Способ получения галактоцереброзидного антигена
Изобретение относится к биохимии, касается получения галактоцереброзидного антигена (ГалЦ) из ткани мозга для дальнейшего использования как компонента диагностической тест-системы. Цель изобретения - повышение активности, стабильности антигена и упрош.ение способа за счет исключения хроматографических этапов выделения и экстракции этанолом. Галактоцереброзиды (ГалЦ) являются специфическими гликолипидными антигенами клеточной поверхности клеток-продуцентов миелина (олигодендроцитов и шванновских клеток) и миелиновых оболочек и способны вызывать образование специфических антител. Для этого определяют антитела к ГалЦ в иммунологических реакциях с липидным антигеном. В качестве липидного антигена вместо смеси ГалЦ, холестерина и лецитина используют суспензию, приготовленную из спиртового раствора общих липидов мозга, полученных путем экстракции ткани мозга хлороформметаноловой смесью, отмытых от ганглиозидов и нелипидных примесей (и упаренных досуха).
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
„„Я0„„1461465 А 1 (5D 4 А 61 К 39 00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
2 танол 1:1 (10 мл смеси на 1г исходной ткани), экстракт фильтруют, фильтрат объединяют с первой порцией и общий объем экстракта доводят хлороформом до соотношения хлороформ — метанол 2:1. Липидный экстракт отмывают от ганглиозидов и нелипидных примесей 0,75%-ным раствором
KCl (2,0 мл раствора КС1 на 10 мл экстракта) и оставляют на ночь для расслоения фаз. Верхнюю водно-метаноловую фазу отбрасывают, а нижний хлороформный слой повторно промывают половинным объемом
«чистой верхней фазы», смесью хлороформметанол — КС1 — 3:47:48 и оставляют на ночь.
Затем верхнюю фазу удаляют. Нижний хлороформный слой представляет собой ОЛЭ мозга быка, отмытый от ганглиозидов и нелипидных примесей. Для приготовления 5 мл липидной суспензии антигена берут 0,1 мл
ОЛЭ и разводят смесью хлороформ — метанол 2:1 в 16 — 25 раз, чтобы концентрация ГалЦ составляла 55 — 75 мкг/мл. ОтбиГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 3883753/28-14 (22) 16.04.85 (46) 28.02.89. Бюл. № 8 (71) Институт физиологии им. И. П. Павлова (72) Н. ГI. Таранова и О. С. Лучакова (53) 615.36(088.8) (56) Duponey P., Journal of Immunology, 1972, ч. 109, № 1, р. 146 — 153. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГАЛАКТОЦЕРЕБРОЗИДНОГО АНТИГЕНА (57) Изобретение относится к биохимии, касается получения галактоцереброзидного антигена (ГалЦ) из ткани мозга для дальнейшего использования как компонента диагностической тест-системы. Цель изобретения — повышение активности, стабильности антигена и упрощение способа за счет ис1
Изобретение относится к биохимии и может быть испол ьзов а но дл я получения гал а ктоцереброзидного антигена (ГалЦ) из ткани мозга для дальнейшего использования как компонента диагностической тест-системы.
Целью изобретения является повышение активности, стабильности антигена и упрощение способа за счет исключения хроматографических этапов выделения и использования экстракции этанолом.
Пример.
Для приготовления антигена готовят общий липидный экстракт (ОЛЭ) мозга. Для этого ткань головного мозга быка, крысы или кролика гомогенизируют и экстрагируют лип иды смесью хлороформ — метанол 2:1 (20 мл смеси на 1 г ткани) при нагревании на водяной бане при 50 — 55 С в течение
15 мин. Экстракт отфильтровывают от осадка, а осадок фильтруют с фильтром, повторно экстрагируют смесью хлороформ — меключения хроматографических этапов выделения и экстракции этанолом. Галактоцереброзиды (ГалЦ) являются специфическими гликолипидными антигенами клеточной поверхности клеток-продуцентов миелина (олигодендроцитов и шванновских клеток) и миелиновых оболочек и способны вызывать образование специфических антител. Для этого определяют антитела к ГалЦ в иммунологических реакциях с липидным антигеном.
В качестве липидного антигена вместо смеси
ГалЦ, холестерина и лецитина используют суспензию, приготовленную из спиртового раствора общих липидов мозга, полученных путем экстракции ткани мозга хлороформметаноловой смесью, отмытых от ганглиозидов и нелипидных примесей (и упаренных досуха).
1461465
Формула изобретения
Сост а вител ь М. В ас илье в
Редактор Н. Горват Техред И. Верес Корректор М. Самборская
Заказ 508/5 Тираж 644 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, 10! рают 1 мл этого раствора в пробирку, упаривают растворитель на кипящей водяной
;бане, вращая пробирку, чтобы осадок липидов образовал тонкую пленку на ее стенках, добавляют 1 мл этилового спирта и растворяют в нем липиды, нагревая спирт на водяной бане до кипения. К кипящему спирту добавляют 4,0 мл дистиллированной воды,,получая концентрацию ГалЦ в антигене
I11,0 — 15,0 мкг/мл. Образуется слегка опалесцирующая суспензия липидов, которую используют в качестве галактоцереброзидного антигена.
Этот антиген используют для определения антител к ГалЦ в сыворотке крови кроликов, иммунизированных ГалЦ, и контрольных кроликов. Определение антител проводят при помощи реакции связывания комплемента.
Способ получения галактоцереброзидного антигена путем экстракции липидов из ткани мозга хлороформ — метанолом, отмывания липидного экстракта от нелипидных примесей и ганглиозидов, отличающийся тем, что, с целью повышения активности, стабильности антиген:.1 и упрощения способа, липидный экстракт упаривают досуха, растворяют осадок липидов в кипящем этаноле и доба вл я ют воду.