Способ диагностики состояния стресса у птиц

 

Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано для оценки состояния птиц при действии различных стресс-факторов, а также контроля за эффективностью средств, аттенуирующих стресс. Цель изобретения - повышение точности способа. В отобранных пробах периферической крови определяют уровень миграционной активности лейкоцитов до и после действия стрессорного фактора, сравнивают их и по отклонению судят о наличии общего адаптационного синдрома. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 6 01 N ЗЗ /48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4707758/15 (22) 19.06.89 (46) 15.07,91. Бюл. № 26 (71) Киши невский сел ьскохозяйствен н ый институт им. М.В.Фрунзе (72) Ю.И,Забудский и И.Г.Скутарь (53) 616.07.591.1(088.8) (56) Silgel Н.S. Physiological stress in biords. — Bicsience, 1980, v.30, ¹ 8, р,529-534.

Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано для оценки состояния птиц при действии различных стресс-факторов, а также контроля за эффективностью средств, аттенуирующих стресс.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Пример 1. Определяют уровень миграционной активности лекоцитов (МАЛ) одним из известных методов, например капилля рным.

Для этого определенный обьем отобранной периферической крови смешивают в пробирке с равным объемом раствора Хэнкса. Осторожно пипетируют полученную смесь и инкубируют в термостате при 37 С в течение 30 мин, Извлекают из термостата, еще раз пипетируют и набирают в стеклянные капилляры с внутренним диаметром

1,0 — 1,5 мм длиной 40 — 50 мм. Один из концов последнего заклеивают смесью воска и пластилина и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 — 20 мин.

По окончании центрифугирования капилляры с содержанием, расслоившимся на форменные элементы и жидкую часть, со„„ Ы„„1663547A l (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ

СТРЕССА,У ПТИЦ (57) Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано для оценки состояния птиц при действии различных стресс-факторов, а также контроля за эффективностью средств, аттенуирующих стресс. Цель изобретения — повышение точности способа, В отобранных пробах периферической крови определяют уровень миграционной активности лейкоцитов до и после действия стрессорного фактора, сравнивают их и по отклонению судят о наличии общего адаптационного синдрома. " табл. стоящую из плазмы и раствора Хэнкса, с помощью пластилина укрепляют в горизонтальном положении на предметном стекле, На микроскопе с помощью окулярмикрометра производят измерения длины столба Я форменных элементов. Предметные стекла с капиллярами в горизонтальном положении помещают в термастат при 37 С на инкубацию в течение 16-18 ч. При увеличении 0 продолжительности инкубации в капилляре Q образуются пузырьки воздуха, что затрудняет дальнейшие измерения и уменьшае) у точность определения МАЛ, По завершении инкубации, предметные стекла с капиллярами извлекают из инкубатора и проводят повторное измерение длины столба форменных элементов, Вследствие миграции лейкоцитов длина по- а следчего увеличивается за счет образовавшегося конуса, состоящего из лейкоцитов, мигрировавших в сторону смеси плазмы и раствора Хэнкса. Определив разницу между вторым и первым измерением длины столба форменных элементов и выразив ее в миллиметрах, получаютданные о величине РлАЛ у данной особи.

1663547

Установив уровень MAfl до влияния стресс-фактора и после, судят о степени стресс-реакции, Пример 2. Стресс, обусловленный холодом.

Опыт проводили на 10-дневных цыплятах, отобранных по методу аналогов, содержащихся в птичнике при 29 — 30 С. У 30 цыплят отбирали пробы периферической крови из крыловой вены. Затем 15 голов опытной группы поместили в картонные коробки и перенесли в помещение с температурой 10 С, где выдерживали в течение 2 ч

15 голов контрольной группы перенесли в другое помещение, где температура была такой же, как и в птичнике 29 — 30 С, и также выдерживали 2 ч, По истечении этого срока цыплята обеих групп были возвращены в птичник, Из крыловой вены через 3, 48 и 96 ч с начала опыта отбирали пробы в стерильные стеклянные пробирки, орошенные антикоагулянтом — раствором лимоннокислого натрия.

l3 отобранных пробках крови определяют МАЛ по методике, описанной выше, Изменения МАЛ крови цыплят при воздействии холодом {мм) представлены в табл,1.

Как видно из табл,1, МАЛ у опытной группы цыплят резко падает после воздействия стресс-фактором и составляет через 4 и 48 ч соответственно 6,2 и 74,7 от уровня

МАЛ до воздействия, Далее МАЛ увеличивается и полностью восстанавливается через 96 ч после оканчания воздействия стресс-фактором. У контрольной группы цыплят, не подвергавшейся воздействию стресс-фактором, особенно процесс взятия крови практически не повлиял на величину

МАЛ, Проводили статистическую обработку полученных данных с использованием критерия Стьюдента, что позволило сделать вывод о достоверности полученных результатов через 48 ч после окончания стрессфактора.

Таким образом, по изменению МАЛ судят о развитии общего адаптационного синдрома у цыплят опытной группы вследствие действия стресс-фактора.

Пример 3. Стресс, вызванный голодом и жаждой.

Берут пробы периферической крови у 15 голов 18-дневных цыплят контрольной группы и 15 голов опытной группы, отобранных по методу аналогов. 24 ч цыплята опытной группы не получали корм и воду. B остальном режим содержания, микроклимата, рациона кормления и поения, методика определения МАЛ идентичны условиям опыта, описанного в примере 2, 5

Через 24, 32, 110 ч с начала опыта отбирают пробы периферической крови у цыплят обеих групп аналогично примеру 1. Результаты определения МАЛ в отобранных пробах приведены в табл.2, Как видно из табл.2, действие стрессфактора вызывает резкое снижение МАЛ (на

65,8 ) уже через 24 ч с начала опыта. У контрольной группы цыплят собственно процесс отбора крови практически не повлиял на величину МАЛ.

Через 32 ч после начала опыта констатировано дальнейшее уменьшение МАЛ, После этого срока искомый показатель к 110 ч от началам опыта практически восстановился до нормы.

Как видно из представленных материалов, стресс-фактор (суточное голодание и жажда) вызывает статически достоверное уменьшение МАЛ, восстанавливающееся до нормы за 3,5 сут. после завершения действия стресс-фактора, Следовательно, наблюдая за изменением уровня МАЛ, представляется возможным выявлять состояние стресса у птиц, Пример 4. Стресс, вызванный облучением гамма-квантами, Берут пробы периферической крови у 28 голов 30-дневных цыплят, отобранных по методу аналогов.

По завершении подготовительного периода, длившегося 2 суток, 14 голов цыплят контрольной и 14 голов цыплят опытной групп поместили в картонные коробки и на автомашине перевезли на установку "Гамма-поле", Расстояние в один конец около 40 км, температура окружающей среды в периодтранспортировки 25 С, Источником излучения на установке является Кобальт-60.

Цыплят опытной группы облучали дозой 750

Р, при мощности дозы 350 P/ìèí, По завершении облучения цыплят обеих групп перевезли обратно в виварий и поместили в соответствующие клетки. Условия содержания, микроклимата, рационы кормления и поения, методика определения МАЛ тождественны условиям опытов 2 и 3.

Пробы периферической крови отбирали у цыплят обеих групп перед началом опыта, а также через 24, 48, 72, 120 и 144 ч.

Результаты измерений МАЛ в отобранных пробах представлены в табл.3.

В контрольной группе отмечено уменьшение МАЛ через 48 ч после транспортировки цыплят на расстояние 80 км на 14 по сравнению с величиной МАЛ до перевозки цыплят, В последующие четверо суток наблюдения за величиной МАЛ установлено постепенное восстановление показателя до нормы.

1663547

Таблица1

Таблица2

Таблица3

В опытной группе через 24 ч после облучения отмечено уменьшение МАЛ до

3,02+0,64, а через трое суток до 2,50+0,77 мм (P < 0,01). В последующем, завершающем 5 периоде опыта обнаружено увеличение

МАЛ. Однако и по прошествии 114 ч после облучения искомый показатель в опытной группе был на 13,2 ниже, чем в контроле.

Очевидно,это обстоятельство обусловлено 10 развитием лучевых реакций у цыплят после облучения дозой 750 P.

Таким образом, во всех примерах стресс-факторы, разные по своей природе, вызывали сходные изменения MAll: умень- 15 шение с последующим восстановлением практически до нормы.

В контрольных же группах величина

МАЛ остается неизменной, что свидетельствует о том, что собственно процесс взятия 20 проб крови у особей на величину этого показателя не влияет. Следовательно, по уровню МАЛ представляется возможным определить состоятие стресса у птиц, что . позволяет рационально применять средства, аттенуирующие стресс, а также по воэможности планировать технологические приемы и массовые ветеринарные обработки, вызывающие вынужденные стрессы.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с большей точностью определять состояние стресса у птиц, так как собственно процесс взятия крови практически не влияет на уровень миграционной способности лейкоцитов.

Формула изобретения

Способ диагностики состояния стресса у птйц путем исследования проб периферической крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в пробах определяют уровень миграционной активности лейкоцитов до и после действия стрессорного фактора, сравнивают их и по отклонению судят о наличии общего адаптационного синдрома.