Способ определения антианоксической активности лекарственного препарата на ткань

 

Изобретение относится к медицине, касается кардиофармакологии, предназначено для изучения фар.макодинамических свойств используе.мых лекарств, ноиска новых лекарственных средств, оптимальной фармакологической коррекции постишемических состояний сосудистой гладкой мускулатуры. Цель изобретения - повышение достоверности способа за счет дополнительной оценки нормализации сократительной функции . Для этого исследуемый образец помещают в физиологический р-р Кребса, содержащий 60±0,1 мМ калия .хлорида, подают в р-р азот взамен кислорода, через 1,5± ±2 мин аноксического периода вновь подают в р-р кислород взамен азота, сравнивают скорость развития быстрой фазы калиевой контрактуры за 120±5 с, вновь повторяют все процедуры и после периода острой аноксии в физиологический р-р Кребса вводят исследуемое лекарственное в-во и статистически обрабатывают данные. Исследуемое лекар ственное в-во вводят в р-р Кребса после вторичного воздействия острой аноксией. (О (/)

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

<511 4. А 61 К 31/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMV СВйДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4210337/28-14 (22) 24.03.87 (46) 23.03.89. Бюл. № 11 (71) Удмуртский государственный университет им. 50-летия СССР, Ижевский государственный медицинский институт и Центральное конструкторское бюро уникального приборостроения АН СССР (72) С. Б. Шишкин, A. В. Кузин, В. И. Шалаев и В. М. Чучков (53) 615.476 (088.8) (56) Barrett et а!.Pharmacology, 1986, 33, 3. р. 139 — 147. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИАНОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА (57) Изобретение относится к медицине, касается кардиофармакологии, предназначено для изучения фармакодинамических свойств используем ых лекарств, поиска новых ле1

Изобретение относит< H к медицине, в частности к кардиофармакологии, и может быть использовано при изучении фармакодинамических особенностей используемых лекарств, поиска новых лекарственных средств и опти м изаци и путей фарм а кологической коррекции постишемических состояний сосудистой гладкой мускулатуры.

Цель изобретения — повышение достоверности способа за счет дополнительной оценки нормализации сократительной функции.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый образец помещают в физиологическийй раст вор Кребса, содержащий

60»-0, l мМ калия хлорида, подают в растÄÄSUÄÄ 1466751 А 1 карственных средств, оптимальной фармакологической коррекции постишемических состояни и сосудистой гладкой мускулатуры.

Цель изобретения — повышение достоверности способа за счет дополнительной оценки нормализации сократительной функции. Для этого исследуемый образец помещают в физиологический р-р Кребса, содержащий 60+-0,1 мМ калия хлорида, подают в р-р азот взамен кислорода, через 1,5++-2 мин аноксического периода вновь подают в р-р кислород взамен азота, сравнивают скорость развития быстрой фазы калиевой контрактуры за 120»-5 с, вновь повторяют все процедуры и после периода острой аноксии в физиологический р-р Кребса вводят исследуемое лекарственное в-во и статистически обрабатывают данные. Исследуемое лекар ственное в-во вводят в р-р Кребса после вторичного воздействия острой аноксией.

2 вор азот взамен кислорода, а через 15»

»:2 мин аноксического периода снова осуществляют подачу в раствор кислорода взамен азота, сравнивают скорость развития быстрой фазы калиевой контрактуры за

120 +-5 с, затем описанные выше действия повторяют, а после периода острой аноксии в физиологический раствор Кребса вводя г исследуемое лекарственное вещество и про водят статистическую обработку данных. Исследуемое лекарственное вещество вводилось в раствор Кребса после вторичного воздействия острой аноксией.

Пример. Сердце собаки со вскрытой под наркозом грудной клеткой останавливают путем введения воздуха в полость левого желудочка. Затем вскрывают перикард il и

1466751

Формула изобретения

Составитель А. Лычкова

Редак1ор Е.11апп Текред И. Верес Корректор Л. Патай

Заказ 970/5 Тираж 644 Подписное

ВНИИПИ ГосударственIIого комптета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР

1!3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раугпскап наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 сердца собаки выделяют сегмент (в середине верхней трети) передней межжелудочковой ветви левой коронарной артерии и сразу помещают его в раствор Кребса. Перед началом эксперимента из сосудистого сегмента приготовляют кольцеобразные отрезки шириной 1 мм и диаметром 1,5 — 1,8 мм (в зависимости от веса и возраста собаки, так как участок выделения сегмента коронарной артерии строго определен). Все манипуляции с сосудистыми препаратами выполняются в растворе Кребса. Сегмент коронарной артерии хранится в растворе Кребса при +4 С не более 48 ч.

Приготовленный кольцеобразный отрезок помещают в рабочую камеру емкостью 15

5 мл на два крючка, один из которых был неподвижно закреплен к стенке камеры, а другой соединен со штоком механотрона типа

6МХ2Б, с помощью которого и проводт4тся измерение механической активности сосудистой гладкой мускулатуры в изометрическом режиме. Через камеру с постоянной скоростью (15 мл/мин) циркулирует оксигенированный (95о/о О, и 5о/о СО,) раствор Кребса, имеющий рН в пределах 7,4 +-0,05 и температуру 38 0, 1 С. Перед введением гиперкалиевого раствора сосудистый препарат выдерживается в камере 2 ч (период адаптации) . Для измерения напряжения кислорода в рабочей камере используют полярограф типа ПА — 3 с двухэлектродной систе30 мой. Начальная нагрузка на сосудистый препарат составляет 1000 +-10 мг. Запись механограммы проводят на самописце Н вЂ” 39 со скоростью движения ленты 3 мм/мин. Для активации электромеханической связи в миоцитах коронарных артерий используют ги- З« перкалиевые растворы Кребса, содержащие

60 0,1 мМ калия хлорида. Изменения концентрации ионов калия осуществляют за счет эквивалентных изменений концентрации ионов натрия в растворе Кребса. В ряде опытов для создания аноксии раствор Кребса 40 аэрируют газовой смесью, состоящей из

95 /о азота и 5о/о СО,.

На фоне развившейся калиевой контрактуры вызывают аноксию введением в рабочую камеру гиперкалиевого раствора Креб- д« са,аэрированного азотом и углекислым газом

Выдерживают в условиях а ноксии 15++- 2 мин (колебания во времени связаны с незначительной разницей в скорости расслабления сосудистых препаратов). В этот период наблюдается выраженное расслабление сосудистых гладких мышц. Через указанный промежуток времени аноксия сменяется на нормоксию и измеряется скорость развития (в мг/мин) быстрой фазы возникшего сокращения в гиперкалиевом растворе Кребса, аэрированного 95 /o О, и 5 /o СО за 120+ 5 с (это время, за которое в условиях нормоксии развивается большая часть быстрой фазы калиевой контрактуры) . Затем описанные действия повторяют, а после периода острой аноксии в раствор Кребса вводят исследуемое лекарственное вещество и проводят статистическую обработку данных. Обнаружено статистически достоверное уменьшение скорости развития быстрой фазы калиевой контрактуры после периода острой аноксии, а именно до аноксии 376,1/326,65—

425,55/+- 20,7 м г/ми н, после а нокси и 198,3/

/146,7 — 249,9/ -21,6 мг/мин (п = 12; Р= 0,05), Общественно-полезный эффект от использования предлагаемого решения по сравнению с известными состоит в том, что предлагаемый способ повышает достоверность экспериментальных исследований в области лекарственной коррекции постишемических состояний сосудистой гладкой мускулатуры.

Способ определения антианоксической активности лекарственного препарата на ткань, содержащую миоциты, путем помещения исследуемого образца в физиологический раствор и воздействия возбуждающим сократительный аппарат миоцитов средством в условиях нормоксии и аноксии и анализа амплитуды сокращения в указанных условиях, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности способа за счет дополнительной оценки нормализации сократительной функции, исследуемый образец померцают в физиологический раствор, аноксию создают путем подачи азота, а через 15+2 мин аноксического периода снова осуществляют подачу в раствор кислорода. сравнивают скорость развития быстрой фазы калиевой контрактуры за 120+-5 с, затем после периода острой аноксии в физиологический раствор вводят исследуемое лекарственное вещество и при уменьшении скорости развития быстрой фазы калиевой контрактуры после периода острой аноксии определяют антианоксическую активность.