Способ выделения ультрамелких форм микробактерий туберкулеза

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выделения ультрамелких форм (УМФ) микобактерий туберкулеза. Цель изобретения - повьшение точности способа. Сущность способа сводится к тому, что культуру микобактерий туберкулеза обрабатывают лизоцимом в оптимальной концентрации 0,2 мг/мл буферного раствора , затем смесь инкубируют, отделяют осадок и обрабатывают его трипсином в оптимальной концентрации 1 мл/мл. После инкубирования осадок удаляют, а надосадочную жидкость фильтруют через каскад мембранных фильтров. Вьщеляемость УМФ в 60% случаев . 1 з.п. ф-лы.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 С 12 Q 1/04//(С 12 Q 1/04, С 12 R 1:32) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ;", ;, : ",,.Я!

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ м а=в

CO (21) 4011288/28-13 (22) 14.01.86 .(46) 15.07.88. Бюп. Р 26 (71) Львовский научно-исследовательский институт туберкулеза (72) Е.И.Дзись и В.А.Самарский (53) 576.8..093.1(088.8) (56) Вейсфейлер Ю.К. Биология и из.менчивость микобактерий туберкулеза .и атипичные микобактерии. Будапешт, 1975, с.225-236. .(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ УЛЬТРАМЕЛКИХ

ФОРМ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выделе„„SU„„409662 А 1 ния ультрамелких форм (УМФ) микобактерий туберкулеза. Цель изобретения— повышение точности способа. Сущность способа сводится к тому, что культуру микобактерий туберкулеза обрабатывают лизоцимом в оптимальной концентрации 0,2 мг/мл буферного раствора, затем смесь инкубируют, отделяют осадок и обрабатывают его трипсином в-оптимальной концентрации

1 мл/мл. После инкубирования осадок удаляют, а надосадочную жидкость фильтруют через каскад мембранных фильтров. Выделяемость УМФ в 602 случаев. 1 s.ï. ф-лы.

1 1409662 г

Формула и з обретения

1. Способ выделения ультрамелких форм микобактерий туберкулеза путем фильтрации культуры микобактерий через мембранные фильтры и отбора фильтрата, содержащего целевой продукт, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, перед фильтрацией культуру обрабатывают раствором лизоцима,отделяют образующийся осадок и обрабатывают его раствором трипсина.

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что используют лиэо— цим в концентрации 0,2 мг/мл и трип" син в концентрации 1 мг/мл фосфатного буфера.

Составитель А.Завадская

Редактор И.Сегляник Техред Л.Олийнык Корректор Л.Пилипенко

Заказ 3457/27 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород„ ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выделения ультрамелких форм микобактерий туберкулеза.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Пример. Для получения ультрамелких форм (УМФ) 50 мг 40-дневной

:культуры микобактерий туберкулеза бычьего типа (Bov-8) гомогениэируют в фарфоровой ступке и инкубируют в

5 мл раствора лизоцима (200 мкг/мп) на 0„1 М фосфатном буфере рН 7,0 в течение 24 ч при 37 С. После инкубации суспензию центрифугируют 15 мин при 2000 об./мин. Супер» таит отбрасывают и к осадку добавляют 1 мл раствора трипсина (1 мг/мл) и инкубируют 20 мин при 37 С. В последующем 20 к суспензии добавляют 2 мл раствора ингибитора трипсина из сои (0,5 мг/мл) .

Смесь инкубируют 20 мин при 37 С и центрифугируют 15 мин при 2000 об/мин °

Надосадочную жидкость фильтруют че- 25 рез систему мембранных фильтров по следовательно с размерами пор 0,85—

0,45 — 0>23 мкм. Качество фильтрации проверяют методом "пузырьковой точки". Полученный фильтрат засевают на 30 питательные среды Финн-П и Левенштейна-Йенсена иэ расчета 0.1 мл на пробу и внутрибрюшинно заражают морских свинок из расчета 1 мг/кг массы животного.

У всех 24 животных, которым ввоили фильтраты, обнаружены характерные специфические и параспецифические изменения во внутренних органах, la то время, как у контрольных животных специфические изменения во внутренних органах отсутствовали. При посевах фильтратов на питательные среды, на среде Финн-П в 60% случаев был установлен характерный рост слизистых колоний коковых форм микобактерий,которые образовывались в результате реверсии УМФ, а в контроле (прототипе) подобный рост бып установлен в 10% случаев.

Для воспроизведения способа могут быть использованы концентрации лизоцима 0,2-1 мг/мл а время инкубации от 18 до 24 ч; трипсина 0,5-2,5 мг/мл при инкубации 20-.40 мин.

Использование предлагаемого способа позволяет выделять ультрамелкие формы микобактерий туберкулеза в достаточном количестве для исследовательских целей, что будет способствовать проведению систематизированных исследований по изучению роли этих форм в патогенезе туберкулеза и развитии специфического воспаления. Использование способа позволяет также разработать новые вакцины и туберкулиновые препараты.