Клинический диагноз: остеохондроз поэвоАнализ результатов капиллярного и ве- ночника с выраженным болевым синдронозного отделов. мом; язвенная болезнь 12-перстной кишки, Три показателя (ФЧ, ЧМФ, МЧ) капил- 55 стадия рубцовой деформации, фаза ремислярногои веноэного отделов больной выше, сии. Дата обследования 09.09.1987. адва(КАФ и ПАЛ) ниже, чем в контроле. Это Артериальный отдел: ФЧ 0,88 (3,64 + дает основание заключить о повышении ак- 0,51); ЧМФ 3,03 (5,15 + 0,33); КАФ 0,8584» тивности фагоцитоза в обоих отделах сосу- «10 /л (3,64 + 0,49 10 /л); МЧ 2,6009 10 /л

1681257 (18,3672 + 3,1824 ° 10 /л); ПАЛ 21,5 (48,1 + 2,25).

Капиллярный отдел: ФЧ 1,82 (3,71 +.

+ 0 51) ЧМФ 4 55 (5,06 - - 0 39) КАФ 1 0912»

«10 /л (3,65 +. 0,49 10 /л); МЧ 4,9649 10 /л (19,1922 + 3,568 10 /л), ПАЛ 17,6 (52,3 +

é3,45).

Анализ результатов артериального и капиллярного отделов.

Абсолютные величины показателей фагоцитоза в артериальном и капиллярном отделах сосудистого русла ниже, чем в контроле. Артериокапилля рная разница

AKP равна — 0,34, ЧМФ вЂ” 1,52, КАФ вЂ” 0,2328»

«10 /л, МЧ вЂ” 2,364 10 /л, ПАЛ 3,9, Полученные результаты разницы имеют четыре минусовых и одно плюсовое значение, сумма равна минус 3 (-3), что свидетельствует о более низких показателях фагоцитоза в первом (артериальном) отделе.

Заключение: у больного П.В,А., страдающего остеохондрозом позвоночника с выраженным болевым синдромом, язвенной болезнью 12-перстной кишки в стадии рубцовой деформации (фаэа ремиссии), при исследовании артериального и капиллярного отделов сосудистого русла определено снижение активности фагоцитоэа лейкоцитов в первом (артериальном) отделе.

Для оценки эффективности и полезности предлагаемого изобретения в клинической практике на протяжении 1978 — 1988 годов в условиях стационара клинической больницы и санаториях ревматологического профиля (санатории "Синяк" и Горная Тисса") обследовано 14 практически здоровых лиц, 31 больной ревматизмом и 20 больных первичным деформирующим остеохондрозом.

При сравнении результатов исследования по способу-прототипу показатели были изменены преимущественно у больных ревматизмом и только в сторону снижения. У больных первичным деформирующим остеоартрозом изученные показатели оказались измененными только у двух больных. Однако показатели прототипа не давали возможности точно оценивать степень нарушения фагоцитоза в отдельном лейкоците и лейкоцитах литра и выявлять тот отдел сосудистого русла, где активность фагоцитоза была изменена.

Таким образом, в прототипе показатели оказались измененными только у 65 больных и только в сторону снижения. Используя предлагаемый способ, удалось выявить изменение активности фагоцитоза лейкоцитов у всех 100 обследованных и их снижение или повышение. Таким образом, формально чувствительность предлагаемого способа выше на 1/3, а с учетом количественной характеристики отдельного лейкоцита и лейкоцитов литра на 100, так как в прототипе такие характеристики отсутствуют.

Формула изобретения

Способ определения активности фагоцитоза лейкоцитов в сосудистом русле, включающий забор исследуемого материала, добавление к нему микробных клеток. определение фагоцитарного индекса, количества микробов в 1 фагоците, количества активных фагоцитов в 1 л исследуемого материала, микробного числа в 1 л, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности способа путем определения фагоцитоэа в различных отделах сосудистого русла, дополнительно определяют фагоцитарный индекс, количество микробов в 1 фагоците, количество активных фагоцитов в

1 л, микробные число в 1 л второго отдела, далее в обоих отделах определяют фагоцитарное число и процент активных лейкоцитов а 1 л, сравнивают величины показателей обоих отделов с соответствующими величинами показателей контрольной группы, ortределяют величину и знак разницы каждого показателя между сравниваемыми отделами, суммируют знаки разниц и при повышении показателей фагоцитоза обследуемого по сравнению с контролем и плюсовой сумме знаков разниц определяют повышение активности фагоцитоза лейкоцитов. в первом отделе, а при минусовой сумме знаков разниц определяют повышение активности фагоцитоза лейкоцитов во втором отделе, при снижении показателей фагоцитоза обследуемого по сравнению с контролем и плюсовой сумме знаков разниц определяют снижение активности фагоцитоза лейкоцитов во втором отделе, а при минусовой сумме знаков разниц — снижение активности фагоцитоза лейкоцитов в первом отделе,