Способ диагностики псориаза

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

ЯХфИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4033624/28-14 (22) 24.01.86 (46) 23.04.88. Бюп. Ф 15 (71) Университет дружбы народов им. Патриса Лумумбы (72) А,Т. Каграманова, Л.Д. Тищенко и З.П. Рожкова (53) 616.07(088.8) (56) Proctor М, S. et al. Elevated

spermidige and spermine levels in

the blood of psoriasis patients.

3. Inv. Dermatol., 1975, v. 65, р. 409-411.

„„SU„„1390 67 А1

<51 4 G 01 N 33/48 (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПСОРИАЗА (57) Определяют содержание полиаминов в суточной моче. При уровне

15 мг и более диагностируют псориаза.

Изобретение повьппает точность опре-. деления в 2-3 раза, время проведения анализа 38 ч

1390567

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматологии, и может быть использовано для диагностики

Для этого 20 мкл полученного раствора переносят при помощи микропипетки на полосу хроматографической бумаги (FN-I, Niederschlap, ГДР или 45

Ленинградская быстрая) размером 4 см х х 40 см, помещенную предварительно в прибор для электрофореза.

Электрофореэ проводят в лимоннокислом буфере рН 3,6 при напряжении 50

480 В и силе тока 50-100 мА в течение 40 мин. Электрофореграммы затем о высушивают в термостате при 70 С, обрабатывают нингидриновым красителем (ацетат кадмия, ацетон, нингидрин, концентрированная уксусная кислота, дистиллированная вода), помещают в о термостат с температурой 70 С на

20 мин, для проявления окраски. Полипсориаза.

Цель изобретения — снижение травматичности и повышение точности способа за счет определения содержания полиаминов в суточной моче больного.

Пример 1. Из суточной мочи больного В. (1250 мл) 3 мл наливают в ампулу, добавляют равный объем

6 н. НС1, заливают ампулу и содержимое подвергают гидролизу в течение

16 ч в термостате с температурой

120 С. Параллельно обрабатывают две пробы и соответствующие контрольные пробы с мочой здоровых людей и пробу с Н О. После гидролиза пробы обрабатывают 3 мл н-бутанола, интенсивно встряхивают и центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин.

Нижнюю водную фракцию количественно переносят в бюкс и содержимое при помощи сначала 10 н. Na0H, а затем

О, 1 í. NaOH доводят рН до 10. Добавляют 6 мл н-бутанола и 2 г солевой смеси и встряхивают пробы в течение

2 ч на шюттель-аппарате. Затем пробы переносят в пробирку и центрифуги- З0 руют в течение 15 мин при 3000 об/мин, Отбирают при помощи шприца количественно верхнюю бутаноловую фракцию, переносят в фарфоровую чашку, добавляют 2 капли 6 н. НС1 и выпаривают бутанол на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл 0,1 н. НС1.

В небольшой части этого раствора определяют количественное содержание полиаминов методом электрофореза на бумаге. амины обнаруживают на электрофореграмме в виде розовато-фиолетовых пятен. Лля идентификации на электрофореграмме пятен, соответствующих путресцину, спермидину и спермину в исследуемой моче, сравнивают профиль пятен с электрофореграммой стандартных полиаминов. Окрашенные пятна, соответствующие индивидуальным полиаминам, вырезают, мелко нарезают, помещают в пробирки и заливают 5 мл элюирующего раствора (ацетат кадмия, этанол, концентрированная уксусная кислота, дистиллированная вода). Пробирки затем ставят в темное место на

5 мин. Измерение величины поглощения раствора производят на спектрофотометре при длине волны 505 нм. При расчете количества полиаминов учитывают указанные разведения, а также возможные примеси любых аминов в реактивах, для чего проводят контрольный опыт с дистиллированной водой.

Относительная ошибка определения

57.

Концентрацию полиаминов, содержащуюся в 20 мкл нанесенной на электрофореграмму жидкости, рассчитывают по калибровочным графикам, построенным для каждого амина на спектрофотометре и выражают в миллиграммах в суточной моче.

Расчет концентрации индивидуальных полиаминов в суточной моче производят по формуле ах10х

3

У где А — количество полиаминов в суточной моче; а — определенная по калибровочному графику концентрация полиамина в 20 мкл жидкости, использованной для электрофореза, мкг; суточный объем мочи, мл;

3 — количество миллилитров мочи, взятое для анализа.

Расчет содержания полиаминов в суточной моче.

Отсчеты на спектрофотометре, соответствующие отдельным фракциям полиаминов, равны путресцина 0,476, спермидина О, 162 и спермина 0,075.

По калибровочному графику находят, что эти данные оптической плотности соответствуют 4,8 мкг путресцина, 2,0 мкг спермидина и 0,87 мкг спер1390567

Формула изобретения

Составитель Н. Валеева

Техред N.яндык Корректор A Обручар (Редактор Н, Рогулич

Заказ 1762/44

Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открывший

113035, Москва, Ж-35, Рвушская наб. ° д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 мина. Умножают эти числа на 10, поскольку сухой остаток растворяют в

0,2 мл, а на электрофоретическую бумагу наносят 20 мкл . Полученные цифры соответствуют содержанию полиаминов в 3 мл мочи, взятой для анализа. Рассчитывают содержание фракций полиаминов в суточной моче (объем мочи у данного больного составлял

1250 мл) по формуле (1): путресцин

20,0 мг; спермидин 8,4 мг; спермин

3,6 мг °

Суммарное содержание полиаминов в суточной моче больногоВ.составляет

32,0 мг, что соответствует диагнозу псориаз.

Пример 2. Больной Н., 47 лет, Болеет несколько лет (5-6) . Обострение около 2-х ме сяце в; прогрессирующая стадия болезни.

Процесс характеризуется не обильными высыпаниями папулезных элементов с локализацией на верхних и нижних конечностях. Папулы розоватого цвета, овальных очертаний с серебристо-белыми чешуйками на поверхности, размером до 2-х копеечной монеты. По периферии папул-венчик гиперемии.

Отмечается появление свежих высыпаний, положительный феномен Кебнера, псориатическая триада. Исходная концентрация полиаминов в суточной моче — 15,72 мг °

На 6-7-й день лечения появления свежих высыпных элементов не отмечается. Отсутствует венчик гиперемии по периферии.

Использование предложенного способа в медицинской практике позволит повысить точность диагностики псориаза в 2-3 раза по сравнению с известным. Способ прост в исполнении, время проведения анализа сокращено с

72 до 38 ч.

Способ диагностики псориаза путем клинического обследования и определения содержания полиаминов в биологической жидкости больного, о т—

25 л и ч а ю шийся тем, что, с целью снижения травматичности и повышения точности способа, определение проводят в суточной моче и при уровне 15 мг и более диагностируют псо