Способ определения количества днк в клетках костного мозга
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
А1
„„SU„„ I427 щ) 4 С 01 Н 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО.ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНЯТИЙ (21) 3603409/28-14 (22) 09,06.83 (46) 30,09.88. Бюл. В 36 (71) Киевский научно-исследовательский институт общей и коммунальной гигиены им. А.Н.Марзеева (72) Е.И.Обухан (53) 615.475 (088.8) (56) Агроскин Л.С., Папаян Г.В.
Цитофотометрия. — Л.: Наука,. 1977, с. 258. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА
ДНК В КЛЕТКАХ КОСТНОГО МОЗГА . (57) Способ относится к области ме. дико-биологических, исследований,,в частности к онкологии и гематологии.
Цель нзобретения — повышение точности способа цитофотометрического определения количества ДНК в клетках костного мозга. Для этого приготавли-" вают мазки по методу Фельгена, определяют содержание ДНК в клетках костного мозга и распределение клеток по фазам митотического цикла. Определяют содержание ДНК в клетках костного мозга с использованием в качестве стандарта сравнения ядер малых лимфоцитов костного мозга интактных жи вотных и распределение клеток по фазам митотического цикла по этому стандарту. Определение проводят мето; дом измерения оптической плотности.
1427303
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии и гематолоФормула изобретения ш = — (4D - В,) S
35.масса ДНК; коэффициент поглощения ДНК малых лимфоцитов с диплоидным Набором хромосом, находящихся в стадии интерфаэы, меньшая и большая оптичес"
1 кие плотностиэ площадь фотометрируемого ядра °, где m
О, и Э
Составитель Э.Чиркова
Техред М,Дидык
Редактор И.Рыбченко
Корректор А.Обручар
Тйраж 847 . Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 4849/42
Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул, Проектная, 4 гии е
Цель изобретения — повышение точ5 ности цитофотометрического определения количества ДНК в клетках костно- го мозга.
Способ осуществляется следующим образом. 10
Мазки костного мозга окрашивают по методу Фельгена и подвергают фотометрии при использовании в качестве стандарта оптической плотности ок" рашенных ядер малых лимфоцитов с дип- 15 лоидным набором хромосом, находящихся в стадии интерфаэы.
П р и и е р. Мазки костного мозга фиксируют в смеси Карнуа (2 ч), гид" ролизуют в 1 н. HCl (11 мин), охра- 20 шивают основным фуксином (60 мин), обезвоживают и заключают в бальзам под покровное стекло. Цитофотометрию
ДНК производят двухволновым методом на цитофотометре МУФ-5 при длинах 25 волн 546 и 480 нм. Измерения выполняют по общепринятой. методике, ис" пользуя зонд диаметром 200 мкм, винтовой окуляр-микрометр для измерения диаметра ядер при увеличении микроскопа Ок.7 06.50. Содержание ДНК вычисляют в условных единицах плотности по известной формуле
Плоидность клеток в условных единицах рассчитывают путем отнесения общей плотности их ядер к общей плотности ДНК малых лимфоцитов (стандарта}. Распределение по фазам митотического цикла производят путем сравнения относительного содержания ДНК исследуемых клеток и стандарта.
Статистически обработанные результаты показали, что среднее содержание
ДНК в стандарте (малых лимфоцитах костного мозга с диплоидным набором хромосом в стадии интерфазы) устрой-" чиво и составляет 32,7+0,65 усл.ед.
Положительный эффект от использования в качестве стандарта сравнения малых лимфоцитов костного мозга в стадии интерфаэы с диплоидным набором хромосом по сравнению с известным стандартом, приготовленным из спермиев кроликов, характеризуется данными сравнения коэффициентов вариации содержания ДНК в известном и предлагаемом стандарте (соответственно 13,07+1,15 и 9,38+0,967).
Способ определения количества ДНК в клетках костного мозга путем приготовления мазков костного мозга по методу Фельгена и измерения оптической плотности окрашенных ядер, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности, дополнительно проводят определение оптической плотности ДНК малых лимфоцитов костного мозга, находящихся в стадии интерфазы и имеющих диплоидный набор хромосом, и определение содержания
ДНК в клетках костного мозга проводят путем сравнения обалдей оптической плотности их ядер с оптической плотностью ДНК малых лимфоцитов,

