Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в
Изобретение относится к производным сахаров ,в частности, к получению 1-N-(W-амино-α-оксиалканоил)канамицина А или В формулы @ где R - ОН или NH<SB POS="POST">2</SB> N - 0-2, широко применяемых антибиотиков. Цель - увеличение выхода целевых продуктов и интенсификация процесса. Получение целевых продуктов ведут из полисилилированного канамицина А или В, содержащего от 4 до 8 триметилсилильных блокирующих групп, или полисилилированного канамицина, содержащего карбобензилоксикарбонильную группу при 6Ъ-аминогруппе и от 3 до 7 триметилсилильных групп и ацилирующего производного кислоты формулы 1 C<SB POS="POST">6</SB>H<SB POS="POST">5</SB>CH<SB POS="POST">2</SB>OC(O)-NH-CH<SB POS="POST">2</SB>-(CH<SB POS="POST">2</SB>)<SB POS="POST">N</SB>-CH(OH-COOH), где N имеет указанные значения, ее N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидного эфира или N-оксисукцинимидного эфира, или смешанного ангидрида кислоты формулы 1 и триметилуксусной либо изобутилкарбоновой кислоты. Ацилирование ведут в среде органического растворителя, содержащего 0-5% воды, после чего блокирующие триметилсилильные группы удаляют гидрогенизацией. 7 табл.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН (19) (11) 11 2 2
HO
0 нн
NH
С=О
I сн 1.-(-)
СН2)11
Ь,. 112
H2I1
ИН
6о
-6и -.и
1 (сиг4, 1 сн
_#_Hg где R — ОН или NH2;
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦТИЯМ
ПРИ П.(НТ СССР (21) 2611254/23-04 (22) 28. 04. 78 (31) 791806 (32) 28.04.77 . (33) US (46) 15.05.89. Бюл . 1(18 (71) Бристоль-Мейерэ Компани (ЦБ) (72) Мартин Джон Крон, Джон Джерард
Кейл,. Дженг Е1ионг Лин, Мариано Весчио
Раггери и Дерек Волкер (ПБ) (53) 547 455.07(088,8) (56) Авторское свидетельство СССР
Ф 1190988, кл. С 07 Н 15/22, 1975. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-И- (Q — NGfHO-Ы-ОКСИАЛКАНОИЛ)КАНАМИЦИНА А ИЛИ В .(57) Изобретение относится к производным сахаров, в частности к получению 1-N (Я-амино-Ы-оксиалканоил)канамицина А или В фор-лы
Изобретение относится к усовершенствованному способу получения 1-NHO (511 4 С 07 Н 1.5/224 А 61 К 31/71 где Р— ОН или NH п = 0-2, широко применяемых антибиотиков. Цель — увеличение выхода целевых продуктов и интенсификация процесса. Получение целевых продуктов ведут из полисилилированного канамицина А или В,содержащего от 4 до 8 триметилсилильных блокирующих групп, или полисилилированного канамицина, содержащего карбобензилоксикарбонильпую группу при
6 -аминогруппе и от 3 до 7 триметилсилильных групп и ацилирующего производного кислоты формулы I
С,Н СН ОС(О)-NH ÑH -(СН,) -СН(OH-СООН), где и имеет указанные значения., ее
N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбокси-. имидного эфира или N îêñèñóêöèíèìèäного эфира или смешанного ангидрида кислоты фор-лы I и триметилуксусной либо изобутилкарбоновой кислоты, Ацилирование ведут в среде органического растворителя, содержащего 0-57. воды, после чего блокирующие триметилсилильные группы удаляют гидрогенизацией.
7 табл, — ((й-амино-Ы-оксиалканоил) канамицина
- А или В общей формулы
1480774
n — целое число от 0 до 2 широко применяемых антибиотиков.
Цель изобретения — увеличение выхода целевых продуктов и интенсификации процесса за счет использования в процессе полисилилированных канамицинов А или В, применения в качестве ацилирующего производного кислоты общей формулы 1О
СбН СИ ОС-БИ-СН -(СН п- СН-СООН
О ОН
HONS
SAE (или
HHBA-ONS) DCU
HCDS
BSA
Дикалит где h имеет укаэанные выше значения, ee N-oxcncyxry ntmt roro эфира или
N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидного эфира, или смешанного ангидрида кислоты формулы (II) и триметилуксусной либо.изобутилкарбоновой кислоты, причем ацилированпе в среде 20 органического растворителя, содержащего от О до 5% воды. . Изобретение иллюстрируется следующими примера а .
При описании примеров использованы 25 следующие сокращения:
HONB N-Окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимид
NAE N-окси-5-норбернен(или ВНВА- -2,3-дикарбоксиимид- 30
-ОНВ) ный активированный эфир ВНВА
N-Оксисукцинимид
N-Оксисукцинимидный активированный эфир
BHBA
DCC Дициклогексилкарбодиимид
Дициклогексилмочевина ексаметилдисилазан 40
Бис(триметилсплил)ацетамид
NSA Триметилсилилацетамид
TFA Трифторацетил 45 трет-ВОС трет-Бутилоксикарбонил
Торговая марка диатомной земли
Лмберлит CG50 Торговая марка хрома- 50 тографического сорта слабокислой катионпообменной смолы карбоксиполиметакрилатного типа
55 р --Бондапак Марка для ряда высокоэффективных жидкостных хроматографических колонок.
Пример 1. Получение 1-N — (I.— — {-) - -амино- — оксибутирил) канамицина
А, (амикацина) селективным ацилирова> нием поли(триметилсилил) 6 -N-карбобензилоксиканамицина Л в безводном диэтилкетоне.
15 г 24,24 ммоль 6 — N-карбобензил1 оксиканамицина Л суспендируют в 90 мл сухого ацетонитрила и нагревают с обратным холодильником в атмосфере азота. В течение 30 мин медленно добавляют 17,5 r (108,48 ммоль) гексаметилдисилазана и полученный раствор кипятят в течение 24 ч. После отгонки рао створителя в вакууме (40 С) и полной сушки в вакууме {10 мм рт.ст.) получают 27,9 г белого аморфного твердого вещества (90,71% в пересчете на 6 -Мкарбобензилоксиканамицин Л (силил), .
Это твердое вещество растворяют в а
150 мл сухого диэтилкетона при 23 С.
11,05 г (26,67 ммоль) N-окси-5- орборнен-2,3-дикарбоксиимидного эфира (NAE) -(-) †(-бензилоксикарбониламин- -оксимасляной кислоты растворяют в о
100 мл сухого диэтилкетона при 23 С
l и медленно при перемешивании добавляют в течение 0,5 ч. Раствор перео мешивают при 23 С 78 ч ° Желтый прозрачный раствор (рН 7,0) разбавляют
100 мл воды. рН смеси доводят до 2,3 (3 н.НС1) и сильно перемешивают при
23 С 15 мин. Водную фазу отделяют, органическую фазу экстрагируют 50 мл воды при рН 8. Соединенные водные фракции промывают 50 мл этилацетата.
Раствор загружают в сосуд Парра на
500 мл вместе с 5 r 5%-ного палладия на угле (катализатор Энгельгарда) и восстанавливают при 50 фунт/кв,дюйм (3,5 атм) водорода при 23 С в течение 2 ч. Смесь фильтруют через слой
Дикалита, который затем промывают еще
30 мл воды. Бесцветный фильтрат упаривают в вакууме (40-45 С) до объема
50 мл. Раствор загружают в ионнообФ менную колопку CG-50 (1ЯНд) 5 х 100 см.
После промывки 1000 мл воды непрореагировавший канамицин А, 3-(?.-(-)- -амина-g-оксибутирил) канамицин А (ВВ-К29) и амикацин элюируют 0,5 н. гидроокисью аммония, Полиацильное вещество выделяют 3 и. раствором гидроокиси аммония. За ходом элюирования следят биоанализом, тонкослойной хроматографией и по оптическому вращению.
5 1480
В табл. 1 приведены данные об объеме и оптическом вращении каждой фракции элюата, а также масса и процент выхода твердого вещества, выде- ленного из каждой фракции при выпаривании досуха.
Отработанный диэтилкетон по данным высокопроизводительной жидкостной хроматографии содержит дополнительно
3-57 амикацина.
6,2 г сырого амикацина растворяют в 20 мл воды и разбавляют 20 мл метанола и для кристаллизации добавляют
20 мл изопропанола. Получают 6,0 г (45,87.) кристаллического амикацина, !
Пример 2. Получение 1-N-(Т;
-(-) - -амино-о!-окснбутирил) канамици —. на А, (амикацина) селективным ацилиро. ванием поли(триметилсилил) 6 -N-карбобензилоксиканамицина В в безводном ацетоне.
103 r 0,081 моль поли(триметилси-! лил) 6.-N-карбобензилоксиканамицина
А, полученного как в примере 1 (в пе-! ресчете на 6 -N-карбобензилоксиканамицин (силил)q), растворяют в 100 "fJI сухого ацетона при 23 С. 35,24 r (0,085 моль) N-окси-5-норборнен-2,3дикарбоксиимидного эфира L (-)-11-бен- ЗО зилоксикарбониламин-оС -оксимасляной кислоты (NAE) растворяют в 180 мл суо хого ацетона при 23 С и медленно при сильном перемешивании добавляют к раствору поли(триметилсилил) 6 -N-карбо- 35
I бензилоксиканамицина А в течение
15 мин. Раствор перемешивают при 23 С
20 ч в атмосфере азота. Светло-желтый прозрачный раствор (pH 7,2) разбавляют !00 мл воды, рН смеси доводят до. 4о
2,5 (3 н ° НС1) и перемешивают 15 мин о при 23 С. Ацетон отгоняют в вакууме а при 35 С. Раствор загружают в сосуд
Парра вместе с 10 г 57.-ного палладия на угле (катализатор Энгельгарда) и восстанавливают при 40 фунт/кв,дюйм (2,8 атм) 2 ч при 23 С.Смесьфильтруют через слой диатомной земли, который затем промывают еще 50 мл воды.
После упаривания до 1/3 объема раствор (рН 6,9-7,2) загружают в ионнообмепную колонку CG 50 (NH ) 6 х 110 . ;м
4 и элюируют с градиентом от Н О до
0,6 н. гидроокиси аммония для выделения амикацина. За ходом элюирования следят с помощью автоматического по-. ляриметра. Комбинации делают на основе данных тонкослойной хроматографии.
Соединенные амикациновые фракции упа774 ривают до 25-ЗОБ твердых. } аствор разбавляют равньи объемом метанола, I затем двумя объемами изопропанола для инициирования кристаллизации. Выделяют 18,2 r (407) кристаллического амикацина. Выделение 127 канамицина
А, 407 ВВ-К29 и 5i полиацил рованного канампцина дало материальный баланс
977.
Пример 3. Получение 1-N †; — (-)- -амино — Ы.-оксибутирил) канамицина А (амикацина) селективным ацилированием поли (трцметилсилил) канамицина А, с применением блокирования
in заец.
А. Поли(триметилсилил) канамицин А.
18 r (37,25 ммоль) свободного ос— нования канамицпна А суспендируют в
200 мл сухого ацетонитрила и нагревают с обратной перегонкой. В течение
30 мин добавляют 29,8 г (184,6 ммоль) гексаметилдисилазона, смесь перемешивают с обратной перегонкой 78 ч и получают светло-желтый прозрачный раствор. После отгонки растворителя в вакууме остается 43 r (94K) аморфного твердого вещества (в пересчете на канамицин А (силил)„,), Б. 1-N-(L-(-)- -амино-о -оксибуририл1канамицин А.
5,56 r (20,43 ммоль) и-(бензилоксикарбонилокси)бензойной кислоты суспендируют в 50 мл сухого ацетонитрила при 23 С. Добавляют при хорошем перемешивании 8,4 г (41,37 ммоль) N,О-бистриметилсилилацетамида, Раствор выдерживают в течение 30 мин при 28 С, затем добавляют в течение 3 ч при сильном перемешивании к раствору .
21,5 r (17,83 ммоль) поли(триметилсилил)канамицина А (в пересчете на соединение (силил)„,) в 75 мл сухого ацетонитрила при 23 С. Смесь перемешивают 4 ч, растворитель отгоняют о в вакууме (40 С) и маслянистый остаток растворяют в 50 мл сухого ацетона при 23 С.
К указанному выше раствору в течение 5 мин добавляют 8,55 r (20,63 ммоль) N-окси-5-норборнен-2,3дикарбоксиимидного эфира Е-(-)-g-бензилоксикарбониламин-oL-îêñèìàñëÿной кислоты (NAE) в 30 мл ацетона. о
Смесь выдерживают при 23 С в течение
78 ч. Раствор разбавляют 100 мл воды и Рн снижается с 7,0 до 2,5 (6 н.
НС1). Смесь помещают в сосуд Парра вместе с 3 г 57.-ного палладия на угле
1480774 (катализатор Энгельгарда) и восстанавливают при 40 фунт/кв.дюйм (2,8 атм) водорода в течение 2 ч при
23 С. Смесь фильтруют через слой ди5 атомной земли, который затем промывают 20 мл воды. В объединенных фильтрате и промывках (168 мл) определяют активность микробиологическим анализом против Е. со1г. и устанавливают, 10 что в них содержится около 1 6400 мкг/мл (выход 197.) амикацина.
Пример 4. Получение 1-N-(Ь— — (-)- -амин-<&-оксибутирил) канамицигга
А (амикацина) селективным ацилированием поли(триметилсилил) канамицина А.
A. Поли(триметилсилил)канамицин A.
Суспенэию 10.г (20,6 ммоль) канамицина A в 100 мл сухого ацетонитрила и 26 мл (119 мыоль) l,l,l,3,3,3-гекса-. метилдисилазана нагревают с обратным холодильником в течение 72 ч. Получают прозрачный светло-желтый раствор.
Этбт раствор упаривают досуха в вакууме при 30-40 С, Получают 21,3 r по- 25 ли(триметилсилил)канамицина А в виде светло-коричневого аморфного порошка (выход 857. в пересчете на канамицин А (силил),О) .
Б. 1-N-(L-(-)-II-амино-о ;оксибутирил)канамицин А.
К раствору 2,4 r (2,0 ммоль) поли(триметилсилил)канамицина А в
30 мл сухого ацетона медленно добавляют 2 ммоль И-окси-5-норбернеп-2,3дикарбоксиимидногo (NAE) L ()« 35
- -бензилоксикарбониламин-с ;оксимасляной кислоты в 10 мл сухого ацетона при 0-5 С. Реакционную смесь перемешивают при 23 С в течение недели, 40 о упаривают досуха в вакууме при температуре бани 30-40 С. Затем к остатку добавляют 60 мл воды, затем 70 мл метанола и получают раствор, который подкисляют 3 н. EIC1 до рН 2 и восстанавливают при 50 фунд/кв.дюйм (3,5 атм) водорода в течение 2 ч, применяя в качестве катализатора
500 мл 5Х-ного палладия па угле..
Смесь фильтруют, в объединенных фильтрах и промывках определяют активность 50 микробиологическим анализом против
Е. coli и находят, что в них содер жится 29,47. амикацина.
Пример 5. Получение ампкацина селективным N-ацилированием поли (триметилсилил) 6 -N-карбобензоксиканамицина в безводном ацетоне.
Силилирование 6 -N-карбобензокси
Кана А в ацетойитриле с помощью гексаметилдисилаэана (ERG)S) дает промежуточпый 1 6-N-карбобенэокси Кана А (силил) . Этот силилированный Кана А хорошо растворим в большинстве органических растворителей, Ацилирование
NAE в безводном ацетоне при 23 С с помощью 57-иого молярного избытка NAE по отношению к 6 -N-CbZ Кана А дает г смесь, содержащую только производное
CbZ амикацина и ВВ-К29, некоторое количество Кана A n немного полиацильного вещества. В этих опытах »е обнаруживали ВВ-К11. Элюирование смеси ацетона и ацилированной смеси после восстановления и обработке из колон+
Э ки с СС-50 (ИН4) с помощью градиента гпдроокиси аммония, дает выход чистого амикацина порядка 40Х.
A. Получение 6 -N-карбобенэилоксиканамицина А (силил) (6 - N-CbZ Ka9 на A (силил) q ) .
Суспендируют 50 г б -И-карбобензилоксиканамицина А (KF 47) в 300 мл ацетонитрила (КГ (0,01Х). Нагревают
О до обратной перегонки (74 С) и подают ток сухого азота через суспензию.
Медленно в течение 30 мин добавляют 75,8 мг гексаметилдисилазана (HMDS).
Полное растворение происходит с вьщелением газообразного аммиака.
Продолжают нагревание с обратной перегонкой в течение 18-20 ч в токе азота.
Светло-желтый прозрачный раствор упаривают в вакууме (температура бани
40-50 С) до пенистого осадка. ПолуО чают 89-92 r (силильного) соединения
9 (90-947 от теории).
B других опытах с растворителем это вещество выделяют и прямо используют для ацилирования.
Б. Получение М-окси-5-норборнен2,3-дикарбоксиимидного эфира Ь-(-)- -карбобензилоксиамин-о -оксимасляной кислоты (ИАЕ).
Растворяют 21,5 г L-(-)-g-карбобензилоксиамин-Ы.-оксимасляной кислоты (ВНВА) в 100 мл сухого ацетона при о
23 С, затем растворяют 15,2 г N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимида (EI0NB). Получают .раствор. В течение
30 мин добавляют раствор 17,48 г дициклогексилкарбодиимида (ДСС) в 50мл ацетона при перемешивании, Темпера- . о тура поднимается до около 40 С во вре9 1480 мя добавления и праггсхадит осаждение дициклогексилмачевины (DCU) .
Перемешивают суспензию в течение
3-4 ч, позволяя температуре устаноо
5 виться около 23-25 С.
Удаляют производное мочениггы фильтрованием, осадок промывают 30 мл ацетона. Сохраняют фггльтрат и промывки для следующей стадии ацилирования. 10
В. Ацилиравание 6 -N-CbZ Кана А (силил)з
Растворяют выделенный в пункте А, 6 -N CbZ (силил)я в 100 мл сухого ацетона при 23-24 С. 75
При хорошем перемешивании в течение 15 мин добавляют раствор МАК из части Б. Температура постепенно повы0 шается до 40 С. Дают раствору остыть
0 до 23 С и перемешивание продолжают 20 в течение 18-20 ч н атмосфере азота.
Добавляют 100 мл воды и уменьшают рН (6,9-7,2) до 2,2-2,5 6 н. соляной кислоты. Перемешивают 15 мин при
23 С. 25
При этом может образоваться второй слой, но это не мешает дальнейшей обработке.
Отгоняют ацетон в вакууме при темО пературе бани 30-35 С. Переносят кон- 30 центрат в сосуд для гидриронания, предварительно продутый азотом. Добавляют 10 r 5%-ного палладия на угле и гидрируют при 40 фунт/кв.дюйм (2,8 атм) в течение 2-3 ч.
Смесь фильтруют через слой Дикалита, осадок и сосуд для гидрирования промывают еще 50 мл воды.
Фильтрат и промывку упаривают до около 1/3 объема (50 мл) н вакууме, 40 при 40-45 С.
774 удельное вращение
С =. 1,07
23 С Н О (гл) 589 +101,6
Выход ВВ-К29 в этой смеси составляет также 39-427, остаточного Кана А
10-14% и 1,3-ди-AHBA-Кана А около 57, что.состанляет баланс веществ 957..
Пример 6. Получение амикацина селектинным N-ацилированием поли(триметилсилил) Кана А в безводном ацетоне. и tt
Силилирование Кана А основания в ацетонитриле с помощью гексаметилдисилазана (IMDS) дает поли(триметилПроверяют рН ана должна быть в диапазоне 6 9-7,2. Если рН другое, та его доводят да нужной величины
1 и. раствором гидроакиси аммапия.
Смесь загружаю-. в колонку с CG-50 (ИН,г) (6 х 110 см) .
Колонку промывают 1000 мл дистиллированной воды, затем элюируют
0,5-0,6 н. раствором гидроокиси аммония, применяя автоматический поляриметр для слежения за ходам элюирования. Порядок элюиронания счедующий:
Остаточный Кана А -+ БВ-К29 — + Амикацин.
E наших продуктах ацилипования не обнаружено ВВ-К11. Палиацильное вещества, например 1,3-ди-AHBA аналог
Кана А, ныпеляют промывкой копонки
3 н. раствором гидроокиси аммония.
Соединяют амикациноные фракции и упаринают их до 25-30% твердых частиц. Разбавляют 1 объемом метанола и добавляют в качестве затравки кристаллы амикацина.
Медленно н течение 2 ч добавляют
2 объема изапропанола (ТРА) при хорошем перемешивании и кристаллизуют при
23 С в течение 6-8 ч.
Осадок отфильтровывают, промывают 50 мл смесью вода — метанол—
IPA (1:1:2) и наконец 25 мл IPA.
Сушат в.вакууме при 40 С в течение
12-16 ч. Выход 17,3-19,0 г (38-42%) амикацина со следующими свойствами.
Тонкослойная хроматография: CHC1)метанол — МН ОН вЂ” вода — (1:4:2:1), 5 х 20 см, силикагеленые пластинки фирмы Квантум Индистриз — одна зона обнаруживается нингидрином (К = 0,4).
Удельное вращение
0 1 M NH40H 0 1 М Н,804
+101,9 + 103,5 силил) Кана А. Степень силилирования еще неопределенная, но по времени считают, что это Кана А (силил) д.
Полисилилированный Кана А легко растворим в большинстве органических растворителях. Ацилирование ЯАЕ в о безводном ацетоне при 23 С при малярном отношении SAE к Кану А 1:1 дает смесь, содержащую производные CbZ амикацина и ВВ-К29, обычно в отношении 2-3/1; ВВ-К6 (аколо 5-87), непро
14807
11 реагировавшего Кана А (15-?07) и небольшое количество полиацильного вещества (около 5-101). По ацилированию политриметилсилил 6 -N-карбобензокси
Кана А не было обнаружено ВВ-К11.
Восстановление и обработка ацетоновой ацилированной смеси с последующей хроматографией на колонке с CG-50 (NH4) с помощью 0,5 н. раствора гидроокиси 10 аммония дают кристаллический амикацин с выходом 34-397.
А. Получение Кана Л (силил)„.
Суспепзию 50 г Кана А ".основания" (КГ 2,5-3,57) в 500 л»л ацетонитрила (КУ (0,0147) нагревают до обратной
D перегонки (74 С) н токе сухого азота. пропускаемого через суспензию.
В течение 30 мин медленно добавляют 112 мл гексаметилдисилазана (НГПБ).,20
Полное растворение происходит за 4-.
5 ч с выделением газообразного ал»»лиака.
Кипячение с обратным холодильником продолжают в течение 22-26 ч в атмо" 25 сфере азота.
Прозрачный светло-желтый раствор упаривают в вакууме (40 С) до сиропообразного остатка. Его прол»ывают еще
100 л»л ацетонитрила и полностью сушат др в высоком вакууме н течение 3-6 ч, Выход беловатого аморфного осадка составляет 109-115 r (90-95% от теории, рассчитано на Кана Л (силил) о )..
Б. Получение N-оксисукцинпмидного дб эфира L-(-)-g-карбобензилоксиамин-, оксамасляной кислоты (SAE).
Растворяют 100 г 1,-(-)-»ь-бензилоксикарбониламин-» -оксимасляной кислоты (ВНВА) и 45,38 r N-оксисукцин-. i»р имида (N-HOS) в 1300 л»л этилацетата (KF < 0,057) при перемешивании при
23 С.
Растворяют 81,29 г дициклогексил- карбодиимида (ДСС) в 400 мл этилацета- 46 та (KF 0,057) при 23 С. При хорошем перемешивании этот раствор в течение
30 мин добавляют к раствору из стадии
A. Температура поднимается до 40-42 С при одновременном выпадении в осадок дициклогексилмочевины (DCU). Суспензию перемешивают 3-4 ч давая темпе» ратуре установиться при 23 С.
Отфильтровывают DCU осадок промывают 250 мл этилацетата (КГа0,05%) .; ВВОсадок DCU выбрасывают. Сохраняют фильтрат и промывки.
Упаривают фильтрат и промывки до
500 мл (в вакууме при 30-35 С). Выкрпсталлизовывается небольшое количество продукта, Концентрат переносят в соответствующий сосуд и при сильном перемешинании добавляют 100 мл гептана. Если нужно, то добавляют н качестве затравки .кристаллы SAE Кристаллизация начинается сразу. Суспензию перемешивают 30 мин при 23 С °
В течение 30 мин добавляют 400 мл гептана и перемешивают 4-5 ч при
23 С.
Осадок отфильтровывают и промывают 200 л»л смеси гептана и этилацетата (3;1), затем 100 мл гептана.
Сушат в вакуумной печи при 30-35 С в течение 18-20 ч. Выход 110,1
131,4 r (80-957), т.пл. 119 †1 С, размягчение 114 С, Тонкослойная хроматография — 4 ацетон: 12 бензол: 1
Cfl. СООН обнаружение: 17 водный КИО,».» х П y " 0,7 для SAE" 0,2 ВНВА на предварительно насеченных силикагельных пластинках фирмы Аналтех Инк.
В. Лцилиронание Кана A (силил)„ .
Растворяют Кана А (силил) „, выделенньп» н части А примера 4, в
500 мл сухого ацетона при 23 С.
При сильном перемешинании быстро добавляют SAE, полученный в части Б (35,03 r), в виде 10%-ного раствора в сухом ацетоне в течение 5-10 мин. о
Температура поднимается на 5 C расто, вору дают стоять до температуры 23 С и в течение 18-20 ч продолжают перемешивание.
Светло-оранжевый прозрачньп» раствор разбавляют 400 мл воды и рН доноднт с 7,0-7,5 до 2,2-2,5 3 н. НС1.
Прозрачный раствор снова перемешивают о при 23 С н течение 15-30 мин.
Отгоняют ацетон и вакууме при температуре бани 30-35 С (может отделитьо ся небольшое количество вещества, но
I это не мешает). Концентрат переносят в соответствующий сосуд для гидриронания, Добавляют 10 r 57.-ного палладия на угле и гидрируют при 50 фунт/кв. дюйм (3,5 атм) в течение 2-3 ч °
Смесь фильтруют через Дикалит и промывают сосуд для гидриронания и осадок еще 2 х 50 мл воды.
Упаривают фильтрат и промывки до около 1/3 объема (150-165 мл) в вакууме при 40-45 С. рН при этом составляет 6,0-7,0..
Смесь загружают н колонку с CG-50 . (%14) размером 6 х 110 см.
14807 /4
Колонку промывают 1000 мл дистиллированной воды. Элюируют 0,5 н, гидроокисью аммония с применением автоматического поляриметра для слежения за ходом элюирования. Ниже приводится порядок элюировапия:
Оставшийся Кана Л - ВВ-К6 — + ВВ-К29
-ФАмикациEE.
В опь|тах не обнаруживали ВВ-К11 °
Соединяют амикационовые фракции и вьптаривают до 25-307 твердых частиц.
Разбавляют 1 объемом метанола и вносят затравку из кристаллов ампкацина.
В течение 2 ч медленно добавляют 15
2 объема ЕРА при хорошем перемешивао нии и кристаллизуют при 23 С в течение 6-8 ч.
Отфильтровывают осадок, промывают
35 мл смеси вода — метанол — тРЛ 20 (1:i:2) и наконец 35 мл IPA.
О
Сушат в вакууме при 40 С в течение
16-24 ч. Выход 19,91-22,84 г (34-39), IR PkK и СИЯ-спектральные данные в дополнение к удельному вращению пол- 25 постыл согласовываются с нужной структурой.
Система тонкослойлой хроматографии:
СНС1 — метанол — NH OH — вода (1:4:
:Z:1) 5 х 20 мл силикагелевые пластин-30 ки фирмы Квантум Индастриз — одна зона амикацина с К =- 0,4 (нингидриновое определение).
Пример 7. Получение амикацина ацилированием поли (триметилсилил) 35
6 -N-CbZ Кана А в тетрагидрофуране с помощью смешанного ангидрида триметилуксусной кислоты и ВНВА.
А. Получение смешанного ангидрида.
5,066 r (20,0 ммоль) ВНВА, 4,068 г 40 (20 ммоль) BSA и 2,116 г (22 ммоль) триэтиламина растворяют в 200 мл вы-! сушенного молекулярными ситами тетрагидрофурана. Раствор кипятят в течео ние 2,25 ч, затем охлаждают до -10 С. 45
В течение 2-3 мин добавляют 2,412 r (20 ммоль) хлорангидрида триметилуксусной кислоты при перемешивании, коо торое продолжают 2 ч при -10 С. Затем о температуре дают подняться до 23 С. 5р
Б. Ацилип ов ание поли (триметилсилил)-6 -N-CbZ Кана А.
5,454 r (4,97 ммоль) поли(триметилсилил)-6 -N-CbZ Кана A,ïîëó÷åííîãî в примере 1 (в пересчете на 6 -СЬЕ Ка= .на А (силил)з), растворяют в 50 мл сухого (молекулярное сито) тетрагидрофурана при 23 С ° В течение 20 мин при перемешивании добавляют половину раствора смешанного ангидрида, полученного в пункте А (10 ммоль), и перемешивание продолжают 7 дней.
Затем добавляют 100 мл воды и рН доводят с 5,4 до 2,0 3 kI kI $0 . Перемешивапие продолжают в течение 1 ч EE раствор экстрагируют этилацетатом.
Полиацилированное вещество начинает кристаллизоваться и реакционную смесь фильтруют. После сушки над Р О масса выделенного твердого вещества составляет 0,702 r. Экстракцию реакционной смеси проводят 4 х 75 мл этилацетата, после чего избыток этилацетата отгойяют нз.водного слоя. Часть водного раствора анализируют с помощью высокопроизводительной жидкостной хроматографии. Полученная кривая показывает выход дп-СЬЕ ампкацина 26,47.
Затем водный слой гидрируют в аппарате Парра прп 50 фунт/кв.дюйм (3,5 атм) водорода в течение 2 ч, применяя 0,5 r 107-ного палладия на угле. Вещество фильтруют и в фильтрат и промывках определяют активность против Е, coli в них содержится
31,27 амикацина. Отношение амикацинВВ-К29 около (9-10):1; следы полиацилов и непрореагировавшего Кана А.
Пример 8. Влияние воды на получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил) Кана А в ацетоо новом растворе при 23 С.
A. Безводный растворитель.
2,4 г (2 ммоль) поли(триметилсилил) Кана А, полученного в примере
3, в пересчете на Кана А (силил)„„, растворяют в 20 мл ацетона, который был высушен молекулярным ситом. Расто вор перемешивают при 23 С и в течение
10 с добавляют раствор 0,701 r (2 ммоль) SAE в 10 мл высушенного мо.лекулярным ситом ацетона, Перемешивао ние продолжают при 23, С в течение
22 ч. Ацетон отгоняют в вакууме при о
40 С и затем водный раствор восстанавливают при 51 фунт/кв,дюйм водоо рода при 23 С в течение 2 ч, применяя
1 r 107-ного палладия на угле в качестве катализатора. микробиологический анализ показывает выход амикацина
31,247.
Б. При добавлении воды к растворителю.
Повторяют стадию А, но к раствору поли(триметилсилил) Кана А добавляют
1 мл (56 ммоль) воды и перемешивают
14807
15 мин перед ацилированием БЛЕ. Микробиологический анализ показывает выход амикацина 33,8%.
Пример 9. Получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил)
6 -N CbZ Кана А в ацетоне смешанным ангидридом ВНВА и изобутилкарбоновой кислоты, A. Получение смешанного ангидрида. 10
1,267 г (5 ммоль) ВНВА и 1,313 r (10 ммоль) N-триметилсилилацетамида (МБА) в 20 мл высушенного молекулярными ситами ацетона перемешивают при 23 С и добавляют 0,7 мл (5 ммоль) 15 триэтиламина (TEA). Смесь кипятят в атмосфере азота 2 5 ч. Смесь охлаж дают до -20 С и добавляют,0,751 г
i(0,713 мл, 5,5 ммоль) изобутилхлор формиата, Сразу начинает отделяться 2О хлоргидрат триэтиламина. Смесь перео мешивают 1 ч при -20 С, Б. Ацилирование, 6.215 г 6 -N-CbZ Капа А (4,9 ммоль в пересчете на соединение (силил) ) растворяют в 20 мл высушенного молекулярными ситами ацетона при перемео шивапии и температуре 23 С. Раствор охлаждают до -20 С и холодный раствор смешанного ангидрида на стадии А медленно добавляют в течение 30 мин, Реакционную смесь перемешивают еще
1,5 ч при -20 .С и 17 ч при 23 С. Затем реакционную смесь выливают в 150 мл воды при 23 С и при перемешивании рН доводят до 2,5 с 7,5 с помощью 3 н.
НС1 и перемешивание продолжают 15 мин.
Затем отгоняют ацетон в вакууме при
40 С. Часть полученного водного раствора анализируют высокопроизводитель40 ной жидкостной хроматографией. Полученная кривая показывает .выход ди-CbZ амикацина- 34,33Х.
Основную часть водного раствора восстанавливают при 50 фунт/кв,дюйм (3,5 атм) водорода при 23 С в течение
3,25 ч, применяя 2,5 г катализатора
Pa/C. Катализатор отфильтровывают, фильтрат и промывки подвергают микробиологическому анализу против Е.coli
50 и получают выход амикацина 35,0%.
Пример 10. Получение амикацина ацилированием поли (триметилсилил) —.
-6 -N-CbZ Кана А в 3-пентаноне.
30 r (23;65 ммоль, в пересчете на
6>-И-CbZ Кана А (силил) ) поли(три55 метилсилил)-6 -N-CbZ Кана А, полученного в примере 1, растворяют в
100 мл высушенного молекулярным ситом
74 16
3-пентанона, перемешивают при 23 С и в течение 40 мин добавляют
26,02 ммоль (избыток 10%) NAE. Перемешивание продолжают 113 ч при 23 С и смесь добавляют в 250 мл воды при сильном перемешивании, рН с 7,3 доводят до 2,5 3 н. НС1, смесь перемешивают еще 30 мин и 3-пентанон отгоняют о в вакууме при 40 С. Водный раствор экстрагируют 4 х. 100 мл этилацетата.
Часть водного раствора анализируют высокопроизводительной жидкостной хроматографией. Полученная кривая показывает выход ди-CbZ амикацина 46,12%.
Основную часть водного раствора восстанавливают при 51 фунт/кв.дюйм водорода (3,55 атм) при 23 С в течение 2,5 ч, применяя 3 г 10%-ного
Рд/С катализатора. Микробиологический анализ части соединенного фильтрата и и промывок показывает выход амикацина 40,24%.Основную часть восстановленной реакционной смеси упаривают в о вакууме при 40 С до объема около
100 мл и фракционируют на ионнообменной колонке CG-50 (4 дюйма х 4 фута, 101 мм х 1,2 м), содержашей около
10 л смолы. Водный раствор загружают в колонку и колонку промывают 5 л воды, вещество элюируют 0 5 н. раствором IJH40Н (затем 3 í. NH40Н для элюирования полиацилированных продуктов). Поляриметрия фракций показы.вает наличие 42,7Х амикацина, 12,0% непрореагировавшего канамицина А, 12,4%. полиацилированного вещества и
23,2% ВВ-К29.
Пример 11. Получение амикацнна ацилированием поли(триметилсилил) 6 -N-CbZ Кана А в безводном циклогексаноне при различной продолжительности реакции.
А. 2,537 г (2,0 ммоль в пересчете на 6 -N-CbZ Кака А (силил) ) поли(триметилсилил) 6 -N-CbZ Кана А, полученного в примере 1, в 300 мл сухоro циклогексанона ацилируют 20 ч при
23 С раствором NAE в сухом циклогекt саноне (10,.8 мл раствора, 0,1944 ммоль/мл, 2,1 ммоль), Реакционную смесь добавляют к 150 мл воды при перемешивании и рН с 5,6 доводят до 2,5 3. н. НС1. Циклогексанон отгоняют в вакууме при 40 С и"часть оставшейся водной фазы берут на анализ жидкостной хроматографией. Основную часть водной фазы восстанавливают при 50 фунт/кв.дюйм (3,5 атм) водоро17
1480774
18 да в течение 3 ч при 23 С, применяя
1 г катализатора 107.- Pd/Ñ. Катализатор отфильтровывают и соединенные фильтрат и промывки микробиологи5 чески анализируют на амикацин.
Б. Реакцию А повторяют, но длительность реакции ацилирования увеличивают до 115 ч, вместе 20 ч, Результаты приведены в табл. 2.
Пример 12 ° Получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил) 6 -И-СЬЕ Кана А в безводном тетрагидрофуране при различной продолжительности реакции ° 15
A. Повторяют пример 11, но вместо сухого циклогексанона применяют сухой тетрагидрофуран.
Б. Повторяют пример 11, но вместо сухого циклогексанона применяют су- 20 хой тетрагидрофуран.
Результаты приведены в табл. 3.
Пример 13. Получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил) 6 -N-CbZ Кана A в безводном ди- 25 оксане при различной длительности реакции.
А. Повторяют пример 11, но ацилирование ведут 44 ч в сухом диоксане.
Б. Повторяют пример 11, но ацилирование ведут 18,5 ч в сухом диоксане. Ф
Результаты приведены в табл. 4 °
p n м e p 14 ° Получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил) 6 -N CbZ Кана А в безводном диэтилкетоне при 75 С.
K перемешиваемому раствору поли(триметилсилил) 6 -N CbZ Кана А, по- 40 лученного как в примере 1 (2,537 г, 2,0 ммоль, в пересчете на 6 -N-CbZ
Кана А (силил) ), в 32 мл высушенного ситами диэтилкетона при 75 С добавляют раствор NAE (10,8 мл, 45
0,1944 ммоль/мл диэтилкетона, 2,1 ммоль) в течение 15 мин. Перемешивание продолжают при 75 С еще 3 ч, после чего смесь выливают в 150 мл воды, рН доводят до 2,8 3 н. НС1 и диэтилкетон отгоняют в вакууме при о
40 С. Анализ .части водной фазы высокопроизводительной жидкостной хроматографией показывает выход ди- CbZ амикацина 39,18 .
Основную часть водной фазы восста навливают при 49,8 фунт/кв.дюйм (3,45 атм) водорода в течение 3,25 ч о .при 23 С, применяя 1 г катализатора
Pd/С. Катализатор отфильтровывают и соединенные фильтрат и промывки анализируют микробиологическим методом на амикацин. Турбидиметрический метод показывает выход 27,84, анализ на пластинках показывает выход 28,67.
Пример 15. Получение амикацина ацилированием поли(триметилсио лил) Кана А с помощью ИАЕ 0-5 С после обратного гидролиза водой.
Л. Силилирование канампцина А с помощью HOES, применяя в качестве катализатора TNCS.
1О г канамицина А 97,6 -ной чистоты (20,14 ммоль) в 100 мл высушенного на молекулярных ситах ацетонитрила кипятят в атмосфере азота. К кипящей реакционной смеси в течение 10 мин добавляют смесь 22,76 г (141 ммоль, 7 моль на 1 моль канамиципа НМВ$) воды и 1 мл, 0,856 г (7,88 ммоль)
ТИСЯ, Нагревание с обратной перегонкой продолжают в течение 4,75 ч, затем смесь охлаждают, выпаривают в вакууме до желтого вязкого сиропа и сушат в вакууме в течение 2 ч. Выход продукта 23,8 г (97,8% в пересчете на канамицин А (силил), )., Б. Ацилирование.
23,8 г (20,14 ммоль) поли(триметилсилил) канамицина А, полученного в стадии А, растворяют в 250 мл высушенного молекулярными ситами ацетона, о затем охлаждают до 0-5 С. Добавляют при перемешивании 3,63 мл (201,4 MMQJIb>
10 моль на 1 моль полисилилированного канамицина А) и смеси дают стоять при умеренном вакууме 30 мин. В теI чение меньше 1 мин добавляют
19,133 ммоль (0,95 моль на 1 моль полисилилированного канамицина А) NAE в 108,3 мл ацетона. Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0-5 С, разбавляо ют водой, рН доводят до 2,5 и ацето отгоняют в вакууме. Водный раствор восстанавливают при 50 фунт/кв.дюйм (3,5 атм) водорода при 23 С в теченйе
2,5 ч, применяя 2 r 10 -ного Pd/Ñ в качестве катализатора. Восстановленную смесь фильтруют через Дикалит, упаривают до 100 мл в вакууме при о
40 С и загружают в колонку с CG-50 (NH ) (6 л смолы 5 х 100 см).Ее про-Ф мывают водой и элюируют последовательно.0,6 — 1 — 3 н. растворами
NHg0H. Получают 60,25 . амикацина, 4,37 BB-K26, 4,35% ВВ-К29, 26,47 канамицина А и 2,18 полиацилов.
774
19 1480
П р и и е р l6. Получение амикацпна ацилированием поли(триметилсилил) 6 -N-СЬЕ Кана A с помощью SAE при 0-5 С после обратного гидролиза.
А. Силилирование 6 — N-CbZ канамицина А, 20 r (32,4 ммоль) 6 -N-CbZ канамицина А в 200 мл высушенного молекулярными ситами ацетонитрила нагрева- 10 ют с обратной перегонкой в атмосфере азота. В течение 10 мин добавлятот
47,3 мл (226,8 ммоль, 7 моль на 1 моль
6 -N-CbZ Кана A) метанола и нагрева— ют с обратной перегонкой 20 ч. Затем 15 смесь охлаждают, упаривают в вакууме и сушат в высоком вакууме в течение
2 ч; получают 39;1 r белого аморфного твердого вещества (выход 95,4Х в пересчете на 6 -N-ГЬХ Кана Л (силил)>).
Б. Ацилирование.
39,1 r (32,4 ммоль) поли(триметилсйлил) 6 -И-CbZ Кана А, полученного в стадии А растворяют в 400 мл сухо- Z5
Э о го ацетона при 23 С и перемешивании.
Добавляют 6,6 мл (162 ммоль, 5 моль на 1 моль полисилилированного 6 -N-CbZ о
Кана А) и смесь перемешивают при 23 С в течение 1 ч при сильной продувке 80 азотом. Смесь охлаждают до 0-5 С, и добавляют раствор 11,35 г (32,4 ммоль)
SAR в 120 мл предварительного охлажденного сухого ацетона. Смесь перемешивают еще 3 ч при 0-5 С, затем помео 35 щают в термостат при 4 С. на одну неделю, Добавляют 300 мл воды, рН доводят до 2,0, смесь перемешивают 1 ч, ацетон отгоняют в вакууме ° Полученный водный раствор восстанавливают при
54 фунт/кв.дюйм (3,7 атм) водорода при 23 С в течение 17 ч, применяя 3 г
10Х-ного Pd/С в качестве катализатора.
Затем смесь фильтруют через Дикалит, упаривают в вакууме до 75-100 мл,: 45 загружают в колонку с CG-50 (NEi4) и элюируют водой и 0,6 н, раствором
NEE40H. Получают 52,527 амикацина, 14;5% BB-K29, 19,6% канампцина и
1,71% полиацилов.
Пример 17. Получение амика цина ацилированием пали(триметилсилил)
Кана А с помощью БАЕ при 0-5 С после обратного гидролиза водой.
А. Силилировапие канамицина А PCS в ацетонитриле, применяя тетраметилгуанидин в качестве акцептора кислоты, 4,88 r, (l0.07 ммоль) амикаци а Л суспендируют при 23 С в 100 мл высушенного на молекулярных ситах ацетонитрила и перемешивапии. К перелтешиваемой суспензии добавляют 16,234 г (140,98 ммоль, 14 моль на l моль канамицина A) тетраметилгуанидина (ТМС), Смесь кипятят в течение 15 мин, добавляют 15,32 г (140,98.ммоль, !4 моль на 1 лтотть канамиципа Л) ТИСБ. Образуется белый осадок TE EG НС1 после того, как добавили половину TNCS. Смесь охлаждают до комнатной температуры, выпаривают до липкого остатка и сушат в высоком вакууме 2 ч. Остаток растирают с сухим THE (100 мл) и нерастворимую соль ТМС НС1(отфильтровывают и промывают 5 х 20 мл ТНГ. Фильтрат и промывки соединяют и упаривают в о вакууме при 40 С до липкого остатка, сушат в высоком вакууме 2 ч. Получают
10,64 г светло-кремового липкого остатка (выход 87,67. в пересчете на канамицин Л (снлил), ).
Б. Ацилирование.
10,64 г (10,07 ммоль) поли(триметилсилил) канамицина Л из стадии А растворяют в 110 мл высушенного молекулярными ситами ацетона при перемео шивании и температуре 23 С, затем рао створ охлаждают до 0-5 С. Добавляют
1,81 мл (100„7 ммоль, 10 моль тта
1 моль полисилилированного Кана А) воды и раствор перемешивают 30 мин в умеренном вакууме. В течение 1 мин добавляют 3,7 г (10,57 ммоль, 5% избытка) БАЕ в 40 мл предварительно охлажденного сухого ацетона и смесь перемешивают в течение 1 ч. Смесь обрабатывают по общей методике примера
16 Б и получают около 507 амикацина, 107 ВВ-К29, 5-8% ВВ-К6, 207 канамицина A и 5-8Х полиацилов.
Пример 18. Получение поли(триметилсилил) канамицина Л в пиридине с помощью HM3S, 10,0 г (20,64 ммоль) канамицина Л суспеттдируют в 100 мл высушенного молекулярными ситами све>кеперегпанного о пиридина при 23 С. Начинают продувку азотом и суспензию нагревают до кипения. Добавляют 17,33 r (107,3 ммоль, 5,2 моль на 1 моль канамицина А) НМОБ в течение 10 мин и смесь кипятят в течение 19 ч. Затем ее охлаждают до комнатной температуры, упаривают в вакууме до светло-желтого золотистого сиропа и сушат в высоком вакууме до белого аморфного твердого вещества.
80774
2! 14
Получают 22,1 г (выход 9,67 в пере: счете на канамицин А (силил) ю ) .
П р и и е р 19. Получение поли(триметилсилил) канамицина A с помощью триэтилхлорсилана с триэтиламином в качестве акцептора кислоты.
5 r (10,07 ммоль, 97,6Х-ной чистоты) канамицина А суспендируют при
23 С в 100 мл высушенного молекулярными ситами ацетонитрила. Добавляют
33,8 мл (24,5 r, 241,7 ммоль) триэтиламина (TEA) и суспензию кипятят.
В течение 20 мин добавляют раствор
23,7 мл (21,3 г, 140,98 ммоль) трихлорэтилсилана в 25 мл сухого ацетонитрила. Кипячение продолжают еще
7 ч и смесь охлаждают до комнатной температуры, после чего выделяются длинные тонкие иглы TEA НС1. Смесь выдерживают при комнатной температуре:около 16 ч, упаривают в вакууме
0 при 40 С до липкого твердого вещества и сушат 2 ч в высоком вакууме до образования оранжевого липкого твердого вещества. его растирают с 100 мл сухого THF при 23 С и отфильтровывают нерастворимую соль ""EA НС1, промывают
5 х 20 мл THF, сушат и получают 16 г
ТЕА НС1. Фильтрат и промывки соединяют и упаривают в вакууме до твердого остатка, который сушат в высоком вакууме 2 ч. Получают 19,3 r поли(триэтилсилил) канамицина А в виде оранжевого вязкого сиропа.
Пример 20. Получение поли(триметилсилил)канамицина А с помощью триметилсилилмочевины.
10 г (20,58 ммоль, 977. †н чистоо ты) канамицина А при 23 О суспендируют в 200 мл высушенного молекулярными ситами ацетонитрила при перемешивании.
К суспензии добавляют 29,45 г (144,01 ммоль, 7 моль на 1моль канамицина Л) бис-триметилсилилмочевины (BSU) и смесь кипятят с обратным холодильником в токе азота в течение
17 ч, затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, Отфильтровывают небольшое количество нерастворимого вещества, промывают 3 х 10 мл ацетонитрила и сушат (1,1381 г). ИКспектр показывает, что это BSU и небольшое количество непрореагировавшего канамицина А. Фильтрат и промывки о соединяют и охлаждают при 4 С в течение 16 ч. Выпавший осадок (7,8 r) отделяют и ИК-спектр показывает, что это BSU плюс мочевина. Светло-желтый фильтрат и промывки упарнвают в вакууме при 40 С и сушат в высоком вакууме, получают 27 r белого твердого вешества, частично липкого, частично в 5 виде иглоподобных тонких кристаллов.
Осадок обрабатывают 150 мл гептана о при 23 С, нерастворимую часть отфильтровывают, промывают 2 х 50 мл гептана, 1р сушат и получают 6,0 г белых кристаллов (ИК-спектр показал, что это BSU плюс мочевина). Соединенные фильтрат и промывки упаривают в вакууме при
40 С и сушат в высоком вакууме 2 ч, получают 20,4 r белых кристаллов.
ИК-спектр которых типичен для полисилилированпогo канамицина А. Расчеты показывают, что продукт содержит в сред" нем 7,22 триметилсилильные группы.
Пример 21. Получение амикацина ацилированием пер-(триметилсилил) канамицина А после частичного десилилирования 1,3-бутандиолом.
А. Получение пер-(триметилсилил) канамицина А.
10 r (20, 639 ммоль) канамицина А о суапендируют при 23 С в 100 мл высушенного молекулярными ситами ацетонитрила при перемешивании. Суспензию нагревают с обратной перегонкой в атмосфере азота и в течение 10 мин добавляют 23,322 r (144,5 ммоль, 7 моль на 1 моль канамицина А) ЕП)Я. Обратную перегонку продолжают 16 ч, затем
35 смесь охлаждают до комнатной температуры, упаривают в вакууме и сушат
2 ч в высоком вакууме. Получают 24,3 r белого липкого остатка (выход 92 1Е в пересчете на канамицин А (силил) н ).
Б. Ацилирование.
24, 3 r пер- (триметилсилил) канамицина А, полученного в стадии А, при о
23 С растворяют в 240 мл высушенного молекулярными ситами ацетона при пере45 мешивании. К этому раствору добавляют
9,25 мл (103,2 ммоль, 5 моль на 1 моль пер-(триметилсилил)канамицина А) 1,3-бутандиола. Смесь перемешивают при о
23 С 2 ч в токе азота и охлаждают до, о
0-5 С. В течение 1 мин добавляют
7,23 г (20,64 моль) SAE в 70 мл предварительного охлажденного ацетона.
Смесь перемешивают при 0-5 С в течео ние 3 ч и выдерживают при 4 С в тече ние 16 ч. Добавляют 200 мл воды, рН доводят до 2,5 и прозрачный желтый о раствор перемешивают при 23 С в тече ние 30 мин. Ацетон отгоняют в вакууме
:и водный раствор восстанавливают при
23 14
55 фунт/кв.дюйм (3,7 атм) водорода о при 23 С в течение 2 ч, применяя 3 r
10%-ного Pd/Ñ в качестве катализатора
Восстановленный раетвор фильтруют через Дикалит, хроматографируют как в примере 16 Б и получают 47,05% амика цина, 5,8% ВВ-К29,, 7,32% ВВ-Кб, 24,26% канамицина А и 7,41% полиациI лов.
Пример 22. Получение амика-. цппа ацилированием поли(триметилсилил канамицина А, полученного в TIIF, с помощью $ЛЕ с катализатором — сульф амиповой кислотой, К кипящей смесгг 5 г (10,32 ммоль) каггамицигга А и 50 мл высушенного молекулярными ситами ТНЕ добавляют
100 мг сульфамнновой кислоты и 12,32 г
"(76,33 ммоль) НМ0$, Смесь кипятят
18 ч полное растворение про1гсходггт о через 6 ч. Раствор охлаждают до 23 С обрабатывают О, 1 кл воды >i иьндсржьгва— ют при 23 С в течение .30 мин. В течеI—ние 30 мин добавляют раствор 3,61 r (10,3 ммоль) SAE в 36 мл THI- . После перекешивания в течение 3 ч смесь разбавляют 100 мл воды, рН доводят
2, 2 1 0%-ной cþ 0É кисгготой. Смесь о перемешивают 30 мин при 23 С, выпаривают в вакууме для отгонки ТНГ. Полученный водный раствор восстанавливают при 50 фунт/кв.дюйм (3,5 атм) водороо да при 23 С в течение 2 ч, применяя
10%-ный Рс1/С. Восстановленный раствор отфильтровывают через Дикалит, осадок промывают водой. Фильтрат и промывки
I (150 мл) анализируют микробиологическим методом против Е. со1г., которые показали, что в них содержится
1225 мкг/кг (выход 31,5% активности) ,амикацина.
П р и и е р 23. Получение амикацина ацилированием поли(трикетилси-. лил) канамицина А с помощью И-оксисукцинимидного эфира дикарбобензилокси АНВЛ, Л. Получение И-оксисукципимидного эфггра дикарбобензилокси L-(-)- ;акино-о токсимасляной кислоты.
8 r (20,65 ммоля) дикарбобензилокси L-(-)-oL-амшг- -оксимасляной кислоты и 2,37 г (20,65 ммоль) И-оксисукципимида растворяют при 23 С в
50 мл сухого ацетона, 4,25 г (20,65 ммоль) дициклогексилкарбодиими да растворяют в 20 мл сухого ацетона и добавляют к полученному раствоо ру, всю смесь перемешивают при 23 С
80774 в течение 2 ч. Дициклогексилкочевину отфильтровывают, осадок промывают
10 мл сухого ацето|га, фильтрат и про мывку объед>гггяют.
Б. Лцилирование.
Поли(триметилсилил) канакицина Л полученньпг по методике примера ?1 из 10 г (20,639 кмоль) канамицина Л, 1ð растворяют в 100 мл сухого ацетона.
Раствор охлаждают до 0-5 С, добавля) ют 3,7 мл дистиллированной воды и раствор перемешивают при 0-5 С в течеггие 30 мип в умеренном вакууме. К этому раствору добавляют раствор блокированного дп-CbZ ацилирующего реагента, полученного в стадии Л, и смесь перемешивают при Π†5 30 мин.
Смесь разбавляют водой, рН доводят
20 до 2,2 и ацетон отгоняют в вакууме.
Водный раствор восстанавливают по общей методике примера 22, :затем фильтруют через Дикалит. Хроматография показывает нани гне 40-45% амикацина, 2 10% BB — К29, следы В — Кб, около 30% канамицина Л и небольшое количество полиацилов.
П р и к е р 24. Получение поли(трикетилсилил) канакицина Л с помощью
$0 НП3$ и икидазола в качестве катализатора, 11 г (22,7 ммоль) канамицина А и
100 мл имндазола нагревают с обратным холодильником в 100 мл сухого ацетонитрила в токе азота. В течение 30 мин
35 добавляют 18,48 г (114,5 кмоль, 5 моль на 1 моль канамицина Л) IIMDS и смесь кипятят 20 ч. Полное растворение происходит через 2,5 ч. Раствор . О охлажг1ают до 23 С, растворитель отгоняют в вакууме и получают 21,6 г поли(триметилсилил)канамицина A в ви— де пенистого остатка (выход 93,1%, в пересчете на канакицин А (силил)„ ).
Пример 25. Получение 1-N45
-tL-(-) -II -àìèHî-Ы-оксибутирил|канамицина В (В — К26) ацгглированием поли— (триметилсилил) канамицина В с помощью
SAE.
А. Получение поли(триметилсилил) канамицина В с помощью ЕП3$ и катализатора ТИС$.
25 г (51,7 ммоль) канамицина В в
250 мл высушенного молекуггярными си55 тами ацетонитрила кипятят в токе азота. В течение 30 мин добавляют 62,3 г (385,8 ммоль, 7,5 коль на 1 коль канамицина В) HMDS, затем 1 мл ТМС$ в качестве катализатора. Смесь кипя26
1480774
25 тят 21 ч, полное растворение через
1 ч. Затем растноритель отгоняют в о вакууме при 60 С и маслянистый остаток
О выдерживают прп 60 С в высоком выкуу5 ме 3 ч, Получают 53,0 г поли(триметилсилил)канамицнна В (ныход 85,27 в пересчете на канамицин В (силил), )
Б. Ацилирование.
53 г поли(триметилсилил)канамици- 1п на В, полученного в стадии А, раство- . о ряют в 500 мл сухого ацетона при 0-5 С, добавляют 20,9 мл метанола и смесь о перемешивают н вакууме при 0-5 С в течение 30 мин. В течение менее 1 мин 15 добавляют раствор 18,1 r (51,67 ммоль)
SAE в 200 мл предварительного охлажденного сухого ацетона и смесь пере= о мешивают 30 мин при 0-5 С. Смесь обрабатывают по методике примера 22 и 2р загружают в колонку с СС-50 (ИН")
4 (8 х 120 см) и элюируют градиентом
1HI4OH с 0,6 н. до 3 н. Получают
387 ВВ-К26, 57 соответствующего 6
-N-ацилированного канамицина В 25 (ВВ-К22), 107 соответствующего 3-N-ацилированного канамицина В (ВВ-К46), 14,637 канамицина В и небольшое количестно полиацилированного канамицина В. 30
Пример 26. Получение поли(триметилсилил) канамицина А с помощью
HMDS с катализатором сульфатом канамицина А.
19,5 г (40,246 ммоль) канамицина А и 0,5 r (0,858 ммоль) сульфата канамицина А (всего 20,0 r, 41 0 ммоль) в 200 мл сухого ацетонитрила нагревают с обратной перегонкой. Медленно добавляют 60,3 г (287,7 ммоль, 7 мбль 40 на 1 моль канамицина А) HMDS и нагревают с обратной перегонкой 28 ч. Затем ее отгоняют досуха на роторном испарителе и сушат в вакууме. Получают 47,5 r поли(триметилсилил) канамицина А в виде светло-желтого масла (выход 95,8 в пересчете на канамицин А (силил) q). ироп анализируют с троиным понто 50 ром на процент содержания Si методом атомно-абсорбционной спектроскопии; результаты составили 20,8, 22.4 и
21,2%, среднее значение 21,57. Теоретическое процентное содержание Si для каждой возможности составляет: силил 11 = 24,1; силил 10 = 23,3; силил 9 = 22,2; силил 8 — 21,1; силил 7 = 19,8; силил 6 = 18,3.
Основываясь на приведенном, можно утнерждать, что содержание силила в продукте примера 26 фактически соответствует диапазону силила 8 — 9, а не теоретическому силилу 10.
Пример 27. Получение амикацина ацилированием поли(триметилси- лил)канамицина А с помощью блокированного N òðèôòîðàöåòèë N oêñèñóêöèíимидного эфира AHBA.
А. Получение И-трифторацетпл АНВА и превращение ее н N oêñèñóêöèíèìèäный эфир.
К суспензии 5 г (42, ммоль) AHBA н 100 мл THF добавляют 40 r (191 ммоль) трифторуксусного ангидрида при перемешинании в течение 10 мин. Раствор перемешивают 18 ч при 23 С и выпарио вают досуха н вакууме при 50 С. Остаток растворяют в 100 мл водного метанола (1:1) и перемешивают 1 ч. Затем раствор выпаривают досуха н вакууме и снова растворяют в 50 мл воды. Водный раствор экстрагируют 3 х 50 мл
HIBK и после сушки сульфатом натрия экстракты выпаривают до масла. Следы растворителя удаляют добавлением и отгонкой 4 мл воды. После стояния масло превращается в парафинообразное кристаллическое вещество (выход 287, 2,5 г).
2.4 г (11,3 ммоль) N-трифторацетил AHBA растворяют и 50 мл сухого ацетона и к раствору добавляют 1,3 г (11,31 ммоль) N-оксисукцинимида,медленно добавляют раствор 2,33 г дициклогексилкарбодиимида.в 20 мл сухого ацетона. Реакционную смесь перемешио вают 2 ч при 23 С и выпавшую дициклогексилмочевину отфильтровывают и промывают небольшим количестном ацетона.
Объединенные фильтрат и промывки (раствор N-оксисукцинимидного эфира
N-трифторацетил АНВА) используют в следующей стадии без выделения.
Б. Ацилирование.
В раствор 11,31 ммоль поли(триметилсилил) канамицина А, полученного в примере 23, в 54 мл ацетона добавляют 2 мл (113,4 ммоль) воды и смесь о перемешивают в вакууме при 0-5 С в течение 30 мин. К смеси добавляют
11,31 ммоль N oêñèñóêöèíèìèäíîrо эфира N-трифторацетил АНВЛ из стадии о А и смесь выдерживают при 5 С н течение 1 ч. рН доводят до 2,0 20Х-ной серной кислотой, смесь перемешивают
30 мин и рН увеличивают до 6,0 раст1480774
27
28 вором NH+OH. Смесь упаривают досуха на роторном испарителе и получают
14,4 г липкого грязно-белого вещества. Его растворяют в 100 мл воды, рН
5 увеличивают с 5,9 до 11„0 10 н. раствором NEE OFE раствор нагревают на масляной бане при 70 С в течение 1 ч.
Затем рН снижают с 9,5 до 7,0 добавлением ггС1,раствор фильтруют для уда- 10 ления небольшого количества нерастворимых веществ и фильтр промывают водой. Объединенные фильтрат и промывки (188 мл) загружают в колонку с CG-50 (NH ) (8 х 90 см), промывают
2 л воды и элюируют градиентом NH4OH
0,6 н. — 1,0 и.. — концентрированный раствор. Получают 28,9% амикацина, 5,0% ВВ-К6, 43,87. канамицина Л, 3,257 полиацилов плюс 14,37 неизвестного вещества в первой фракции.
Пример 28, Получение амикацина. ацилированием поли(триметилсилил)канамицина А с помощью блокированного трет-бутилоксикарбопилом N—
-оксисукцинимидного эфира AHBA.
A. Получение трет-ВОС AHBA и превращение в его N-оксисукцинимидный эфира
Раствор 5 г (42 ммоль) АНВЛв 100 мл30 воды и 20 мл ацетона доводят до рН
10 10 н ° раствором NaOH. В течение
3-4 мин добавляют 11,6 г (53 ммоль) ди-трет-бутилдикарбоната и раствор перемешивают 35 мин при рП 10 при периодическом добавлении 10 н. NaOH, Ацетон отгоняют в вакууме и водную фазу промывают 40 мл этилацетата, рН водного раствора снижают до 2,3 3 н, НС1 и экстрагируют 3 х 30 мл МХВК. 40
Объединенные экстракты сушат сульфатом натрия и упаривают до прозрачного маслянистого остатка (8,2 г, 89%).
4,25 r (19,4 ммоль) трет-ВОС-AHBA растворяют в 50 мл ацетона и добавля- 45 ют 2,23 r (19,4 ммоль) N-оксисукцинимида. Медленно добавляют раствор 4 r (19,4 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 20 мл ацетона и смесь перемешио вают 2 ч при 23 С. Выпавшую дицикло" гексилмочевину отфильтровывают и промывают небольшим количеством ацетона. Фильтрат и промывки (раствор
N-оксисукцинимидного эфира трет-ВОСAHBA) используют в следующей стадии без выделения.
Б. Ацилирование.
E(раствору 41,28 ммоль поли(триметилсилил)канамицина А, полученного в примере 26, в 94 мл ацетона добавляют 3,5 мл (194 ммоль) воды и смесь перемешивают в вакууме при 0-5 С в течение 30 мин. Добавляют 19,4 ммоль
N oêñècóKöèíèìèäItoãî эфира трет-ВОСЛНВЛ из стадии Л и смесь оставляют о стоять при 5 С в течение 1 ч. Добавляют 200 мл врдьг и рН снижают с 7,0 до 2,0 207-ной серной кислотой. Через 30 мин перемешивания рН поднимают до 6,0 раствором NH 1 и. — концентрированный. Получают 40,327 амикацина, 4>58% ВВ-К6, 8,327 ВВ-К29, 30,507 канамицина В и 7,437. полиацилов. Пример 29. Повторяют методику примера 1, но 6 -И-карбобензилоксиканамицин I А заменяют :эквимолярным количеством 6 -N êàðáoáeIIçèëoêñIIêàíàмицином В; получают 1-N- I L- (-) -)(-амин-Ы-оксибутирил) канамицин В. Пример 30. Повторяют методику примера 1, но применяемый в нем N — окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидный эфир L-(-) †g †бензилоксикарбониламин-oL-оксимасляной кислоты заменяют N îêñè-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидным эфиром 1-(-)-P-бензилоксикарбониламин-oL-оксипропионовой кислоты и N-окси-5-норбернен-2,3-дикарбоксиимидным эфиром 1-(-)-II-áåíçèëоксикарбониламин-е -оксивалериановой кислоты соответственно и получают 1-N-fL-(-)-8-амино-Ы-оксипропионил канамицина А и 1-И-(1-(-)-3-амин-Ы,— -оксивалерил1канамицин А соответст— венно. Пример 31. Повторяют методику примера 25, но вместо N †îêñè-эфира L-(-)- -бензилоксикарбониламино-g-оксимасляной кислоты берут И-оксисукцинимидный эфир 1-(-)-/3-бензилоксикарбониламино-г -оксипропионовой кислоты и N-оксисукцинимидный 1480774 30 эфир 1.-(-)-о-бенэилоксикарбониламиновЂ,4-оксивалериановой кислоты соответственно и получают 1-И-$L-(-)-Р-амико-ь|-оксипропионил) канамицин В и 15 -N- fL — (-) -3-амино — ;оксивалерил) канамицин B соответственно. Пример 32. Приготовление ВВ-К8 путем ацилирования поли(триметилсилил) 3,6 -ди-N-карбобензилкана- 10 мицина А в безводном диэтилкетоне, Г А. 3, 6 — ди — N-êàðáoáåíýèëoêcèêàíeмицин А. Суспензию, содержащую 7,26 r (15 ммоль) канамицина A (свободное 15 основание) и 18,6 r (75 ммоль) тетрагидрата никельацетата в 300 мл диметилсульфоксида (DMSO), нагревают при о 100 С в течение 30 мин с перемешиванием до получения чистого зеленого раствора. После охлаждения раствор, содержащий 11,8 г (37,6 ммоль) N-карбобензилокси-5-норборен-2,3-дикарбоксимида в 50 мл ПИ$0, добавляют к указанному выше раствору. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, обрабатывают 100 мл концентрированной аммиачной воды и 1 л воды и перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч затем ввоУ Ч зо дят в верхнюю часть колонки объемом 300 мл с дианионом HP-10.Затем колонку подвергают элюированию 7 H. NH OH, а затем смесью метанол-вода (1:1) и наконец смесью метанол-вода (10:1) фракции по 20 мл собирают и анализируют с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах силикагеля 60 F-254 фирмы МегсЕ, используя хлороформ — этанол — 287-ный .гидроксид аммония (1:2:2). Порция желаемого про- 40 дукта, который выкристаллизовывается в виде тонких игл из фракций, содержащих продукт в высокой концентрации, отфильтровывают для создания аналитической пробы. Фильтрат и другие фракции, содержащие желаемый продукт (Г> 0,42), сливают вместе и раствор затем упаривают под вакуумом. Остаток растирают в порошок с диэтиловым эфиром для получения 9,7 r (867) названного продукта. t nn > 300 C IR(KBr): 1 C=O 1690 cM . 57K(OlISO-d6+DC1, pDca 3) F: 4, 76-5, 26 (6Н, m, Н, Н " и CO-OCHz-C4H х 2); 7,26 (10H, S, CO-ОСН -С Н, х 2). Вычислено, 7: С 52,98; Н 6,54; N 7,27. С Н е И40 Н О Найдено, 7: С 53,20; H 6,42; N 7 04. 1. Поли(триметилсилил) 3,6 -ди-Nкарбобепэилоксиканамицин А. Смесь, содержащую 1,5 r (2 ммоль) Г 3,6 -ди-N-карбобензилоксиканамицин А иэ стадии А и 1,29 г (8 ммоль) гексаметилдисилазана н 15 мл сухого ацетонитрила нагревают с обратным холодильником в течение 16 ч. Чистый раствор концентрируют под вакуумом до-: суха и остаток растворяют в 20 мл сухого диэтилкетона. Раствор непосредственно используют в следующей стадии. Б- Лцилирование поли(триметилсилили) 3,6 -ди-N-карбобензилоксиканамицин А Г эквимолярным количеством ацилирующего агента. К раствору из стадии Б добавляют с перемешиванием 700 мг (2 ммоль) И-оксисукцинимидного эфира Е-(-)-ь -карбобенэилоксиамино- -îêcèìàñëëíîé кислоты ($АЕ). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 19 ч, а затем обрабатывают 8 мл воды и 35 мл тетрагидрофурана (THF), с помощью водного раствора соляной кислоты доводят до рН 3, перемешпвают в течение 30 мин, затем упаривают под вакуумом досуха. Остаток растворяют в смеси 30 мл воды, 40 мл метанола, l0 мп п-бутанола и 40 мл THF и гидрируют в течение ночи в присутствии 500 мг 107-ного палладия на углероде. Катализатор отделяют фильтрацией и фильтрат упаривают в вакууме, а затем лиофилизируют для получения сырого ВВ-К8. Аморфный порошок вновь растворяют в воде и рН раствора доводят до 4 при помощи водного раствора соляной кислоты и хроматографируют на колонке Амберлит CG-50 с циркуляцией ИН . Колонку подвергают ступенчатому элюированию водой; 0,1, 0,3, 0,5 и 2 н. ИП40Н, 10 мл фракции собирают и анализируют с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах силикагеля 60 Г-254 фирмы Merck, используя хлороформ — метанол — 28X-ный гидроксид алюминия — вода (1:4:2:1). Гомогенные фракции сливают, упарива- ют и лиофилизируют. Фракции, содерЖащие ВВ-К8, и фракции, содержащие извлеченный канамицин А, анализируют с помощью К. pneumoniae А 20680и В.Subti1is PCI 129 соответственно (см. табл. 5). 32 1480774 СН2МН2 HoWlо ъ NH C=0 1 — CH L-(1 1 (.СН2)и СН2 I нг Н2 Таблица1 Канами55 ВВ-К29 Амикацин Полиацилы Гидрогенолиэ частично деблокированного продукта с использованием Pd/C, с последующим извлечением в колонке CG-50, дает дополнительно 30 мг (2%) ВВ-К8. Общий выход ВВ-К8 846 мг (69%). Г. Ацилирование поли(триметилсилил)3,6 -ди-N-карбобенэилоксиканами.тцина А с использованием 1,2 эквивалента ацилирующего агента. Повторяют стадию В за исключением того, что добавляют 20%-ный избыток ацилирующего агента. Получают резуль таты, приведенные в табл. 6. Гидрогенолиз частично деблокированного продукта с использованием Pd/Ñ, с последующим извлечением в колонке CG-50, дает дополнительно 21 мг (2%) БВ-К8. Общий выход ВВ-К8 771 мг (62%). где R — 0H или NH<1 - n --целое число от 0 до 2, путем обработки производного канами цина А или В ацилирующим производным кислоты общей формулы II С6Н5 CH OC NH СН2 (СН2).— С)1 СООИ .р ОИ где и имеет указанные значения, в среде органического растворителя с последующим удалением блокирующих ;групп, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевых продуктов и интенсификации про-. цесса, в качестве производного канамицина А или В используется полисилилированный канамицин А или В, содержащий от 4 до 8 триметилсилильных блокирующих групп, или полисилилированный канамицин, содержащий карбобензилоксикарбонильную группу при 6 -аминогруппе и от 3 до 7 триметилсилильяых групп, в качестве ацилируД. Ацилирование поли(триметилси лил) 3,6 -ди-N-карбобенэилоксиканамицина А, используя 1,5 эквивалент ацилирующего агента. Повторяют стадию В за исключением того, что добавляют 50%-ный избыток ацилирующего агента, Получают результаты, приведенные в табл. 7. Предлагаемый способ позволяет повысить выход целевых продуктов и интенсиф1лцировать процесс. Формула изобретения Способ получения 1-N (Ó-амино-d.— -oKcHGJIKBHoHJT)I Вещество Объем, о Масса, Выход, 578 мл г % 1000 +0,115 0,989 9,15 1750 +0,24 4„37 32,0 2000 +0,31 6,20 47,4 900 +0,032 0,288 2,0 14 5() 7 74 Выход, 7. Реакция Жидкостная хроматография (ди-CbZ амикацин) 49,18 56,17 42,87 55,39 39, 16 38,45 А Выход, 7 Реакция Микробиологический анализ на Амикацин Жидкостная хроматография (ди-CbZ амикацин) Турбидимет- Пластинки рически 28, 18 28,63 28,34 2i 52 29,27 33,39 Выход, 7 Реакция Микробиологический анализ Амикацин Турбидимет- Пластинки рически 33,36 33,37 39, 18 42,82 43,27 22,55 А Номер %1 ОН Масса, Выход фракции н. мг Продукт нна 32-39 Частично деблокированный продукт 7* Канамицин А Неидентифицированпый продукт 67*™* ВВ-К8 5 Диацилканамицин А 0,1 !02 0,42 0,33 40-46 47-59 174* 105 0,3 0i3 0,18 0,5 816** 0,5 60-78 S9-95. +408 мкг/мг; **956 мкг/мг; t * *На основании бнопробы.. Жидкстная хроматография (ди-CbZ амикацин) Таблица 2 Микробиологический анализ амикацина, Турбиди- Пластинметричес- ки Та блица 3 Таблица 4 Таблица 5 1480774 36 Таблица 6 Номер фракции Выход Вели.— Продукт NH 0H Масса, н. мг чина В. 0,2 107 28-29 30-41 О, 2 157 0,35 *933 мкг/мг; **На основании биопробы. Т а блица 7! .Номер фракции Продукт Выход Масса, мг НН ОН, н. полученная) 29-39 0,2 293 Составитель Г. Коннова Техред М.Дидык Корректор M. Максимишинец Редактор Н.Киштулинец Заказ 2565/59 Тираж 339 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðîä, ул. Гагарина,101 42-52 0,3 120 53-81 0,3 0,5 750* 60* 94-116 1,2 147 11 40-47 0,3 95* 6*** 65-80 0,5 582** 29»»» 100-130 1 2 543 26 »860 мкг/мг; **880 мкг/мг; *"*На основании биопробы. Частично деблокированный продукт Неидентифицированный продукт ВВ-К8 Диацилканамицин А Частично деблокированный продукт Канамицин А ВВ-К8 Диацилканамицин А 0,30 0,14 0 05 Величина В (дважды 0,67 0,33 0,09