Способ определения водорастворимого меланина
Изобретение относится к методам биохимического анализа, в частности к способам определения концентрации меланиновых пигментов. Цель изобретения - повышение точности способа. Количество меланина определяют по степени ингибирования реакции восстановления нитросинего тетразолия в формаэан в слабощелочной среде рН 8,2 в присутствии феназинметосульфата и восстановленного никотинамидадениндинуклеотида - НАДНа, или по ускорению реакции автоокисления адреналина в щелочной среде рН 10,2. Количество меланина определяют спектрофотометрически по изменению начальной скорости образования продукта реакций по сравнению с контролем. (В первом случае - по торможению начальной скорости образования формазана при 560 нм во втором - по ускорению начальной скорости образования адренохрома при 500 нм). 3 табл.
союз советских
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (и)ю G 01 N 33/52, 33/48
ГОСУДАР CT В Е ННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР ф
У Р„/1 41
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4386460/14 (22) 11.01.88 (46) 15.03.91. Бюл. М 10 (71) Самаркандский государственный университет им. А. Навои (72) Г.Г.Цой, В.А.Онищенко. А.А.Каваэ, Л.Я,Симонова, Д.У.Уэакова и М.А. Риш (53) 612,015(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
N. 1107053, кл. G 01 N 33/48, 1983, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМОГО МЕЛАНИНА (57) Изобретение относится к методам биохимического анализа, в частности к способам определения концентрации меланиновых пигментов. Цель изобретения— повышение точности способа. Количество
Изобретение относится к методам биохимического анализа, а именно к способам определения концентрации меланиновых природных и синтетических пигментов, и может быть использовано в научно-исследовательской работе и медицине.
Цель изобретения — повышение точности способа.
Способ осуществляют следующим образом.
Для количественного определения водорастворимого меланина применяют спектрофотометрические методы обнаружения супероксидного радикала в водной среде.
Количество меланина определяют по степени ингибирования реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) в формазан в слабощелочной среде рН 8,2 в присутствии фенаэинметосульфата и восстановленного
„„,, Ц„„1635139 А1 меланина определяют по степени ингибирования реакции восстановления нитросинего тетраэолия в формаэан в слабощелочной среде рН 8,2 в присутствии феназинметосульфата и восстановленного никотинамидадениндинуклеотида—
НАДН2, или по ускорению реакции автоокисления адреналина в щелочной среде рН 10,2. Количество меланина определяют спектрофотометрически по изменению начальной скорости образования продукта реакций по сравнению с контролем. (В первом случае — по торможению начальной скорости образования формаэана при 560 нм. во втором — по ускорению начальной скорости образования адренохрома при 500 нм).
3 табл.
Ъ 1 никотинамидадениндинуклеотида — НАДН р или по ускорению реакции автоокисления адреналина в щелочной среде рН 10,2. Количество меланина определяют спектрофотометрически по изменению начальной скорости образования продукта реакций по сравнению с контролем. В первом случае — по торможению начальной скорости образования формаэана (V>) при 560 нм
Л Овфо (Чм =
t, t - 1 мин), во втором — по ускорению начальной скорости образования адренохрома (V ) при 500 нм
L1 0soo (1/и t, t = 1 мин). Концентрацию меланина рассчитывают по калибровочным кривым.
Пример 1. Определение концентрации меланина с применением метода восстановления нитросинего тетраэолия. В
1635139 спектрофотометрическую кювету толщиной
10 мм, содержащую 50 мкМ нитросинего тетразолия (0,5 мл), 4,5 мкМ фенаэинметосульфата (0,2 мл),в 0,05 М пирофосфатном буфере рН 8,2 с 0.69 мкМ ЭДТА. добавляют
0,2 мл водного раствора пробы, содержащей меланьМовый пигмент, Непосредственно перед спектрофотометрированием в реакционную смесь добавляют 384 мкМ (1 мл) восстановленного никотинамидадениндинуклеотида—
НАДНр. Общий объем реакционной смеси равен 3 мл. Контролем служит проба, не содержащая меланина. Все растворы, кроме буферного, готовят в день анализа и содержат в темной посуде.
Результаты определений меланиновых пигментов, полученных иэ виноградных выжимок и иэ выделений тутового шелкопряда, приведены в табл. 1.
Пример 2. Определение концентрации меланина применением метода автоокисления адреналина в щелочной среде. В спектрофотометрическую кювету толщиной
10 мм, содержащую 2,3 мл 0,2 M раствора
Na-карбонатного буфера рН 10.2, добавляют 0,2 пробы и непосредственно перед спектрофотометрированием 0,5 мл 5,4х10 раствора адреналина (мдротартрата) в 0,2 ьной лимонной кислоте. Количество меланина определяют по величине начальной скорости образования продукта окисления адреналина — адренохрома при 500 нм или по проценту ускорения реакции по отношению к контрольной, пользуясь калибровочными кривыми.
Результаты определений меланиновых
5 пигментов иэ виноградных выжимок и иэ выделений гусениц тутового шелкопряда приведены в табл. 2, В табл. 3 представлены данные, подтверждающие более высокую точность
10 предлагаемого способа по сравнению с из-. вестным способом.
Таким образом, использование предлагаемого способа обеспечивает повышение точности по сравнению с способом-прото15 типом.
Формула изобретения
Способ определения водорастворимого меланина, включающий обработку пробы и
20 спектрофотометрическую регистрацию, о тлича ющийся тем,что,сцельюповышения точности способа, пробу добавляют в систему генерации супероксидных радикалов феназинметосульфат-восстановленный
25 и никотинамидадениндинуклеотид в присутствии нитросинего тетразолиевого или адреналин в щелочной среде, а содержание меланина определяют по степени ингибирования скорости восстановления нитроси30 него тетраэолиевого или по степени увеличения скорости образования адренохромэ.
Таблица 1
16351Л
Таблица 2
Таблица 3
Составитель Н. Гуляева
Техред М. Моргентал Корректор Л.Пилипенко
Редактор А.Ревин
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101
Заказ 754 Тираж 431 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
