Способ количественной оценки реакции высвобождения тромбоцитов

 

Изобретение относится к медицине, в частности к исследованию гемостаза, и может быть использовано для исследования функциональной активности тромбоцитов. Целью изобретения является ускорение и расширение информативности способа за счет выявления нарушений функционального состояния тромбоцитов. Способ осуществляется путем охлаждения плазмы в течение 45 мин с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5-7 мин. По отношению произведения количества тромбоцитов в 1 мм плазмы здорового на коэффициент экстинкции больного к произведению количества тромбоцитов в 1 мм3 больного на коэффициент экстинкции здорового расчитывают степень агрегации тромбоцитов.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si)s G 01 N 33/86

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4642307/14 (22) 26.01,89 (46) 15.05.91. Бюл. N 18 (71) Государственный медицинский институт им. Ленинского комсомола (72) А.Е,Дорохов и Г.А.Суханова (53) 616.155.2 (088.8) (56) Barbui Т,, Battista R., О! п! Е.

Spontaneous Platelet Aggregation in

Myeloproliferative Dlsordes. — Acta Haemat, 50:25-29, 1973, (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ

РЕАКЦИИ ВЫСВОБОЖДЕНИЯ ТРОМБОЦИТОВ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к исследованию гемостаза, и моИзобретение относится к медицине, а именно к гемостазу, и может быть использовано для исследования функционального состояния тромбоцитов при диагностике тромбоцитопатий. тромбозов, ДВС-синдромов, системных васкулитов, миелопролиферативных заболеваний.

Цель изобретения — ускорение и расширение информативности способа путем выявления нарушений функционального состояния тромбоцитов.

Способ осуществляют следующим образом.

Забор крови производят после малотравматической венопункции короткой иглой с широким просветом (желательно без наложения жгута) в силиконированную посуду свободным током (без шприца). В сили„„Я2 „„1649447 А1 жет быть использовано для исследования функциональной активности тромбоцитов.

Целью изобретения является ускорение и расширение информативности способа за счет выявления нарушений функционального состояния тромбоцитов, Способ осуществляется путем охлаждения плазмы в течение 45 мин с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 —.7 мин.

По отношению произведения количества тромбоцитов в 1 мм плазмы здорового на коэффициент экстинкции больного к произведению количества тромбоцитов в 1 мм больного на коэффициент экстинкции здорового расчитывают степень агрегации тромбоцитов, ° еай конированную пробирку предварительно наливают стабилизатор 3,8 -ный раствор цитрата натрия) 1 мл, набирают кровь до + метки 10 мл и аккуратным покачиванием О перемешивают со стабилизатором. Богатую тромбоцитами плазму получают центрифугированием в течение 5 мин при

1000 об/мин на центрифуге ЗУХЛ 4.2

ОПн (больных эритремией с гематокритом свыше 0,55 л/л — в течение 10 мин при 1500 об/мин). Беруте центриl96ssh фужные пробирки (пластиковые) по 0,5 мл богатой тромбоцитами плазмы больного и здорового человека (контроль), предварительно определив количество тромбоцитов в 1 мм плазмы, и ставят при температуре + 4 С в холодильную камеру на 45 мин. После этого плазму цен1649447 трифугируют и ри 3000 об/мин на центрифуге ЗУХЛ 4,2 ОПн в течение 5-7 мин. Затем к

0,8 мл богатой тромбоцитами плазме здорового человека добавляют 0,4 мл полученной при центрифугировании исследуемой плазмы больного и определяют оптическую плотность- смеси (ОП 1) на фотоэлектрокалориметре КФК-2-YXJl4.2. Затем плазму перемешивают на магнитной мешалке MM 3М при 600 об/мин в течение 3 мин и вновь определяют оптическую плотность смеси (ОП 2). Коэффициент экстинкции рассчитываОП 1 — ОП 2 ют по формуле — „— Кб . Затем исследование повторяют с охлажденной и отцентрифугированной плазмой здорового человека (контроль) и рассчитывают коэфОП 1 — ОП 2 фициент экстинкции Кк—

Полученные значения подставльчот в форТк Кб мулу . 100 g, и сравнивают с норТб Кк мой, составляющей 70 — 120 /,. Если полученный результат больше 120О/О, то у больного реакция высвобождения тромбоцитов повышена, если менее 70;ь, то — снижена, Расширение возможностей- предлагаемого способа заключается в том, что в отличие от способа-прототипа он выявляет снижение и отсутствие реакции высвобождения тромбоцитов, которые встречаются у больных с кровоточивостью и включены в большую группу тромбоцитопатий.

В таблице приведены результаты сравнительного анализа данных реакции высвобождения тромбоцитов по способу-прототипу и предлагаемому способу.

Способ-прототип не выявляет нарушений функционального состояния тромбоцитов, сопровождающихся снижением или отсутствием реакции высвобождения тромбоцитов (исследования 3, 5, 7), По способу-прототипу у здоровых людей (контроль) спонтанной индуцированной холодом реакции высвобождения тромбоцитов не происходит, причем 0-2 g — ошибка метода за счет разрешающей возможности фотоэлектрокалориметра.

Способ-прототип выявляет только повышение реакции высвобождения (исследования 2, 4), По данным предлагаемого способа размах показателей в этих исследованиях более значительный.

Обоснование параметров способа, Одно центрифугирование без охлаждения реакции высвобождения тромбоцитов не вызывает. Сочетание охлаждения и центрифугирования по сравнению с прототии при снижении и отсутствии реакции вы5 свобождения. Сочетание охлаждения продолж ител ь ностыб более 45 мин

55 пом вызвало более выраженную реакцию высвобождения тромбоцитов, что позволило давать оценку не только при усилении, но продолжительностью с центрифугированием продолжительностью более 7 мин на результаты исследования не влияло.

Охлаждение менее 45 мин с центрифугированием менее 5 мин вызывали недостаточную реакцию высвобождения тромбоцитов.

Режим центрифугирования 3000 об/мин выбран с целью осаждения тромбоцитов и их агрегатов после охлаждения богатой тромбоцитами плазмы, Центрифугирование при менее 3000 об/мин в течение 5 — 7 мин достаточного осаждения .тромбоцитов не дает и плазма остается богатой тромбоцитами, что искажает конечный результат опыта.

При центрифугировании более 3000 об/мин охлажденные тромбоциты подвергаются разрушению, что приводит к значителтной ошибке предлагаемого метода.

Статистические данные определения нормы для реакции высвобождения тромбоцитов, Количество случаев и = 50.

Х вЂ” ", Х= — "" =96,5

n 5О

ZG 1э7

fn = — = 195, rye а=Х вЂ” X и — 1 49

Х + m =96,5 + 19,5 или 77-116 $

Авторами расширены пределы границ нормы за счет включения в них несущественных отклонений от 70 — 77 и от 116 — 120$.

Пример 1. Больной Г.,ЗОлет, поступил на обследование по поводу частых носовых кровотечений неясного генеза. Больному по описанной методике проведена количественная оценка реакции высвобождения тромбоцитов. Оптическая плотность 1 (ОП 1) оказалась равной 0,53, оптическая плотность 2 (ОП 2) 0,48. Оптическая плотность 1 на контроле (плазма здорового человека) равна 0,54, оптическая плотность 2 0,27. По формуле

ОП 1 — ОП 2

ОП 1 вычислены коэффициенты зкстинкции, которые у больного оказались равными 0,09, на контроле 0,5. Определено количество тромбоцитов в плазме больного и здорового, Количество тромбоцитов в плазме больного оказалось равным 213 . 109/л, здорового 305 10 /л. Эти значения под9 ставлены в формулу

1649447

Заключение

Результат по способу и ототип

Заключение

Результат по предлагаемом способ

Плазма больных

М и/и

0%

92

150%

Норма

Повышение

Резкое снижение

Резкое повышение

Отсутствие

Умеренное повышение, Умеренное снижение

З.С.

О.Н.

Норма

Повышение

Норма

3Q%

Л,З.

А,Б.

Е.П.

17%

407%

0% .

Повышение

Норма

Норма

Мо а

138%

С.А, б4

Кб ТК 100 — 0,09 305 100 1 =25 о „

КК Т5 05 213

Полученный результат позволил поставить диагноз: тромбоцитопатия с нарушением реакции высвобождения, объяснивший 5 и ричину кровоточивости у данного больного, Пример 2, Больной Л.3. поступил в краевой гематологический центр с частыми носовыми кровотечениями, синячковостью.

Обследован в лаборатории гемостаза, Нару- 10 шений в свертывающей системе крови, а также нарушений агрегационной, адгеэивной функций не обнаружено. Патология в системе гемостаэа найдена только при использовании предлагаемого способа, Реак- 15 ция высвобождения тромбоцитов составила

30%, что является резким снижением по сравнению с нормой (70 — 120%). Это позволило обьяснить причину кровоточивости у данного больного. 20

Пример 3. Больной А.Б. Диагноз; тромбоз глубоких вен голени. В свертывающей системе гемостаза выявлены незначительные нарушения. При исследовании функционального состояния тромбоцитов 25 выявлено нерезкое повышение агрегационной функции тромбоцитов и резкое повышение реакции высвобождения тромбоцитов—

407 (норма 70 — 120%), что позволило найти звено в системе гемостаза. требующее 30 певоочередной медикаментозной коррекции, Пример 4. Больной О.M. Диагноз: острый миелобластный лейкоз (миелопролиферативное заболевание). 35

У больного на фоне основного заболевания выявлены признаки тромбоваскулита.

При обследовании реакция высвобождения тромбоцитов составила 150 (норма 7040

120%), что подтвердило диагноз тромбоваскулита при данном заболевании и позволило провести соответствующее лечение.

Изобретение позволяет оценить состояние тромбоцитов при тромбозах, ДВС-синдромах, системных васкулитах, миепопролиферативных заболеваниях, диагносцировать группу тромбоцитопатий, связанных с нарушением реакции высвобождения, сократить время определения до 45 мин по сравнению с прототипом (2 ч).

Способ может быть воспроизведен в любой гемокоагулокологической лаборатории, Формула изобретения

Способ количественной реакции высвобождения тромбоцитов путем получения обогащенной тромбоцитами плазмы больного и здорового человека, определения количества тромбоцитов в 1 мм плазмы, охлаждения полученных плазм при температуре+4 С, смешивания с неохлажденной обогащенной тромбоцитами плазмой здорового, измерения их оптической плотности и расчета, отличающийся тем,что,с целью ускорения и расширения информативности способа за счет выявления нарушений . функционального состояния тромбоцитов, охлаждение плазмы осуществляют в течение 45 мин с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 — 7 мин и после измерения оптической плотности по отношению количества тромбоцитов в 1 мм плазмы здорового на коэффициент экстинкции больного к произведению количества тромбоцитов в 1 мм3 больного на коэффициент экстинкции здорового, рассчитывают степень агрегации тромбоцитов.