Способ получения гибридных культур грибов

 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к слиянию протопластов, и может быть использовано в медицине и сельском хозяйстве. Целью изобретения является повышение выхода и стабильности гибридных культур грибов. Способ состоит в том, что протопласты одного из родительских штаммов перед слиянием обрабатывают дельтонином в концентрации 0,01-0,02% в течение 5-10 мин.

р +

@, СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕОКИХ

РЕСПУБЛИК

„„ЯО„„! 544799 А 1 (51 ) 5 С 12 ! 5/00

1!Л - ИЦ2Л ц;ц.,тп, „,,,;;:д

Б Б Г; ! Э:. .ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ обработки уменьшает стабильность прот»пластов.

Способ осуществляют следующим образом, Прот»пласты грибов получают с помощью литической смеси ферментов, К сусиензии протопластов одного из штаммон добавляют дельтонин до концентрации 0,01-0,02Х, выдерживают

5-10 мин при комнатной температуре °

Слияние иротопластов осуществляют в буферном растворе, содержащем полиэтиленгликоль и стабилизирующие вещества. Через определенные промежут1 ки времени под микроскопом отбирают гибридные культуры и помещают íà селективную среду выращивания ° Полученные гибриды стабильны и при культивировании не распадаются на родительские клетки.

II р и м е р 1. Культура гриба

TrinhnrIerma reegei ЦМ94!4, хранят на картофельно-дестрозном агаре.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ П(НТ СССР (?I) 4418176/31 — 13 (2?) 29.04,ЯЯ (46) 23,02 90, 1>юл. М 7 (71) Ингтитут би»химии им. A.II, Баха (72) Н.Н. Нуиубидзе, К. Прабакаран, И.Н. Образцова, В,A. Лемина, A,Н, )!жафарона и Л,A, Киесон (53) 631.522:58.083 ° 5 (088.8) (56) Г гепгку 1... Кеv i F

;3-:, IåË1,1, Fxrr nI;1ч 1975, v.3!, р. 50-52 °

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения гибридги. х культур грибов, который может быть использован ири получении новых штамм»в грибов с заранее заданными свойствами н микробиологической, н медицинской промышленности. и сельском хозяйстве, Цель изобретения — ионьппение выхода и стабильногти гибридных культур грибов, Способ состоит в том, что перед слиянием прот»пласты одного из родительских штамм»в обрабатывают стероидным гликозидом дельтонином в KQH центрации 0,027 10 мин, Нри концентрации ниже 0,01K эффективность слияния уменьшается, т.е, снижается выход гибридных культур, а ири концентрации выше 0,027 падает стабильность протоилагтон, При меньшем времени обработки снижается эффектинн«сть слиянии, б»лысее время

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИБРИДН!11Х КУЛЬ-

ТУР ГРИБ0Б (57) Изобретение относится к биотехнологии, н частности к слиянию прот»пластов, и может быть использовано н медицине,и сельском хозяйстве, Целью изобретения является повышение выхода и стабильности гибридных культур грибов. Способ состоит в том, что протопласты одного из родительских штаммов перед слиянием обрабатывают дельтонином в концентрации 0,01-0,02Х н течение 5-10 мин.

Г<)C T(113 HT <3)II )3, Д ем КИН

Техред 1. >)!илык Корректор С, Черни

Редлктор Н. )(Попс»

Заказ ч/! Тираж 488 Подписное

РПИИПИ I <3<.yäл(3стве)11»о<:) коня»т>: г,» <1 11» с ретениям и открытиям при ГКНТ СССР

11 31(3 >, Моск)»л, m- >, луп<<. кля няб., д. 4/5 > lI

IlpoH 3I3oJ1c.т1» 1<н)-и 3;r,l l 11>< н)111 1..> <: «,31 Патент, Г.ужг.ород, ул. Гагарина, 101

Инокупят готовят II;1 ди<.TH .111HpoH;IHII<)(13<) J1P. I3l lp Il

Л С и М Р f l < Р 1 I I P H 11 Р Р Е М РГП И и 11)ПИ 11;I C P <> JIP

1 лгn при 3() С, После 2!)-члсов<)го р< стл мицелии отдел)II<)T <1)HIH 1н»т Дистич

250 мкг /мл с буфер Л ) . 100 мг промытоГО MHII P!I ИЯ (ПО CblP Н дирун)т в ) мл 6уферл Л, содержлщегс) также 50 Mr .<111.»Hpylnlf(P01 смеси, сс)стоящей из тех)всчегких фермен rnblx преплраТоВ целловиридинл и пектофоединя, взятых в co<)THolllpHHII 1: l.,Поспе 4часовой инкублции получешппе протон)1лстьl От()еп(ян)т от нера.»руп(енн11х клеток <1)1<л)>т(»< влнигм через стекпян— ный <1)и..1),тр, промыв лют несколько ряз буфером Л и кон11Р(1Т(»ирун)т фильтр;)т центpll

- г)

Г))яг)с»г-с!)я -t, . Г)3гуеоя)-ог31)п) (<107 )ч.

К ко<гцептрирон линой суспензии протоплястов Il" 1:!»O<3> г! а "Р>зЯР1 Д<»бл1»пян) Г г,> дель To)Inn дс концентрации 0,01/, f»IIJ3ep)f Hr»af<) T 5 МНН, центрифугирун т при

1000 об,/ми:1, Концентрировянну<п суспен»ию протопллстов ра водят 0,05 11 трис-!1<;3 буферным раствором с рП 8,0, содержащим 0 02 11 Сл01 и 0,7 !1 Г<1 <."1, до концентрлции протоплястов !О мл.

К 3 мл получРннои суГпензии ДОблвлйют

< 7

250 мкг стрептоми<цшсульфатл, 2 )).

11оли.»тиленг IHKo)IH и 0 2 мл гуcff(H »Hè

40 протоп.<1лстов Тт i C!Iodenna г ч;-,<-1 (дс конечн(й концентрации 10 протопллстов в ыл). Гистсму инкубируют при

30 Г, нлблн)для IIOJr микроскопом »а процессом слияния протопластов, Получениь)е фуз 1H TI (продуK TI.I слияния, от) биран)т под ми(сроскопом и вьlcpf»;11nT нл к<3рто<1)е3п,но-декстрознун) среду. Через негкоп),к<,<1ней к<) I!) IHIH, M<»()

lси о глин;и щиегя <)т р<)дитс пl cf<их If

M<) 13 ) НЬIГ ЕB IН)Т H ПОСЛЕ, 1<)Б ЛТРЛЬ НЬ)М P;l 3

6лнлени ем полу I л)с)т моноьлетку, Ня основе моноклетки 13ысевян)T колонин), ПО„ гуч Р нlf IЯ ги бpиДII 3 Я к >ль тypя Я вл Я eт с:я стлбильной (хранится более года 1! и жизнегпос<) бной, 1 лубинное культивиров ание ведут нл средлх )1л идель с а, Киркл, Исследование морфологии гибридных клеток свидетельствует об осупсествлении межродового слияния мицелилльных грибов двух классон — дейтеромицетов и блзиднамицетов. Новая культура продуцирует фермент1)ый комп)1екг, проявляющий лигнолитическую (к лк г 1;)3пе1 oc haPtP <.hry sos porifrm ) .и целлюлолитиче скую (как Tr i chod Prma

,) активности. Ilo сравнению с

p<:дительскими (птаммами повьппается лктивность целлобиазы.

Пример 2, Способ осуществлян)т Г:гласно примеру 1, Но )3 качестве родительских штаммов используют

Тг chÌ rmP 1ol)fihrасМ-" »пп, Pleuro+11: . t,г= lt,»r. 0482, Дельтонином в концентрации 0,022 обрабатывают протопллсты Tr icho(3prmfl 1nngihr)3chia1;»пп 7?6 в течение 10 мин, Получают стабильные жизнеспособные фузанты, Таким образом, предлагаемый спо-, гоб позволяет получать стабильные гибридные культуры грибов, принадлежащих различным родам, Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Гпособ получения гибридных культур грибов, включающий слияние проf оплястов в буферном растворе, содержащем полизтипенгликоль и стабилизируюп1ие вещества, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и стабильности гибридных культур, перед слиянием протоцласты одной из родительских форм обрабатывают дельтонином в концентрации 0,01-0,02Х в течение 5-10 мин,