Способ количественного определения витамина д @ в растительных кормах

 

Изобретение Относится к аналитической химии и может быть использовано для определения витамина D в природных соединениях методом колоночной хроматографии. Целью изобретения является повышение чувствительности и сокращение времени анализа. Исследуемый образец гидролизируют спиртовым раствором щелочи, .осуществляют экстракционное выделение неомьшенной фракции и отделяют примеси на хроМатографических колонках. Предварит ельное отделение каратрнидов осуществляют на колонке с окисью алюминия. Фракцию, содержащую витамин 0, отбирают по времени выхода витамина Dj из колонки, растворяют в гексане, подают в микроколонку с силикагелем и злюируют смесью 40-60%-ного раствора гексана в хлороформе. Вьщеленный на второй колонке витамин 0 детектируют в УФ-спектре, . табл. S С/) со 05 со о О5

СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

<5ц 4 6 О1 N. 30/06

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H A BTGPCHGMV. СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТБЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4085852/23-25 (22) 04.07.86 (46) 30.12.87. Бюл. № 48 (71) Научно-исследовательский институт животноводства Лесостепи и Полесья УССР (72) Н,А. Романов, В.В. Мирось и Т.Л. Осипова (53) 543.544(088.8) (56) Cohen Н., Lapointe И. J. Food

Chemistry, 1978, № 26, V. 5, р. 1.210-1213.

Двинская Л.М. Определение D-витаминной обеспеченности сельскохозяйственных животных. — В кн". )Кирорастворимые витамины и методы их определения в биологических субстрактах.

Боровск, 1979, с. 47-54.

„„Я0„„1363060 A1 (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА 0 В РАСТИТЕЛЬНЫХ КОРМАХ (57) Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения витамина D в природных соединениях методом колоночной хроматографии. Целью изобретения является повьппение чувствительности и сокращение времени анализа. Исследуемый образец гидролизируют спиртовым раствором щелочи,,осуществляют экстракционное выделение неомыленной фракции и отделяют примеси на хроматографических колонках. Предваритель ное отделение каратонидов осуществляют на колонке с окисью алюминия °

Фракцию, содержащую витамин 0, отбирают по времени выхода витамина 0 из колонки, растворяют в гексане, подают в микроколонку с силикагелем и элюируют смесью 40-60Х-ного раствора гексана в хлороформе. Выделенный на второй колонке витамин 0 детектируют в УФ-спектре. 2 табл.

1363060

Изобретение относится к ачалитической химии и может быть использовано для количественного определения витамина D в природных соединениях методом колоночной хроматографии.

Цель изобретения — повышение чувствительности и сокращение времени анализа.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый образец гидролизуют спиртовым раствором щелочи, осуществляют экстракционное выделение неомыленной фракции и отделяют примеси 1г на хроматографических колонках. Предварительное отделение каротиноидов осуществляют на колонке с окисью алюминия. Фракцию, содержащую витамин 0, отбирают по времени выхода витамина 02 из колонки, растворяют в гексане, подают в микроколонку с силикагелем и элюируют смесью 40-60 -ного раствора гексана в хлороформе. Выделенный на второй колонке витамин 25

D детектируют в УФ вЂ спект, Пример 1. Определение витамина 0 в искусственных растворах с

2 добавками и без добавок эргостерина, каротина, витаминов А и E.

50 мл стандартного раствора витамина 02 с добавками и без добавки эргостерина, каротина, витаминов А и Е пропускают через колонку с окисью алюминия (длина колонки 500 мм, диаметр 8 мм). Колонку промывают

50 мл гексана и элюируют витамин 02

1,5 .-ным раствором изопропанола в гексане. Фракцию, содержащую витамин

0,отбирают по времени выхода витамина 02 из колонки, упаривают досуха в атмосфере инертного газа и растворяют в 500-1000 мкл гексана. 200300 мкл пробы вводят в микроколонку с селикагелем жидкостного хроматогра- 4

45 фа высокого давления "Милихром и элюируют витамин 0 40-60 -ным растворам гексана в хлороформе.

Детектирование ведут в УФ-спектре при 226 нм. Чувствительность определения витамина 0 0,5 мкг (20 ИЕ) в .литре; определению не мешают эргостерин, каротин, витамины А и E в значительных избытках, Расчет содержания витамина D2 ведут по площади хромато- графического пика с учетом степени концентрирования его на хроматографической колонке.

Результаты определения витамина

D в искусственных растворах (и=10)

2 приведены в табл. 1, Пример 2. Определение витамина 0 в сене люцерновом и злаковом.

Навеску корма 25 г заливают 100 мл этилового спирта, добавляют 25 мл

50 -ного раствора гидроокиси калия и ведут гидролиз в течение 40 мин о при 60 С в атмосфере инертного газа.

Витамин D экстрагируют гексаном

2 (дважды по 20 мл) из гидрализата, разбавленного водой да 40% эталона, отмывают водой от щелочи, сушат с сернокислым натрием и пропускают через колонку с окисью алюминия. Колонку промывают 50 мл ге:.сана и элюируют витамин 0 1,5%-ным раствором изопропана в гексане. Фракцию, содержащую витамин D, отбирают по времени выхода витамина D2 из колонки, упаривают досуха в атмосфере инертного газа и растворяют в 500-1000 мкл гексана. 200-300 мкл пробы вводят в микроколонку с силикагелем жидкостного хроматографа высокого давления

"Милихром и элюируют витамин D

40-60 .-ным раствором гексана в хлороформе. Детектирование ведут в

УФ-спектре при 266 нм.

Результаты определения витамина

0 в сене люцерновом и злаковом (п=10) приведены в табл. 2.

Аналогично определяют витамин D2 в других растительных кормах, при этом относительное стандартное отклонение не превышает 0,05, Формула изобретения

Способ количественного определения витамина D2 в растительных кормах, включающий гидролиз образца спиртовым раствором щелочи, экстракционное выделение неомыляемой фракции, многократное отделение примесей на хроматографических колонках в потоках органических элюентов и спектрофотометрическое детектирование выделенного витамина D, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и сокращения времени анализа, выделенную при пер-.. вом разделении фракцию витамина 0 растворяют в гексане, а последующее отделение примесей осуществляют в потоке 40-60%-ного раствора гексана в хлороформе.

1363060

Таблица 1

Концентрация витамина 0 мкг/л

Найдено витина Г2, Sr мкг/л

Сопутствующее вещество

0,50

0 50

0,03

Нет

0,98

0,01

0,100

0,100

Нет

0,01

0,99

Витамин Е

Таблица 2

Объект анализа Введено . Найдено витамина 0, витамина 0 мкг/кг мкг/кг

4,04

0,0.1

Сено люцерновое Без добавки

6,60

0,02

2,50

То же

0,02

0,653

1,184

Без добавки

Сено злаковое

0,02

0,50

То же

Составитель А. Толстых

Редактор И. Рыбченко Техред А.Кравчук Коррректор Г. Решетник

Заказ 6397/33

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4

Эргостерин

Каротин

Витамин А

Концентрация сопутствующего вещества, мкг/л

100,0

1000,0

100,0

100,0