Способ получения иммобилизованных бактерий-биодеструкторов bacillus suвтilis к1

 

Изобретение относится к прикладной микробиологии - получению иммобилизованных микробных клеток, в частности бактерий-деструкторов поликапроамида. Целью изобретения является повышение биодеструктирующей активности при повышении сроков хранения. Изобретение состоит в том, что суспензию клеток BACILLUS SUBTILIS KI в количестве 0,5 - 1,10<SP POS="POST">9</SP> единиц на 1 мг волокнистого носителя в стерильных условиях выдерживают с поликапроамидным нетканым полотном, имеющим тонину волокна 0,4 текс, в течение 1 - 3 недель при 35 - 37°С. Способ позволяет в 3 - 10 раз увеличить биодеструктирующую активность целевого продукта при повышении сроков хранения. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТ жИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУ БЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ПЮТ СССР (21) 4712475/13 (22) 29.06.89 (46) 23.08.91. Бюл. У 31 (71) Ленинградский институт советской торговли им. Ф.Энгельса и Ленинградский институт текстильной и легкой промышленности им. С .И.Кирова (72) И.А.Ермилова, И.И.Шамолина, Е.Л.Пехташева, Е.Г.Алексеева и Г.В.Грмилова (53) 577.15(088.8) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИМИОБИЛИЗОВАННЫХ БАКТЕРИЙ-БИОДЕСТРУКТОРОВ BACILLUS

SUBTILIS KI (57) Изобретение относится к прикладной микробиологии — получению иммобиИзобретение относится к получению иммобилизованных микробных клеток, в частности клеток-деструкторов поликапроамида и изделий из него, которые могут длительно храниться и затем использоваться дпя оценки биодеструкции поликапроамидных материалов.

Целью изобретения является увеличение биодеструктирующей активности при повышении сроков хранения.

Способ получения иммсбилизованных бактерий-биодеструкторов Васillus subtilis KI заключается в инкубации клеток (водная суспензия) в количестве (0,5 — 1,0) 107 единиц на 1 мг поликапроамидного нетканого полотна, имеющего тонину волокон 0,4 текс, с последующим высушиванием и хранением целевого прпдукта. Клетки инкубируют

„„SU„, 1671692 A 1 (51)5 С 12 N 11/08//(С 12 л1 11/08, С 12 R 1:25) лизованных микробных клеток, в частности бактерий-деструкторов поликапро— амида. Целью изобретения является поЭ вышение биодеструктирующей активности при повышении сроков хранения. Изобретение состоит в том, что суспензию клеток Bacillus subtilis KI в кпличео стве(0,5 — 1) 10 единиц на 1 мг волокнистого носителя в стерильных условиях выдерживают с поликапроамидным нетканым полотном, имеющим тонину волокна 0,4 текс, в течсние 1 — 3 недель при,5 — 37 С. Способ позволяет в 3 о 10 раз увеличить биодеструктирующую активность целевого продукта при повышении сроков хранения. 1 з.п. A-лы, а

1 табл.

9 с носителем при 35 — 37ОС в течение

3 недель. При длительном хранении им полученного препарата возрастает биодеструктирующая активность клеток в

3 — 10 раз.

Пример 1. Поликапроамидный волокнистый материал (ПКА) обрабатывают водной суспензией микробной культуры Bacillus subtilis KI с концентрацией клеток 1,1 млрд. в 1 мл и выдерживают в течение 1 недели при

35 С при 1007-ной влажности. Волокно высушивают в стерильных условиях на воздухе и хранят в чашках Петри или и стерильных бумажных пакетах в течение

5 лет. Затем осуществляют восстановление клеток из состояния анабиоза, для чего образцы волокон с иммобили,,зованными клетками помещают в мясо1611692

Бйодеструктнруннаа активность нтанна, краиивнегосн в нниобилизованноб форме

Срок краненин, енперяту- реня, гол а, С ел

Условнл извчобилнзании.Пример

Колнче с тНоситель

К, ел. Ек, 2 II, ea. EII, во клеток еЛ 107 ха

1 нг носи тела

Комплексная !IKA нить, 15,6 текс

То ае

4,2

5,1

5,6

5,а

4З ° 5

50,7

55,5

40 1

0 ° 34

0,4В

0,55

0,19

0,9

1 ° 2

1,5

1,3

37

37

37

0,5

0,5

0,5

0,5

Штапельное 0КА волокна, 0,1 текс

Нетзвнос иглопробивное

ПК4 полотно, 250 гlн, 0,4 такс

То ве

2 ° 1

39,5

6,2

0,19

0,5

40,З

40 ° 7

51,2

5,6

5,5

5,4

1,9

1.В

1 ° 6 о,г!

0,З

0,59

36

40 г

3 лня

0,5

0,5

0 5

Ее сзюлозное валакяо (лзвестныл спо аб)

Пеллопозное волокно

Та ке

Штапельное IIKA волокно, 0,7 текс

То ве

О,!2 о,ii

0,г0

36,5

39 ° 3

40,1

5,2

4,7

5,1

1,З

1,9

1,5

З7

37

0 5

0 5

0 5!

11

0,57

0,71

0,69

),З

1 ° 7

1,5

53,6

57,3

64,9

5,3

5,6

S ° 5

3!

37

0 5

О,S

0,5

13

14

Нетканое пглопробнвнае

tIKA полотно, 250 гlи, 0,4 текс га ве

49,5

56,0

65,В

69,3

7i, 1

0,56

0,60

0 ° ВЗ

1,24

1,26

2,1

1,1

1,7

2,7

1,9

З,7

4,9

5,7

4,2

6,1

36

З7

37 о,i

0,5

0,5

0,5

1,0

16

1! ! в

19 и р и и е ч а я н е. к — гокязатепь биалеструксзеи; N — обнес количество павренленна) Як, g н — атносительнне г.гренности резуль агав изнеренив. пепто!)7)))й бу/7).он, ку/)ьт))))))1эуют в те— чение 24 — 48 ч при 35 — 37 С и делают высев на мясопептонный агар. Для оценки биодсструктирующей способности клеток готовят суспензию клеток в

1 мл стерильной воды и инокулируют

20 мг поликапроамидного волокна. Испытания проводят при 35 2 0, относительной влажности воздуха, близкой к 10.07., )3 течение 1 мес . Дпя оценки биодеструкции IIKA-волокон под микро— скопом вь)яв))лют типы повреждений волокон в зависимости от нарушения мик— роструктуры и рассчитывают по coBDa 15 купности абсолютных и относительных поврез)щений показатель биостойкости, характеризую )ззй степень деструкции волокон .

Примеры и результаты опытов сведе- 20 ны в таблицу.

Анализ полученных данных показывает, что наибольшую биодеструктирую чч щую активность после 5-летнего хранения имеет культура, иммобилизация ко- 25 торой осуществлена на нетканом ПКА материале, имеющем тонину 0,4 текс (масса в r 1000 м нити или волокна).

Увеличение этого параметра (до 0,7 и 15,6 текс) приводит к уменьшению активности. Полотен с тониной волокна менее 0,4 текс (из поликапроайзща) нет. Увеличение температуры и сроков инкубации (пример 8) не приводит к повышению активности, а снижение этих параметров (пример 7) вызывает уменьшение активности.

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет получить целевой продукт с повышенной при хранении активностью в 3 — 10 раз по сравнению с известными способами.

Формула изобретения

1. Способ получения иммобилизованных бактерий-биодеструкторов Bac i 1 lus

subtilis KI, включающий инкубацию водной суспензии бактерий в присутствии волокнистого носителя и высушивание целевого продукта, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения биодеструктирующей активности при повышении сроков хранения, в качестве волокнистого носителя используют поликапроамидное нетканое полотно, имеющее тонину волокон 0у4 текс.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю" шийся тем, что инкубацию проводят при 35 — 37 С в течение 1 — 3 не0 дель.