Способ идентификации гаплоидов кукурузы

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции для выявления гаплоидов кукурузы. Цель изобретения -повышение точности идентификации гаплоидов и ускорение селекционного процесса. Зерновки с гаплоидным зародышем получают в результате скрещивания гибридной комбинации с маркерной гаплоиндуцирующей линией. Полученные семена высаживают в чашки Петри и проращивают в термостате. Предварительно отбирают предполагаемые гаплоиды по морфологическим признакам корешков и первого листа проростков. У 7-8-дневных проростков получают электрофоретические спектры пероксидат, а к гаплоидам относят проростки, в спектре которых присутствует одна верхняя зона с R<SB POS="POST">F</SB> 0,17. 1 з.п. ф-лы.

- = Ф- РЕСПУБЛИК

Р. (51) 4 А 01 Н 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ та проростков.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

flQ ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К A BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4253507/31 — 13 (22) 01.06.87 (46) 15.08.89. Бюл, ¹ 30 (71) Институт экологической генетики АН МССР (72) Т.Я.Кибенко, С.Т.Чалык, В.И.Черноморец, Л.В. Голышкин и Л.С.Секирова (53) 631.521(088.8) (56) Тырнов В.С. и Завалишина А.Н.

"Индукция высокой частоты возникновения матроклинных гаплоидов у кукурузы. Доклады АН СССР, т. 276, № 33, 1984, с. 735-738. (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ГАПЛОИДОВ

КУКУРУЗЫ (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использоваИзобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции для выявления гаплоидов кукурузы.

Известен способ выявления гаплоидов, основанный на использовании доминантных маркерных генов и на морфологических особенностях гаплоидов кукурузы.

Цель изобретения — повышение точности идентификации гаплоидов и ускорение селекционного процесса.

Способ осуществляют следующим образом.

Зерновки с гаплоидным зародышем получают в полевых условиях в результате скрещивания нескольких гибридных комбинаций с маркерно гаплоинду„„Я0„„1500213 А 1 но в селекции для выявления гаплоидов кукурузы. Цель изобретения — повышение точности идентификации гаплоидов и ускорение селекционного процесса. Зерновки с гаплоидным зародышем получают в результате скрещивания гибридной комбинации с маркерной, гаплоиндуцирующей линией. Полученные семена высаживают в чашки Петри и проращивают в термостате. Предварительно отбирают предполагаемые гаплоиды по морфологическим признакам корешков и первого листа проростков.

У 7-8 дневных проростков получают электрофоретические спектры пероксидат, а к гаплоидам относят проростки, в спектре которых присутствует одна верхняя зона с R 0 17. 1 з и. ф-лы. цирующей линией КИС (коричневый маркер Саратовский) . Гибридные комбинации используют в качестве материнского компонента. На початки материнских растений до появления рылец надевают пергаментные изоляторы. Пыльцу

I с КИС наносят вручную. Изоляторы на початках сохраняют до созревания семян. После созревания полученные семена высаживают в чашки Петри и трое суток проращивают в термостате при 30 С. Предварительный отбор пред- 3 полагаемых гаплоидов проводят по от- д, сутствню антоцианового окрашивания корешков, а также по морфологическим признакам корешков и первого лис3 4 возможность ошибок в отборе гаплоидов по морфологическим признакам.

Среди гаплоидов и предполагаемых гаплоидов, выделенных IIo морфологическим маркерам, методом электрофореза обнаружены диплоиды.

Применение предлагаемого способа увеличивает надежность отбора истинных гаплоидов, что очень важно для ускорения селекционного процесса.

150021

Формула изобретения

Составитель E.ØKðaäîê

Редактор В.Ковтун Техред A.ÊðaööóK Корректор М.Самборская

Заказ 4785/3 Тираж б21 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская ваб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "1!атент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 10!

Для анализа берут часть листовой пластинки 7-8 — деннных проростков кукурузы. Образцы гомогенизируют в течение 1-2 мин в трисглициновом буфе5 ре рН 8,3. Гомогенат после 1 ч настаивания центрифугируют (5 тыс.об/мин в течение 10 мин). Для анализа берут надосадочную жидкость, смешанную с 40 -ным раствором сахаро- 0 зы. Электрофорез проводят в вертикальных двуслойных пластинах полиакриламидного геля. Пероксилазу выявляют по реакции окисления бензидина до образования продукта окисления, Элект-5 рофореграммы обрабатывают на лазерном денситометре.

На электрофореграммах и денситограммах различия между гаплоидами и диплоидами выявлены в верхней части спектра: у гаплоидов присутствует компонент с Rf 0,17, тогда как у диплоидов — с Rf 0,17 и Rf 0,20.

Метод отличается точностью и исключает ошибки в идентификации ran25 лоидов. Так, например, электрофорез пероксидазы листьев проростков гаплоидов из нескольких гибридных комбинаций, отобранных с помощью известных морфологических маркеров 3МС (зародьппевый маркер Саратовский) и

KMC (коричневый маркер Саратовский) по известному способу, и предполагаемых гаплоидов, у которых данный маркер проявляется не четко, показап 35

1. Способ идентификации гаплоидов кукурузы, включающий скрещивание маркерной формы, содержащей гаплоиндуцирующий фактор с исходной гибридной комбинацией, и последующий отбор ,гаплоидных проростков по иорфологическим признакам, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения точности идентификации гаплоидов и ускорения селекционного процесса, у отобранных по морфологическим признакам проростков дополнительно получают электрофоретические спектры пероксидазы и к гаплоидам относят проростки, в спектре которых присутствует одна верхняя зона с Rf 0,17.

2. Способ по п. 1, отличаюшийся тем, что получают электрофоретические спектры 7-8 дневных npo" ростков.