Способ определения триптофансодержащих соединений и метаболитов триптофанового ряда в ликворе

 

Изобретение относится к медицине , точнее к биофизическим исследованиям ликвора, предназначено для использования в научно-исследоватепьских лабораториях и клиниках с диагностической целью. Цель изобретенияупрощение способа путем сокращения числа трудоемких операций. Для этого; ликвор обрабатьтают химическим реагентом , регистрируют флюоресценцию. Находят максимум длины волны возбуждающего света (Ago). В водных ррах этот диапазон соответствует Л ggjj триптофана 280 нм soss окисленных форм триптофана (серотонина) 300 нм. В качестве реагента используют перекись водорода и в течение 4 мин кювету с разведением ликвора облучают монохроматическим лучом ультрафиолета при А вози- 290 нм. Определяют константы скорости снижения интенсивности флюоресценции во времени: константу фотоокисления К, и константу фотохимического окисления К. При К О и Kj O определяют триптофансодержащие белки, при К; О, К 2 т О - метаболиты триптофанового ряда. сл

CPf03 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 G 01 И 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ .Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4041719/28-14 (22) 24 .03.86 (46) 07.05.88. Бюл. У 17 (71) Новосибирский государственный медицинский институт (72) В.В.Каменская, И.И.Гречишкин, Г.И.Окладников и 3.Я. Гизатулин (53) 612.015(088.8) (56) Лобода Е.Б. и Макаров А.Ю.Лабораторное дело, 1984, 0 4, с. 219-221. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИПТОФАНСОДЕРЖАЩИХ. СОЕДИНЕНИЙ И МЕТАБОЛИТОВ

ТРИПТОФАНОВОГО РЯДА В ЛИКВОРЕ (57) Изобретение относится к медицине, точнее к биофизическим исследованиям ликвора, предназначено для использования в научно-исследовательских лабораториях и клиниках с диагностической целью. Цель изобретения— упрощение способа путем сокращения

ÄÄSUÄÄ 1394136 А1 числа трудоемких операций. Для этого ликвор обрабатывают химическим реагентом, регистрируют флюоресценцию.

Находят максимум длины волны возбуж. дающего света (Л з ) . В водных ррах этот диапазон соответствует.

Й 80зю триптофана 280 нм; Л воз окисленных форм триптофана (серотонина)

300 нм. В качестве реагента используют перекись водорода и в течение

4 мин кювету с разведением ликвора облучают монохроматическим лучом ультрафиолета при Л = 290 нм. Определяют константы скорости снчжения интенсивности флюоресценции во времени: константу фотоокисления К, и константу фотохимического окисления

К . При К, = 0 и К > 0 определяют триптофансодержащие белки, при К;, > О, К 0 — метаболиты триптофанового ряда.

1394136

Изобретение относится к медицине, 1 в! частности к методам биофизических ссЛедований ликвора, и может быть спользовано в научно-исследовательских лабораториях и клинике с диагно5 стической целью.

Цель изобретения — упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций.

Способ осуществляют следующим образом.

При комнатной температуре в кваревую кювету флюоресцентного спектроотометра (модель MPF-4 HITACHI, Япо- 15 ния) наливают 1,5 мл дистиллированной воды, добавляют 0,5 мл исследуемой жидкости. Находят максимум длины вол— ны возбужцающего,света (Л „„ ). Для ликвора человека Л, = 280-300 нм. !

В водных растворах этот диапазон со ответствует il!! 3 триптофана 280 нм, окисленных форм триптофана (се-! ротонин) 300 нм.

При фиксированной Я, записывают 25 спектр флюоресценции исследуемой жидкости и. Находят макс имум длины волны флюоресценции (3 ф„ „р,) . Для ликвора человека Ь, „,р — — 335-341 нм. В водных растворах Л ф„„„,, триптофана 30

350 нм, il y окисленных форм триптофана (5-окситриптофан, серотонин) 335 нм.

Фиксируют положение монохроматора детектора флюоресценции в соответствии с найденной Лфд

В течение выбранного отрезка времени (4 мин) исследуемая проба облучается монохроматическим лучом ультрафиолета (УФ) -и одновременно непрерывно записывается динамика квантового выхода (интенсивность) флюоресценции на длине ;волны А ф„,р— режим фотоокисления флюоресцирующего субстрата (К ).

В кювету к исследуемой жидкости добавляют перекись водорода (25 мкл) и также в течение 4 мин облучают монохроматическим УФ при Х < = 300 нм.

Исследуют жидкость с добавленной к ней перекисью водорода — режим фотохимического окисления флюоресцирующего субстрата (К2), По начальным и конечным значениям точек кривых находят значения констант скоростей: фотоокисления флюоLl I i, ресцирующего субстрата К, = — — ; фотохимического окисления флюоресцирулт ющего субстрата К = — — где д

Э разница интенсивностей флюоресценцин.

При К = О, К > О источником флюоресценции является триптофан, а при

К О, Кд > О источником флюоресценции являются окисленные формы триптофана.

Продолжительность исследования

10-12 мин.

Пример 1. Больной Шурыгин, 62 года. Люмбальная пункция. Ликвор прозрачный. Диагноз — склероз сосудов головного мозга.

При комнатной температуре в кварцевую кювету флюоресцентного спектрофотометра наливают 1,5 мл дистиллированной воды и добавляют 0,5 мл исследуемого ликвора.

Находят максимум длины волны возбуждающего света Ь „ = 290 нм.

Фиксируют Л щ = 290 нм и записывают спектр фяюоресценции разведения ликвора больного.

Находят максимум длины волны флуоресценции Л „,р = 335 нм. Фиксируют положение монохроматора детектора флюоресценции („„,р = 335 нм). В течение 4 мин облучают разведение ликвора монохроматическим лучом УФ (290 нм) и одновременно записывают динамику-.квантового выхода интенсивности флюоресценции на длине волны

335 нм — режим фотоокисления разведения ликвора.

В кювету с разведением ликввра добавляют перекись водорода в объеме

25 мкл и также в течение 4 мин облучают монохроматическим ультрафиолетом при, = 290 нм. !

По начальным и конечным значениями точек кривых определяют значение констант скоростей: фотоокисление

6I

К вЂ” —; DI — О; К „— О и фотохимиLtI ческое окисление К< = —, йТ т О;

К О.

Заключение: в ликворе больного присутствует триптофан.

Пример 2. Больной Семенов, 23 года. Люмбальная пункция. Ликвор ксантохромный. Диагноз — менингит.

При комнатной температуре в кварцевую кювету флюоресцентного спектрофотометра наливают 1,5 мл дистиллированной воды и добавляют 0,5 мл исследуемого ликвора. Находят .максимальную длину волны возбуждающего

1394136 ведением фото- и биохимического окисления исследуемой жидкости при и Д „, соответствующих фромофорам триптофанового ряда, чувствительность, позволяющая обнаружить не менее 10 г/мл флюоресцирующего субстрата при использовании фпюориметра с техническими параметрами, аналогичными NI F-4, минимальный используемый объем ликвора О,1 мп, продолжительность исследования 10-12 мин.

Составитель Н. Гуляева

Техред М.Моргентал

Редактор Г.Волкова

Корректор О. Кундрик

Тираж 847

Заказ 2215/41

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 света = 290 нм, Фиксируют

290 цм и записывают спектр флуоресценции разведения ликвора.

Находят максимум длины волны флюо5 ресценции ) snoop = 335 лм. Фиксируют положение монохроматора детектора

Флюоресценции (A

В течение 4 мин исследуемая проба ликвора облучается монохроматическим лучом ультрафиолета (jl <, а = 290 нм) и одновременно непрерывно записывается динамика квантового выхода (интенсивность) флюоресценции на длине волны P < = 335 нм — режим фотоокисления флюоресцирующего субстрата (К,).

В кювету с исследуемым разведением ликвора добавляют перекись водорода (25 мкл) и также в течение 4 мин 2Î облучают исследуемую жидкость с добавленной к ней перекисью водорода при 1 6- = 290 нм — режим фотохимического окисления разведения ликвора (К ). 25

При К, 7 0 и К> з О в ликворе присутствуют окисленные формы триптофана.

Преимуществами предлагаемого способа являются простота, специфичность чп способа, которая обеспечивается проФормула изобретения

Способ определения триптофансодержащих соединений и метаболитов триптофанового ряда в ликворе путем обработки ликвора химическим агентом с последующей регистрацией флюоресценции, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа трудоемких операций, в качестве реагента используют перекись водорода, определяют константы скорости снижения интенсивности флюоресценции во времени: константу фотоокисления К и константу фото1 химического окисления К, причем при

К = О и К ) О определяют триптофансодержащие белки, а при К э О, К О.метаболиты триптофанового ряда.