Способ получения антисыворотки против антигенной детерминанты 1-j @ рецептора т-супрессоров

 

Изобретение относится к эксперимент;1льной биологии и медицине. Целью изобретения является повьппение активности антисыворотки против Т- супрессоров. Гибрида 1-реципиентам (ДВА/2ХЗК)Р вводили клетки селезенки мьшей линии 5R, предварительно стимулированных внутрибрюшинным введением иммуностимулирующей дозы эритроцитов барана. Такую процедуру повторяют 6 раз с недельным интервалом . Через 10 дней после последней иммунизации берут кровь, вьщеляют сыворотку и адсорбируют ее теми же клетками селезенки мышей линии 5R. ПредложенньаЧ способ позволяет получить антисыворотку с резко усилен- .ной акти}зностью и иммуномодулирукЛдими свойствами для изучения механизмов регуля1 ,ии иммунного ответа субпопул.чции иммунокомпетентных клеток супрессорного ряда. Полученная антисыворотка активна в чрезвычайно малых дозах, а ее рабочее разведение в 5-10 раз превосходит имеющийся коммерческ1Ш препарат. с 9 (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 01 Г? 33 53

1ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

??РИ ГКНТ СССР (46) 23. 09. 90. Бюл. М- 35 (21) 4201576/28-14 (22) 19. 12. 86 (71) Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза (72) А.С.Апт, Б.В.??иконенко, А.М.Мороз и Г1.М.Авербах (53) 615.373(088.8) (56) J. Exp. Nea, 1977, v. 147, 314.

{54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ AHTHCblEOPOTKH

ПРОТИВ AHTH? EHHOA igETEPMHHAHTbl 1-Х

РЕЦЕПТОРА Т-СУПРЕССОРОВ (57) Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине. Целью изобретения является повьппение активности антисыворотки против Tсупрессоров. Гибридам-реципиентам

{ДВА/2ХЗЕ)Е, вводили клетки селезенки мышей линии SR, предварительно

Способ относится к экспериментальной биологии и медицине. Он может быть использован в исследовании механизмов регуляции иммунитета Т-суп-= рессорами in vivo u in virto утем высокоспецифического воздействия на эти клетки.

Целью изобретения является повышение активности антисыворотки против T-супрессоров, позволяющее примекять ее в более высоких разведениях.

Пример. Гибриды-реципиенты (ДВА/2ФЗк)F, получают, скрещивая самца ДВА/2 с тремя самками ЗК. Для иммунизации используют гибридов F„ обоего пола в возрасте 3 месяца.

Мышам-донорам линии SR„ отличающимся от линии ЗК только по аллелю, З5УО

„.SU„„1470 5 А1 стимулированных внутрибрюшинным введением иимуностимулирующей дозы эритроцитов барана. Такую процедуру повторяют 6 раэ с недельным интервалом. Через 10 дней после последней имгунизации берут кровь, выделяют сыворотку и адсорбируют ее теми же клетками селезенки мьппей линии 5R, Предложенный способ позволяет получить антисыворотку с резко усилен.ной активностью и иммуномодулируюпгими свойствами дггя изучения механизмов регуля.,ии иммунного ответа субпопул..ции иммунокомпетентных клеток супрессорного ряда. Полученная акти- сыворотка активна в черезвычайно мальгх дозах, а ее рабочее разведение в 5-10 раз превосходит имеющийся коммерческий препарат. субобласти I-J (иьппи SR несут аллель

hl к

I- г, мыши ÇR — 1 —.? ) „вводят внут9 рибрюшинно б 10 эритроцитов барана.

Ю

Через 1 неделю после введения эритроцитов барана мьппей 5к забива ют, готовят суспензию клеток селезенки и эту суспензию вводят внутрибрюшинко реципиентам (ДВА/2 <3R) F< в дозе i 0 ° 10 клеток на мышь. Такую

Э процедуру повторяют ? раэ с недельным интервалом. Через 10 дней после 7 иммунизаций у реципиентов берут кровь иэ ретроорбитального синуса в стерильных условиях, отстаивают 4 ч при 4 С до образования сгустка, центрифугируют сыворотку при 400 g 15 мин на холоде и получают антисыворотку.

147

Формула изобретения

Составитель П. Бонарцев

Техред М.Ходанич Корректор Л.Пилипенко

Редактор Л.Павлова

Заказ 3330 Тираж 511 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, W-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðoä, ул. Гагарина,101

Для удаления антиидиотиннческих

И аутоантител полученную антисыворот ку анти- 1 н 3 подвергали абсорбции. абсорбцию проводили в течение 45 мин при 4 С на смеси клеток селезенки, и ,Пиифоузлов и тимуса мьппей-реципиен«ов (ДВА(2ХЗК)Р,, предварительно за неделю до абсорбции получивших фнутрибрюшинно 6 10 эритроцитов ба« ана, т.е. прошедших ту же обработку, то и мыши-доноры 5R при получении итисыворотки. Для абсорбции 1 мл итисыворотки использовали 0,15 мл отного осадка (400 g, 20 мин) клеок реципиента при периодическом пеемешивании. После проведения абсорби аллоантисыворотку освобождали от орбирующих клеток (400 я, 4 С, 5 мин), разливали аликвотами по !

00 мкл и хранили при -70 С до ис1тользования.

Во gcex исследованных тест-систек мах антисыворотка анти Х-J, полученная предлагаемъэ« методом, отменяла суспензию иммунного ответа, действуя

0059 4 высокоспецифично, была активна в черезвычайно малых дозах, а ее рабочее разведение в 5- 10 раэ превосходило имеющийся коммерческий препарат.

Способ получения антисыноротки к против антигеннгй детерминанты I-J рецептора Т-супрессоров путем имму" ниэации мьппей-реципиентов клетками селезенки мьппеи линии 5R с последующим выделением сыворотки крови, о т л и ч а ю щ и й.с я тем, что, с целью повышения активности антнсыворотки, в качестве реципиентов используют гибриды мышей (ДВА/2хЗК)Г,, а иммунизацию осуществляют клетками селезенки тех же мышей, предварительно стимулированных внутрибрюшинным введением иммуностимулирующей дозы эритроцитов барана, далее после выделения сыворотки ее абсорбиру-, 25 ют теми же клетками селезенки сти- . мулированных мьппей линии 5R.