Состав для криоконсервации артерий и способ подготовки их к трансплантации

 

Изобретение относится к медицине , в частности, к трансплантологии. Целью изобретения является сохранение атромбогенных свойств сосудистой стенки артерии и увеличение сохранности за счет этого ее функциональной полноценности при длительном хранении в замороженном состоянии. В качестве раствора для криоконсервации используют солевой раствор, содержащий (в г/л) однозамещенный фосфат калия 1,0-1,04

двузамещенный фосфат калия 3,6-4,0

бикарбонат натрия 0,82-0,86

цитрат натрия 0,28-0,32

сукцинат натрия 0,48-0,52

маннитол 0,38-0,40 и воду дистиллированную до 1 л, в который дополнительно вводят диметилсульфоксид в концентрации 5-15 г/л, альбумин сыворотки крови человека в концентрации 20-50 г/л и селенит натрия в концентрации 2<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">-5</SP> - 4<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">-5</SP> г/л. После помещения артерии в раствор концентрацию диметилсульфоксида постепенно увеличивают от 5 до 15 г/л в течение 25-30 мин, после чего артерию выдерживают в растворе еще 25-30 мин и замораживают до (-50)-(-70)°С со скоростью 1-3°С/мин. После отогрева артерии из замороженного состояния ее погружают на 20-30 мин. в консервирующий раствор, дополнительно содержащий 30-40 г/л маннитола. После этого артерия готова к пересадке. Изобретение позволит создать запас полноценных сосудистых трансплантатов, хранящихся в замороженном состоянии, которые в нужный момент могут быть использованы хирургами для замены поврежденных артерий.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ l 500231 А 1 (51) 4 А 01 N 1/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ fHHT СССР

1 (21) 4308135/28-14 (22) 21.07.87 (46) 15.08.89. Бюл. 11 30 (71) Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов (72) В.И. Кирпатовский и А.В. Верзин (53) 615.475(088.8) (56) Шумаков В.И., Онищенко Н.А., Кирпатовский В.И. Фармакологическая защита трансплантата. М.: Медицина,, 1983, с. 260.

Boren С.Н., Roon А.J., Мооге W.S.

Maintenance of viable arterial

allagrafts by cryopreservation.

Surgery, 1978, vol. 83, Р 4, р.382391. (54) СОСТАВ ДЛЯ КРИОКОНСЕРВАЦИИ АРТЕРИЙ И СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ИХ К ТРАНСПЛАНТАЦИИ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к трансплантологии.

Целью изобретения является сохранение атромбогенных свойств сосудистой стенки артерии и увеличение сохранности за счет этого ее функциональной полноценности при длительном хранении в замороженном состоянии. В качестве раствора для криоконсервации

Изобретение относится к медицине, в частности к трансплантологии.

Цель изобретения — сохранение атрембогенных свойств сосудистой стенки артерий.

Состав готовится простым смешиванием компонентов.

2 используют солевой раствор, содержащий (в г/л) однозамещенный фосфат калия 1,0-1,04; двуэамещенный фосфат калия 3,6-4,0; бикарбонат натрия 0,820,86; цитрат натрия 0,28-0,32; сукцинат натрия 0,48-0,52 маннитол 0,380,40 и воду дистиллированную до 1 л, в который дополнительно вводят диметилсульфоксид в концентрации 5-15 г/л, альбумин сыворотки крови человека в концентрации 20-50 г/л и селенит натрия в концентрации 2 10 - 4 -10 г/л.

После помещения артерии в раствор концентрацию диметилсульфоксида постепенно увеличивают от 5 до 15 г/л в течение 25-30 мнн после чего арте- а

Э

Я рию выдерживают в растворе еще 25— е

30 мин и эамораживают до (-50)-(-70) С Щ со скоростью 1-3 С/мин. После отогрева артерии иэ замороженного состоя- С ния ее погружают на 20-30 мин в консервирующий раствор, дополнительно Со-— держащий 30-40 г/л маннитола. После с этого артерия готова к пересадке. CA

Изобретение позволяет создать запас полноценных сосудистых трансплантатов, хранящихся в замороженном состоянии, которые в нужный момент могут быть использованы хирургами для замены поврежденных артерий.

Пример 1 ° Берут компоненты, г/л: однозамещенный фосфат калия

1,0; двузамещенный фосфат калия 3,6; бикарбонат натрия 0,82; цитрат натрия 0,28; сукцинат натрия 0,48; маннитол 38,0; диметилсульфоксид (ДМСО)

5,0; альбумин сыворотки человека

1500231

20,0; селенит натрия 2 10 ; вода дистиллированная до 1 л.

При консервации данным раствором отек сосудов составил в среднем 14,4+

4Х, что меньше прототипа (46+67).

H p и м е р 2. Берут компоненты, г/л: однозамещенный фосфат калия

1 04; двузамещенный фосфат калия 4,0; бикарбонат натрия 0,86; цитрат нат- 1Î рия 0,32; сукцинат натрия 0,52; маннитол 40,0; диметилсульфоксид 15.0; альбумин сыворотки человека 50,0; селенит натрия 4 "10 ; вода дистиллированная до 1 л. 15

При консервации данным раствором отек сосудов составил в среднем

20+47.

Способ осуществляют следующим образом. 20

Удаленную артерию промывают в. солевом изоосмотическом растворе любого состава для удаления крови и сгустков фибрина и после этого помещают в предлагаемый раствор, содержащий 5Х

ДМСО. После этого в раствор остепенно добавляют дополнительное количество ДМСО, повышая его концентрацию с 5 до 157. в течение 25-30 мин и выдерживают в этом растворе еще 25-30 мин при комнатной температуре. Затем артерию извлекают, помещают в контейнер для замораживания, охлаждают со скоростью 1-3 С/мин до -50 — -70 С и хранят при этой температуре. При необходимости контейнер с артерией извлекают, отогревают в водяной бане при комнатной температуре и переносят в раствор, содержащий-57 ДМСО и дополнительно содержащий 30-40 г/л 40 маннитола, для удаления избытка ДМСО из стенки сосуда при минимальных осмотических перепадах на клеточной мембране. В этом растворе выдерживают .20-30 мин и переносят артерию в изо- 45 осмотический солевой раствор любого состава; при этом артерия готова к пересадке.

Пример 1. У 5 крыс удаляют сегмент брюшной аорты ниже места отхождения почечных артерий длиной

0,6-0,9 см, отмывают от крови и сгустков в солевом изоосмотическом растворе (НИИТиИО-2) и помещают в предлагаемый раствор, содержащий 5Х ДМСО, 20 г/л альбумина, сыворотки человека и 3 -10 г/л селенита натрия. После этого постепенно увеличивают концентрацию ДМСО в этом растворе с 5 до

15Х в течение 30 мин. После выдерживания артерии в растворе еще 30 мин их извлекают, помещают в контейнер и

I замораживают со скоростью 1-3 С/мин до -50 С. Артерии хранят при этой температуре от 5 дней до 1 мес.После отогрева в водяной бане до комнатной температуры артерии извлекают из контейнера, погружают на 20-.30 мин в раствор, содержащий все компоненты раствора для криоконсервации; концентрация ДМСО в нем составляла 5Х, а содержание маннитола увеличивают на

30-40 г/л (до 80 г/л). Затем артерии пересаживают крысам-реципиентам,, заменив криоконсервированным трансплантатом соответствующий сегмент брюшной аорты. При пересадке используют микрохирургическую технику и ат равматический шовный материал 10/О.

У всех животных после пересадки трансплантат нормально функционировал весь период наблюдения (до 4 мес.), обеспечивая полноценное кровоснабжение нижней половины туловища животного. При осмотре через 4 мес все 5 трансплантатов были проходимы, внешне выглядели нормально без признаков стенозирования или аневризматического расширения. На резрезе в просвете ар- терии никаких тромбов не было обнару— жено. Интима была гладкая и блестящая. Предлагаемый состав для криоконсервации и способ подготовки артерий к трансплантации обеспечивают надежное длительное хранение донорских артерий в течение длительного времени с сохранением атромбогенных свойств сосудистой стенки. После пе» ресадки этих артерий в 100Х случаев трансплантат нормально функционирует длительное время. При пересадке артерий, криоконсервированных по способу-прототипу, функция трансплантата длительно сохраниялась лишь в 407.

Способ обеспечивает сохранение атромбогенных свойств интимы сосудов и длительное функционирование пересаженных артерий.

Формула изобретения

1. Состав для криоконсервации артерий, содержащий одно- и двузамещенный фосфат калия, бикарбонат натрия, цитрат натрия, сукцинат натрия, меннитол и дистиллированную воду, о тл и ч а ю шийся тем, что, с

1500231

3,6-4,0

0,82-0,86

0,28-0,32

0,48-0,52

38,0-40,0

5,0-15,0

Диметилсульфоксид

Альбумин сыворотки крови человека

Селенит натрия

Дистиллированная вода

20,0-50,0

2 10 +-4 10 з

До1л

Составитель В. Фролова .

Редактор В. Ковтун Техред М. Ходанич Корректор О.Ципле

Заказ 4787/4 Тираж 421 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул. Гагарина, 101 целью сохранения атромбогенных свойств сосудистой стенки артерии, он дополнительно содержит диметилсульфоксид, альбумин сыворотки крови человека и селенит натрия при следующих соотношениях компонентов,г/л:

Однозамещенный фосфат калия 1,0-1,04

Двузамещенный фосфат калия

Бикарбонат натрия

Цитрат натрия

Сукцинат натрия

Маннитол

2. Способ подготовки артерий к трансплантации, включающий выдерживание артерий в консервирующем растворе, замораживание, хранение в замороженном состоянии и оттаивание до комнатной температуры, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью увеличений сохранности функциональной полноценности за счет сохранения атромбогенных свойств сосудистой стенки артерий, после погружения в консервирующий раствор, концентрацию диметилсульфоксида доводят до

5-15 г/л в течение 25-30 мин, затем инкубируют 25-30 мин, замораживают до (-50)-(-70) С со скоростью 1

3 С/мин, а после оттаивания дополнительно вносят в раствор 30-40 г/л

20 маннитола и погружают в него артерию на 20-30 мин.