Способ выделения неполовозрелых форм трематод из моллюсков

 

Изобретение относится к биологии, а конкретно к зоологии и паразитологии . Цель изобретения - обеспечение жизнеспособности моллюсков и предотвращение их травмирования. Половозрелых моллюсков вьщерживают сначала 72-96 ч в первом трехкомпонентном растворе, содержащем нитрат калия, нитрит калия и гидроксиламин, калдого по 0,00025-0,00045 мас.%, остальное вода. Затем моллюсков переносят во второй трехкомпонентный раствор тех же солей при следующем соотношении компонентов, мас.%: 0,0075- 0,0095; 0,0045-0,0065; 0,0075-0,0095, остальное вода. Изобретение позволяет на 100% сохранить жизнеспособность моллюсков. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

09) 01) А1 (Я) 4 А 01 К 67/00 А 61 В 10/00 ф(Г -";1 -,и; $!

I > ь:

) .1

1 -..ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4041655/30-15 (22) 24 ° 03 ° 86 (46) 30.04.88. Бюл. В 16 (71) Винницкий филиал Украинской сельскохозяйственной академии (72) Н.Ф.Запорожец и В,П.Стасюк (53) 619 616.995. 122 (088.8) (56) Фролова Е .Н. и др. Практикум по зоологии беспозвоночньм животньм. — M. 1985, с.85-86,208.

Абуладзе К.И. Практикум по диагностике инвазионных болезней сельскохозяйственньм животных. — М., 1984 ° с.5-9. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХ

ФОРМ ТРЕМАТОД ИЗ МОЛЛЮСКОВ (57) Изобретение относится к биоло-. гии, а конкретно к зоологии и паразитологии, Цель изобретения — обеспечение жизнеспособности моллюсков и предотвращение их травмирования. Половозрелых моллюсков выдерживают сначала 72-96 ч в первом трехкомпонентном растворе, содержащем нитрат калия, нитрит калия и гидроксиламин, каждого по 0,00025-0,00045 мас.Х, ос" тальное вода. Затем моллюсков переносят во второй трехкомпонентный раствор тех же солей при следукщем соотношении компонентов, мас.X: 0,00750,0095 Оэ0045 0 ° 0065; Ов0075 0 ° 0095 ° остальное вода. Изобретение позволя- ф ет на 100Х сохранить жизнеспособность моллюсков. 4 табл.

1391557

Изобретение относится к биологии, а именно к зоологии и паразитологии, а также к средствам обучения в качестве наглядного пособия в учебно-ме5 тодической и научно-исследовательской работе.

Цель изобретения — диагностика заражения моллюсков неполовозрелыми формами трематод с одновременным сохранением жизнеспособности моллюсков.

Пример 1. А. Берут 6 (1 для контроля, остальные — для опытов) мерных колб, емкость каждой 500 мп, нумеруют их и в каждую наливают до метки дистиллированную воду. На аналитических весах взвешивают навески химических веществ в количествах, указанных в табл.1, и вносят в колбы

2 — 6 поочередно. Получают первые трехкомпонентные растворы, состоящие з нитрита и нитрита калия и гидроксиламина.

Затем нумЕруют 6 стеклянных банок емкостью 250 мл каждая, в первую бан- 25 ку наливают 100 мл дистиллированной воды, а в остальные — по 100 мл соот- ветствующего раствора (табл.1), в каждую банку — по одному половоэрелому прудовику. Сосуды закрывают капроновыми крьппками (в каждой отверстие диаметром 4 мм для доступа воздуха в полость сосуда) и оставляют опять в помещении при 18 С. Ведут наблюдения в течение 84 ч при помощи лупы. Из табл.1 видно, что выдерживание моллюсков в первых трехкомпонентных растворах при заданных концентрациях химических веществ в течение

84 ч не сопровождается выделением из их организма церкариев. Появление в растворах опытных сосудов церкариев замечают по их специфической форме тела, похожей на головастиков, и быстрой подвижности в растворах.

Б. Берут 6 мерных колб, емкость каждой 500 мл, нумеруют их и в каждую наливают до метки дистиллированную воду. Аналогичным образом получают вторые трехкомпонентные растворы (табл.2).

По примеру 1А через 84 ч крышки с банок снимают, моллюсков временно переносят в другие сосуды, воду и

55 растворы удаляют, в банки наливают по 100 мл воды и растворов, приготовленных в колбах по примеру fB (табл.2). В банки на 9 ч помещают моллюсков, закрывают крышками и ведут наблюдения.

Количество церкариев, вьщеленных одним прудовиком, определяют следун щим образом: через 9 ч после помещения моллюсков во вторые трехкомпонентные растворы последние перемешивают стеклянной палочкой и с каждого опытного сосуда отбирают пипеткой

4 пробы раствора по 1 мп в каждой.

Пробы наливают в 4 чашки Петри и при помощи лупы ведут учет количества вьщеленных церкариев. По 4 пробам выводят среднее. Среднее количество (содержимое в 1 мп) умножают на 100 (100 мп раствора) и получают среднее количество трематод, виделенное одним моллюском (табл.2).

Из табл.2 следует, что выдерживание моллюсков в первых растворах в течение 84 ч с последующим переносом и вьщерживанием их во вторых растворах (эа исключением растворов в сосудах 2 и 6) сопровождается вьщелением иэ организма моллюсков церкариев.

По примеру 1А и Б растворы готовят из расчета использования нитрата и нитрита калия в возрастающих концентрациях от сосуда 2 до 6, а гидроксиламина — в убывающих.

В. Последовательность выполнения технических операций аналогична А и

Б, за исключением внесения во вторые растворы гидроксиламина в возрастаницих концентрациях (табл.3).

Из табл.З видно, что выдерживание моллюсков 84 ч в первых растворах с последукицим их перенесением и выдерживанием в течение 9 ч во вторых растворах, приготовленных с добавкой гидроксиламина в возрастающих концентрациях 0,007-0,01% не сопровождается вьщелением церкариев из организма моллюсков за исключением сосуда 4, где концентрации всех трех химических веществ аналогичны сосуду 4 табл.2.

На основании проведенных исследований делают общий вывод: граничными значениями концентраций нитрата калия в первых растворах являются

0,00025-0,00045, нитрита калия—

0,00025-0,00045%, гидроксиламина—

0,00045-0,00025, во вторых растворах — 0,0075-0,0095 для нитрата калия, 0,0045- 0,0065 для нитрита калия и 0,0095-0,0075 для гидроксиламина. з 13915

При таких концентрациях выдерживание моллюсков в первых растворах в течение 84 ч с последующим перенесением их во вторые растворы и выдерживание их на протяжении 9 ч сопровождается

5 выделением церкариев из организма моллюсков. При этом для приготовления сложных трехкомпонентных растворов нитрат и нитрит калия применяют в возврастакщих концентрациях, а гидроксиламин — в убывающих по отношению к концентрациям первых двух веществ.

Пример 2. Берут мерную колбу емкостью 500 мл. Наливают дистиллированную воду до метки. Готовят первый трехкомпонентный раствор из вышеназванных веществ при концентрации каждого 0,000357. — табл.4, сосуд 4. 20

Методика проведения опыта аналогична примеру 1 (табл.4).

Из табл.4 следует, что граничными значениями времени выдерживания моллюсков в первом растворе являются 2Á

72-96 ч, а во втором растворе 6-12 ч.

При этих значениях времени и последовательности из организма моллюсков не выделяются церкарии.

Выдерживание моллюсков во втором д0 растворе в течение 5-13 ч без предварительного выдерживания их в первом растворе не сопровождается выделением из их организма церкарий.

Изобретение дает возможность на

100Х сохранять моллюсков живыми пос35 ле получения от них церкариев и использовать их по другому назначению, проводить диагностические исследования на предмет видовой принадлежнос40 ти заражения моллюсков зародышами фасциол и на этом основании прогнозировать возникнование у животных

57

4 фасциолеза и предупреждение его возникновения, получать церкарии в нужном количестве и в нужное время, выделять церкарии из организма моллюс- . ков естественным путем. Изобретение также характеризуется доступностью применяемых химических веществ и сосудов, простотой технического исполнения и гигиеничностью.

Изобретение можно испольэовать в вивариях для дегельминтиэации моллюсков с целью оздоровления их и продления срока жизнеспособности, а также для предупреждения их гибели, и в педагогическом процессе обучения студентов и учащихся в учебньас заведениях биологических профилей, а также в лабораторной практике, особенно ветеринарных и медицинских профилей.

Формула изобретения

Способ выделения неполовозрелых форм трематод из моллюсков, включающий помещение моллюсков в раствор, отличающийся тем, что, с целью обеспечения жизнеспособности моллюсков и предотвращения их травмирования, в качестве раствора используют водные растворы, содержащие нитрат, нитрит калия и гидроксиламин, причем сначала моллюсков помещают на

72-96 ч в раствор, содержащий, мас.Xi

Нитрат калия 0,00025-0,00045

Нитрит калия 0,00025-0,00045

Гидроксиламин 0,00025-0,00045

Вода Остальное, а затем на 6-12 ч переносят в раствор, содержащий, мас.7.:

Нитрат калия 0,0075-0,0095

Нитрит калия 0,0045-0,0065

Гидроксиламин 0,0075-0,0095

Вода Остальное

1391557

Сосуд з ) Показатели

4 5

Нитрат калия

О ° 00125

0 0,001

О 0,0002

О 0,001

0,00025

Гидроксиламин

О 0,0002

О 0,0025 0,00225

0,00045

О 0,0005

Сосуд

Показатели

1 (1 2

Нитрат калия

0,0375

О 0,035

О 0,007

0,0275

О 0,02

О ° 0045

Гидроксиламин

О 0 ° 004

0,0475

О 005

0,0095

О 0,01

Выделе но церкариев, штук О О

50

125

Навески нитрата на 500 мл воды, r

Концентрация нитрата в растворах, Х

Навески нитрита на 500 мл воды, г

Концентрации. нитрита в растворах, Х

Навески гидроксиламина на

500 мл воды, r

Концентрации гидроксиламина в растворах, Х

Навеска нитрата на 500 мл воды, г

Концентрация нитрата в растворах, 7.

Навеска нитрита на 500 мп воды, r

Концентрация нитрита в растворах, Х

Навеска гидроксиламина на

500 мл води, r

Концентрация гидроксиламина в растворах, 7.

0,00025

Нитрит калия

О, 00125

0,0075

Нитрит калия

0,0225

Таблица 1

0,00175 0 ° 00225 0,0025

0,00035 0,00045 0,0005

0,00175 0,00225 0,0025

0,00035 0,00045 0,0005

0,00175 0,00125 0,001

0,00035 0,00025 0 0002

Т а б л и ц а 2

4 5 6

0,0425 0 0475 0 ° 05

Оэ0085 Оэ0095 Оэ01

0,0325 О ° 035

0,0055 0,0065 0,007

0,0425 О ° 0375 0,035

0,0085 0,0075 0,007

1391557

Покаэатели (1

2 3

Первые растворы

Нитрат калия

0,00175 0,00225 0,0025

0,00035 0,00045 0,0005

О О, 001 О, 00125

О 0,0002 0,00025

Нитрит калия

О 0,001 0,00125

0 00175 Оэ00225 О ° 0025

0 00035 О ° 00045 0 ° 0005

О 0,0002 0 00025

Гидроксиламин

О 0,0025 0,00225

0,00175 0,00125 0,001

0,00035 0,00025 0,0002

О 0,0005 0 00045

Вторые растворы

Нитрат калия

О 0,035 0,0375

Ов0425 О ° 0475 0,05

Ов0085 О ° 0095 Оэ01

О 0,007 0,0075

Нитрит калия

О 0,02 0,0225

0,0275 0,0325 0,035

0,0055 0,065 0,007

О 0,004 0,0045

Гидроксиламин

О 0,035 0,6375

О 0,007 0,0075

0,0425 0,0475 0,05

0,0085 0,0095 0,01

О О

125

ТаЬикца4

Зранк вваарвява- I раствор иск юеопниское, а 97

Зццелаао цврка

pRoa y от к С

11 72 В4 96 97

0 . 0 0 0 0

Зреа эцкервквамив нолнюсков, ч

3llgO7EOllO @аркармав, штук

II раствор

3 6 9 12 13

0 0 0 0 0

Навеска на 500 мл воды, r

Концентрация в растворе, 3

Навеска на 500 мл воды, г

Концентрация в растворе, Х

Навеска на 500 мл воды, r

Концентрация в растворах, Ж

Навеска на 500 мл воды, r

Концентрация в растворах, 7

Навеска йа 500 мл воды, г

Концентрация в растворах, Х

Навеска на 500 мл воды, r

Концентрация в растворах, Х

Выделено церкариев, штук

Таблица