Способ определения способности клеток секретировать простагландин е в среду культивирования

 

Изобретение относится к биологии клетки и медицине и может быть использовано для изучения способности нормальных и опухолевых клеток секретировать простагландин Е. Целью изобретения является определение способности клеток секретировать простагландин в культуральную жидкость. Сущность изобретения состоит в том, что исследуемые клетки культивируют в присутствии ингибитора синтеза простагландина Е-индометацина или без него, а затем полученные культуральные жидкости добавляют к нормальным клеткам-киллерам (НК-клеткам) и после инкубации определяют цитотоксическую активность (ЦТА) НК-клеток. Вывод о способности исследуемых клеток секретировать простагландин Е в среду делают на основании снижения ЦТА НК-клеток в присутствии культуральной жидкости этих клеток, не обработанных индометацином, при условии отмены этого эффекта в присутствии культуральной жидкости исследуемых клеток, обработанных индометационом.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИ Х

РЕСПУБЛИК (51)4 С 01 1Ч 33 88

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕ"ГЕЛЬСТВУ ных индоме гdltHHÎM. дометацином, при одновременном сохранении этой активности в присутствии КЖ-клеток, обработанных индомстацином.

Пример. Двухсуточную культуру клеток высокоэлокачественной опухоли сирийского хомяка, индуцированной вирусом саркомы Рауса (ОПХ.-SR), обработанную или необработанную в течение двух часов индометацином (20 мкг/мл ростовой среды), снимали со стекла версеном, осаждали центрифугированием при 400 g, в течение 5 мин, и ресуспеидировали в питательной срЕде

ВРИ?-!640 (с 10Х бычьей сыворотки) до

7 концентрации не ниже 2 .10 клеток в

I мл среды.

Клетки повторно центрифугировали

5 мин при 400 g, затем помещали в.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 43508бб/28-14 (22) 28.12.87 (46) 15.12,89. Бюл. K: 46 (71) Все..оюэный онкологическии научный центр А И СССР (72) Т.Е. Ключарева и В.A. Китk« и"я (53) 612.015(088.8) (54) СПОСОБ ОПРЕ11ЕПРПИЯ 0ПОСОБ11ОСТИ

КЛЕТОК СЕК РЕТИРОВАТЬ >IFOCТА!11АПДИИ Г.

СРЕДУ КУ11Ь ТИ В11РО ВА11ИЯ (57) Изобретение .: гн си ся ., би 1л гии клетки и медицине и . жет быть использовано длн иэучь-ния сп собир . ти нормальных и оиухолпвых k: вЂ,.т h екрь— тировать простаглачди Е. 11ельк1 и-: б— ретения является nkkðåä ..с ние спог; бности клеток секретировать прост; гИзобретение относится к био: огни клетки и медицине.

Цель изобретения — определение способности кл ток секретировать простагландин Е (ПГЕ) в культура ьную среду °

Цель достигается тем, что ку ьтуральные жидкости (КЖ) исследуемых клеток, предварительно обработанных и необработанных ингибитором :интеэ»

ПГЕ индометацином, добавляют к нормальным клеткам-киллерам (ИК-клеткам), и после инкубации определяют цитотоксическую активность (LITA) klkклеток, Вывод о способности клеток секретировать ПГЕ делают на основа нии снижения ЦТА HI — êëåòoê после инкубации их с культуральнои средой исследуемых клеток, не обработанных ин„„SU„„152 A1

2 ландин в культуральную жидкость. Исследуемые клетки культивируют в присутствии ингибитора синтеза простагл;ндина Е-индометацина или без него, з;тем полученные культуральные жидкости добавляют к нормальным клеткамкиллерам (НК-клеткам) и после инкубапии определяют цитотоксическую активность (ЦТА) НК-клеток. Вывод о способности исследуемых клеток секретировать простагландин Е k ..реду делают на ос совании снижения 1. ТА НК.-клеток в

I1pHc òcTHHH культур 1ьнси жидкости этих KJIE. TcK) не обработанных гнэометанином, при усло .ии отмень этого c„ фаь " 1i 4< v Tcтвии к ль .: y ральнои жид кости исследуемых клеток, обработан1529125

1147-689 1007 = 29, 31;

2252-689

ЦТА НК-клеток, обработанных КЖ

ОПХ-SR, снижалась до

939-689

ООŠ— 5, А.;

1002, 1опыт — 1 контр

ЦТА =

1 мсакс 1комтр где 1,я„,, 1„,„ и 1„„, количество импульсов в надосадочной жидкос- 30 ти в опыте, контроле или при полном лизисе таиных культуральными жидкостями клеток-киллеров, при этом способность клеток секретировать простагландин Е в среду определяют при наличии снижения цитотоксической активности в Ilpo бе без индометацина и одновременном отсутствии снижения в пробе с индоме35 шеней соответственно.

В данном примере ЦТА интактных

НК-клеток равна тацином.

Составитель Е. Синауридзе

Редактор Т. Парфенова Техред A. Кравчук г Корректор C IikeKMap

Закэ 7635/40 Тираж 789 Подписное

ВККИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент, r.Óæãoðîä, ул. Гагарина,101 термостат при 37 С на 20 мин, отсасыо вали КЖ и 0,2 мл КЖ добавляли к равному обьему суспензии HK-клеток, содержащей (2-5) 10 клеток в 1 мл сре5 ды. HK-клетки предварительно выделяли иэ крови человека в ступенчатом градиенте плотности перколла. После

30 мин инкубации при 37 С к HK-клеткам добавляли 0,4 мл меченных Cr клеток тимомы человека lOLT 4 такой концентрации, чтобы соотношение клеток-мишеней и эффекторов (HK-клеток) составляло 1:50. Затем ставили цитотоксический тест стандартным методом в 96-луночкой плате. Через 4 ч отсасывали иэ лунок по 0,1 мл надосадочной жидкости в пластиковые ампулы и просчитывали их в гамма-счетчике. Уровень ЦТА определяли по общепринятой формуле расчета процента лизиса мишеней (процент выхеда радиоактивной метки из клеток в надосадочную жидкость) ЦТА НК-клеток, обработанных КЖ

ОПХ-SR, преобработанных индометацином, равна

1097-689

2252-689

Из представленных данных видно, что КЖ клеток ОПХ-SR снижает ЦТА

НК-клеток почти в 2 раза (с 29,3 до

15,6X), а индометацин отменяет этот эффект. На основании этих данных был сделан вывод о секреции этими клетками простагландина типа Е.

Формул а и з о б р е т е н и я

Способ определения способности кле ток секретировать простагландин E в среду культивирования, включающий обработку нормальных клеток-киллеров культуральной жидкостью исследуемых клеток, обработанных индометацином, и культуральной жицкостью тех же клеток, не обработанных индометацином, с последующим определением цитотоксической активности исходных и обрабо